Q热立克次体67kD蛋白的免疫保护性研究

本文报道Ｑ热立克次体６７ｋＤ膜蛋白抗原对小鼠和豚鼠的免疫原性和免疫保护性的研究。结果表明６７ｋＤ蛋白抗原在体内和体外均能有效地激活实验动物的细胞免疫和体液免疫系统。免疫小鼠和豚鼠对１０３ＩＤ５０Ｑ热立克次体七医株Ⅰ相攻击的保护率均为１００％，体外淋巴细胞增殖试验阳性，免疫动物出现迟发型变态反应，并全部检出特异性抗体。本项研究提示６７ｋＤ蛋白有可能用于制作有效的Ｑ热亚单位疫苗。     

用DNA探针技术检出Q热立克次体

Ｑ热立克次体九里株全ＤＮＡ经ＥｃｏＲＩ酶切后，与ｐＵＣ１８质粒载体相连，从获得的１６个重组子中筛选出３号重组子的２．５ｋｂ插入片段经￣３２Ｐ标记后制成探针，分别与Ｑ热立克次体、莫氏立克次体、普氏立克次体、黑龙江立克次体、绿脓杆菌、大肠杆菌的全ＤＮＡ进行杂交，结果显示，２．５ｋｂ片段具较高的特异性和敏感性，可用于Ｑ热立克次体的检出。来源于慢性Ｑ热立克次体质粒ＱｐＲＳＰＣＲ扩增片段（１．４８５ｋｂ）所制备的探针只与ＹＳ－８和ＹＨ－１１株ＤＮＡ有杂交，从而证明我国云南此两分离株为慢性株。若以上两探针联合应用，可望鉴别Ｑ热立克次体的急、慢性感染。     

黑龙江立克次体外膜蛋白B基因表达及表达重组蛋白的抗原性分析

黑龙江立克次体为远东蜱传斑点热病原体,本文以黑龙江立克次体基因组为模板,扩增ompB的4段基因,利用原核表达载体构建重组表达质粒,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌表达重组目的蛋白,并对其抗原性进行分析.免疫印迹反应表明,重组表达的4个蛋白均与黑龙江立克次体感染小鼠血清反应.该4个重组蛋白分别免疫小鼠后,分析其血清的特...     

我国Q热立克次体分离株cbhE‘和cbbE’基因的扩增

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）首次对我国Ｑ热立克次体分离株质粒上的特异ＤＮＡ片段ｃｂｈＥ＇和ｃｂｂＥ＇基因进行扩增，目的序列分别为２５８ｂｐ和１４８５ｂｐ。实验结果显示，在我国分离的８株Ｑ热立克次体株中，３株出现了２５８ｂｐ阳性扩增带，５株有１４８５ｂｐ扩增带；两对引物只扩增Ｑ热立克次体的ＤＮＡ。研究证明，我国分离的Ｑ热立克次体株也分别带有ＱｐＨＩ和ＱｐＲＳ型质粒，存在急、慢性分离株之分，但分离株所含质粒类型并不完全与其菌株感染的临床表现相吻合。     

空肠弯曲菌67KD外膜蛋白诱导抗核抗体生成

在分离提取空肠弯曲菌 S—131主要膜抗原成份67KD 鞭毛蛋白的基础上,用此蛋白成份经腹腔免疫8周龄雌性 KM 小鼠,每周一次,共12周,ELISA 方法动态测定小鼠血清中自身抗核抗体(包括抗 ds-DNA,ss-DNA 和组蛋白抗体)的水平。发现输注剂量为120—200μg/次/小鼠时能成功诱导上述各类自身抗体的产生,其中抗组蛋白抗体的阳性反应性最大,出现时间较早.本研究为从分子水平研究慢性感染诱致自身免疫的机理提供了新的实验依据,为抗组蛋白抗体作临床早期诊断的潜在作用提供了佐证.     

基于ompB基因序列的立克次体精河株的系统发育分析与鉴定

用PCR方法扩增新疆分离的斑点热立克次体精河株(Rickettsia sp.Jinghe)的外膜蛋白B基因(ompB)并测定其序列,将精河株ompB基因序列与其他斑点热群立克次体的ompB基因序列进行比较作系统发育分析,结果表明精河株与西伯利亚立克次体(R.sibirica)有最近的亲缘关系,但他们之间的差异水平可将精河株列为斑点热群立克次体的一个新种。     

斑点热群立克次体HL—93株ompA蛋白基因片段的克…

以根据立氏立克次体分子量为１９０×１０＾３蛋白抗原基因序列设计的一对引物Ｒｒ１９０．７０ｐ和Ｒｒ１９０．６０２ｎ，用聚合酶链反应技术从斑点热群立克次体ＨＬ－９３株染色体ＤＮＡ中扩增出了１９０×１０＾３蛋白基因的部分片段。通过载体质粒ｐＧＥＭ－Ｔ将该部分基因片段克隆进入了大肠杆菌ＪＭ１０１，并进行了核苷酸序列分析。     

黑龙江口岸斑点热群立克次体调查研究

为了解黑龙江口岸地区斑点热群立克次体在人群、鼠类、蜱类中的分布特征,针对黑龙江省9个中俄边境口岸,采集出入境人群的血液样本215份、鼠类样本204份、蜱类样本188份,利用半巢式PCR方法对所有样本进行斑点热群立克次体特异性片段扩增,通过基因测序对斑点热群立克次体分型。结果在哈尔滨机场及嘉荫两个口岸的大仓鼠及小家鼠中检测到2例劳氏立克次体Rickettsia raoultii,为首次在黑龙江口岸鼠样本中检测出劳氏立克次体;在188份蜱样本中,检出斑点热群立克次体阳性样本101例,感染率达53．7％,其中劳氏立克次体89例,新塔拉塞维奇立克次体Candidatus Rickettsia tarasevichiae 11例,黑龙江立克次体Rickettsia heilongjiangii 1例,同样首次在黑龙江口岸全沟硬蜱中检测到新塔拉塞维奇立克次体。黑龙江中俄边境口岸开展SFGR的长期监测具有非常重要的公共卫生学意义。     

甘肃南部部分地区Q热分子流行病学调查研究

为了解甘肃南部部分地区人群、媒介及宿主动物中Q热贝氏柯克斯体感染情况,采用布旗法和夹夜法分别采集蜱、野栖鼠标本,并收集当地居民及家畜血液标本.应用巢式PCR方法扩增蜱及野栖鼠标本中Q热立克次体,共检测6种蜱1 273只,其中若蜱1 126只,成蜱147只蜱标本,若蜱67组中有5组检测到Q热病原体DNA片段.成蜱中17只检测阳性;42只野栖鼠中2个鼠种3只检测阳性;采用间接免疫荧光法进行血清Q热抗体检测.共检测当地居民血清446份,抗体阳性29份;不同职业阳性率存在差异,以牧民的阳性率为最高.共检测家畜血液标本326份,其中牛56份,阳性5份;羊270份,阳性29份,无显著差别.饲养牛羊、牛羊不明原因流产、接生时保护措施3个因素与血清阳率有关,其中前两个因素为危险因素,后者为保护因素.     

日本立克次体ompB蛋白基因克隆及序列分析

参照立氏立克次体分子量为１２×１０＾４蛋白基因序列合成引物，分两段扩增日本立克次体的１２×１０＾４蛋白基因，扩增ＤＮＡ的长度分别为２．５和２．６ｋｂ。含有启动子区的２．６ｋｂ片段在ｐＵＣ１９质粒中不稳定。从这段ＤＮＡ删去启动子及８５个氨基酸编码子区的扩增产物可被克隆。     

斑点热群立克次体HL-93株ompA蛋白基因片段的克隆及序列分析

以根据立氏立克次体（Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ，Ｒｒ）分子量为１９０×１０~３蛋白抗原基因序列设计的一对引物Ｒｒ １９０．７０ｐ和Ｒｒ １９０．６０２ｎ，用聚合酶链反应技术从斑点热群立克次体ＨＬ－９３株染色体ＤＮＡ中扩增出了１９０×１０~３蛋白基因的部分片段。通过载体质粒ｐＧＥＭ－Ｔ将该部分基因片段克隆进入了大肠杆菌ＪＭ１０１，并进行了核苷酸序列分析。通过与已报道的立氏立克次体、日本立克次体１９０×１０~３蛋白基因该部分片段的ＤＮＡ序列进行比较发现：ＨＬ－９３株立克次体与立氏和日本立克次体该部分ＤＮＡ分别有３１和２４个核苷酸不同，与这两种立克次体该部分ＤＮＡ的同源性分别为９４％和９５．４％。根据改变的核苷酸推定的与这两种立克次体的氨基酸序列的同源性分别为８７％和８９％。序列分析表明ＨＬ－９３株立克次体属于斑点热群立克次体新成员。     

福建省斑点热群立克次体的检测,分离及鉴定

作者用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ分型系统首次对福建省宁化县和漳州市的蜱和啮齿动物进行了斑点热群立克次体的检测。并从宁化县收集的越原血蜱中分离到一株斑点热群立克次体，命名为ＮＨ－９５株，分别用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及ＰＣＲ／ＲＦＬＰ进行了鉴定。结果显示：宁化县的越原血蜱、微小血蜱、金泽革蜱和漳州市的黄胸鼠可能感染西伯利亚立克次体；ＮＨ－９５株在蛋白多肽、抗原多肽和ＰＣＲ／ＲＦＬＰ图谱上均与西伯利亚立克次体一致，在中国南方地区首次从病原学证明存在北亚蜱传斑点热的自然疫源地。     

我国Q热立克次体菌株23S rRNA基因插入顺序的分析

目的 对我国伯氏考克斯体分离株的２３Ｓ ｒＲＮＡ基因插入片段（２３Ｓ ＩＶＳ）作核酸序列分析。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增７株Ｃｂ中国分离株和２株外国参考株的２３Ｓ ＩＶＳ，用双脱氧核苷酸法对扩增产物进行测序。3