AS1.398中性蛋白酶的固定化研究

本文对枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶的固定化进行了研究。考查了温度,pH值、交联剂用量,以及载体与酶的比例等因素对AS1.398中性蛋白酶固定化的影响;确定了固定化AS1.398中性蛋白酶的一些催化特性:最适温度60℃,最适pH值8.0,操作半衰期88天。固定化AS1.398中性蛋白酶活性回收为74％。     

中性蛋白酶AS 1.398固定化酶的研究

枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶经海藻胶包埋制成固定化酶,用396的胶包埋率达98%,表现活力为7%左右。其最适反应pH为7.0,最适温度为55℃,与自然酶相一致。固定化酶的耐热性比自然酶高,最稳定的pH为7.0左右,pH8.0以上不稳定。海藻胶容易解体,球形破裂,因此只适合在中性条件下使用。     

中性蛋白酶AS 1.398固定化酶的研究

枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶经海藻胶包埋制成固定化酶,用396的胶包埋率达98%,表现活力为7%左右。其最适反应pH为7.0,最适温度为55℃,与自然酶相一致。固定化酶的耐热性比自然酶高,最稳定的pH为7.0左右,pH8.0以上不稳定。海藻胶容易解体,球形破裂,因此只适合在中性条件下使用。     

N-琥珀酰壳聚糖固定化中性蛋白酶的制备及性质研究

以N-琥珀酰壳聚糖为载体固定中性蛋白酶,研究了固定化酶的适宜温度、pH、热稳定性和酸碱稳定性等酶学性质,同时对固定化酶和游离酶的红外光谱图作了分析比较.结果表明:中性蛋白酶经固定化后,最适酶反应pH由7升至8,最适温度没有改变,仍为50℃,所得固定化酶具有较宽的酸碱稳定性范围,在pH 7～9都保持较高活力,并且同定化酶的热稳定性比游离酶有较大的提高.红外光谱分析表明,酶固定化前后的红外光谱图的部分特征峰有较大的差异.     

壳聚糖固定化木聚糖酶的研究

从青霉菌m8提取出木聚糖酶,将其固定在用戊二醛交联的壳聚糖载体上。1．0g壳聚糖与4％的二醛结合固定3．5mg蛋白,酶活回收率为46．6％。在酶的最适pH为4．6,固定化酶为pH3．8。原酶的最适温度为55℃,固定化酶在60－75℃都具有较高活性。固定化酶的耐热性优于原酶,固定化酶的表现Km值略低于原酶,前者为5．0×10－2g／L,后者为3．58×10－2g／L。     

壳聚糖固定化半纤维素酶的研究

从青霉菌m8提取出半纤维素酶,将其固定在用戊二醛交联的壳聚糖载体上.0.5 g壳聚糖与4%的戊二醛结合固定2.5 mg蛋白质,酶活回收率为45.6%. 原酶的最适pH为4.6,固定化酶为pH 3.6.原酶的最适温度为55℃,固定化酶在60～75℃都具有较高活性.固定化酶的耐热性优于原酶. 以半纤维素为底物,固定化酶的表观K_m值略低于原酶,前者为5.0×10^－2 g/L,后者为3.58×10^－2 g/L.     

壳聚糖固定化琼脂酶的研究

采用壳聚糖微球对琼脂酶进行固定化,在单因素实验的基础上用正交试验法确定最佳固定化工艺。结果表明:在戊二醛体积分数为2.5%,交联时间为6 h,加酶量为15 mL,固定时间为3 h时固定酶的活力最高;固定化酶的最适反应温度及最适pH分别为50℃和8.5,高于游离酶;同时其热稳定性及操作稳定性均高于游离酶。     

中性蛋白酶发酵工艺优化研究

采用正交试验,对枯草芽孢杆菌ＨＤ４０１中性蛋白酶深层发酵工艺进行了优化,结果表明：较优发酵培养基为玉米粉５％、豆饼粉３％、麸皮４％、Ｎａ_２ＨＰＯ_４０．４％、ＫＨ_２ＰＯ_４０．０３％;在发酵中期流加蚕蛹水解液５％、植酸钙０．２％、吐温－８００．１％,对发酵后期有较大的调控作用。采用优化工艺,在２Ｌ发酵罐中进行验证试验,酶活达１３２００ｕ／ｍｌ,比原工艺提高了１６４％。     

枯草杆菌中性蛋白酶天然抑制剂的筛选

用透明因法和福林──酚法筛选了２１种植物中的蛋白酶活性抑制剂,其中来自鼓皮、高粱、玉米和土豆的抑制剂的活性在本研究条件下达５０％以上。进一步研究了麸皮、玉米两种抑制剂在不同温度和ｐＨ值下的稳定性,结果表明,两者的稳定性相差甚远,是两类不同的抑制剂。玉米抑制剂比麸皮抑制剂更稳定。     

植物中蛋白类蛋白酶抑制剂的研究进展

介绍植物蛋白类蛋白酶抑制剂(proteinase inhibitor)近年来的研究进展,包括其分类、生理功能及应用研究.     

紫外线诱变选育碱性蛋白酶高产菌株

本实验以枯草杆菌A4－3为出发菌株,发酵产生碱性蛋白酶,其野生型菌株产酶为2412u／ml。采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子,得到变异株As—4,产酶2732．8u／ml。对As—4菌株进行紫外线绣变处理1min,得变异菌株AX—46,产酶为3213．8u／ml,且产酶能力稳定。     

丝氨酸蛋白酶超家族分子结构进化研究

采用刚体结构比较法进行蛋白质的结构比较,根据结构比较分数构建分子进化树, 研究丝氨酸蛋白酶超家族分子的进化规律。对分子进化树进行了一些初步分析,得到了一些有意义的结果。根据蛋白质的进化,可以比较精确的确定某物种的进化地位,对于物种的分类具有重要意义。通过对超家族分子进化的研究可以了解蛋白质超家族不同蛋白质之间的亲缘关系和蛋白质之间的进化差异,对于蛋白质工程分子设计提供帮助,对蛋白质结构预测具有一定意义     

提高枯草杆菌原生质体融合率的研究

利用改良的HM制备液,在适宜的条件下酶解制备亲本株的原生质体,在DNase存在的条件下,用PEG(MW6,000)做为聚合剂,经低温短时间处理,将枯草杆菌(B,subtilisK)Ki—2—132衍生株与BR151衍生株的原生质体融合,再在适宜的条件下使用改良的DM_3再生培养基,补加适量经处理的人血清白蛋白,同时加入适量适合于枯草杆菌细胞壁再生的引物进行再生。使再生率达到了55—58.15％左右,融合率高达1.82×10~(-2)。筛选出51种不同类型的融合子923株。经继代八代测得其融合子的稳定率达32 46％。从而在工业菌株的选育中使获得高产菌株成为可能。     

白色念珠菌蛋白酶与其毒力关系的研究

目的 探讨白色念珠菌蛋白酶活动与其毒力关系。方法的采用牛奶平地检测５４株白色念珠菌蛋白酶的分泌能力,然后选择６侏菌分别经摇瓶培养测定其蛋白酶活力,并以静脉内注射方式感染小鼠进行毒力试验,以小鼠平均生存时间来评价菌株毒力。结果 ５４株白色念珠菌全部能分泌蛋白酶,检出率为１００％。动物试验表明蛋白酶活力愈高的菌株,相应小鼠平均生存时间愈短;蛋白酶活力与菌株毒力直接正相关（γ＝０．９３４,Ｐ＜０．０１）     

利用淀粉的碱性蛋白酶工程菌的培养条件

自70年代开始,国内曾筛选出短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus) 289、209两株产碱性蛋白酶的菌株。由于这两个菌株以葡萄糖为速效碳源,菌株产碱性蛋白酶的能力受培养基中总糖的制约,且两株菌易受短小芽孢杆菌烈性噬菌体PP_1—PP_10。的感染,因而不利于作为碱性蛋白酶制剂生产用菌。作者已从制革厂毛泥池中分离得到一株碱性蛋白酶产生菌——短小芽孢杆菌cl72,该菌株对PP_1—pp_10。噬菌体不敏感,对地衣芽孢杆菌pL_1噬菌体亦无交叉感染,是野生型的噬菌体抗性菌株。C172菌无淀粉酶基因,仍     

宇佐美曲霉L336酸性蛋白酶的动力学性质*

L336酸性蛋白酶的分子量为54000,等电点为3．8±0．2。在pH2．5,40℃条件下,酶对酪蛋白、牛血清白蛋白和牛血红蛋白的Km值分别为0．263g／L、0．278g／L和0．415g／L,Vmax分别为2075、1550和2793μgTyr／min、mL,酪蛋白为最适底物。在pH2．0～5．0、40℃以下时酶的稳定性最好。此外,还研究了金属离子对酶活性的影响。