豚鼠心室肌细胞Na^＋／Ca^2＋交换电流的记录方法

心肌细胞上存在Ｎａ＋／Ｃａ２＋ 交换系统，并可通过Ｎａ＋／Ｃａ２ ＋ 交换电流反映其功能活动。Ｎａ＋／Ｃａ２ ＋ 交换电流的记录采用全细胞电压钳技术，在细胞外灌流液和电极内液中分别加入多种膜通道阻断剂，利用斜坡电压脉冲程序记录在灌流液中加入ＮｉＣｌ２ 前后的电流－ 电压关系曲线，两者数字相减得到单一的Ｎａ＋／Ｃａ２＋ 交换电流。     

E-4031 对豚鼠心室肌细胞 Na+/Ca2+交换电流的影响

采用全细胞电压钳技术的斜坡脉冲程序 ,观察E - 4 0 3 1对豚鼠心室肌细胞膜Na /Ca2 交换电流的影响。结果表明E - 4 0 3 10 0 1,0 1和 1 0 μmol/L分别使膜电位 5 0mV时的Na /Ca2 交换电流相应增加 ( 11± 6) % ,( 5 9± 13 ) %和 ( 112± 2 5 ) % ,提示E - 4 0 3 1对Na /Ca2 交换电流的增强作用为其在抗心律失常治疗中具有正性肌力作用的重要机制     

二甲基氨氯吡咪对油酸诱导的血管内皮损伤的影响

目的:探讨钠氢交换抑制剂二甲基氨氯吡咪(ＤＭＡ)对低浓度油酸(ＯＡ)所致的血管内皮损伤的保护作用。方法:分别用ＯＡ及ＯＡ＋ＤＭＡ温育离体大鼠胸主动脉环,观察其对乙酰胆碱(Ａｃｈ),硝普钠(ＳＮＰ),Ｌ－Ｎ－硝基精氨酸甲酯(Ｌ－ＮＡＭＥ)的反应。结果:ＯＡ(１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１)温育３０ｍｉｎ后,Ａｃｈ诱导的舒张反应减弱,最大舒张从６４%降低到２８%;Ｌ－ＮＡＭＥ诱导的收缩反应也减弱,最大收缩由５２%降低到３４%。而对ＳＮＰ诱导的舒张反应无影响。如用ＤＭＡ(１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１)＋ＯＡ温育３０ｍｉｎ,则可部分恢复单用ＯＡ引起的Ａｃｈ的舒张反应及Ｌ－ＮＡＭＥ收缩反应的减弱,Ａｃｈ的最大舒张恢复到４７%,Ｌ－ＮＡＭＥ的最大收缩恢复到４５%。 结论:ＤＭＡ对ＯＡ所致的血管内皮损伤具有保护作用。     

再灌注期间联合应用牛磺酸与二甲基氨氯吡咪(DMA)对心肌损伤的保护作用

目的进一步探讨心肌缺血-再灌注损伤发病机制及寻求有效的防治药物。方法采用Langendorff法建立离体大鼠心肌缺血-再灌注模型,全心缺血45 min后,再灌注30 min,在再灌注期间给予台氏液灌流作为对照;而药物干预分别为再灌全过程给予牛磺酸,再灌早期给予DMA,两者联合应用。观察药物对离体灌流心脏血流动力学指标的作用,同时观察再灌注期间心律失常的发生情况以及冠脉流出液中肌酸激酶的活性变化。结果再灌注期间全程给予20 mmol/L牛磺酸对于改善血流动力学指标LVSP-LVDP, dp/dtmax,-dp/dtmax有一定的作用,但较对照组不具统计学意义。再灌注早期给予20μmol/L DMA后上述血流动力学指标较对照组有显著改善。牛磺酸组和DMA组再灌注时心律失常的发生率均较对照组降低,且流出液中肌酸激酶(CK)的活性下降。联合使用二者显示协同效应。结论再灌注期间联合使用牛磺酸和DMA能从很大程度上减轻心肌缺血-再灌注损伤。     

双甲基氨氯吡咪抑制人肺癌细胞株Na~+/H~+交换泵-1活性诱导肿瘤细胞酸化和凋亡

目的：研究Ｎａ＋／Ｈ＋交换泵－１（ＮＨＥ－１）在肺癌细胞增殖／凋亡调控中的作用。方法：采用荧光探针法检则ＮＨＥ－１抑制剂双甲基氨氯吡咪（ＤＭＡ）对人肺巨细胞癌高转移株（ＰＬＡ－８０１Ｄ）细胞的酸化作用；以活细胞计数法检测ＤＭＡ对ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞增殖生长的抑制作用；采用原位细胞凋亡检测法观察ＤＭＡ诱导ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞的凋亡。结果：经２５μｍｏｌ／Ｌ以上ＤＭＡ处理２４ｈ或５０μｍｏｌ／Ｌ处理８ｈ以上即能酸化ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞，其细胞内ｐＨ（ｐＨｉ）显著降低，并诱导了ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞的凋亡，肿瘤细胞的增殖生长也显著受抑。结论：ＮＨＥ－１在肺癌细胞增殖／凋亡调控中起重要作用，抑制其增强的活性可能具有一定的应用前景     

东亚钳蝎毒BmK-9-(2)对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的 :观察东亚钳蝎毒 Bm K- 9- (2 )对豚鼠心室肌细胞钠通道的作用。方法 :采用全细胞膜片钳方法。结果 :Bm K- 9- (2 )使钠通道峰值电流增加 2 7%。峰值钠电导增加 1 7%。钠通道未失活成分增加 8%。 Bm K- 9- (2 )对心肌细胞钙通道没有明显影响。结论 :Bm K- 9- (2 )可激活钠通道并使钠通道失活过程延长     

氨氯吡咪抑制血管内皮细胞生长因子mRNA表达对K562细胞凋亡的影响

目的:探讨氨氯吡咪(Amiloride)通过抑制血管内皮细胞生长因子mRNA(VEGF mRNA)表达,观察VEGF mRNA与K562细胞凋亡是否有关。方法:将不同浓度Amiloride与K562细胞共同孵育,采用Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡。同时采用RT-PCR技术观察Amiloride对K562细胞VEGF mRNA表达的影响,免疫组化方法观察Amiloride对K562细胞VEGF蛋白表达的影响。应用MTT法观测Amiloride对K562细胞增殖的影响。结果:不同浓度Amiloride作用K562细胞24h后,K562细胞的增殖受到抑制,VEGF mRNA表达强度的相对系数及VEGF蛋白呈浓度依赖性下降,并且可以观察到随着VEGF mRNA表达强度的相对系数的降低,K562细胞凋亡率增加,二者之间显著负相关(P<0.05)。结论:氨氯吡咪可能通过抑制VEGF mRNA表达促进K562细胞凋亡。     

1-磷酸鞘氨醇对豚鼠心室肌细胞单通道延迟整流钾电流的影响

目的： 观察1-磷酸鞘氨醇（S1P）对豚鼠心室肌细胞单通道延迟整流钾电流的影响,探讨S1P在室性心律失常中的作用。方法： Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞,随机选取心室肌细胞分为正常对照组、S1P(2.2 μmol·L^-1)组及S1P(2.2 μmol·L^-1)+Suramin（200 μmol·L^-1）组。应用细胞贴附式记录方式记录心室肌细胞延迟整流钾电流（I_K）。结果：细胞贴附式记录及通道动力学分析 ,S1P组心室肌细胞通道开放时间及开放概率明显低于正常对照组(P<0.05),关闭时间明显高于正常对照组（P<0.05）;S1P+Suramin组通道开放时间、开放概率以及关闭时间与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05）。结论： S1P抑制心室肌细胞延迟整流钾电流外流,该作用通过缩短开放时间、延长关闭时间、降低开放概率实现,且通过膜受体介导。     

β3-肾上腺素能受体对心力衰竭大鼠心室肌细胞内静息Ca2+浓度的调控及其转导途径

目的 观察β_3-肾上腺素能受体(β_3-AR)对心力衰竭大鼠心室肌细胞内静息Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]I)的调控及其转导途径.方法 通过结扎冠状动脉前降支制备大鼠实验性心力衰竭模型,经典酶分离法分离心肌细胞,Fluo-3/AM染色,激光共聚焦显微镜观察B_3-AR兴奋剂BRL-37344以及合用PTX(Gi抑制剂)、L-NAME(NOS抑制剂)、Methylene blue (NO抑制剂)时对心室肌细胞内静息Ca~(2+)浓度的影响及其转导途径.结果 在心力衰竭和正常对照大鼠,β_3-AR激动剂BRL37344(1 μmol/L)分别使心室肌细胞内[Ca~(2+)]I下调至用药前水平的59.4%、45.5%(P<0.05);在分别用L-NAME(10μmoI/L)、Methylene blue(10 μmol/L)、PTX(2μg/ml)阻断下,BRL37344(1μmol/L)使正常对照大鼠[Ca~(2+)]I分别下降10.1%、16.9%、15.4%,而在心力衰竭大鼠[Ca~(2+)]I分别下降16.9%、19.3%、11.7%.结论 β_3-AR激动剂可以使心室肌细胞内[Ca~(2+)]I下调,心力衰竭心肌下调程度较轻,其作用是通过PTX-NOS-NO转导.

Abstract：

Objective To observe the effect of β_3-adrenoceptor (AR) in regulating resting intracellular Ca_(2+) concentration of the ventricular myocytes and investigate the signaling pathway in rats with experimental heart failure. Methods Rat models of experimental heart failure were established by ligation of the anterior descending artery, and the myocytes were isolated by enzymatic digestion. The resting intracellular Ca~(2+) concentration was determined using laser scanning confocal microscopy (LSCM) in the cells stimulated with 1 μmol/L BRL37344 (a selective β_3-AR agonist) alone or in combination with PTX,L-NAME, or methylene blue. Result In the ventricular myocytes from normal control rats, BRL373444 reduced the resting intracellular Ca~(2+) concentration of by 45.5%, while the reduction increased to 59.4% in the cells from rats with heart failure. In combination with L-NAME (10 μmol/L), methylene blue (10 μmol/L), and PTX (2 μg/ml), BRL373444 caused a reduction in resting intracellular Ca~(2+) concentration of the ventricle myocytes from normal control rats by 10.1%, 16.9%, and 15.4%,respectively in control group, while the rate was 16.9%, 19.3%, and 11.7% in the heart failure group. Conclusion β_3-AR agonist can decrease the resting intracellular Ca~(2+) concentration of the ventricular myocytes, but the reduction is smaller in cells from rats with heart failure than in cells of normal rats. This effect is mediated through the PTX-NOS-NO pathway.     

缺血再灌注小鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流的改变

目的观察缺血再灌注损伤对小鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白电流的直接影响,探讨缺血再灌注损伤中Ca2+超载的机制。方法采用全细胞打孔膜片钳技术,观察缺血再灌注损伤对急性分离的小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白电流(INa/Ca)的影响。细胞外灌流代谢抑制剂(5 mmol/L氰化钠和10 mmol/L脱氧葡萄糖)模拟化学性心肌细胞缺血状态。结果缺血8m in明显抑制了小鼠心室肌细胞钠钙交换蛋白内向和外向电流〔在-100 mV,电流从(-0.04±0.01)nA减小到0 nA;在+50mV,电流从(0.25±0.08)nA减小到(0.11±0.03)nA〕。而随后的再灌注则导致钠钙交换蛋白电流迅速而明显的增大,尤以外向电流增大更加显著〔在+50 mV,电流从(0.25±0.08)nA增大到(0.49±0.12)nA〕。结论缺血再灌注直接影响小鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换蛋白的功能及状态,使Na+/Ca2+交换蛋白的反向转运功能明显增强,这种改变可能是导致缺血再灌注损伤中Ca2+超载的关键因素。     

甲基黄酮醇胺对大鼠心室肌细胞钙电流的影响

采用胶原酶Ｂ急性分离大鼠心室肌细胞。利用膜片钳技术,观察甲基黄酮醇胺对心肌细胞膜钙离子通道的影响。结果表明：甲基黄酮醇胺１ 、１０ 和５０ μｍｏｌ／Ｌ可剂量依赖性地抑制大鼠心室肌细胞膜钙离子电流,表明甲基黄酮醇胺有钙拮抗作用。     

钠钙离子交换体介导的钙超载对造影剂诱导NRK52E细胞损伤的影响

目的:本研究探讨钠钙离子交换体(NCX)是否参与了造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤及反向模式钠钙离子交换体抑制剂KB-R7943对造影剂诱导的肾小管上皮损伤的影响。方法:鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)被分成6组:正常对照组、造影剂组、甘露醇组、钙离子拮抗剂(CCB)组、KB-R7943(10-5mol/L)和KB-R7943(10-6mol/L)组。造影剂作用1 h后,细胞损伤采用LDH检测,细胞形态变化及细胞凋亡分别由倒置显微镜和流式细胞仪检测;细胞内钙采用共聚焦微镜测定;钠钙离子交换体mRNA表达采用RT-PCR测定。结果:造影剂作用1 h后,细胞损伤、细胞凋亡、细胞内钙进行性增加,显著高于相同渗透压甘露醇组;KB-R7943显著改善了上述异常,且较相同浓度CCB具有更好的效果并显示出剂量效应;钠钙离子交换体mRNA表达没有变化。结论:经反向模式钠钙离子交换体导致的细胞内钙超载参与了造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤;反向模式钠钙离子交换体抑制剂KB-R7943以呈剂量方式对造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。     

Characteristics of single Ca2+channel kinetics in feline hypertrophied ventricular myocytes

目的　慢性压力负荷导致的心肌肥厚所伴有的动作电位时程的延长可能与L型钙流失活延迟有关。本文的目的是探索左室高血压所致的家猫肥厚心肌的单通道L型钙流的特征 ,以及在动作电位延长中的作用。方法　应用膜片钳技术研究正常和压力负荷所致的肥厚家猫心肌单通道L型钙流的特征。左室高血压模型用部分结扎降主动脉的方法。结果　从 - 40mV去极化到 0mV时 ,正常心肌和肥厚心肌的单通道L型钙流的振幅分别为 1 0 2± 0 0 3pA和1 0 5± 0 0 3pA ,斜率电道分别为 2 6 2± 1 0pS和 2 5 8± 0 9pS ,两者相比均无差别。但脉冲终末部分的平均振幅 ,肥厚心肌明显大于正常心肌。通道开放时间直方图分析表明 ,正常心肌细胞的开放时间分布呈单指数曲线 ,而肥大心肌细胞为双指数曲线。肥大心肌的平均开放时间明显长于正常心肌细胞。结论　左室压力负荷所致的肥大细胞的动作电位时程延长与L型钙流的失活时间延迟有关。     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞Ito电流影响的实验研究

目的探讨卡维地洛对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)的作用.方法采用胶原酶酶解法分离得到大鼠单心室肌细胞;采用膜片钳全细胞技术记录灌流卡维地洛前后Ito电流的变化.结果灌流0.1 mM及1.0 mM卡维地洛后,Ito电流密度分别为(pA/pF)(5.06±1.98),(3.91±0.66),P＜0.05;不同去极化电压水平Ito电流值也有明显减小,Ⅰ-Ⅴ曲线向下方移位.结论卡维地洛对大鼠心室肌细胞Ito电流具有抑制作用,此抑制作用呈浓度依赖趋势.     

钠/钙和钠/氢交换蛋白与心肌缺血再灌注损伤

Ca2+超载与缺血/再灌注损伤有密切关系,钠/钙交换蛋白和钠/氢交换蛋白是缺血/再灌注Ca2+超载过程中两个至关重要的因素。目前已有很多钠/钙交换蛋白(NCX)抑制剂和钠/氢交换蛋白(NHE)抑制剂用来防止Ca2+超载引起的缺血再灌注损伤。     

兔心肌梗死后心室肌细胞钙电流变化及比索洛尔的影响

目的本研究观察心肌梗死(myocardial infarction,MI)后3周,兔心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的改变及比索洛尔的影响.方法采用Langendoff灌流法获得单个心室肌细胞,利用膜片钳技术全细胞记录模式,记录心室肌细胞L型钙电流(ICa-L).结果本实验记录了3组心室肌细胞的ICa-L的电流的变化.MI组ICa-L电流峰值显著高于伪手术组(Sham组)(2.19±0.84)nA vs(1.57±0.56)nA,(P＜0.05),比索洛尔组(β-B组)(1.78±0.53)nA与Sham组间无显著差异.但经膜电容标化后,ICa-L电流密度3组间无显著差异[MI组(12.60±3.74)pA/pF、β-B组(12.57±2.69)pMpF、Sham组(12.49±4.21)pA/pF],Ⅰ～Ⅴ曲线呈典型"铃型"曲线.结论比索洛尔可减轻MI非梗塞区心室肌细胞ICa-L的变化.     

模拟缺血对兔三层心室肌细胞快钠通道的影响

目的探讨心肌缺血时折返性心律失常发生的离子机制。方法以酶解法分离兔心室肌三层细胞,先后用正常和缺血液灌流模拟正常和缺血状态,并采用膜片钳全细胞记录法观察三层心室肌细胞快钠通道的活性和异质性变化。结果(1)缺血后三层细胞的钠电流(INa)电压依赖性、I-V曲线的形态轨迹未变,INa峰电流密度减小,三层细胞间峰电流密度差异发生变化。(2)缺血后三层细胞失活曲线均左移,失活加速,三层细胞间INa失活半电压差异发生变化。(3)缺血30 min时INa灭活后恢复曲线由原来的三层细胞间无统计学差异(P>0.05)变为有统计学差异(P<0.05)。各层细胞自身INa灭活后恢复随着缺血时间延长而减慢,但无统学差异。结论心肌缺血使钠通道活性改变,影响三层细胞间INa的异质性及三层细胞离子通道电流平衡,构成心律失常发生的基质,可部分解释三层细胞在正常和缺血状态对药物的不同反应。