牛乳主要过敏原酪蛋白的特性和分离纯化研究进展

牛乳是理想的蛋白补充剂,其中80%蛋白质为酪蛋白。酪蛋白作为牛乳中主要过敏原,严重影响牛乳过敏患者的营养补充选择。酪蛋白的结构特征与其致敏性强弱有关,所以选择合适的分离纯化方法,获得高纯度的酪蛋白是深入探究结构特征与致敏性关联的前提。本文从酪蛋白胶束的初步分离和酪蛋白亚型的提纯两个角度,总结了国内外牛乳酪蛋白分离纯化的研究进展。同时,文章也阐述了牛乳酪蛋白的基本特性以及其结构与致敏性的关系,以期为进一步降低酪蛋白致敏性的研究提供参考。     

酶解牛乳酪蛋白制备ACE抑制肽的研究

目的利用酶技术制备酪蛋白源ACE抑制肽.方法以ACE抑制活性为指标,筛选最佳用酶,优化酶解反应条件,并研究酶解过程中水解度和游离氨基酸含量的变化.结果通过对5种蛋白酶的筛选,最终确定AS1.398中性蛋白酶为水解用酶,制备酪蛋白源ACE抑制肽,其最佳反应条件为pH 7、温度45℃、底物质量分数7.5%、酶用量([E]/[S])5%,水解6 h.在酶解过程中,随着时间的延长,水解度略有增加,而游离氨基酸含量大幅度增加.酪蛋白ACE抑制肽的半抑制浓度(IC50值)为0.68mg/mL.结论牛乳酪蛋白用蛋白酶水解可制备高活性的ACE抑制肽,是获得ACE抑制肽的良好来源.     

牛乳中酪蛋白磷酸肽的制备工艺优化

研究碱性蛋白酶酶解牛乳中酪蛋白制取酪蛋白磷酸肽的条件,并用响应面对其进行优化。在单因素实验的基础上,依据Centure-Composite Design中心组合实验设计原理,运用3因素3水平的响应曲面分析法,建立了碱性蛋白酶水解牛乳酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽的二次多项数学模型,并以水解度为响应值作响应面,结果表明:酶水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽的优化工艺条件分别为,水解时间为90 min、酶用量为底物的2.3%、温度60.04℃,pH值7.73,在此条件下实际水解度为20.40%。以此酶解条件,从牛乳中制备酪蛋白磷酸肽,其得率为6.8%,并对其理化性质进行了检测。     

水解牛乳酪蛋白的抗原性研究

采用间接竞争抑制Elisa法测定水解酪蛋白中的残留抗原性,从而间接测定其致敏性。选择7种蛋白酶在各自适宜条件下酶解酪蛋白,观察酪蛋白抗原性随酶解过程的变化情况,并讨论了水解酪蛋白的抗原性随分子质量的变化以及深度水解酪蛋白与适度水解酪蛋白的抗原性。结果表明,不同蛋白酶对酪蛋白的抗原性影响不同,这可能是由于不同的蛋白酶具有不同特异性,其中,中性蛋白酶降低酪蛋白抗原性的效果最佳,抗原抑制率为20.91%;水解酪蛋白的分子质量越小,其残留抗原性越小,当其分子质量小于3 000Da时,抗原抑制率仅为6.61%;深度水解酪蛋白的抗原性较适度水解酪蛋白低,这主要是由于水解度及分子质量的不同。     

低矿化牛乳酪蛋白胶束与婴幼儿蛋白质胃肠消化的关系

蛋白质消化吸收对生命早期的生长发育至关重要，牛乳酪蛋白胶束矿化水平是影响婴幼儿蛋白质胃肠消化的重要因素。目前，乳制品加工业中常用的降低酪蛋白矿化水平的方法有离子交换脱钙法、螯合脱钙法和酸化脱钙法。低矿化牛乳酪蛋白能增加蛋白质溶解性、抑制蛋白凝胶形成、提高酪蛋白体外胃肠消化速率。研究发现，低矿化牛乳酪蛋白通过改变酪蛋白胶束结构，导致酸性环境和胃蛋白酶作用下形成的絮凝颗粒小且疏松，加速酪蛋白在胃中的分解和消化速率，能够帮助改善婴幼儿蛋白质胃肠消化问题，提高婴幼儿胃肠舒适度。文章旨在为婴幼儿配方奶粉选用低矿化牛乳酪蛋白胶束作为配料改善婴幼儿胃肠消化提供营养学理论支持。     

凡纳滨对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用免疫印迹法检测其主要过敏原蛋白组分;用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对凡纳滨对虾水溶性蛋白水解,消减过敏原。并且通过间接酶联免疫吸附实验和致敏豚鼠全身免疫实验对过敏原消减情况进行检测,确定酶法消减过敏原条件。结果表明,凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19kD 以及14kD 的蛋白质组分。胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0,酶与底物比1:100(m/m,下同),45℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物比1:100,60℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;菠萝蛋白酶最佳水解条件：pH7.5,酶与底物比1:100,55℃,底物质量浓度5g/100mL,水解时间3h。并且胰蛋白酶水解产物和木瓜蛋白酶水解产物对致敏豚鼠的全身免疫实验安全性很好。     

热处理对牛乳酪蛋白胶束结构影响的研究进展

概述了热处理过程中对牛乳中酪蛋白内部作用力、酪蛋白各个单体以及胶束结构的影响。指出热处理的温度和处理时间的不同,导致酪蛋白的疏水作用及二硫键的变化、组成酪蛋白胶束的各个单体(αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白)离解程度及结构的差异、酪蛋白胶束尺寸及胶束间作用力的改变。这对于牛乳酪蛋白的应用和整个胶束结构在热处理过程中的研究具有指导意义。     

酪蛋白糖巨肽的生理功能及发展前景

酪蛋白糖巨肽（casein Glycomacmpepride，简称CGMP）是一种含有唾液酸的糖肽，用凝乳酶或酸性蛋白酶水解牛乳酪蛋白（主要是K-酪蛋白），乳清中含有CGMP。简述CGMP的化学结构、制备、检测方法、生物活性、研究现状及应用前景。     

酶法制取罗非鱼动物蛋白水解液的研究

利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶对罗非鱼肉进行水解制备水解动物 蛋白,以水解度(DH)为指标对水解过程进行分析,选取中性蛋白酶作为适宜的单酶并研究其酶法水解最适宜的工 艺条件。为进一步提高水解度,进行了中性蛋白酶与酸性蛋白酶复合酶解的研究。     

3种乳源酪蛋白粒径及胶束结构的差异性

通过纳米粒度分析仪和扫描电子显微镜,分别对水牛乳、牛乳及羊乳中的酪蛋白颗粒直径大小分布情况及酪蛋白胶束结构进行研究。结果表明：水牛乳、牛乳及羊乳中酪蛋白的粒径分布及胶束结构方面存在明显的差异。水牛乳酪蛋白平均颗粒直径为182.3nm,酪蛋白颗粒互相连接成较细长的胶束,胶束之间交联成网络状;牛乳酪蛋白平均颗粒直径为207.4nm,酪蛋白颗粒聚集成直径较大的胶束;羊乳酪蛋白平均颗粒直径为173.8nm,酪蛋白颗粒仅能够形成较短的胶束,也不能交联成网络状。     

胰蛋白酶水解降低乳蛋白过敏的研究

为获得低致敏的婴儿配方食品原料,对乳蛋白中的主要过敏原在水解过程中抗原抑制率的变化情况进行研究.采用间接竞争EUSA法检测水解过程中主要过敏蛋白——β-乳球蛋白(β-LG)、酪蛋白和牛血清白蛋白(BSA)的抗原抑制率的变化情况.结果表明:胰蛋白酶水解的最适条件为温度45℃,E/S 0.5%,水解时间1 h.在此水解条件下乳蛋白的总致敏性降低最多,其中β-乳球蛋白下降(55.93±3.63)%,酪蛋白下降(90.53±5.27)%和牛血清白蛋白下降(57.44±5.02)%.用胰蛋白酶水解乳蛋白可获得低致敏性的婴儿配方食品原料.     

生物法制备低过敏乳的研究进展

牛乳中的乳蛋白绝大多数潜在过敏原,致使部分过敏体质的人群在摄入牛乳时发生过敏现象.降低牛乳蛋白过敏性的方法主要是通过物理法、化学法和生物法破坏蛋白质的过敏表位.与物理法、化学法比较,生物法不仅能更有效降低牛乳的过敏性,还可以赋予食品更多典型风味.文章主要介绍牛乳中过敏蛋白的组成及过敏表位,重点阐述两种制备低过敏乳的生物法(酶法水解和乳酸菌发酵法)及其研究进展,为制备低过敏乳制品提供参考依据.     

菠萝蛋白酶酶解鱼鳞蛋白的工艺优化研究

鱼鳞中含有丰富的蛋白质资源,对其进行温和、环保的酶法水解受到更多的关注.本文采用菠萝蛋白酶水解鱼鳞蛋白,制备胶原多肽制品.通过考察温度、时间、酶量、料液比等单一因素对酶解的影响,设计了L9(34)正交实验,最终获得了菠萝蛋白酶水解鱼鳞蛋白的优化工艺条件,即温度60℃,时间3h,酶量4％(质量分数),底物浓度5％(质量分数),水解度为18.1％,该条件具有生产应用前景.     

牛乳和驼乳中酪蛋白的差异蛋白组学分析

为深入研究牛乳和驼乳中酪蛋白的差异蛋白组学分析,采用双向电泳和质谱联用技术在蛋白质水平上探讨牛乳和驼乳的差异性,获得其中差异蛋白质,并以此为标识物建立了驼乳中牛源性成分的检测方法,进一步促进驼乳以及驼乳酪蛋白的研究和开发。用双向电泳技术（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）对牛乳和驼乳中酪蛋白进行了初步分离分析。结果表明：与牛乳酪蛋白相比,在驼乳酪蛋白的2-DE图谱中发现差异蛋白斑点有40个,其中33个蛋白在驼乳酪蛋白中表达缺失,7个蛋白在驼乳酪蛋白中表现为低表达,对低表达的蛋白斑点（10、11、13、16、63、64、127）进行Maldi-TOF-TOF质谱鉴定,成功回收和鉴定了这7个低表达蛋白的中5个,归属为3个蛋白,分别是酪蛋白2、κ-酪蛋白A片段、β-酪蛋白。说明驼乳和牛乳酪蛋白之间的确实存在一定差异性,可以以此差异蛋白为检测标识物来建立驼乳中牛源性成分的检测方法,来满足驼乳及乳制品真实性问题的检测需求。     

多酶协同水解核桃蛋白的研究

以核桃蛋白为原料,采用酶法制备核桃多肽,对单一酶解、多酶酶解、加酶顺序进行了研究。试验结果表明:蛋白酶种类对核桃蛋白水解作用影响较大,单酶水解度大小依次为碱性蛋白酶中性蛋白酶酸性蛋白酶菠萝蛋白酶木瓜蛋白酶;分步依次加酶方式优于同时加酶方式;选择碱性、中性、酸性3种蛋白酶对核桃蛋白进行分步依次加酶水解,水解度达到45.58%。     

电泳与质谱技术联用鉴定牛乳酪蛋白分子酶法脱磷酸化修饰

牛乳酪蛋白的磷酸化程度对酪蛋白的结构、功能和营养特性等有着重要的影响。为了从分子水平上模拟人乳组成,选用合适的方法修饰调控牛乳酪蛋白磷酸化程度,并且准确检测其磷酸化程度的变化至关重要。该研究使用马铃薯酸性磷酸酶(PAP)对β-酪蛋白和酪蛋白酸钠脱磷酸化修饰,并分别运用SDS-PAGE、UreaPAGE和质谱技术联用鉴定酶法脱磷酸化修饰后蛋白中磷酸化程度的变化。实验结果表明,采用SDS-PAGE可以观测到α-、β-酪蛋白和蛋白水解情况,但不能区分不同程度脱磷酸化的酪蛋白。Urea-PAGE能较为清晰地表示不同程度脱磷酸化的酪蛋白,但不能准确鉴定不同程度脱磷酸化酪蛋白所含的磷酸基团的个数。LC-MS不仅可以清晰地表示酪蛋白脱磷酸化程度,还可以定量分析不同程度脱磷酸化酪蛋白所含的磷酸基团的个数。     

南美白对虾主要过敏原原肌球蛋白的低过敏性处理方法研究

以南美白对虾原肌球蛋白(Tropomyosin,Tm)为研究对象,采用酶解法、超声结合酶解法消减3种虾制品中的Tm。首先,以菠萝蛋白酶水解富集的Tm样品通过优化酶活与底物质量比、反应时间和反应温度,建立了能有效消减Tm的酶解方法;同时对比了酶解、超声结合酶解法分别对虾仁、蝴蝶虾仁和虾糜3种制品中的Tm过敏原性变化情况。Tm致敏动物模型的抗血清ELISA结果显示,单纯酶解和超声结合酶解处理的虾仁其过敏原性无显著性差异(P0.05);经超声结合菠萝蛋白酶酶解处理后的蝴蝶虾仁样品其过敏原性降低了21.05%;而虾糜样品中,单纯的酶解或超声结合酶解法与对照相比均有显著性差异,其过敏原性分别减少了30.70%和33.33%。综上所述,作者建立的酶解法可有效消减Tm的过敏原性,该酶解法以及超声结合酶解法在低过敏原性蝴蝶虾仁和虾糜制品的生产领域具有较高的应用可行性。     

冻融处理对牦牛乳酪蛋白胶束组成和稳定性的影响

冷冻贮藏是克服牦牛乳生产的季节性、产量低、泌乳期短等问题的重要手段,本研究探究了冻融处理条件对牦牛乳酪蛋白胶束组成和胶体稳定性的影响。将脱脂后的牦牛和荷斯坦牛原料乳于-18℃和-80℃冷冻贮藏210 d后,分别在4℃、25℃和50℃条件下解冻,通过超高速离心法（135 000 g,2 h,25℃）分离牦牛乳中的胶束相和乳清相。监测胶态钙和磷酸根、4种酪蛋白在两相中的分布;通过动态光散射检测酪蛋白胶束直径和直径分布,通过Turbiscan法测试样品经过冻融前后的物理稳定性变化规律。冻融处理促进了牦牛乳溶解相中的钙离子、磷酸根离子、αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白和β-酪蛋白迁移到胶束相中,导致胶束直径和直径多不分散指数增加,物理稳定性降低。冻藏温度相同的条件下,解冻温度越高,胶束相中钙和磷酸根、αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白和β-酪蛋白的含量越大,导致胶束的稳定性越低。在解冻温度相同的条件下,-18℃和-80℃冷冻贮藏条件产生的2种牦牛乳酪蛋白胶束的性质无显著差异。冻融处理对牦牛乳酪蛋白胶束的组成和稳定性有不利影响,低温解冻对牦牛乳酪蛋白胶束组成和稳定性的影响最小。     

谷氨酰胺转氨酶交联对牦牛乳曲拉酪蛋白功能性质的影响

以曲拉和荷斯坦牛乳酪蛋白为原料,利用安全、高效的谷氨酰胺转氨酶对其进行交联修饰,研究谷氨酰胺转氨酶对酪蛋白功能性质的影响,测定交联前后样品的持水性、持油性、热稳定性、黏度、起泡性。结果表明,牦牛乳曲拉酪蛋白和荷斯坦牛乳酪蛋白经过谷氨酰胺转氨酶交联后,两种酪蛋白的交联度分别可达到20.04%(p<0.05)和25.15%(p<0.05),曲拉酪蛋白的持水性、热稳定性、黏度和泡沫稳定性显著增加(p<0.05),荷斯坦酪蛋白的黏度和热稳定性显著增加(p<0.05),其余性质均无显著差异。研究结果能为酶法改性酪蛋白的工业化生产提供理论依据。     

低致敏食品制备技术及其工业化应用研究进展

食物过敏是联合国粮农组织和世界卫生组织认定的全球性食品安全问题之一。在食品加工多元化的背景下,食物过敏患者要完全避免过敏原十分困难,研发低致敏食品对食物过敏患者的安全膳食至关重要。总结了低致敏食品制备技术的加工技术原理;以蒸煮、微波和烘烤为主的热加工技术通过加热诱导蛋白质变性的方式破坏致敏性构象性表位;高压、脉冲电场、脉冲光、低温等离子体、辐照和超声等非热加工技术可以通过过敏原蛋白结构修饰、多肽链断裂、新化学键的产生等方式直接破坏致敏性表位;酶水解、酶交联、糖基化、微生物发酵等其他加工方法则通过改变蛋白质构象或将蛋白质与糖类物质结合,破坏或隐藏过敏原致敏性表位。另外,对工业化低致敏蛋白配料的加工方法和生产现状进行了阐述分析。基于酶法水解的部分水解乳蛋白和深度水解乳蛋白已经可以工业化生产,其他消减食物致敏性的方法以及其他低致敏蛋白配料值得进一步研究。希望可以为工业化生产低致敏食品提供参考。