左旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

用大鼠肝微粒体体外温孵法进行了左旋黄皮酰胺[(-)-clausenamide]代谢转化研究,优化了温孵体系,建立了反相HPLC-DAD同时分离检测左旋黄皮酰胺及其体外代谢产物的分析方法。用硅胶低压柱色谱、制备TLC及制备HPLC分离纯化了两个代谢产物并进行了光谱鉴定。结果表明,两个代谢物分别确定为6-和5-位羟基取代的黄皮酰胺。     

右旋和左旋黄皮酰胺在大鼠体内代谢转化的研究

目的　研究黄皮酰胺在大鼠体内的代谢转化途径。方法　收集ip给药后大鼠的尿液、粪便及血液进行分析,寻找已知的代谢产物并通过HPLC-DAD和HPLC-MS分析寻找未知的代谢产物,确定大鼠体内的主要代谢途径。并通过比较(+),(-)-黄皮酰胺代谢的差异,初步研究其代谢转化的立体选择性。结果　HPLC分析发现,大鼠肝微粒体中所分离得到的6个主要代谢产物均在体内存在,(+),(-)-黄皮酰胺的代谢有明显的差异,根据MS碎片信息确定了一个新的代谢产物的结构,即N-去甲黄皮酰胺。结论　手性黄皮酰胺主要在肝脏中发生羟基化代谢反应,并有明显的立体选择性。     

黄皮酰胺对映体在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学黄皮酰胺对映体在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学

目的研究黄皮酰胺（clausenamide,Clau）对映体在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学并比较其立体选择性差异。方法应用反相HPLC法测定Clau对映体在体外代谢系统中的产物，并用Eadie-Hofstee作图法分析数据、求算酶促反应动力学参数K_m和V_max以及肝代谢速率V_max/K_m。结果在体外代谢系统中，左旋黄皮酰胺主要生成7-羟-Clau、5-羟-Clau和4-羟-Clau，其优势代谢途径为7位羟化；7位羟化代谢的V_max/K_m值高于5位和4位。右旋黄皮酰胺的4位羟化反应K_m最小、V_max最大, 因此代谢速率最高，是左旋体4位羟化的8倍；而其7-羟-Clau和5-羟-Clau 的产生量很小。结论黄皮酰胺对映体在大鼠肝微粒体中的羟化代谢存在明显的底物立体选择性差异。     

水黄皮素在大鼠肝微粒体中的代谢研究

目的 研究水黄皮素在大鼠肝微粒体中的代谢稳定性,确定水黄皮素的代谢酶表型.方法 将水黄皮素与大鼠肝微粒体于37℃孵育,应用UPLC-MS/MS法检测孵育液中水黄皮素的含量,考察水黄皮素的代谢稳定性.将水黄皮素与各细胞色素P450(CYP)酶中的各同工酶CYP2E1、2C19、1A2、2D6、2C9和3A4的特异性抑制剂共孵育,确定其代谢酶表型.结果 在大鼠肝微粒体中,水黄皮素的t1/2=1.97 h、Cl =0.70 mL·h-1 ·mg-1,CYP1 A2是其主要代谢酶.结论 水黄皮素在大鼠肝微粒体中是由多个CYP同工酶介导代谢的,其中,CYP1 A2酶的介导作用最强.     

米氮平在鼠肝微粒体中的体外代谢研究

目的:通过不同诱导剂预处理鼠肝,研究米氮平在肝微粒体中的代谢主要受何种酶影响,同时研究米氮平对介导其自身代谢的P450酶亚型是否有影响,为米氮平的临床合理应用提供科学依据。方法:将米氮平与不同诱导剂诱导的鼠肝微粒体进行体外孵育代谢,以乙腈中止反应,样品用25%氨水碱化后以环己烷提取。用RPHPLC测定剩余的米氮平含量,流动相为甲醇水(含10mmol·L-1NH4AC,5mmol·L-1SDS,pH3.5)6238(VV),检测波长为307nm。结果:本文测定方法回收率高,日内和日间精密度均良好,符合生物样本检测要求。苯巴比妥诱导的鼠肝微粒体对米氮平的代谢具有明显的催化作用,利福平也有一定的催化能力,米氮平诱导的鼠肝微粒体与对照组对米氮平的代谢无明显差异。结论:由苯巴比妥诱导的P450酶亚型(主要为细胞色素P4503A4)和利福平诱导的P450酶亚型(主要为细胞色素P4502C92C19,同时也对P4503A4有一定的诱导作用)在米氮平的体外代谢中起着重要作用;而米氮平诱导组对于米氮平代谢无明显影响,预示米氮平对介导其自身代谢的P450酶亚型无明显的诱导或抑制作用。     

大鼠肝微粒体温孵体系中（＋）,（—）—黄皮酰胺及其代谢产物的LC—MS分析

目的：建立黄皮酰胺及其代谢产物的ＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ在线检测分析方法,并对未分离得到的微量代谢产物进行分析确证,探索ＬＣ－ＭＳ在代谢转化研究中的应用。方法：利用柱后补偿技术,采用正离子检测对大鼠肝微体中（＋）,（－）－黄皮酰胺及其代谢产物进行ＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ分析,根据ＭＳ的碎片信息检测主要的代谢产物,特别是对未分离得到的代谢产物的结构碎片进行分析,确定其结构。结果：除检测出主要已知代谢产物     

苯环喹溴铵在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

目的:建立检测大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵代谢产物的方法,验证其在大鼠体内的代谢途径。方法:采用大鼠肝微粒体体外温孵法,建立液相色谱-质谱法测定并分析肝微粒体中苯环喹溴铵及其代谢物。色谱及质谱条件如下:色谱柱为TSK-gelODS-80Ts,流动相为甲醇-40mmol·L-1的乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)梯度洗脱;正离子模式,扫描型离子检测。结果:在体外代谢系统中,根据质谱碎片信息检测出6个代谢产物,分别是苯环喹溴铵的二羟基、单羟基和氧化产物。结论:建立的液相色谱-质谱法能够准确灵敏地测定大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵的代谢产物,验证了在大鼠体内苯环喹溴铵的代谢部位在环戊烷基上。     

氯代正丁苯酞在大鼠肝微粒体中的代谢研究

用大鼠肝微粒体体外温孵方法进行了氯代正丁苯酞(CBP)代谢转化研究,优化了温孵体系的组成,建立了反相HPLC-DAD在线同时分离检测CBP及其4个体外代谢产物的分析方法,并比较了在苯巴比妥(PB)与3-甲基胆蒽(3-MC)诱导的微粒体中代谢差别。利用TLC、柱色谱与制备HPLC分离纯化了3个主要代谢产物,并进行了NMR,MS,UV等光谱鉴定,确定了其主要代谢产物为γ-羟基氯代正丁苯酞与β-羟基氯代正丁苯酞及它们的立体异构体。     

反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中左旋黄皮酰胺及其主要代谢产物和药代动力学

目的　探讨左旋黄皮酰胺［（-）clau］及其主要代谢产物6-OH-clau在大鼠体内的药代动力学。方法　建立了RP-HPLC-UV法。固定相为Kromasil-100 C₁₈（5 μm）色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-水（21∶16.5∶62.5), DM-9384作内标,氯仿作提取溶剂。结果　测得（-）clau的回收率为96.91%～105.74%,日内、日间RSD低于7%,最低检测浓度为24 ng.mL^-1,（-）clau和6-OH-clau分别在0.047～968 μg.mL^-1和0.049～200 μg.mL^-1,线性关系良好(γ=0.999); （-）clau和6-OH-clau血浆浓度-时间曲线符合二室开放模型,同时求得两者的药代动力学参数。结论　数据表明（-）clau在大鼠血浆中的分布、代谢转化和消除均较快。     

蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化

目的研究蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法,研究对蓝萼甲素的代谢转化。采用RP-HPLC法同时分离检测蓝萼甲素及其体外代谢产物。结果用液-液萃取、制备HPLC法,从大鼠胆汁中分离了一个代谢产物,经质谱分析推测结构为羟基化蓝萼甲素,并采用HPLC-MS连用,分析了肝微粒体体外温孵样品中的代谢产物,推测了蓝萼甲素的可能代谢转化途径。结论蓝萼甲素在大鼠肝微粒体和胆汁中可被代谢转化,主要代谢产物为羟基化蓝萼甲素。     

毛茛甙的抗诱变作用及代谢转化

研究表明,毛茛甙可显著抑制MMC和MMS等诱变剂对沙门氏菌TA₁₀₀和TA102回复突变作用;对MMC诱发的小鼠PEC徽核抑制率达56.5%。代谢研究表明:毛茛甙抑制DNA生物合成的作用可被肝微粒体酶和胞浆液分别降低46和12%;RP-HPLC测定显示,体外毛茛甙可被肝微粒代谢转化。     

毛茛甙的抗诱变作用及代谢转化

研究表明,毛茛甙可显著抑制MMC和MMS等诱变剂对沙门氏菌TA_(100)和TA_(102)回复突变作用;对MMC诱发的小鼠PEC徽核抑制率达56.5%。代谢研究表明:毛茛甙抑制DNA生物合成的作用可被肝微粒体酶和胞浆液分别降低46和12%;RP-HPLC测定显示,体外毛茛甙可被肝微粒代谢转化。     

GLUCURONIDATION OF DIHYDROCODEINE BY HUMAN LIVER MICROSOMES AND THE EFFECT OF INHIBITORS

1. Glucuronidation is the major route of metabolism of dihydrocodeine (DHC) and accounts for 25–30% of an oral dose in urine. The kinetics of DHC-6-glucuronide formation in liver microsomes from five human donors and the effect of a number of potential inhibitor drugs were examined using a newly developed and validated HPLC assay.
2. The formation of DHC-6-glucuronide exhibited atypical kinetics that conformed to the Hill equation. The mean intrinsic dissociation constant (K_s) and maximum velocity (V_max) values were 1566 μmol/L and 0.043 μmol/min per g, respectively. The K_s and V_max values varied 1.5- and 3.5-fold, respectively.
3. Seven drugs were tested for inhibitory effects on DHC glucuronidation at low (50 μmol/L) and high (500 μmol/L) concentrations. At 50 μmol/L, only diclofenac produced greater than 50% inhibition, while at concentrations of 500 μmol/L inhibition was greater than 35% for diclofenac, amitriptyline, oxazepam, naproxen, chloramphenicol and probenecid, but not paracetamol.
4. The present study found little interindividual variation in the activity of human liver microsomes for glucuronidation of DHC. Comparison of the results from the inhibition studies with those reported previously for codeine and morphine suggest that the UDP-glucuronosyltransferase isoform UGT2B7 is involved in the glucuronidation of DHC.     

大鼠肝微粒体体外代谢奥美拉唑的研究

建立了大鼠肝微粒体体外孵育代谢奥美拉唑酶促反应及用反相HPLC法测定奥美拉唑两种主要代谢物——羟基奥美拉唑和奥美拉唑砜含量的方法.吉果表明,奥美拉唑主要通过羟化和S原子氧化反应进行代谢。其羟化反应的最大反应速率为2033nmol/(min·mgprotein),米氏常数为46.8umol·L^-1,而S原子氧化反应的最大反应速率为187.9nmol/(min·mgprotein),米氏常数为120.7Umol·L^-1。同时证明,美芬妥英、5种苯二氮类药物及罂粟碱对奥美拉唑的羟化代谢均有显著的抑制作用,其中罂粟碱的作用最强。     

地非三唑的RP-HPLC法测定及其体外代谢研究

目的为研究抗早孕新药地非三唑(DL111-IT)的代谢作用机理和进一步开发利用,建立其体外代谢的RP-HPLC测定法。方法以Lichrospher ODS-C₁₈为色谱柱,甲醇-pH 7.5磷酸盐缓冲液(70∶30)为流动相,检测波长:235 nm,流速1.0 mL·min^-1,地西泮为内标,对鼠肝微粒体孵育液中DL111-IT的RP-HPLC法进行方法学研究。应用建立的方法对DL111-IT在不同来源的鼠肝微粒体中的体外代谢进行试验。结果DL111-IT浓度在1.01～101.0 μg·mL^-1呈良好的线性关系,在不同浓度下测得平均绝对回收率和相对回收率分别为(92±4)%和(100.3±1.9)%(N=5);DL111-IT在鼠肝微粒体中的代谢, β-萘黄酮组明显快于其他组。结论本法简便、准确,可用于DL111-IT的体外代谢研究。     

反式曲马朵在大鼠肝微粒体O-去甲基代谢中的立体选择性

目的研究反式曲马朵O-去甲基代谢的立体选择性。方法高效毛细管电泳法测定大鼠肝微粒体孵育液中反式曲马朵和O-去甲基曲马朵对映体的浓度,酶促动力学方法研究O-去甲基曲马朵对映体的生成。结果 (-)-O-去甲基曲马朵生成有较大的V_max;反式曲马朵两对映体间存在相互作用,使(+)-O-去甲基曲马朵生成的V_max明显减慢;奎宁及奎尼丁对(+)-O-去甲基曲马朵生成的抑制作用较强。结论反式曲马朵O-去甲基代谢有立体选择性,对映体间的相互作用及酶抑制剂使其立体选择性程度加强。     

高三尖杉酯碱在大鼠及兔肝微粒体的代谢研究

采用动物肝微粒体体外代谢法对高三尖杉酯碱进行了代谢转化的研究。应用梯度洗脱—反相HPLC结合二极管陈列检测器对体外代谢体系进行了分析。判定在体外代谢体系中,高三尖杉酯碱主要产生一个代谢产物。用HPLC法制备出一定量代谢物纯品,经光谱分析及与化学制备的对照品相比较,推定其代谢物结构为:2′-羟基-2′(α-乙酸)-6′-甲基-6′-羟基-庚酰三尖杉碱。     

左旋一叶萩碱的代谢转化

目的　研究一叶碱 [securinine ,( - )SE]在大鼠体内外的代谢转化。方法　采用大鼠肝微粒体体外温孵法对 ( - )SE的代谢转化进行了研究 ,优化了代谢体系 ,建立了反相HPLC法同时分离检测 ( - )SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取 ,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了 4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上 ,建立了生物体液中 ( - )SE及其代谢物的反相HPLC分析方法 ,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经 β 葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果　代谢物分别鉴定为 6 位羟基 ,6 位羰基及 5 位α及 β羟基取代的 ( - )SE ,还证实了体内 6 位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论　基本阐明 ( - )SE在大鼠体内外代谢转化的途径     

左旋一叶碱的代谢转化

目的研究一叶碱［securinine,(-)SE］在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法对(-)SE的代谢转化进行了研究,优化了代谢体系,建立了反相HPLC法同时分离检测(-)SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上,建立了生物体液中(-)SE及其代谢物的反相HPLC分析方法,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经β-葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果代谢物分别鉴定为6-位羟基,6-位羰基及5-位α及β羟基取代的(-)SE,还证实了体内6-位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论基本阐明(-)SE在大鼠体内外代谢转化的途径。