5-氟尿嘧啶联合热疗对人肝癌细胞株的增殖抑制作用

目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)联合热疗诱导人肝癌细胞株(SSMC7721细胞)的增殖抑制率,细胞凋亡率及其对细胞周期进程的影响,旨在为肝细胞癌的综合治疗提供理论依据.方法 应用MTT比色法检测不同条件下对SSMC7721细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,电子显微镜检测亚细胞结构改变.结果 单纯热疗组、5-FU组及联合组对SSMC7721细胞抑制率分别为18.4%、28.3%和52.7%,与对照组相比差异均有统计学意义(P均＜0.01).流式细胞仪结果显示:G1期细胞增多,S期细胞减少、G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),电子显微镜结果显示细胞核染色质趋边凝集、线粒体肿胀.结论 5-FU联合热疗能显著提高SSMC7721细胞的增殖抑制率,抑制SSMC7721细胞G1期向S期转化进程,诱导SSMC7721细胞凋亡及亚细胞结构改变.     

乳腺癌化疗患者联合应用大蒜素胶囊对其细胞免疫功能的影响

目的探讨乳腺癌化疗患者联合应用大蒜素胶囊对其免疫功能的影响。方法选取2018年4月至2018年10月在唐山市人民医院行手术治疗,且经病理学诊断为乳腺癌患者62例作为观察对象。应用随机数字表法分为治疗组与对照组,每组各31例。治疗组给予大蒜素胶囊联合EC方案(盐酸表柔比星注射液90mg/m^2+环磷酰胺90mg/m^2,第1天,21d为1个周期,连续4个周期)。对照组患者单纯给予EC方案化疗4个疗程。记录不良反应发生情况,治疗前及治疗结束后行T淋巴细胞亚群检测评价机体免疫功能。结果治疗后两组不良反应发生次数比较(治疗组共70例次,对照组69例次),差异无统计学意义(P均>0.05)。治疗组患者化疗前CD3^+(53.76±4.29)%;CD4^+(40.19±3.71)%;CD8^+(28.61±2.75)%;CD4^+/CD8^+1.41±0.16。化疗后CD3^+(52.41±4.44)%;CD4^+(39.49±4.06)%;CD8^+(28.70±2.76)%;CD4^+/CD8^+1.35±0.94。对照组患者化疗前CD3^+(54.35±4.09)%;CD4^+(40.70±4.09)%;CD8^+(27.62±3.60)%;CD4^+/CD8^+1.49±0.24。化疗后CD3^+(44.27±6.67)%;CD4^+(35.39±4.96)%;CD8^+(30.48±3.43)%;CD4^+/CD8^+1.17±0.20。治疗组治疗后CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+有所下降、CD8^+有所上升,但差异无统计学意义(P>0.05)。对照组治疗后CD3^+[由(54.35±4.09)%降到(44.27±6.67)%]、CD4^+[由(40.70±4.09)%降到(35.39±4.96)%]、CD4^+/CD8^+[由(1.49±0.24)降到(1.17±0.20)]有所下降、CD8^+有所上升[由(27.62±3.60)%升到(30.48±3.43)%],差异有统计学意义(t值分别为7.17、4.60、5.71、-3.02,P值分别为0.000、0.000、0.002、0.000);治疗组与对照组比较,CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+明显上升、CD8^+明显下降(P均<0.01)。结论乳腺癌化疗患者应用大蒜素胶囊可以改善因化疗引起的免疫功能降低。     

以体外共培养系统进行乳腺癌细胞株对正常内皮细胞作用的研究

目的 本文建立了体外肿瘤细胞与内皮细胞的共培养体系，试图以这种体外共培养环境下了解乳腺癌细胞对正常内皮细胞的作用，模拟研究体内肿瘤细胞对血管内皮细胞的细胞性质和行为的作用和影响。方法 对乳腺癌细胞株MEF-7、MDA-MB-231与正常、新鲜脐带的静脉内皮细胞体外共培养的细胞比例和培养条件进行了实验摸索，分别建立了体外乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231与正常脐带静脉内皮细胞的体外共培养体系。以同期培养的正常脐带静脉内     

乳腺癌细胞株化疗药物相互作用的临床研究

目的利用乳腺癌细胞株探讨化疗药物的相互作用。方法利用MTT法测定4种化疗药的单药和联合用药对胃癌细胞株的抑制率,将测得的数据输入电脑,用CalcuSyn(Biosoft)软件处理,推算出有关数据:斜率(m)截距(y-int)IC50联合指数(CI)和剂量减少指数(DRI)。结果资料显示,乳腺癌细胞株化疗敏感性顺序:EPI>CDDP>MMC>5FU;联合用药的敏感性顺序:5FU+EPI>5FU+CD-DP>EPI+CDDP>EPI+MMC>MMC+CDDP>5FU+MMC。根据两种药物联合用药DRI分析,以5FU+EPI为最佳;3种药物的联合用药的DRI也明显优于2种药物的联合用药。在3种药物联合使用中,5FU,MMC和EPI中200∶1∶1的配比要比100∶1∶1更理想。结论MTT法体外癌细胞药敏试验可以指导临床个体化治疗。     

地特胰岛素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖及凋亡的影响

目的：探讨地特胰岛素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法：用10 U/L地特胰岛素处理人乳腺癌细胞株MCF-7,处理不同时间后,用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用Western blotting法检测胰岛素受体（insulin receptor,INS-R）和胰岛素样生长因子1类受体（type 1 insulin-like growth factor receptor,IGF-1R）的表达,用real-time PCR法检测B细胞淋巴瘤因子2（B cell lymphoma 2,Bcl 2）、IGF-1R、Myc-1和caspase-3的mRNA水平.结果：人乳腺癌细胞株MCF-7经地特胰岛素处理后,细胞增殖水平随处理时间的延长呈现增高趋势（r=0.753,P ＜0.01）,细胞凋亡水平则随处理时间的延长而降低（r=-0.821,P＜0.01）;INS-R和IGF-1R蛋白的表达水平随处理时间的延长而升高,之后有所降低;凋亡抑制基因Bcl-2、IGF-1R和Myc-1的mRNA水平也呈类似变化趋势（r=0.813,P＜0.01）,而促凋亡相关基因caspase-3则呈现相反的变化趋势（r=-0.719,P＜0.01）.结论：地特胰岛素处理可以促进人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖并抑制其凋亡,其机制可能与促进凋亡抑制基因表达以及抑制凋亡基因表达有关.     

十二碳烯酸对人乳腺癌细胞株BT-20环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷水平的影响

目的观察十二碳烯酸对人乳腺癌细胞株BT-20增殖及其环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平的影响。方法选用甘肃地产猫儿眼(Euphorbia kansui L.),经提取分离制得十二碳烯酸。人乳腺癌细胞株BT-20传代培养后,分别给予0.2、0.6、1.8 mg/L 3个浓度的十二碳烯酸培养48 h作为实验1、2、3组;每孔加5-Fu(10 mg/L,PBS液配制)20μl培养48 h作为5-Fu组;加等量PBS液培养48 h作为空白对照组。用MTT法检测各组细胞的增殖抑制率,用放射免疫法检测各组细胞的cAMP、cGMP含量,观察十二碳烯酸对人BT-20细胞cAMP、cGMP水平的影响。结果经给予不同液体培养48 h后,与对照组(细胞增殖抑制率为0)比较,实验1、2、3组和5-Fu组人乳腺癌细胞株BT-20的增殖抑制率分别为57.15%、75.87%、88.78%和81.73%(P均<0.01);c AMP含量分别增加了13.23%、25.96%、47.59%和34.39%(P均<0.01);cGMP含量分别降低了12.59%、19.29%、33.49%和22.47%(P<0.05,P<0.01);c AMP/c GMP比值分别增加了29.32%、55.77%、121.55%和72.59%(P<0.05,P<0.01)。结论十二碳烯酸具有抑制人乳腺癌细胞株BT-20增殖和升高c AMP/c GMP比值的作用。     

大蒜素药理作用和作用机理的探讨

大蒜素（Allicin）又名大蒜新素，化学名二烯丙基三硫化物（CH2=CH-CH2-S-S-S-CH2-CH=CH2），是从蒜的球形鳞茎中提取的挥发性油状物，是大蒜的主要有效成分。近年来，国内外学者对大蒜的化学、药理和临床进行了多方面的研究，证明大蒜素具有卓越的功效。它不仅杀菌力强，抗菌谱广，且具有抗肿瘤、降胆固醇、抗血小板聚集、护肝、预防心血管疾病、降血压等药理学作用。     

IVIG对乳腺癌细胞株MDA-MB-453体外增殖抑制作用的实验研究

静脉注射丙种球蛋白(IVIG), 来源于健康志愿者捐献的血浆经灭菌、分离得到,因此是一种源自人体的安全的生物制品.IVIg主要适用于血小板减少性紫癜(ITP)、自体免疫疾病以及免疫介导的疾病的治疗[1-2].近年来,有文献报道IVIG还可用于治疗各种肿瘤,有一定的临床效果[3-4].乳腺癌是严重威胁人类健康的常见病和多发病,乳腺癌新发病人数每年有增加的趋势.本实验是利用目前较为先进的ATP-荧光发光法检测抑瘤率并结合流式细胞仪检测肿瘤细胞周期、凋亡指数,来探索IVIG体外对乳腺癌细胞增殖的影响.     

亚高温热疗联合多西紫杉醇对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的 观察亚高温热疗联合多西紫杉醇化疗是否具有协同抗肿瘤效应,并探讨其作用机制.方法 首先采用MTT法观察多西紫杉醇对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的影响,并筛选出有效浓度.将体外培养的MCF-7细胞分为空白对照组、多西紫杉醇组及热疗+多西紫杉醇组,热疗+多西紫杉醇组又根据热疗温度(包括39.0℃、39.5℃、40.0℃、40.5℃、41.0℃)不同细分为5个亚组.各组MCF-7细胞分别经相应干预后,利用流式细胞仪检测上述各组细胞凋亡情况及对细胞生长周期的影响.采用Western blotting技术检测各组细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白、凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白、热休克蛋白70(HSP-70)及多药耐药基因(MDR)产物P糖蛋白(P-gp)表达情况.结果 热疗联合多西紫杉醇干预可促进MCF-7细胞凋亡增加,如41.0℃热疗+多西紫杉醇组凋亡率[(37.12±6.73)％]显著高于多西紫杉醇组凋亡率[(19.16±3.42)％];热疗联合多西紫杉醇干预可诱导MCF-7细胞生长周期停滞在G2/M期,如41.0℃热疗+多西紫杉醇组G2/M期细胞比例[(38.18±4.72)％]显著高于多西紫杉醇组[(26.63±4.08)％].热疗+多西紫杉醇组MAPK通路蛋白表达较多西紫杉醇组显著增强,Bcl-2蛋白表达则明显降低,而Bax蛋白表达有轻微升高.热疗+多西紫杉醇组细胞热休克蛋白70(HSP-70)、P-gp蛋白表达均较多西紫杉醇组明显增强.结论 亚高温热疗联合多西紫杉醇干预能抑制人乳腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有协同抗肿瘤效应,其治疗机制可能与激活细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38蛋白有关,另外亚高温热疗联合多西紫杉醇干预能增强MCF-7细胞HSP-70及P-gp蛋白表达,这可能会导致肿瘤细胞化疗耐药性产生.     

青蒿琥酯对生存素在乳腺癌细胞株MDA-MB-231表达的影响

目的 探讨青蒿琥酯对生存素(survivin)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中表达的影响.方法 以不同浓度(0、25、50 μg/mL)的青蒿琥酯处理MDA-MB-231细胞,分别于药物处理后24、48和72 h收集细胞及培养上清液,用RT-PCR检测不同组别、不同时间点的细胞中survivin的基因表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组、各时间点培养上清液中survivin的蛋白质表达水平.结果 PCR结果和ELISA结果均显示,随着药物浓度的增加和处理时间的延长,survivin基因水平和蛋白质水平的表达也逐渐降低,同一时间点各组间survivin的表达量进行单因素方差分析,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组(0 μg/mL)在24 h和48 h survivin的表达量变化不大,经t检验分析,差异无统计学意义(P＞0.05),而各浓度经药物处理48 h后survivin的表达量明显低于24 h的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可通过抑制survivin的表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.     

肿瘤抑制基因WWOX转染MDA-MB-231细胞系的实验研究

目的探讨肿瘤抑制基因WWOX与乳腺癌疾病相关性,为进一步研究WWOX基因的作用机制及功能奠定基础。方法构建真核表达载体pcDNA4．0／Myc—His-WWOX,并转染至MDA．MB．231细胞中,采用RT-PCR及Westernblot方法,检测WWOXmRNA及融合蛋白在MDA-MB-231细胞中的表达。结果测序结果显示,RT-PCR法获得的WWOX序列与GenBank中报道的一致。真核表达载体pcDNA4．0／Myc．His—WWOX转染MDA—MB-231细胞48h后,从RT-PCR及Westernblot结果中观察到WWOX基因的有效转录。结论成功构建了肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体pcDNA4．0／Myc．His—WWOX,为进一步研究WWOX在乳腺癌发生和进展中的作用及其靶向基因治疗奠定了实验基础。     

Apoptotic effect of tolfenamic acid on MDA-MB-231 breast cancer cells and xenograft tumors

Recent studies have indicated that non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID), particularly tolfenamic acid, can inhibit proliferation and induce apoptosis invarious cancer cells. Breast cancer represents one-third of all cancers diagnosed in women and is the second leading cause of cancer death in Western European and North American women. In the present study, we investigated the apoptotic effect of tolfenamic acid in MDA-MB-231 estrogen receptor-negative human breast carcinoma cells and in a xenograft tumor model. Treatment of cells with tolfenamic acid significantly decreased cell viability in a concentration-dependent manner. Notably, tolfenamic acid increased apoptosis-related proteins, such as p53 and p21, within 48 h. Furthermore, in vivo experiments showed that tolfenamic acid treatment resulted in a significant reduction in tumor volume over 5 weeks. Immunohistochemistry results showed that apoptosis-related protein induction by tolfenamic acid was significantly higher in the 50 mg/kg-treated group compared to the control group. Together, these results indicate that tolfenamic acid induces apoptosis in MDA-MB-231 breast cancer cells and tumor xenograft model and it may be a potential chemotherapeutic agent against breast cancer.     

Ultrasound Enhances the Efficacy of Chlorin e6-Mediated Photodynamic Therapy in MDA-MB-231 Cells

Sono-photodynamic therapy (SPDT) is a new modality for cancer treatment. Some studies have reported enhanced tumor cytotoxicity when sonodynamic therapy (SDT) is combined with photodynamic therapy (PDT). In this study, we investigated the cytotoxic effect of SPDT-activated chlorin e6 (Ce6) on MDA-MB-231 cells. Ce6 was found to localize mainly in mitochondria, with maximal uptake within 4 h. Cell survival was estimated by MTT (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltertrazolium bromide tetrazolium) assay 24 h after irradiation; the combined therapy enhanced cytotoxicity to a greater extent. Apoptosis was analyzed using annexin V-PE/7-ADD (7-aminoactinomycin D) staining as well as DAPI (4', 6-diamidino-2-phenylindole) staining, and the results indicated that the cells with apoptotic characteristics were significantly increased in groups given combined therapy. Rhodamine-123 staining and cytochrome c release revealed more serious damage of mitochondria after combined treatment. The generation of reactive oxygen species detected by flow cytometry was greatly increased in cells treated with the combination therapy, and the loss in cell viability could be effectively rescued with the reactive oxygen species inhibitor N-acetylcysteine. Moreover, enhancement of cell membrane permeability after ultrasound treatment was evaluated using FD-500, and it was found that the much higher uptake of Ce6 might be involved in PDT therapy with pre-treatment ultrasound. These results suggest that ultrasound enhances the cytotoxicity of Ce6-mediated PDT, possibly because of the increased intracellular Ce6 level and ROS formation by ultrasound pre-treatment.     

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对乳腺癌细胞的抑制与诱导凋亡作用

目的：观察两种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）对MDA-MB-231乳腺癌细胞生长的影响及机制。方法：利用MTT 法和生长曲线的绘制检测不同浓度的HSPG在不同时间对MDA-MB-231细胞的抑制作用, 流式细胞术结合Annexin V-FITC 及PI双标记染色检测分析HSPG 对MDA-MB-231细胞凋亡的影响。结果： MTT法测得不同浓度MCF-7 type HSPG作用于MDA-MB-231后24h、48h、72h均可明显抑制肿瘤细胞生长，并且呈现出剂量依赖性；生长曲线结果显示不同浓度MCF-7 type HSPG可明显抑制MDA-MB-231的生长；流式细胞术显示MCF-7 type HSPG诱导MDA-MB-231细胞凋亡增加；MDA-MB-231 type HSPG对其源细胞（MDA-MB-231）则无明显的生长抑制作用，对其凋亡率无明显影响。结论：MCF-7 type HSPG对MDA-MB-231细胞生长具有显著的抑制作用，其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

硫酸乙酰肝素在MDA-MB-231细胞增殖抑制中的作用

目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparan sufate,HS)在抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖过程中对葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated pr otein,GRP78)及相关凋亡蛋白表达的影响.方法:培养人乳腺癌上皮MCF-7细胞株,生长达汇合期及汇合后期时收集培养液,提取其中的HS链.采用噻唑蓝比色法检测HS对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.应用Westem blot法分别检测GRP78蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:HS对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P<0.05).HS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,并随着剂量的增大,细胞的凋亡率升高(P<0.05).HS抑制MDA-MB-231细胞GRP78蛋白的表达(P<0.05).HS可促进Bax蛋白表达(P<0.05),但抑制Bcl-2蛋白的表达(P<0.05).结论:HS通过减少MDA-MB-231细胞的GRF78、Bcl-2的表达,增加Bax表达来促进肿瘤细胞的凋亡,发挥其抗肿瘤作用.     

声动力学治疗对MDA-MB-231细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 探讨超声辐照血卟啉单甲醚和声诺维对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖及侵袭能力的影响。方法 将对数生长期的MDA-MB-231细胞制成细胞悬液,加入HMME和SonoVue后用超声进行辐照。分3组：对照组,不接受治疗;辐照组1：输出声强0.3 W/cm²,辐照时间60 s;辐照组2：输出声强0.6 W/cm²,辐照时间30 s。采用MTS法绘制细胞生长曲线,平板克隆方法观察细胞形成克隆的能力,并用Transwell小室法检测细胞侵袭能力。结果 对照组的生长曲线陡直,而辐照组的曲线平缓。接种2周后对照组出现肉眼可见的细胞克隆,而辐照组未出现。结晶紫染色后观察,辐照组仅可见由少许细胞聚集成的细胞团。接种后24 h、48 h观察,对照组、辐照组1、辐照组2穿越小室的细胞数分别为42.00±13.52、3.52±1.26、2.75±0.96（P<0.05）及104.25±12.61、36.25±3.40、28.75±4.99（P<0.05）。对照组穿越小室的细胞数显著高于辐照组（P<0.05）。结论 超声辐照联合HMME及SonoVue能有效抑制MB-231细胞增殖,降低细胞形成克隆的能力,并显著降低细胞的侵袭能力。     

非甾体类抗炎药对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖影响的实验室研究

目的 通过研究阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用.方法 采用MTT法检测不同浓度的阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响.结果 阿司匹林、塞来昔布单药对MDA-MB-231细胞生长均有抑制作用,表现为浓度、时间依赖性,统计学差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的阿司匹林、塞来昔布分别联合阿那曲唑后对MDA-MB-231细胞的抑制作用较单用阿那曲唑增强,亦表现为浓度依赖性,差别具有统计学意义(P<0.05).结论 阿司匹林和塞来昔布均有抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用,两者分别联合阿那曲唑后有协同抗肿瘤的作用.     

Optimization of Phase-Change Contrast Agents for Targeting MDA-MB-231 Breast Cancer Cells

Breast cancer remains a leading cause of death for women throughout the world. Recent advances in medical imaging technologies and tumor targeting agents signify vast potential for progress toward improved management of this global problem. Phase-change contrast agents (PCCAs) are dynamic imaging agents with practical applications in both the research and clinical settings. PCCAs possess characteristics that allow for cellular uptake where they can be converted from liquid-phase PCCAs to gaseous microbubbles via ultrasound energy. Previously, we reported successful internalization of folate-targeted PCCAs in MDA-MB-231 breast cancer cells followed by ultrasound-mediated activation to produce internalized microbubbles. This study examines the binding, internalization and activation of folate-receptor targeted PCCAs in MDA-MB-231 breast cancer cells as a function of gaseous core compositions, incubation time and ultrasound exposure period. In vitro results indicate that internalization and ultrasound-mediated activation of PCCAs were significantly greater using a 50:50 mixture of decafluorobutane:dodecafluoropentane compared with other core compositions: 50:50 octafluoropropane:decafluorobutane (p < 0.0001), decafluorobutane (p < 0.04) and dodecafluoropentane (p < 0.0001). Furthermore, it was found that PCCAs composed of perfluorocarbons with higher boiling points responded with greater activation efficiency when exposed to 12 s of ultrasound exposure as opposed to 4 s of ultrasound exposure. When evaluating different incubation times, it was found that incubating the PCCAs with breast cancer cells for 60 min did not produce significantly greater internalization and activation compared with incubation for 10 min; this was concluded after comparing the number of microbubbles present per cell before ultrasound versus post-ultrasound, and finding a ratio of intracellular microbubbles post-ultrasound/pre-ultrasound, 3.46 versus 3.14, respectively. The data collected in this study helps illustrate further optimization of folate-receptor targeted PCCAs for breast cancer targeting and imaging.