免疫沉淀法分离纯化感染细胞保的甲肝病毒RNA

本研究采用抗血清（多抗血清）沉淀甲肝病毒，并用盐酸胍－酸性酚，氯仿一生法分离纯化病毒ＲＮＡ。此方法能排除非病毒ＲＮＡ的污染，操作简单，要求条件较低，ＲＮＡ的纯度和完整性都较好。     

甲肝病毒单克隆抗体的研制与应用

本研究成功制备了抗甲肝病毒 (HAV)McAb ,为甲肝研究和诊断提供了大量高效价标准化抗体 .用细胞培养的NJ 3株HAV免疫Balb/c小鼠 ,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆 ,建立了 5株能稳定分泌抗HAVMcAb的杂交瘤细胞 .经鉴定 ,其上清和腹水的抗体效价分别为 0 5× 10 2 ～ 1× 10 3及 1× 10 3～ 2× 10 5.用免疫印迹法和间接ELISA分析 ,这 5株抗体分别能与HAV的 3个抗原位点结合 .在HAAg检测中 ,McAb的应用简化了操作步骤     

水稻叶片RNA的一步法分离纯化及其质量检测

本文报道了利用异硫氰酸胍：酚：氯仿一步法成功分离纯化出高质量水稻叶片ＲＮＡ并对其进行质量检测的结果，并且就该技术的方法、原理及操作中需注意的关键环节作了介绍。     

雏鸭混合感染基因A型和基因C型鸭甲肝病毒研究

研究了2013年四川地区某鸭场暴发的基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)和基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)的混合感染病例.疾病发生于20~25日龄雏鸭,发病率25%~30%,死亡率为20%~30%,临死前出现明显的神经症状,病死雏鸭肝脏肿大,出血.利用双重RT-PCR从病死雏鸭的肝脏组织中同时检测出DHAV-A和DHAV-C.这是四川省养鸭密集区第一次发现雏鸭混合感染DHAV-A和DHAV-C的情况.此外,对2009~2012年四川省各养鸭密集区鸭甲肝炎流行情况做了调查.一共从四川省养鸭密集区采集312份疑似鸭肝炎样本中检测出120份鸭甲型肝病毒性肝炎.其中基因C型鸭肝炎阳性率为75%,基因A型鸭肝炎仅为25%,未发现基因A型和基因C型混合感染情况.结果说明2009~2012年我省鸭病毒性肝炎以基因C型鸭甲肝病毒为优势病原.2013年,开始出现DHAV-A和DHAV-C混合感染病例.因此如何采取有效措施应对其危害,这应该引起养鸭界及相关部门的高度重视.     

简便分离鉴定酵母细胞总RNA的方法

针对酵母具有细胞壁的特点,建立了一种简便,快速,有效分离鉴定酵母细胞总ＲＮＡ的方法,并对三种便于提取酵母细胞总ＲＮＡ的方法进行分析,所得取的总ＲＮＡ质量高,可用于进行分离ｍＲＮＡ,ＰＣＲ扩增以及ｄｏｔ或Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。     

细胞与病毒中的RNA依赖的RNA聚合酶

就细胞与病毒的RdRP的结构及其功能，以丙型肝炎病毒的NS5B蛋白和RNA干扰系统为例，介绍了RdRP的研究进展．     

正相色谱法分离纯化紫杉醇工艺过程的研究

紫杉醇是一种具有独特抗癌机制的天然产物,介绍了正相色谱法分离纯化紫杉醇工艺的全过程.该工艺分离纯化过程以正相色谱分离纯化为主要过程、由正己烷固液萃取、碱洗、一次层析、一次结晶、溴加成、二次层析和二次结晶7个单元操作过程组成.紫杉醇纯化全过程的总收率为收率69%.纯度99.07%     

大孔树脂吸附法分离纯化CoQ10的研究

用大孔树脂吸附法代替溶媒萃取法分离纯化CoQ10。确定国产1300做吸附剂。确定了最佳提取工艺;采用丙酮解吸;实验室放大收率可达97%。     

水生动物双RNA病毒的研究进展

水生动物双RNA病毒（ Aquabirnavirus,ABV）隶属双RNA病毒科Birnaviridae,是一类可引起水生动物爆发传染性病毒病的病原,在世界范围内给水产养殖业造成了巨大损失,其代表种为传染性胰脏坏死病毒（ Infectious Pancreatic Necrosis Virus,IPNV）。ABV的基因组包括两段分节的RNA,以负链RNA为模板进行病毒基因组复制,编码5种成熟的蛋白;本文结合ABV的功能基因、致病机理、诊断检测及免疫防治等近年研究的热点做一综述,以期为研究者提供参考。     

对虾白斑症病毒的分离纯化及形态结构观察

取患白斑症的濒死斑节对虾 (Penaeusmonodon)的表皮、鳃和胃 ,匀浆后通过蔗糖密度梯度离心和蔗糖垫层差速离心两种方案 ,提纯出WSSV ;两种方案比较 ,蔗糖垫层差速离心操作简便 ,不需使用超速离心机 ,所得病毒纯度较高 ,损失少 .负染观察发现 ,纯化的病毒核衣壳 2个末端结构不同 ,其中一端呈圆形 ,高约 2 1nm ,另一端较平 ,高约 15nm ;完整核衣壳的两个末端结构间的螺旋单位一般为 15圈 ,但也偶见个别较长的核衣壳 ,其螺旋单位数达 2 3圈 .     

甲型肝炎病毒(H2株)在三种细胞中的感染性滴度比较

本文用恒河猴胚肾传代细胞（ＭＥＫ）、人胚肺成纤维二倍体细胞（ＫＭＢ１７和２ＢＳ）对ＨＡＶ－Ｈ２株感染性滴度进行了初步研究,结果显示Ｈ２株在ＭＥＫ上感染性滴度（ＣＣＩＤ５０／ｍＬ）最高,ＣＣＩＤ５０／ｍＬ比ＫＭＢ１７,２ＢＳ平均ＣＣＩＤ５０／ｍＬ高１．２８ｌｏｇ和１．５９ｌｏｇ．经统计学分析,Ｐ＜０．０５,有显著性差异,证实ＭＥＫ对Ｈ２株最敏感．ＭＥＫ可能是测定ＨＡＶ感染性滴度和繁殖ＨＡＶ较理想的细胞     

H2株甲肝减毒活疫苗K7的核苷酸全序列分析

应用ＲＴ－ＰＣＲ获取Ｈ２株甲肝减毒活疫苗（Ｋ７）的ｃＤＮＡ片段，经末端终止测序ＰＣＲ试剂盒和全自动测序仪（ＡＢＩ３７７）作序列测定，用Ｍａｘｔｒｉｇｅｎｅ软件进行计算机分析，Ｋ７疫苗病毒的核苷酸全长含７４４３个碱基．Ｋ７对比其亲代Ｈ２株，减毒的ＨＭ１７５株以及ＨＭ１７５野毒株，同源性分别为９９．７５％，９９．９５％和９９．６１％；彼此间在Ｐ１和Ｐ２连接区１６８个碱基的同源性为９９．４％～１００％，均为ⅠＢ基因亚型．前三者在５’非编码区均有１３１～１３４位和２０３位５个碱基缺失，且结构蛋白基因区序列完全一致．本文用分子病毒学方法证实了Ｋ７疫苗的优异纯毒水平，也为开展甲型肝炎分子流行病学工作提供了基础资料     

2株甲型肝炎病毒(L8 株、H2株)蛋白酶2A在大肠杆菌中的表达

首次把生长特性有显著差异的 2株甲型肝病毒 (L8株、H2 株 )的蛋白酶 2A基因分别用基因工程技术克隆到大肠杆菌表达载体 pGEX -KG上 ,重组质粒转化至大肠杆菌 (E .coliBL - 2 1和DH5α)中 ,表达的结果显示 :2株甲型肝病毒的蛋白酶 2A均得以表达 ;表达量占菌体总蛋白 2 0 %以上 .为进一步纯化该蛋白酶、研究其生物学功能和与真核细胞代谢的关系奠定了基础 .     

2株甲型肝炎病毒蛋白酶2A核苷酸序列的测定与比较

从甲型肝炎病毒２个不同株感染的ＫＭＢ１７细胞中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出此２毒株病毒蛋白２Ａ基因,将２个２Ａ基因克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定,得到２个２Ａ基因的核心苷酸序列,序列比较发现它们及与ＨＡＶ野毒株相对应序列有突变存在,Ｈ２株与ＨＭ１７５相比有一个点突变,同源性为９９．７２％;与ＨＭ１７５比较,Ｈ２株和Ｌ８株第３１９７位核苷酸均由Ａ突变为Ｇ,相应的氨基酸由丝氨酸     

RNA interference-mediated inhibition of Hepatitis B Virus replication

Persistent and recurrent infection of hepatitis B virus (HBV) represents one of the most common and severe viral infections of humans, and has caused a formidable health problem in the affected countries. Currently used antiviral drugs have a very limited success on controlling HBV replication and infection. RNA interference (RNAi), a process by which double-stranded RNA (dsRNA) directs sequence-specific degradation of target mRNA in mammalian and plant cells, has recently been used to knockdown gene expression in various species. In this study, we sought to determine whether RNAi-mediated silencing of HBV viral gene expression could lead to the effective inhibition of HBV replication. We first developed RNAi vectors that expressed small interfering RNA (siRNA) and targeted the HBV core or surface gene sequence. Our results demonstrated that these specific siRNAs efficiently reduced the levels of corresponding viral RNAs and proteins, and thus suppressed viral replication. Treatment with siRNA gave the greatest reduction in the levels of HBsAg (92%) and in HBeAg (85%) respectively in the cultured cell medium. Our findings further demonstrated that the RNAi-mediated antiviral effect was sequence-specific and dose-dependent. Therefore, our findings strongly suggest that RNAi-mediated silencing of HBV viral genes could effectively inhibit the replication of HBV, hence RNAi-based strategy should be further explored as a more efficacious antiviral therapy of HBV infection.     

一种改进的珙桐(Davidia Involucrata)干种子总RNA提取方法

改进后的方法在提取缓冲液中加入了2％的PVP(分子量10000）和10mM的半胱氨酸以避免多酚类物质的氧化，减少了苯酚抽提的次数。使用该改进的方法可以从平均每克珙桐干种子中获得240μg的总RNA，这些总RNA适合用于体外反转录、Northem杂交以及cDNA文库的构建。     

一种改进的珙桐(Davidia involucrata)干种子总RNA的提取方法

使用基于去污剂或盐酸胍等常规提取缓冲液 ,从含有大量脂肪、蛋白质和多酚类等次生代谢物的珙桐(ＤａｖｉｄｉａｉｎｖｏｌｕｃｒａｔａＢａｉｌｌ.)干种子中制备足够量的总ＲＮＡ极为困难 .著名的观赏植物珙桐特产于中国西南部 .其组织含大量多酚类物质 ,这些多酚类物质的污染 ,使得从其各种组织中提取核酸尤为困难 .一旦珙桐的组织破裂后 ,胞质内的这些污染物就直接与核酸接触 .许多植物组织中含有多酚类物质 ,它们是极强的氧化剂 .它们的存在会极大地降低所提取核酸的得率和纯度[1] .氧化后的多酚类物质会与蛋白质和核酸发生共价结合 .这…     

HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体的构建及其体外转录制备感染性RNA的研究

运用重叠延伸PCR方法对HCV全长基因组cDNANS3和NS5A上的E1202G、T1280I和S2197P进行细胞培养适应性突变,构建含有细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA,体外转录制备RNA,脂质体法转染人肝癌细胞Huh-7,以RT-PCR检测HCV正、负链RNA,间接免疫荧光法和Western blot检测细胞内HCVNS3蛋白的表达。结果证明,转染后细胞内可间断检测到HCV正、负链RNA及HCVNS3蛋白的表达,且突变体RNA与未突变的HCVRNA相比,明显具有更高的复制效率和蛋白表达。该研究为后续HCV体外培养体系的研究提供了可在细胞内高效自主复制的HCV病毒模板。     

红曲霉RNA的提取方法

采用异硫氰酸胍和β_巯基乙醇联合变性 ,酚 ,氯仿和异戊醇抽提的方法 ,对红曲霉总RNA进行提取。得到的RNA样品经过甲醛变性凝胶电泳和紫外分光光度法检测 ,证实为完整、均一的总RNA ,为构建红曲霉的cDNA(complemetaryDNA ,互补DNA)文库和筛选差异表达的基因奠定了基础。