非霍奇金淋巴瘤p73基因甲基化及去甲基化的研究

目的探讨p73基因异常甲基化在非霍奇金淋巴瘤（non—Hodgkin’s lymphomas,NHL）中的分布,去甲基化p73基因的再表达。方法采用甲基化特异性PCR（Methylation specific polymerase chain reaction,MSP）方法检测22例非霍奇金淋巴瘤p73基因CpG岛甲基化状态。使用反转录PCR（Reverse transoription polymerase chain reaction,RT-PCR）方法检测CdR药物作用前后P73基因mRNA的表达情况。结果非霍奇金淋巴瘤p73基因甲基化的发生率为27.3％（6／22）,高度恶性比低度恶性更易发生甲基化,其发生率分别为42．8％和0％,5-杂氮-2’．脱氧胞嘧啶（5-aza-2’-deoxycytidine,CdR）在4．0～8．0μmol/L时可诱导非霍奇金淋巴瘤细胞p73去甲基化。结论p73基因甲基化可能是非霍奇金淋巴瘤发病的原因之一,去甲基化治疗是可行的。     

FHIT基因5''''CpG岛甲基化及与其失活的关系

目的：探讨胃肠癌细胞株FHIT基因甲基化状态及与其失活的关系。方法：用甲基化特异性PCR（methylation—specific PCR，MSP）检测7个肿瘤细胞株的FHIT基因甲基化状态，然后应用去甲基化试剂5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’deoxycytine，5-Aza—CdR）处理MKN-28细胞及HCT1116细胞，应用RT-PCR检测药物处理前后FHIT基因mRNA的表达状态。结果：7个肿瘤细胞株有6个检测到FHIT基因5’CpG岛甲基化；经5-Aza—CdR处理后MKN-28细胞的FHIT基因mRNA重新表达。结论：FHIT基因5’CpG岛的甲基化引起FHIT基因的表达缺失，与胃肠癌的发生密切相关。     

5-氮-2''''-脱氧胞苷诱导E-cadherin基因去甲基化及转录和表达

背景与目的：用去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对细胞株MDA—MB-435抑癌基因E—cadherin（上皮钙粘附素，简称E—cad）表达的影响。观察DNA甲基化的可逆性，为肿瘤治疗提供新的靶点。方法：在用5-Aza—CdR处理MDA．MB-435细胞株前、后分别应用甲基化特异性PCR（MSP）检测E—cad基因5’-CpG岛甲基化改变；用免疫组化（LsAB法）检测E—cad蛋白表达；用半定量RT—PCR观察E—cad mRNA的变化。结果：①MDA—MB-435细胞在用药前E—cad基因甲基化PCR扩增阳性（116bp），而非甲基化PCR扩增阴性。用0．5μmol／L的5-Aza—CdR处理后发现该细胞E—cad基因甲基化PCR扩增阴性，而非甲基化PCR扩增出阳性条带（97bp）。②免疫细胞化学法检测E—cad蛋白：用药前细胞未见E—cad蛋白表达。用5-Aza—CdR处理后在细胞膜可见E—cad染色阳性。③RT—PCR发现用5-Aza—CdR处理前细胞不能扩增出630bp的E—cadmRNA特异性条带；用0．5、1．0、2．0、5．0μmol／L的5-Aza处理细胞后都可检测到E—cadmRNA转录，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关。结论：去甲基化药物5-Aza—CdR能有效地逆转MDA—MB-435细胞株的E—cad基因异常甲基化，诱导mRNA转录和蛋白的表达。     

甲状腺肿瘤中p16基因甲基化及p16蛋白的表达

目的探讨甲状腺肿瘤细胞中p16基因异常甲基化及p16蛋白的表达。方法采用甲基化敏感的限制性内切酶SmaI消化DNA，PCR扩增p16基因外显子1，分析60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子15′CpG岛异常甲基化，采用免疫组化Envision法检测60例甲状腺肿瘤标本细胞中p16蛋白的表达。结果60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子。5′CpG岛异常甲基化率为15．0％（9／60）。30例甲状腺癌中为30．0％（9／30）；30例腺瘤中无异常甲基化，组间比较差异有显著性（P〈0．001）。60例甲状腺肿瘤中p16蛋白阳性表达率为46．7％／60）。30例腺瘤中p16蛋白阳性表达率为60．0％（18／30）；30例甲状腺癌中为33．3％（10／30），组间较差异有显著性（P〈0．05）。结论p16基因外显子t5′CpG岛异常甲基化与甲状腺癌的发生、发展有关，其主要机制可能与甲状腺恶性肿瘤中p16基因失活导致P16蛋白表达缺失有关。     

非霍奇金淋巴瘤降钙素基因高度甲基化的检测

降钙素(CT)基因位于人类11号染色体短臂11P15,在某些肿瘤,DNA甲基化发生改变,其5′端"CCGG"发生高度甲基化,我们应用多聚酶链反应(PCR)检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)CT基因的高度甲基化,旨在探讨甲基化分析在NHL诊断和微小残留病灶监测上的应用价值。 1 材料与方法 实验标本取自病理确诊的18例NHL患者,6例淋巴细胞型,高分化／低分化, 2例混合型, 1例组织细胞型,9例亚型未知(依据Rappaport非霍奇金淋巴瘤分类法)的淋巴瘤组织、髓片或血涂片(骨髓转移或骨髓转移合并淋巴肉瘤细胞白血病)(其中2例瘤组织, 14例髓片,2例血涂片),除2…     

异硫氰酸苯己酯诱导Molt-4细胞p15基因去甲基化的实验研究

 目的　研究异硫氰酸苯己酯（PHI）对急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞p15基因的去甲基化作用及转录激活作用。方法　采用甲基特异性聚合酶链反应（MSP）检测PHI作用前后Molt－4细胞株p15基因甲基化状态的变化情况;RT-PCR检测p15基因的mRNA的表达变化;Western blotting检测p15蛋白的表达变化。结果　PHI作用于Molt-4细胞5 d后,p15基因的异常甲基化现象被逆转,基因的甲基化程度减弱;基因转录激活,p15 mRNA、p15蛋白表达呈浓度依赖性增加。各组p15 mRNA条带灰度值与β-actin比值为：空白对照组（0.17±0.12）,PHI 10 μmol／L组（0.29±0.14）,PHI 20 μmol／L组（0.55±0.07）,PHI 40 μmol／L组（0.93±0.13）,各加药组与空白对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论　PHI有DNA去甲基化的作用,能诱导沉默的p15基因重新表达。     

非霍奇金淋巴瘤组织p73 mRNA基因表达与病因关系

目的 :探讨非霍奇淋巴瘤p73mRNA基因表达与病因的关系。方法 :采用逆转录聚合酶链反应技术 (RT PCR) ,检测 10例非恶性淋巴组织与 40例非霍奇金淋巴瘤组织 p73mR NA基因表达状况。结果 :10例非恶性淋巴组织均有mRNA表达 ( 10 0 % )。 40例非霍奇金淋巴瘤 p73mRNA表达 3 2 5 % ( 13 / 40 ) ,两组表达率差异有统计学意义 ,P <0 0 1。p73mRNA表达与临床分期无关 ,P >0 0 5 ,与病理类型有关 ,P <0 0 5。结论 :p73基因可能与非霍奇金淋巴瘤的发生有关     

肺癌组织细胞FHIT 基因启动子甲基化和转录表达

 目的 探讨FHIT（fragile histidine triad，脆性组氨酸三联体）基因表达水平及其启动子CpG岛甲基化状态与肺癌发生发展的关系。方法 用实时定量PCR检测FHIT mRNA在肺癌组织、肺癌旁组织与去甲基化剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine、5-Aza—CdR）处理前后A549细胞株中的表达，用甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测FHIT启动子CpG岛甲基化状态。结果 FHIT mRNA在肺癌旁组织中全部表达，在肺癌组织中表达缺失率为48．89％（22／45），且表达量低于正常肺组织（t=-15．851，P〈0．001），但在不同年龄和性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类的差异无显著性；FHIT基因启动子在肺癌组织中发生甲基化的频率为40％（18／45）、在癌旁组织中频率8．7％（2／23）（X^2=7．184，P〈0．01），18份启动子区甲基化的肺癌标本中，10份同时伴有mRNA表达缺失。结论 在肺癌组织中，FHIT基因启动子甲基化频率明显升高，其表达缺失或下调，提示FHIT启动子甲基化可在肺癌发生和发展中起一定作用。     

MUM1/IRF4在恶性淋巴瘤中的表达及其意义

目的通过检测恶性淋巴瘤组织中MUM1（multiple myeloma oneogene1）／IRF4（imerferon regulatory factor4）蛋白的表达，探讨MUM1／IRF4在恶性淋巴瘤的诊断及细胞起源中的意义。方法应用免疫组织化学S-P法，检测84例恶性淋巴瘤标本中MUM1／IRF4蛋白的表达。结果恶性淋巴瘤MUM1蛋白总阳性表达率为66．7％（56／84），其中霍奇金淋巴瘤阳性表达率为100.0％（14／14），非霍奇金淋巴瘤阳性表达率为60．0％（42／70）。在70例非霍奇金淋巴瘤中，B细胞淋巴瘤阳性表达率为52．0％（26／50），T细胞淋巴瘤阳性表达率为80.0％（16／20）。结论霍奇金淋巴瘤H／RS细胞可能来源于B细胞，在目细胞淋巴瘤中MUM1的表达提示该细胞处于分化的终末阶段，在T细胞淋巴瘤中MUM1的表达可能与细胞的活化有关。