抗人直肠癌单克隆抗体的制备及应用研究

目的:制备鼠抗人直肠癌单克隆抗体.方法:以手术取得的新鲜直肠癌组织免疫Balb/c小鼠,用淋巴细胞杂交瘤技术获得能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系.结果:制得了1株能稳定分泌高特异和高效价单抗的杂交瘤细胞系,其单抗相应抗原在直肠癌组织高度表达(＞90%),主要分布于细胞膜,胞浆少量分布,并可脱落至腺腔.结论:此单抗的成功研制为直肠癌早期诊断和进一步制备抗直肠癌独特型抗体提供了可能性.     

抗胎儿血红蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的 制备和鉴定抗胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)单克隆抗体(mAb),为相关疾病的研究提供支持与工具.方法 用脐带血红细胞裂解物免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合制备杂交瘤,经筛选和三次克隆化,从制备的腹水中纯化单克隆抗体.用ELISA以及western blot等方法鉴定单克隆抗体的特性(效价、Ig亚类、特异性以及亲和力).结果 筛选到3株可稳定分泌抗HbF单克隆抗体的杂交瘤细胞6A5、5C8、2C8,腹水效价分别为1×10-6、 2×10-6和4×10-6.单抗亚类均为IgG1,抗体亲和力分别为7.8×109、2.2×108和8.6×109.ELISA和western blot结果显示,6A5、5C8、2C8 mAb只与HbF的二聚体特异性结合,与其他类型血红蛋白不发生交叉反应.结论 获得3株能特异性识别HbF的高亲和力mAb,可结合二聚体与单体HbF,为临床检测HbF水平及相关研究提供了有效的工具.     

抗人真肠癌单克隆抗体的制备及应用研究

目的 制备鼠抗人直肠癌单克隆抗体。方法 以手术取得的新鲜直肠癌组织免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用淋巴细胞杂交瘤技术获得能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系。结果 制得了１株能稳定分泌高特异和高效价单抗的杂交瘤细胞系,其单抗相应抗原在直肠癌组织高度表达（〉９０％）,主要分布于细胞膜,胞浆少量分布,并可脱落至腺腔。结论 些单抗的成功研制为直肠癌早期诊断和进一步制备抗直肠癌独特型抗体提供了可能性。     

抗地高辛单克隆抗体制备及有关实验研究

以地高辛-人血清白蛋白偶联物为抗原,应用B细胞杂交瘤技术融合并筛选出7株分泌抗地高辛单克隆抗体的杂交瘤。该抗体可与地高辛人血清白蛋白特异性结合而不和其它具有类似化学结构的半抗原结合。用抗地高辛单克隆抗体治疗实验性地高辛中毒动物模型,可使地高辛中毒表现迅速消失。作者认为,抗地高辛单克隆抗体可作为地高辛的拮抗剂,对治疗地高辛中毒具有重要意义。     

抗脂多糖单克隆抗体的制备及功能研究

摘 要 目的：制备广谱结合活性抗脂多糖单克隆抗体,并探讨其保护活性。 方法：用噬菌体展示技术筛选出模拟脂多糖保守结构的多肽;将模拟肽与蓝载体交联后免疫BALB/c小鼠并制备单克隆抗体;间接ELISA与免疫荧光检测其结合活性;小鼠体内、外实验检测其保护活性。结果：经过三次融合,筛选到一株具广谱结合活性的抗脂多糖单克隆抗体SMU-3A8;间接ELISA与免疫荧光检测显示其可以和4种商品化脂多糖及6种G-菌发生交叉反应;体外实验显示SMU-3A8可以部分抑制脂多糖刺激小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7产生NO;体内实验表明其可以延长致死量鼠伤寒杆菌感染BALB/c小鼠的生存时间、提高生存率。结论：在本实验中,我们成功制备了一株具广谱结合活性,对鼠伤寒菌感染小鼠模型有保护作用的抗脂多糖单克隆抗体;为脂多糖相关研究提供了一个有力工具。 关键词 脂多糖 单克隆抗体 噬菌体展示 模拟肽     

抗人μ链单克隆抗体的制备及应用

抗入μ链抗体用途广泛,为获得有较高特异性和反应灵敏的试剂,我们制备了抗μ链单克隆抗体(McAb).现报告如下。一、材料与方法1.试剂盒抗HAV-IgM、抗HFRSV-IgM及抗HBc-Ig ELISA 试剂盒均由本所提供.     

抗甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备与应用

甲状腺球蛋白(TG)是一种正常的血清成份,既往认为TG 被封闭在甲状腺内,这个结论随着检测技术发展很快被否定.发现在生理情况下有小量TG能通过淋巴管进入血循环,可在外周血中检出。TG 是分子量为660000的糖蛋白,T_3、T_4的前体,沉降系数19_s。用RIA 法检测TG,受很     

抗MYCT-1单克隆抗体的制备及鉴定

MYCT-1（myc target 1）基因是我室克隆的新候选抑癌基因,GenBank登录号NM-025107,曾命名MTLC（myc target from laryngeal catlcer cells）。前期研究表明MYCT-1基因广泛表达于多种正常组织,在胃癌、喉癌、肝癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤组织中表达下调。     

测值稳定的抗人AMH单克隆抗体制备及应用

目的 制备用于化学发光免疫诊断的抗缪勒氏管激素(AMH)单克隆抗体(单抗),以解决临床应用中样本保存后AMH测值升高的问题。方法 利用杂交瘤技术制备结合AMH不同氨基酸位点的单抗,通过检测室温保存样本测值变化筛选测值稳定的抗体对,同时对AMH测值升高的原因进行分析。结果 获得了结合AMH 15个不同位点的单抗,抗体对筛选结果表明,结合AMH 351～380氨基酸的全部单抗及部分结合426～541氨基酸、477～501氨基酸的单抗用于检测室温保存3 d的样本测值稳定(<10%),而其他位点的单抗测值均显著上升。样本中C1q浓度及抗体Fc段均与AMH测值升高无关,重组AMH抗原室温保存后测值不上升。用所获抗体对260/80配置的化学发光试剂检测灵敏度达0.08 ng/mL,测值与罗氏试剂比较,R²=0.997 9,有较好的相关性,且偏差无统计学意义(P=0.264)。结论 保存样本测值升高推测是由AMH构象改变而非补体干扰所致,获得了测值稳定的单抗,建立了满足临床要求的AMH化学发光检测方法。     

抗胆固醇酯转运蛋白单克隆抗体的制备及其应用

目的　自行制备胆固醇酯转运蛋白 (CETP)单克隆抗体 (McAb) ,建立人血清CETP的酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,并调查中国人群CETP参考值。方法　应用杂交瘤技术制备CETPMcAb。用棋盘试验确定ELISA法的反应条件 ;进行灵敏度、精密度、回收率、特异性试验。结果　制备出一株特异性好、反应性强的CETPMcAb。筛选出ELISA法最佳反应条件 ,样品稀释2 0 0 0倍 ,可检测 0 2 8～ 4 5 2mg/L的血清CETP水平 ;平均批内CV 4 9% ,平均批间CV 10 2 % ;平均回收率为 92 5 %～ 97 2 % ;特异性高。检测结果同国外试验室ELISA法高度相关。 112 8例参考人群血清CETP浓度为 1 84± 1 5 5mg/L ,女性高于男性 ,随着年龄增高 ,CETP浓度降低。冠心病患者CETP浓度为 2 66± 2 0 8mg/L ,较相应对照组显著升高 (P <0 0 1)。结论　该法具有方便、快速、准确、特异等优点 ,对了解CETP在动脉粥样硬化发生中的作用有着十分重要的意义。     

用基因工程重组的HBcAg制备抗HBc单克隆抗体及临床应用

用基因工程重组的ＨＢｃＡｇ制备抗ＨＢｃ单克隆抗体及临床应用蒋琳，谢溱，杨宗模，刘新铭（卫生部兰州生物制品研究所，７３００４６）我们用基因工程重组ＨＢｃＡｇ作为免疫原，制备了５株抗ＨＢｃ单克隆抗体，用于临床诊断，取得了较好的效果。１材料和方法１．１抗Ｈ...     

抗极低密度脂蛋白受体单克隆抗体的大量制备及纯化

背景：极低密度脂蛋白受体被认为是一种＂瑞士军刀＂样多功能受体,对该受体的研究很广泛,但其商品化抗体种类较少,价格偏贵。目的：获得研究可用的抗极低密度脂蛋白受体的单克隆抗体。方法：为了获得抗极低密度脂蛋白受体单克隆抗体,选用可分泌针对极低密度脂蛋白受体胞内段的单克隆抗体的杂交瘤细胞IgG 6A6。通过将杂交瘤细胞IgG 6A6注入Balb/c小鼠腹腔内,2周后收集腹水,分别通过盐析法（正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法）初步纯化和亲和层析进一步纯化目的蛋白,获得针对极低密度脂蛋白受体胞内段的单克隆抗体。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其相对分子质量和纯度,酶联免疫吸附实验检测其活性。结果与结论：未纯化腹水Western Blotting结果显示条带较多,背景不干净;而经正辛酸-饱和硫酸铵法初步纯化的腹水、经Protein A进一步纯化得到的抗体均可特异识别极低密度脂蛋白受体。提示经盐析法和Protein A Agarose纯化可获得较纯和有活性的单克隆抗体。     

提供抗类风湿关节炎实验工具：人Janus激酶1单克隆抗体的免疫学特性

目的：制备人Janus激酶1单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.方法：实验于2003-03/2005-04在湖南远泰生物技术有限公司免疫学实验室完成.用化学合成的部分人Janus激酶1多肽链与锁眼蓝蛋白偶联后的全抗原对BALB/c小鼠进行免疫,采用杂交瘤技术制备抗人Janus激酶1的单克隆抗体;同时采用酶联免疫吸附法和免疫印迹法进行筛选;免疫印迹法和免疫细胞化学分析鉴定单克隆抗体的特异性.结果：获得了一株可稳定分泌人Janus激酶1单克隆抗体的细胞株4E5D4,单抗的Ig亚类为IgG.通过免疫印迹法检测,发现其能够特异性识别人Janus激酶1蛋白.结论：成功制备了抗人Janus激酶1的单克隆抗体,为进一步研究其对类风湿关节炎的临床疗效提供了实验工具.     

提供抗类风湿关节炎实验工具:人Janus激酶1单克隆抗体的免疫学特性

目的:制备人Janus激酶1单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法:实验于2003-03/2005-04在湖南远泰生物技术有限公司免疫学实验室完成。用化学合成的部分人Janus激酶1多肽链与锁眼蓝蛋白偶联后的全抗原对BALB/c小鼠进行免疫,采用杂交瘤技术制备抗人Janus激酶1的单克隆抗体;同时采用酶联免疫吸附法和免疫印迹法进行筛选;免疫印迹法和免疫细胞化学分析鉴定单克隆抗体的特异性。结果:获得了一株可稳定分泌人Janus激酶1单克隆抗体的细胞株4E5D4,单抗的Ig亚类为IgG。通过免疫印迹法检测,发现其能够特异性识别人Janus激酶1蛋白。结论:成功制备了抗人Janus激酶1的单克隆抗体,为进一步研究其对类风湿关节炎的临床疗效提供了实验工具。     

抗载脂蛋白（a）单克隆抗体的制备及其应用

为建立特异有效的脂蛋白（ａ）检测方法，应用杂交瘤技术，制备出４株抗载脂蛋白（ａ）单克隆抗体，分别命名为Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４。各株单克隆抗体与纤溶酶原和勒脂蛋白Ｂ等无交叉反应。此法可满足临床脂蛋白（ａ）浓度检测的需要。     

抗载脂蛋白（a）单克隆抗体的制备及其应用

为建立特异有效的脂蛋白（ａ）检测方法，应用杂交瘤技术，制备出４株抗载脂蛋白（ａ）单克隆抗体，分别命名为Ｍ＿１、Ｍ＿２、Ｍ＿３、Ｍ＿４。各株单克隆抗体与纤溶酶原和载脂蛋白Ｂ等无交叉反应。单抗相加试验及竞争抑制试验结果表明：Ｍ＿１、Ｍ＿４识别同一抗原位点，Ｍ＿２、Ｍ＿３识别另一位点。选用Ｍ＿１、Ｍ＿２、Ｍ＿４３株单克隆抗体建立了测定血清脂蛋白（ａ）浓度的双抗体夹心酶联免疫测定法。样品稀释后测定范围为０．０５～１．６０ｍｇ／Ｌ，批内平均变异系数（ＣＶ）４．２％，批间平均ＣＶ８．７％。测定了１０３２例中老年临床血清标本，脂蛋白（ａ）浓度为１７９，１±１７９．３ｍｇ／Ｌ（ｘ±ｓ）。与多克隆抗体的酶联免疫测定法同时测定了３８份临床标本，结果相似。此法可满足临床脂蛋白（３）浓度检测的需要。