兔抗绿脓杆菌EP血清对实验感染小鼠被动免疫效果的研究

本研究表明,兔抗绿脓杆菌EP血清对我国绿脓杆菌1～11等不同血清型别株感染的防御效果显著。EP血清除对9型作用不显著外,对1、2、3、6、8和10型菌株感染的保护效果尤佳。与对照组相比,EP血清免疫组能保护50～100%小鼠耐受10～20LD50的攻击。     

抗宋内氏志贺菌脂多糖单克隆抗体对小鼠免疫保护作用的初步研究

本文用宋内氏志贺菌加热致死后的菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以纯化脂多糖筛选，获得２株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并以小鼠腹腔感染作为实验动物模型，进行单克隆抗体被动保护实验。结果表明，在攻击前输入单克隆抗体，对同型菌感染有显著保护作用，保护率随抗体剂量增加而增高。提示识别脂多糖分子上某一抗原决定簇的抗体，能够对感染起到良好的保护作用。脂多糖是志贺菌毒力相关因子之一。     

内毒素核心糖脂单克隆抗体的血清学反应性及保护作用的初步研究

以S.minnesota R595菌为免疫原,通过细胞融合获得8株分泌抗核心糖脂单抗的杂交瘤细胞系。对其中的两株代表性单抗2D6E7和3H4 2F7的血清学反应性以及在小鼠Hb/Mu腹腔感染模型中的保护作用进行了初步研究。菌体吸收试验和间接免疫荧光试验(ⅡF)表明,单抗能与多种革兰氏阴性杆菌(GNB)产生交叉反应,并且光滑型GNB的煮沸菌体荧光染色呈阳性,活菌染色呈阴性。保护性试验结果表明,3H4 2F7单抗能显著提高S.minnesota(野生菌株),鼠伤寒杆菌和E.Coli等光滑型GNB攻击的小鼠存活率(P<0.05),显示出抗核心糖脂单抗的良好交叉保护作用。若攻击前、后2h或攻击同时输入单抗3H4 2F7,对光滑型GNB的感染均有明显保护效果(P<0.05);2D6 E7单抗未表现有保护活性。     

痢疾杆菌脂多糖抗独特型(AId)单克隆抗体的制备和鉴定

以抗宋内志贺氏痢疾杆菌(Shigella sonnei)脂多糖单克隆抗体(Ab1)为抗原,免疫同系BALB/c小鼠和异系DBA小鼠,以其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞株融合,得到16株能稳定分泌抗独特型单克隆抗体(Ab2)的杂交瘤细胞株,对其中5株抗体进行了血清学、免疫化原和免疫生物学鉴定,证明其中2株(AC1和BH8)为内影像抗独特型单克隆抗体(Ab2β)。它们能够模拟宋内菌脂、多糖抗原位点,使动物产生功能类似Ab1的抗体(Ab3),为进一步研究其作为疫苗的可行性打下了基础。     

单纯疱疹病毒糖蛋白单克隆抗体对致死性腹腔感染BALB/c幼鼠的被动保护作用

用单纯疤疹病毒(HSV)Ⅰ型SM44株和Ⅱ型SaV株分别腹腔感染BALB/c小鼠,于感染前后不同时间经腹腔注射HSV单克隆抗体(McAb)观察6株McAbs对致死性腹腔感染小鼠的被动保护作用。结果4株McAbs(2C5、1A12、Mad-2、1D10)对HSV-Ⅰ感染的小鼠有保护作用,5株McAbs(2C5、1A12、2A8、1D10、CH-A9)对HSV-Ⅱ感染的小鼠有保护作用。体内保护作用与体外的中和活性相关;并分析了McAbs在中和试验中有无补体参与条件下的保护能力。还证实了HSV糖蛋白在急性感染病程中其型特异性和型共同性抗原决定簇在体内的表达。     

单克隆抗体在研究绿脓杆菌表面抗原中的应用

McAb与各种免疫化学技术结合,用于分析细胞表面抗原。在交叉免疫电泳中,应用两种不同脂多糖特异的McAb,揭示了在一株绿脓杆菌内存在LPS亚群。为确定微孔蛋白F的表面位置,这种蛋白特异性的四株McAb都显示出能与完整绿脓杆菌细胞作用,在间接免疫荧光试验中产生高强度荧光。在小鼠中,一种F蛋白特异的McAb成功地显示了对绿脓杆菌感染的保护,表明F蛋白是能在活菌内表达的。采用免疫荧光,显示脂蛋白H_2书异的McAb只是在O抗原缺陷的绿脓杆菌变株中能与该蛋白作用。蛋白F特异性McAb能与溴化氰裂解或胰酶及链酶蛋白酶消化的F蛋白片段反应,这充分证明McAb在抗原分析中可用作特异性试剂。根据肽段分析,可测定F蛋白独特抗原决定区域的化学性。     

痢疾杆菌脂多糖抗独特型（AId）单克隆抗体的制备和鉴定

以抗宋内志贺氏痢疾杆菌脂多糖单克隆抗体为抗，免疫同系ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和异系ＤＢＡ小鼠，以其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞株融合，得到１６株能稳定分泌抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对其中５株抗体进行了血清学、免疫化原和免疫生物学鉴定，证明其中２株为内影像抗独特型单克隆抗体。它们能够模拟宋内菌脂多糖抗原位点，使动物产生功能类似Ａｂ１的抗体，为进一步研究其作为疫苗的可行性打下了基础。     

抗绿脓杆菌毒素A单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

本文采用绿脓杆菌外毒素A免疫BALB/c小鼠取脾细胞与Sp2/0细胞融合,建立了6株分泌单克隆抗体的杂交瘤,分别命名为14F10,23B9,23F1,23C12,,24A6及24B5。其中,23F1及24A6在传代培养中逐渐丧失了分泌抗体的能力,其余4株可稳定地分泌抗体。它们的Ig亚类鉴定;14F10为IgM,23B9为IgC1,23C12为JgG2b,24B5为JgG1。注射入同系小鼠腹腔,可产生高滴度抗体,在夹心ELISA试验中己证实均为抗绿脓杆菌外毒素A特异性的。此外,文中还讨论了在间接ELISA初次筛选中出现的假阴性及假阳性的原因及其排除方法。     

抗禽流感病毒M2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:利用纯化的融合蛋白GST-M2免疫BALB/c小鼠,然后以GST-M2 和 GST分别作为ELISA抗原进行筛选,选择GST-M2抗原检测强阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆,建立能稳定分泌抗AIV M2 mAb的杂交瘤细胞株.mAb的效价采用间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)测定,用夹心ELISA测定Ig亚类,Western blot、抗原捕获ELISA、间接免疫荧光及免疫组化染色法检测 mAb 的特性.结果:得到4株分泌抗禽流感病毒M2蛋白的mAb的杂交瘤细胞株1E1、2F8、4E3 和 5D6,小鼠腹水中抗体的ELISA效价大于210×100、AGP效价大于1:4.抗体亚类鉴定1E1和4E3为IgG2a,2178和5G6为IgG2b.抗原捕获ELISA表明,2F8 wAb能与H5、H9亚型AIV发生特异性反应,而不能与鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)反应.IFA和免疫组化试验表明,2F8 mAb能够与感染了禽流感病毒的MDCK细胞以及鸡体组织细胞发生特异性结合.结论:本研究获得4株抗禽流感病毒M2蛋白的mAb,其中2F8mAb的效价高、特异性强,可作为检测AIV方法的核心试剂.     

抗hCG-β单克隆抗体的产生及初步鉴定

本文报道用hCG免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,获得6株分泌抗hCG单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中,2B5和2D8二株细胞的分泌抗体,对hCG-β亚基呈强阳性反应。其培养液抗体的ELISA效价为10~(-2)～10~(-4);注入同系小鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-5)～10~(-7)。2B5抗体为IgA,2D8抗体属IgG_1。它们对hCG-β的亲和常数(K_a)分别为0.8×10~9升/克分子和1.8×10~9升/克分子.在以~(125)I-hCG-β作为标记物的检测系统中,2B5抗体在50％抑制时同hLH的交叉反应为5.7％,而2D8抗体为3.1％.     

花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体的制备与应用

目的制备与鉴定抗花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体,建立双单抗ELISA法,检测食品中花生过敏原。方法以花生主要过敏原Ara h1为抗原免疫Balb/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1。半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株后诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体。利用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型。间接ELISA法和Western blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏源的交叉反应性。建立双单抗夹心ELISA法检测食品中的花生过敏原。结果共获得抗Ara h1细胞株4株,分别命名为2G9、5G4、5B5、2C7,效价均高于1∶106。经抗体亚型鉴定,4株抗体均为Ig G1型。Western blot的结果表明4株抗体均能识别Ara h1,其中2G9与5G4结合能力较强。在特异性检测实验中,2G9和5G4与其他种类过敏原无交叉反应。通过建立双单克隆抗体夹心ELISA法,发现花生Ara h1蛋白的检出低限为:5 ng/ml,标准曲线在~80 ng/ml范围内线性良好。利用此法检测了10种食品,结果显示在5种含有花生成分的食品中均检测到了花生过敏原。结论获得高效价抗体4株,建立了高效、高特异性的食品中花生过敏原的检测方法,为食品中花生过敏原的检测提供了依据。     

抗人载脂蛋白E单克隆抗体制备及免疫学特性的研究

应用人血清纯化的ApoE免疫BALB/C小鼠,其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗人ApoE单克隆抗体的杂交瘤细胞株(E6C3,E4C2和E3C3),对其免疫学特性进行了研究。腹水效价为8×10~(-5)～2×10~(-6),与其它载脂蛋白没有交叉反应,制备免疫亲和层析柱纯化了ApoE,单抗相加试验和双抗体夹心试验证明,两株MeAb识别ApoE的两个不同抗原决定簇,抗体亚型均为IgG_1型。应用ELISA双抗体夹心法测定了人血清ApoE含量。     

角蛋白和过氧化物酶双特异性杂交杂交瘤的建立

作者采用杂交杂交瘤技术制备用于免疫学测定的双特异性抗体。以8-氮鸟嘌呤处理抗过氧化物酶杂交瘤细胞株E-47,获得了HAT敏感的突变株,且保持抗过氧化物酶分泌活性,将其中一个细胞克隆O45克隆化后,与角蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,得到了一株稳定分泌抗角蛋白和抗过氧化物酶双特异性抗体的杂交杂交瘤BKH,染色体众数为129条,分泌的抗体含有IgG(1-2a)型杂交抗体。免疫组化显示,BKH抗体可识别角化的皮肤鳞状上皮组织,而不与其它上皮组织反应。     

平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。     

抗人红细胞M型抗原单克隆抗体的研制及初步应用

应用杂交瘤枝术,用人M型RBC免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞系NS-1融合,筛选出抗M血型抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株13H_2;经过8个多月连续传代培养增殖良好,仍能稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体。细胞培养上清效价1∶512,亲和力11s。通过将此株单抗用于血型检测、标准红细胞谱细胞的鉴定和在法医上检测血痕,均证明此株单抗识别的只是红细胞上的M血型抗原,与其它血型抗原无关。较多克隆抗M型抗原血清特异性强,效价高,亲和力好,是检测MN血型的良好诊断试剂。     

H5N1流感病毒M1蛋白免疫制备的单克隆抗体的研究

目的 制备抗人流感病毒H5N1株M1蛋白的单克隆抗体,为流感的快速诊断和研究提供新的工具.方法 应用在大肠埃希菌中表达的人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)株M1蛋白,以纯化的表达产物免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与sp2/0细胞系作细胞融合后,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞,并应用间接免疫荧光法对抗体的特异性进行鉴定.结果 获得3株能稳定分泌抗禽流感病毒M1抗原的McAb杂交瘤细胞株,交叉反应试验及间接免疫荧光检测表明,三株McAb具有型特异性.结论 用H5N1禽流感病毒M1蛋白免疫制备的单克隆抗体,具有一定的交叉反应性,可用于多种亚型甲型流感病毒的检测.     

抗百日咳毒素单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的：制备抗百日咳毒素（PT）的单克隆抗体（mAb）。方法：按常规细胞融合技术制备抗PT的mAb，并对其特异性、相对亲和力及中和活性等进行了鉴定。结果：获得7株分泌抗PT的mAb的杂交瘤细胞。7株mAb的Ig亚类（型）均为1gG1（κ），并能特异性识别PT，与百日咳丝状血凝素及C型肠毒素无交叉反应。其中2侏mAb 1D4和3E4有中和抑制PT聚集CHO细胞的活性。Western blot的结果表明，2D7、5F9、5F8、1D4和2C25株mAb，均能识别PT抗原的S1亚单位蛋白，mAb 1B8可识别S2亚单位蛋白，mAb 3E4可识别S3亚单位蛋白。结论：成功地制备抗PT的mAb，经鉴定具有良好的特异性，为研制定量检测PT的ELISA试剂盒提供了制剂，     

小鼠感染流感病毒后可抵抗致死性流感病毒攻击的研究

目的 BALB/c小鼠初次感染流感病毒(A/California/7/2009(H1N1)(pCA07)和A/Guangzhou/333/99(H9N2)(GZ333))后,用流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)(PR8) 10倍致死剂量攻击,观察攻毒后小鼠的反应.方法 BALB/c小鼠150只,分成3组,空白对照组PBS滴鼻,实验组分别感染甲型H1N1流感病毒pCA07和禽源H9N2病毒GZ333；感染56 d后用10倍致死剂量的鼠肺适应株流感病毒PR8攻击两个实验组和对照组小鼠,比较PR8病毒攻击后,病毒载量和抗体水平,以及对小鼠存活率的影响.结果 感染过pCA07和GZ333的小鼠在致死病毒PR8攻击后全部存活,并分别在病毒攻击6d和9d后小鼠肺组织中检测不到攻击病毒.对初次感染病毒的抗体水平在病毒PR8攻击后迅速升高,在保持初次感染病毒抗体的同时能够产生针对PR8病毒的抗体.结论 不同亚型流感病毒感染小鼠后可以提供交叉保护.     

抗TIGIT单克隆抗体的制备及活性鉴定

目的制备新型抑制剂膜分子TIGIT(T cell immunoglobulin and ITIM domain)的单克隆抗体并鉴定其在心脏移植免疫耐受中的作用.方法用人TIGIT-GST重组蛋白免疫小鼠并制备单克隆抗体,抗体特异性实验检测抗体与TIGIT的结合能力.运用重导向杀伤实验检测TIGIT抗体对NK细胞杀伤P815的作用.通过酶吸收法检测TIGIT活化性抗体对CTLs及CD8 Treg细胞活性的影响.结果成功制备得到一株非活化的抗TIGIT的抗体7M13和一株活化性的抗TIGIT抗体4D9.抗体特异性实验表明抗体7M13和4D9均能与人和小鼠的TIGIT结合.重导向杀伤实验表明该抗体7M13对NK细胞杀伤P815细胞的功能没有显著抑制作用,说明7M13可以与TIGIT结合而不活化TIGIT;而4D9则可以显著抑制NK细胞的杀伤功能.从37例心脏移植患者中分离CTLs及CD8 Treg,采用TIGIT活化性抗体处理对细胞生存能力无显著影响,但可明显抑制CTLs的增殖能力,而对CD8 Treg的增殖能力无显著影响.结论分别成功获得非活化的抗TIGIT抗体7M13和活化性的抗TIGIT抗体4D9,并且4D9可显著抑制NK细胞的杀伤功能.     

抗人淋巴细胞T8抗原样McAb的研制和初步鉴定

用杂交瘤技术,将经人外周血E花环阳性细胞免疫小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合后,产生一分泌IgG_1亚型McAb杂交瘤株。其所分泌抗体经微量放射免疫测定及间接免疫荧光法分析,表明它只能与T细胞系、76％的胸腺细胞及22％的外周血T淋巴细胞反应,不与其它各种不同细胞反应。将此抗体所识别入外周血T淋巴细胞亚群与抗Leu-2a识别T8~+细胞、抗Leu-3a识别T4~+细胞比较,发现此抗体与抗Leu-2a识别同一群细胞。此抗体能从T细胞表面沉淀出30KD(还原条件)或78KD(非还原条件)分子,并完全阻断FITC标记抗Leu-2a与T细胞的结合,说明此抗体是识别T8抗原样的McAb。