载5-氟尿嘧啶聚乳酸纳米微粒瘤内注射治疗胃癌

目的观察生物可降解5-氟尿嘧啶聚乳酸纳米微粒（5-Fu-NPs）注射缓释剂用于肿瘤内局部给药的抗肿瘤活性。方法36只（SCID）小鼠随机分为6组，分别瘤内注射生理盐水的对照组、瘤内注射5．Fu．NPs（包括5-Fu20mg／kg体重和5-Fu30mg／kg体重）、无载药NPs、5-Fu注射液及腹腔注射5-Fu注射液，每3d瘤内给药1次共3次。观察荷瘤鼠肿瘤生长、荷瘤鼠给药前、后血象及给药后肿瘤组织凋亡指数。结果瘤内注射5-Fu-NPs缓释剂组小鼠肿瘤生长缓慢，瘤体明显小于5-Fu（含5-Fu20mg／kg体重）腹腔注射给药组，相应的抑瘤率分别为2．93％、22．87％、27．57％、41．64％和50．43％，其中以瘤内注射5-Fu-NPs对小鼠胃癌有较高抑瘤率，呈现良好的量效关系，且对骨髓的副作用为最小。结论瘤内应用5-Fu-NPs缓释剂的抗肿瘤效果优于局部和全身单纯5-Fu给药。     

氟尿嘧啶免疫聚乳酸纳米微粒抗肿瘤效应的研究

目的利用载氟尿嘧啶（5-FU）免疫聚乳酸（PEA）纳米微粒（NPs），观察其对严重联合免疫缺陷病（SCID）鼠人胃癌移植模型的治疗效应。方法超声乳化法合成的载5-FU的抗血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体纳米微粒，建立SCID鼠人胃癌移植肿瘤模型，观察药物对高表达VEGF胃癌移植肿瘤模型的治疗效应及其不良反应。结果空白对照组、未载药空纳米微粒组、5-FU组（20mg／kg）、抗VEGF单克隆抗体-未载药空纳米微粒组、抗VEGF单克隆抗体组、载5-FU纳米微粒组、5-FU（20mg／kg）加抗VEGF单克隆抗体组及抗VEGF单克隆抗体-载5-FU纳米微粒组（20mg／kg）的抑瘤率分别为0、6．61％、24．26％、27．94％、35．29％、37．50％、39．71％和52．21％，且载5-FU的抗VEGF单克隆抗体纳米微粒组和未载药纳米微粒组的血白细胞数量及肝肾功能与空白对照组相比，差异无统计学意义（P〈0.05）；而含5-FU原药组血白细胞数量较空白对照组和抗VEGF单克隆抗体-载5-FU纳米微粒组下降34．43％和37．38％（P〈0.05）：而肝转氨酶升高93．17％和66．56％。治疗组与对照组癌细胞凋亡指数相比，以抗VEGF单克隆抗体．载5-FU纳米微粒组更为明显，差异有统计学意义（P〈0.05）；含抗VEGF抗体的实验组微血管密度明显低于含5-FU药组和对照组（P〈0.05）。结论载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米微粒可提高5-FU的抑瘤率，并通过抑制肿瘤的血管生成，诱导肿瘤细胞凋亡，增加疗效，有效降低5-FU的骨髓抑制和肝肾功能损害作用．是一种安全的新型药物纳米级靶向制剂。     

5-氟尿嘧啶聚乳酸载药纳米微粒对人胃癌和结肠癌细胞株的体外杀伤效应

目的探讨5-氟尿嘧啶聚乳酸载药纳米微粒(5-Fu-PLA-NP)对人胃癌和结肠癌细胞株的体外杀伤效应。方法超声乳化法制备5-Fu-PLA-NP载药纳米微粒;用噻唑蓝(MTT)比色法从1~10d连续检测1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L浓度5-Fu-PLA-NP和5-Fu对人胃癌细胞株MGC803和结肠癌细胞株SW620的体外杀伤效应,并计算出2种药物的半数抑制率浓度IC50和对肿瘤细胞的生长抑制率。结果5-Fu-PLA-NP的体外累积药物释放率在7d时为75.7%,10d时达94.3%;5-Fu的杀伤效应在1~7d时呈时间依赖关系,7d后进入平台期;5-Fu-PLA-NP则在1~10d均呈时间依赖关系;7d时两者在不同剂量的杀伤效应均呈剂量依赖关系,并且两者间差异无统计学意义。结论5-Fu-PLA-NP具有药物缓释效应,可延长药物对人胃癌与结肠癌细胞的有效作用时间;并且载药纳米微粒没有降低5-Fu成分的生物学活性。     

化疗药物对胃癌细胞的杀伤效应

目的 探讨化疗药物对胃癌细胞的杀伤效应.方法 收集2006年4月至2007年2月济南军区总医院手术切除的84例胃癌标本,新鲜胃癌组织制备单细胞悬液,分别加入羟基喜树碱、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素培养48 h.MTT法观察药物作用后癌细胞活性变化.免疫组织化学检测生存素及PTEN的表达.采用χ~2、秩和检验和Fisher确切概率法分析数据.结果 不同化疗药物对胃癌细胞杀伤效应不同,分化差的胃癌较分化好的胃癌对化疗药物敏感.在印戒细胞癌、黏液腺癌及低分化腺癌中生存素阳性率高于乳头状腺癌及管状腺癌,差异有统计学意义(χ~2=10.625,P<0.05);而FFEN表达与生存素相反,差异有统计学意义(χ~2=6.060,P<0.05).生存素与5-氟尿嘧啶及阿霉素的体外耐药有关(χ~2=6.609,6.350,P<0.05).结论 MTT体外药敏实验有助于筛选个体有效化疗药物.生存素参与了肿瘤细胞化疗耐受,生存素与PTEN的表达有关.     

多种化疗药物对胃癌细胞杀伤效应的研究

目的：探讨不同分化的胃癌细胞对不同化疗药物的敏感性。 方法：选择低分化的MGC-803和高分化的AGS两种胃癌细胞系,以及正常胃黏膜上皮细胞GES-1,分别加入不同浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）、奥沙利铂（L-OHP）、多西他赛（DXT）、顺铂（DDP）、伊立替康（CPT-11）作用48 h后,用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,并计算药物半数抑制浓度（IC50）。用IC50的5-FU、DDP、L-OHP作用于MGC-803和AGS细胞48 h后,检测细胞凋亡及细胞周期分布情况。 结果：5种化疗药物对MGC-803、AGS细胞以及GES-1细胞均有明显的抑制作用（均P<0.05）,其中5-FU、DDP、CPT-11对AGS细胞的作用较强;L-OHP、DXT对MGC-803细胞作用较强;DDP对GES-1细胞的抑制作用较强。5-FU、DDP、L-OHP均明显诱导两种胃癌细胞凋亡,其中5-FU组与L-OHP组凋亡率高于DDP组（均P<0.05）;细胞周期分析显示,L-OHP增加两种细胞的S期阻滞,DDP增加MGC-803细胞的S期阻滞,5-FU与DDP增加AGS细胞的G1阻滞（均P<0.05）,但5-FU对MGC-803细胞周期无明显影响（P>0.05）。 结论：化疗药物对胃癌细胞的抑制作用与其病理类型有关,且对胃癌细胞凋亡的诱导和细胞周期阻滞作用均不同。     

载5-氟脲嘧啶聚己内酯纳米粒子对人胆管癌细胞的体外杀伤作用

目的:探讨聚己内酯载5-氟尿嘧啶(5-FU)纳米粒子对人胆管癌细胞株的体外杀伤作用、安全性及机制。方法:超声乳化法制备载5-FU聚己内酯纳米粒子(5-FU-PCL-NP),观察空载纳米粒子的体外溶血及5-FU-PCL-NP的体外药物释放情况,检测5-FU-PLA-NP对人胆管癌细胞株Hccc-9810增殖抑制及凋亡诱导作用。结果:5-FU-PCL-NP成功合成,其载药率为15.1%,包封率为41.9%,溶血试验阴性,5-FU-PCL-NP体外释放5-FU缓慢,其72 h释放率为62.9%。与单纯5-FU比较,5-FU-PCL-NP对Hccc-9810细胞的增殖抑制作用明显增强,IC50明显降低[(1.32±0.12)μg/m L vs.(2.5±0.39)μg/m L],促Hccc-9810细胞凋亡作用明显增强(均P0.05)。空载纳米粒对Hccc-9810细胞凋亡无明显影响(P0.05)。结论:载5-FU聚己内酯纳米粒子5-FU-PCL-NP具有良好的药物缓释效应,可延长5-FU的作用时间窗,对胆管癌细胞有较好的体外杀伤作用,且生物安全性好。     

化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应及其与Bcl－2表达的关系

目的观察化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤作用，探讨其与胃癌组织中Bcl-2蛋白表达的关系。方法新鲜胃癌组织制备单细胞悬液，分别加入紫杉醇（Tax）、顺铂（DDP）、阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-Fu）和丝裂霉素（MMC）培养48h。四氮唑盐还原法（MTr）观察药物作用后癌细胞活力及代谢活性变化。免疫组织化学技术检测Bcl-2的表达。结果5种化疗药物平均抑制率依次为Tax（40．6±6．9）％、5．FU（38．9±9．2）％、CDDP（38．4±7．8）％、ADM（31．6±8．5）％、MMC（28．9±9．8）％。不同类型胃癌对5种化疗药物的敏感性由强到弱依次为印戒细胞癌、管状腺癌、黏液腺癌和乳头状腺癌。全组Bcl-2阳性率为80％，阳性者对5-FU、MMC和ADM有较强的耐药性。结论MTr比色法体外药敏试验。有助于筛选个体化有效治疗药物。Bcl-2的高表达可能是胃癌多药耐药的原因之一。     

TNP-470对胃癌细胞株SGC-7901体外血管生成拟态的抑制作用

目的：研究TNP-470对胃癌细胞株SGC-7901体外血管生成拟态的影响。方法：将培养的SGC-7901细胞分为TNP-470组及对照组，应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化。Transwell小室检测癌细胞体外侵袭力的变化，体外管状形成试验检测管道形成能力的变化。结果：TNP-470对SGC-7901细胞增殖没有明显抑制作用，可以显著降低SGC-7901细胞的体外侵袭能力，抑制体外管道形成。结论：TNP-470能够抑制SGC-7901细胞的体外血管生成拟态形成。     

热CO2气腹对胃癌细胞的杀伤作用

目的 研究热CO2气腹对胃癌细胞的杀伤作用,进一步探讨临床上对胃癌患者行腹腔镜手术时施以热CO2气腹的可行性及安全性.方法 建立热CO2气腹体外实验模型,将胃癌细胞株SGC-7901根据实验目的分组:对照组(常规培养);单纯CO2组;单纯热疗组;热CO2气腹组.经各组不同处理后,以细胞计数试剂盒-8检测细胞增生情况,以钙磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染流式细胞术及赫斯特荧光染料33342/碘化丙啶双染荧光显微镜检测细胞凋亡情况.结果 细胞增生检测结果显示,热CO2气腹组与对照组、单纯热疗组及单纯CO2组相比,有显著抑制胃癌细胞增生的效应(P＜0.05);细胞凋亡检测结果显示,热CO2气腹组能够明显诱导胃癌细胞凋亡,且在荧光显微镜下观察到呈亮蓝色改变的凋亡胃癌细胞.结论 热CO2气腹能够显著抑制胃癌细胞株SGC-7901的增生,并可能通过诱导细胞凋亡来杀伤胃癌细胞.     

二十二碳六烯酸联合5氟尿嘧啶对胃癌细胞生长及bcl-2、bcl 2l12和bax表达的影响

目的 评估二十二碳六烯酸(DHA)联合5氟尿嘧啶(5-Fu)对胃癌细胞SGC 7901生长以及bcl-2、bcl 2l12和bax基因表达的影响.方法 采用台盼蓝拒染方法检测两药物单用和联用对细胞活力的影响,用联合系数判断两药合用效果,倒置显微镜下观察细胞生长状况,PI染色流式细胞术检测亚二倍体峰比并拟合细胞周期曲线,Annexin-V/PI双标记方法检测早期细胞凋亡,RT-PCR方法检测bcl-2、bcl 2l12和bax基因的表达.结果 DHA可抑制胃癌SGC 7901细胞生长,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05),24 h、48 h的半数抑制浓度分别为67.81 μg/ml、45.76 μg/ml;DHA联合5-FU对细胞生长的抑制具有协同作用(CI<1,P<0.01),倒置显微镜下可见两药联合处理后细胞稀疏;亚二倍体峰比、Annexin-V早期凋亡率示DHA、5-FU均能诱导细胞凋亡且联合用药后细胞凋亡更明显(DHA、5-FU、联合组的亚二倍体峰比分别为5.2%、6.2%、13.9%;早期细胞凋亡率分别为4.00%、5.37%、13.11%);细胞周期曲线在联合组停滞于G0/G1和S期;RT-PCR显示DHA、5-FU可下调bcl-2和bcl 2l12表达,两药联合表达时下调更显著,bax表达则无明显改变.结论 DHA能抑制胃癌SGC 7901细胞增殖,联合5-FU后对细胞生长抑制和周期阻滞具有协同作用,可能通过下调bcl-2和bcl 2l12基因诱导胃癌SGC 7901细胞发生凋亡.     

ω-3多不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸对胃癌细胞株AGS生长和增殖的影响

目的评价ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFA）体外抑制胃癌细胞株AGS增殖和诱导细胞凋亡的能力。方法在处于指数生长期的AGS细胞株培养剂中添加二十二碳六烯酸（DHA）,采用噻唑蓝法、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法检测AGS细胞株的生长和增殖情况,并通过免疫组化检测经DHA处理前后细胞中COX-2的表达。结果经DHA作用后,AGS细胞增殖受抑制,随DHA浓度的递增AGS细胞增殖率逐次下降,呈现明显量效关系,同时诱导细胞凋亡;琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现典型的阶梯状条带;流式细胞仪检测出凋亡峰,细胞周期分析表明细胞阻滞于G0／G1期。ω-3PUFA对正常肠上皮细胞增殖无明显影响。经DHA作用后,AGS细胞中COX-2表达下调。结论DHA可能通过抑制COX-2而阻遏AGS细胞的增殖,诱发细胞凋亡。     

抗HER-2加抗CD3双特异抗体抑制胃癌细胞生长的实验研究

目的探讨基因工程抗HER-2 抗CD3双特异抗体(bispecific antibody,BsAb)对表达人表皮生长因子受体2(HER-2/neu)的人胃癌细胞体外及体内生长的影响。方法用MTT方法测定Herceptin、抗CD3和BsAb抗体对胃癌细胞系SGC-7901的抑制率;免疫细胞化学法检测SGC-7901细胞的HER-2表达水平;建立裸鼠模型,将HER-2 CD3 BsAb与效应细胞(正常人外周血淋巴细胞)联合应用,观测各组荷瘤动物的肿瘤生长状况。结果正常对照组、抗CD3单克隆抗体联合效应细胞、Herceptin联合效应细胞及HER2 CD3 BsAb联合效应细胞肿瘤细胞的生长抑制率分别为0、(24.3±1.2)%、(56.2±2.6)%、(91.3±4.1)%各组荷瘤裸鼠与对照组的肿瘤体积为(0.86±0.02) cm~3、(0.52±0.04)cm~3、(0.20±0.06)cm~3、(0.11±0.02)cm~3,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),其中HER-2 CD3 BsAb联合效应细胞的抑制作用更为显著,与抗CD3 McAb联合效应细胞、Herceptin联合效应细胞组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。结论HER-2/neu是胃癌免疫治疗的有效靶点,基因工程抗HER-2 抗CD3 BsAb在体外及体内均具有有效的抗肿瘤活性。     

ω-3多不饱和脂肪酸对人胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)对人胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝实验、细胞形态学观察、片断DNA电泳、流式细胞技术和硫代巴比妥酸法对细胞增殖、细胞凋亡以及细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量进行分析。结果胃癌细胞经40μg/ml的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)作用24～72h后,细胞增殖受到明显抑制,同时诱发细胞凋亡,且呈现时间依赖关系。凋亡细胞表现为细胞固缩、胞膜突起出泡、核染色质凝聚、边集和凋亡小体形成。DNA裂解片断呈典型的凋亡“阶梯”状条带,流式细胞仪见明显的亚二倍体峰。EPA和DHA作用72h,胃癌细胞内MDA的含量显著高于对照组(P<0.001)。EPA和DHA对正常成纤维细胞的增殖和脂质过氧化反应无明显影响。结论ω-3PUFA通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡来阻遏胃癌细胞的生长,这种作用可能与细胞内脂质过氧化产物的增加有关。     

干细胞标记物Lgr5在胃癌组织中的表达及临床意义

目的分析干细胞标记物Lgr5（富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5）蛋白在人胃癌组织中的异常表达,并探讨在胃癌肿瘤的发生发展等过程中发挥的作用。 方法选取2012年1月至2015年6月接受胃癌手术治疗的70例患者,采用免疫组化法分别检测70例胃正常组织、癌旁组织、胃腺癌标本中Lgr5的蛋白表达,并统计学分析其与临床病理指标、患者生存预后的关系。 结果70例胃癌组织中的Lgr5蛋白阳性表达率（50/70,71.4%）明显高于癌旁组织（35/70,50.0%）、正常组织（21/70,30.0%）,差异有统计学意义（χ²=6.738、24.034,P=0.009、0.000）;Lgr5蛋白的表达与胃癌患者的性别、年龄及分化程度无明显相关性,与淋巴结节转移、TNM分期密切相关（均P<0.05）。随访胃癌患者66例,其中Lgr5阳性组47例,Lgr5阴性组19例,生存分析两组术后3年生存率差异有统计学意义（χ²=3.929,P=0.047）。 结论Lgr5蛋白在胃癌发生过程中可能发挥一定作用,它与胃癌的侵袭、转移和预后明显相关,Lgr5的表达检测可作为判断胃癌患者预后的一种手段。     

反义人端粒酶逆转录酶基因转染对人胃癌细胞系的影响

目的探讨反义人端粒酶(hTERT)基因治疗的可行性。方法构建hTERT基因的反义表达载体,经脂质体介导转染人未分化胃癌细胞系HGC-27,通过Southernblot检测外源反义基因的整合;RT-PCR及DNA测序法检测反义基因的转录;RT-PCR半定量方法检测被封闭目的基因mRNA的转录水平;TRAP及PCRELISA方法检测细胞的端粒酶活性;流式细胞仪检测细胞周期变化。结果外源反义hTERT基因已整合入细胞并获稳定转录,且能显著封闭目的基因转录的mRNA,并显著抑制HGC-27细胞的端粒酶活性,抑制HGC-27细胞的增殖并促进其凋亡。结论端粒酶反义hTERT基因可有效地应用于胃癌的基因治疗。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对胃癌细胞侵袭转移的影响

目的 观察矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)对人胃癌细胞株MGC803和SGC7901增殖、迁移和侵袭运动能力的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 用C3G处理人胃癌MGC803和SGC7901细胞株,用MTF比色法检测C3G对该细胞系增殖的抑制作用,Transwe1l小室进行迁移实验和人工重组基底膜侵袭实验.用RT-PCR及Western blot方法检测用药前后肿瘤细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因和蛋白的表达水平.结果 C3G在体外明显抑制人胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.01),MGC803 24 hIC50=6.27μg/ml,SCC7901 24 h IC50=5.42 μg/ml.经C3G处理后,MGC803和SGC7901细胞迁移、侵袭能力明显降低(P＜0.01),MGC803和SGC7901阴性对照组24 h侵袭细胞数分别为(207±9)个和(115±9)个,C3G 10 μg/ml组侵袭细胞数则分别减少至(24±5)个和(14±6)个.MMP-2基因和蛋白表达水平显著下降(P＜0.01),且呈现浓度依赖性.结论 C3G具有体外抗胃癌细胞增殖的作用,且可能通过抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭运动能力来发挥预防肿瘤侵袭的作用,其机制可能与抑制MMP-2的生成有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of cyanidin-3-glucoside extracted from Chinese bayberry on the proliferation. migration and invasion ability of the gastric cancer cell lines MGC803 and SGC7901 in vitro, and explore the possible mechanism of the preventive effects of C3G on tumor metastasis.Methods After treatment by C3G, the growth inhibiting of C3G on MGC803 and SGC7901 was determined by MTF assay, cell migration and invasion ability was evaluated with transwell chamber. Expression of Matrix metalloproteinase 2( MMP-2 )mRNA and protion on cells were analyzed by RT-PCR and Western blot.Results C3G significantly inhibited the proliferation of MGC803 and SGC7901 cells in a concentration and time-dependent manner as measured by MTT method ( P ＜0. 01 ), and the IC50 were: MGC803:24 h IC50 =6. 27 μg/ml;SGC7901:24 h IC50 = 5.42 μg/ml. After the cells were treated with C3G, the migration and invasion ability of MGC803 and SGC7901 cells decreased significantly ( P ＜ 0. 01 ) the number of invasive cells in 24 hours of the negative control MGC803, SGC7901 group was ( 207 ± 9 ) and ( 115 ± 9 ),respectively, while in C3G 10 μg/ml group the number of invasive cells decreased to( 24 ± 5 ) , ( 14 ± 6). In addition, the expression of MMP-2 mRNA and protion decreased abviously ( P ＜ 0. 01 ), all that was in a concentration-dependent manner. Conclusions In vitro, C3G has a concentration- and time-dependent growth inhibiting effect on MGC803 and SGC7901 cells, and may prevent metastasis by affecting migration and invasion ability of tumor cells. This action may be mediated by down-regulation of MMP-2mRNA and protein.