先天性巨结肠—氧化氮的组织化学观察

采用ＮＡＤＰＨ二磷酸酶组织化学方法，研究先天性巨结肠症ＮＡＮＣ抑制性神经系统。结果提示狭窄段肠管缺乏ＮＯＳ阳性神经丛，肌层内有散在神经纤维，有时可见到粗纤维或小神经干；正常结肠和巨结肠正常段富含阳性神经节细胞和神经纤维。提示ＮＯ与先天性巨结肠发病机理有关。     

一氧化氮与先天性巨结肠（综述）

1987年证实一氧化氮(NO)内源性机制的存在与意义以来,NO研究很快得到生物界和医学界的重视。NO机制与消化系统的生理功能和临床病理之间存在着广泛而密切的联系。 用还原性辅酶Ⅰ依赖性黄递酶(NADPHd)组织化学、一氧化氮合成酶(NOS)免疫组织化学方法发现人胃肠道组织中均有NOS分布。NOS在胃肠壁全层均有分布,以环形平滑肌最多。NO参与的功能有:胃肠粘膜血流调节、分泌功能调节、免疫防护屏障、炎症、胃肠动力调节。 先天性巨结肠(HD)病理学上证实为肌层和粘     

先天性巨结肠免疫组织化学研究

为观察神经标志物PGP9．5和S－100蛋白在先天性巨结肠（HD）中的表达,采用一抗为抗PGP9．5和抗S－100蛋白的PAP免疫组织化学方法,探讨其在临床诊断中的意义。结果：（1）在对照组结肠壁神经丛中可见染色深浅不一的PGP9．5免疫反应阳性神经节细胞,神经纤维均匀分布在肠壁各层;神经节细胞胞体不表达S-100蛋白,表现为细胞状“空白区”。（2）HD结肠壁神经发育异常,PGP9．5和S－100蛋白免疫反应性神经纤维明显增生,分布紊乱,未见有PGP9．5阳性神经节细胞;在神经丛中,增生的S－100蛋白阳性神经纤维中偶见有细胞状的“空白”区。提示结肠壁神经发育异常是HD的主要病理生理变化,神经丛中PGP9．5阳性反应的细胞团块和S－100蛋白染色的神经丛中细胞状“空白”区,可特征性地提示神经节细胞的存在,用于HD的临床诊断敏感度高。     

先天性巨结肠神经肌肉连接免疫组织化学研究

目的采用免疫组织化学方法，对先天性巨结肠神经肌肉连接进行研究，并探讨其与先天性巨结肠发病机制之间的关系。方法应用免疫组化技术对20例先天性巨结肠病变肠段及10例正常结肠组织标本行突触素和神经丝神经肌肉连接标记，光镜下观察其免疫反应表达。结果对照组的结肠突触素和神经细丝的免疫反应呈强阳性表达，先天性巨结肠组扩张肠段突触素和神经细丝的免疫反应呈阳性或弱阳性表达，狭窄段肠壁突触素和神经细丝的免疫反应呈阴性表达。结论先天性巨结肠病变肠段同时缺乏内源性神经支配和外源性神经支配，处于完全失神经支配状态，Cannon定律是先天性巨结肠的病理生理最简单的解释。     

先天性巨结肠根治术疗效分析

对先天性巨结肠根治术后379例进行随访，结果显示：90％的患者术后大便性状、排便次数正常，控制排便的能力优良。术后主要并发症为污粪、便秘、失禁。主要死亡原因为小肠结肠炎。认为术中彻底切除病变肠管、保留部分肛门内括约肌、术后长期扩肛、积极治疗小肠结肠炎是提高疗效的关键。     

规范、统一先天性巨结肠分型的建议

关于先天性巨结肠的分型,国内和国际的标准并不一致.相对而言,国内分型细致而复杂,国际分型简单且清晰.本文通过回顾国内外先天性巨结肠分型的历史,结合近年来先天性巨结肠的基础研究情况、临床表现、手术方式及术后管理等方面工作进展,对先天性巨结肠的分型进行述评.     

腹腔镜先天性巨结肠根治术

本院从 2 0 0 0年 5月起在腹腔镜辅助下先天性巨结肠根治术 15例 ,效果满意 ,现报道如下。1.一股资料　本组 15例 ,男 5例 ,女 10例 ,年龄最小 2 3ｄ ,最大 4岁 ,平均1.5岁。全部病例均行钡剂灌肠检查和直肠粘膜检查 ,部分行直肠内测压明确诊断先为天性巨结肠症 ,其中 1例短段型 ,其余均为普通型。2 .手术方法　本组病例术前准备同开腹手术。全部患儿采用气管插管静脉复合全身麻醉 ,取头低脚高位 ,于脐上Ｖａｒｅｓｓ针穿刺 ,慢速注入ＣＯ2 ,形成气腹 ,压力在 10～ 14ｍｍＨｇ ,拔除Ｖａｒｅｓｓ针后于同一点置入内径 10ｍｍ 0°腹腔镜 ;分…     

免疫组织化学方法在先天性巨结肠诊断中的应用

目的观察不同抗体在先天性巨结肠(HD)手术切除标本中的表达情况,寻找一个特异性抗体帮助快速、正确诊断HD。方法选择5个抗体包括神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100、组织蛋白酶D(CathepsinD,CAD)、外周蛋白(Peripherin),蛋白基因产物(PGP9.5),利用免疫组织化学方法分别标记HD手术切除后标本的远端及近端根部。结果PGP9.5、NSE、Pe-ripherin在肠壁肌间、黏膜下神经丛及神经节细胞中均阳性表达,S100阳性表达黏膜下、肌间神经丛,对神经节细胞则阴性表达,CAD仅阳性表达神经节细胞而不表达神经丛。结论与其他抗体相比,CAD具有结果明显、易判断、快速等特点,是帮助诊断HD的一个特异性抗体。     

先天性巨结肠术后结肠传输时间测定的意义

目的　探讨先天性巨结肠 (HD)Swenson改良术后远期结肠动力功能。方法　 2 0 0 0年 6月至 2 0 0 2年对 2 2例HD行Swenson改良术后的儿童随访 ,应用简化的不透X线标记物追踪法测定其结肠传输时间 ,初步探讨结肠功能的变化。其中男 14例 ,女 8例 ;年龄 5～ 2 0岁 ,平均 10 .0岁。全部病例均经术前钡灌肠及病理检查确诊。平均随访时间为 9年 (5～ 15年 )。结果　对照组儿童的全结肠传输时间 (TCTT)、右半结肠传输时间 (RCTT)、左半结肠传输时间 (LCTT)、直肠乙状结肠传输时间 (RSTT)分别为 (2 8.7± 7.7)h、(7.5± 3.2 )h、(6 .5± 3.8)h和 (13.4± 5 .6 ) g ,与对照组相比 ,巨结肠组儿童的TCTT和RSTT显著延长 (39.4± 19.5 )h比 (2 8.7± 7.7)h ,P <0 .0 5 ;(2 8.5± 18.8)h比(13.4± 5 .6 )h ,P <0 .0 1。结论　应用多次口服标记物一次排片法测定正常儿童的全结肠传输时间为 (2 8.7± 7.7)h。先天性巨结肠Swenson改良术后儿童的TCTT和RSTT较正常儿童均显著延长。其新生“直肠乙状结肠”部位存在明显的动力异常。先天性巨结肠术后远期排便功能障碍与结肠动力异常有关。     

高浓度氧对早产鼠肺一氧化氮合酶表达的影响

目的：明确高浓度氧对早产大鼠肺一氧化氮(nitric oxide, NO)合成及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)表达的影响,以探讨内源性NO在新生儿高氧肺损伤中的作用。方法：3日龄早产鼠随机分为空气组和高氧组,检测实验3 d及7 d时两组肺湿重/干重比值(W/D),肺组织病理学改变,支气管肺泡灌洗液中NO含量及诱导型NOS(iNOS),内皮细胞型NOS(eNOS)在肺内的分布和表达(免疫组织化学方法)。结果：3 d时高氧组表现为急性肺损伤：充血、出血、炎性渗出;7 d时,W/D值高于空气组(5.54±0.41) vs (5.00±0.15),(P<0.05),病理改变依然明显。与空气组相比,暴露3 d及7 d时,高氧组灌洗液中的NO含量(17.06±5.86)和(23.75±4.07) μmol/L较空气组(5.59±2.03)和(7.93±2.33) μmol/L明显上升(P均<0.01)。高氧组肺气道和肺泡上皮细胞、炎症细胞iNOS表达强阳性,强度高于空气组(P<0.01),且高氧7 d组高于3 d组(P<0.01)。与空气组比较,7 d时高氧组气道上皮细胞eNOS表达增加(P<0.05)。结论：高氧可上调早产大鼠肺炎症细胞、上皮细胞NOS的表达,促进NO合成,提示内源性NO介导参与了高氧诱导的肺损伤。     

Nitric Oxide in the Evaluation of Congenital Heart Disease with Pulmonary Hypertension: Factors Related to Nitric Oxide Response

Inhaled nitric oxide (NO) has been used in the preoperative evaluation of patients with congenital heart disease and pulmonary hypertension. The purpose of this study was to characterize responses in pulmonary vascular resistance (PVR) to oxygen and increasing doses of NO during cardiac catheterization and to determine if any related factors affect the response of the pulmonary vascular bed to NO. A prospective analysis of 42 patients (median age, 3.0 years) with congenital heart disease and pulmonary hypertension who underwent NO testing was performed. Systemic vascular resistance (SVR) and PVR were assessed in room air, 100% oxygen, and oxygen plus 20, 40, and 80 parts per million (ppm) NO. Changes in pulmonary artery pressure, PVR, and SVR were assessed. The response to NO was then correlated to individual patient’s age, gender, type of heart defect, the presence of trisomy 21, and baseline PVR/SVR. There was a greater decrease in PVR and PVR/SVR with 20 ppm NO than with oxygen alone. There was no additional decrease at 40 or 80 ppm NO. There was no correlation between age, gender, type of congenital heart disease, and baseline PVR/SVR ratio with the degree of response to NO. Patients with trisomy 21 had less of a response to NO (p = 0.017) than patients without trisomy 21. There is no difference in determining PVR response with doses of NO beyond 20 ppm during cardiac catheterization. Age, gender, and baseline PVR/SVR ratio are not associated with responsiveness to NO. Patients with trisomy 21 may be less responsive to NO.     

儿童体外循环围术期内源性一氧化氮浓度的变化

目的 探讨儿童体外循环期间内源性一氧化氮(NO)浓度的变化及意义。方法 将先心病患儿分为非紫绀型与紫绀型组，非紫绀型再分为肺高压与非肺高压组，于转流前、主动脉阻断后、转流结束、术后24h、术后72h和术后7d测定NO浓度。结果 主动脉阻断后略有降低，体外循环结束时显著增高，术后第1d仍处于较高水平，术后第3d恢复正常；在体外循环期间紫绀型与非紫绀型先心病血浆NO浓度的比较有显著意义；非肺高压组NO浓度升高显著，肺高压组则升高较少，两组术后24h及72h的比较有显著意义。结论 本实验显示术后24h、术后72hNO浓度升高显著，可能与体外循环所致的炎性反应有关；肺高压组则升高较少，易发生肺高压危象，这也是术后NO治疗肺高压危象的基础。     

抑制NO合酶亚型对大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

目的　 观察不同的NO合酶亚型 (NOS)选择性抑制剂对缺氧缺血性脑损伤的影响并探讨其可能的机制 ,为NO相关药物的临床应用提供一定的动物实验依据。 方法 　建立新生大鼠HIE动物模型 ,观察使用NOS抑制剂后其脑组织匀浆液中NO浓度以及SOD、MDA含量的变化 ,将后二者作为反映脑损伤程度的指标 ,观察不同来源和浓度的NO与SOD、MDA的关系及NOS抑制剂对缺氧缺血性脑损伤后脑组织病理学改变的影响。 结果 　实验动物在缺氧缺血性脑损伤后 ,脑组织NO浓度显著升高 ,并具一定的时相波动特征 ,同时SOD下降、MDA升高 ;使用NOS抑制剂L NAME和AG后 ,NO浓度均有不同程度下降 ,唯时相有所差别。L NAME在HI损伤早期 ( <2h)无明显保护氧自由基损伤的作用 ,而在后期 ( 2 4h)则表现出一定的保护作用 ;AG在HI损伤早期和后期均有良好的保护作用。 结论 　在一定时相和浓度范围内 ,NO的来源较NO的浓度与氧自由基损伤的关系更为密切 ,使用iNOS抑制剂可减轻缺氧缺血后氧自由基对脑的损伤     

经肛门巨结肠根治心形吻合术(附15例报告)

目的 探讨先天性巨结肠症手术治疗的有效术式。方法 15例先天性巨结肠症患儿采用经肛门巨结肠根治心形吻合手术，观察手术并发症及术后恢复情况。结果 手术损伤小，术后并发症少，恢复快。结论 经肛门巨结肠根治心形吻合术是安全有效的微创手术治疗方法。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤iNOS mRNA表达变化

目的　 研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)时诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA的表达变化。 方法 　制备新生大鼠左脑HIBD的模型。用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测HIBD后 6h、2 4h、48h、5d不同时点脑皮层iNOSmRNA的表达情况。经凝胶成像及分析系统扫描RT PCR产物 ,用内参半定量分析iNOSmRNA的动态变化。同时观察光镜下神经元坏死变化。 结果 　 7日龄Wistar大鼠对照组没有iNOSmRNA表达 ,HIBD 6h开始表达 ,HIBD 2 4～ 48h为表达高峰 (与HIBD 6h相比有显著性差异 ,P <0 0 1) ,此后逐渐下降 ,HIBD 5d仍可检测出 (与HIBD 6h相比有显著性差异 ,P <0 0 1)。观察光镜下神经元坏死在HIBD后 2 4～ 48h最显著。 结论 　新生大鼠HIBD可诱导iNOS基因表达 ,其可能参与HIBD后的神经毒性损伤     

窒息对新生大鼠肾组织一氧化氮和一氧化氮合酶含量的影响

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)在窒息后肾损伤中的作用。方法Wistar新生大鼠48只,随机分为对照组、窒息后复氧2h组、24h组和48h组,制备常压窒息模型。窒息30min后在上述时间点处死动物,测定肾脏NOS和NO含量,并在光镜下对肾小管损伤程度进行评分。结果窒息复氧2h肾脏NOS和NO即显著升高,持续时间达24h,肾小管评分在窒息后24h和48h明显增高。结论NOS和NO在新生大鼠窒息后的肾损伤中起重要作用。     

自发性高血压大鼠主动脉中一氧化氮/一氧化氮合酶体系的变化

目的 探讨自发性高血压大鼠主动脉中一氧化氮(NO)/一氧化氮合酶(NOS)体系的变化.方法 随机选取健康雄性4周龄Wistar大鼠7只和4周龄自发性高血压大鼠7只,分别作为正常对照组及高血压组.4周龄及12周龄时检测二组大鼠血压.8周龄时取2组大鼠主动脉组织,采用硝酸还原酶法测定其NO水平,Western blot法检查其内皮型NOS(eNOS)以及诱导型NOS(iNOS)蛋白水平.用SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析.结果 12周龄时高血压组大鼠血压明显高于正常对照组[(24.1±0 5) kPa vs (15.9±0.3) kPa](P<0.05).12周龄时高血压组大鼠主动脉组织中NO水平较正常对照组主动脉中NO水平低[(7.2±1 7) μmol·(g prot)-1 vs (17.1±5.3) μmol·(g prot)-1](P<0.05).12周龄时高血压组大鼠主动脉中eNOS蛋白表达量与正常对照组大鼠比较差异无统计学意义[(0.5±0.2) vs (0.5±0.3)](P>0.05);12周龄时高血压组大鼠主动脉中iNOS蛋白表达量显著低于正常对照组大鼠[(0.9±0.3) vs (1.5±0.5)](P<0.05).结论 自发性高血压大鼠主动脉中NO/NOS体系下调参与高血压的形成过程.     

Nitric oxide treatment and acute pulmonary inflammatory response in very premature infants with intractable respiratory failure shortly after birth

Aim: Premature infants with respiratory failure and early-onset pneumonia have low inducible nitric oxide synthase (NOS2) and no evidence of nitric oxide (NO) toxicity. However, inhalation of NO may not be indicated in sepsis because excessive NO generation has been reported. This prospective study was designed to test the hypothesis that inhaled NO is effective in a select group of small premature infants and that the responsiveness to NO is associated with low NOS2 enzyme. Methods: 246 very low birthweight infants (birthweight 31500 g, VLBW) were screened for severe, intractable respiratory failure (oxygenation index 340, arterial-alveolar ratio for oxygen tension 30.10) that does not respond to two doses of surfactant within 5 h from birth. Infants with severe cardiac failure or a bleeding disorder were excluded. Five of the nine eligible cases received inhaled NO. They all had prolonged rupture of foetal membranes, early-onset pneumonia and persistent pulmonary hypertension. Results: All five responded strikingly, survived and appeared normal in follow-up. Airway specimens during the first day of life revealed very low NOS2, interleukin-13 and surfactant protein A, compared with VLBW infants who had no acute infection despite histological chorioamnionitis. In early-onset pneumonia, NOS2 and other inflammatory mediators increased first during the recovery 1-2 d after birth. Conclusion: VLBW infants with progressive respiratory failure and infection at birth have deficient pulmonary NOS2 and cytokine response. After surfactant therapy, these infants responded strikingly to inhaled NO. An acute pulmonary inflammatory response may contribute to respiratory adaptation in early-onset pneumonia.