环氧合酶2在心肌纤维化中的表达及意义

目的：研究环氧合酶2（COX2）在心肌纤维化中的表达及意义。方法：注射盐酸异丙肾上腺素（Iso）15 mg•kg^-1复制大鼠心肌坏死模型，用MD-100自动生化分析仪检测大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶（CK-MB）的含量。通过免疫组化染色分析心肌COX2蛋白表达，RT-PCR分析COX2 mRNA表达。结果：与正常对照组比较，注射Iso后4 h血清LDH、CK及CK-MB达高峰(P<0.05)，6 h AST达高峰(P<0.05)。COX2蛋白表达随病变程度的加重而增加，与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05)。COX2 mRNA表达结果显示，注射Iso后2 ~ 12 h，COX2 mRNA表达有逐渐增加趋势，但与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)；注射Iso后24~48 h，COX2 mRNA表达较正常对照组明显增加(P<0.05)；48 h后mRNA表达逐渐下降，3周后仍未降至正常，但与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：COX2的蛋白表达及COX2 mRNA 水平在缺血性坏死心肌中明显增加，提示COX2的表达与纤维化程度有关联，可能参与了心肌纤维化的过程。     

Bcl-2及Bax在异丙肾上腺素致心肌坏死模型大鼠心肌中的表达及意义

目的：探讨Bcl-2及Bax在异丙肾上腺素（Isp）致心肌坏死模型大鼠心肌中的表达及意义。方法：40只大鼠随机分为4组：正常对照组及注射Isp后12 h、1周和3周组。除正常对照组外,其他各组大鼠皮下注射Isp（15 mg?kg-1体重）,并于给药后12 h、1周和3周时取对应组大鼠心脏,用免疫组化法及RT-PCR法检测各组大鼠心肌组织中Bcl-2及Bax的表达。结果：免疫组化结果显示,注射Isp后 12 h及1周组大鼠心肌组织中Bax表达明显高于正常对照组（P<0.05）;注射Isp后12 h、1周及3周组大鼠心肌组织Bcl-2表达量均明显低于正常对照组（P<0.05）;注射Isp后12 h、1周、3周后,各组大鼠心肌组织Bcl-2/Bax比值均低于正常对照组（P<0.05）。RT-PCR结果显示,注射Isp后各组大鼠心肌组织Bax mRNA表达量均明显高于正常对照组（P<0.05）,且在注射Isp后1周时,Bax mRNA表达量达到高峰;注射Isp后,各组大鼠心肌组织Bcl-2 mRNA表达量均明显低于正常对照组大鼠（P<0.05）;与正常对照组大鼠比较,在注射Isp后 12h及1周,各组大鼠心肌组织Bcl-2/Bax比值明显增高（P<0.05）。结论：心肌细胞的凋亡是心肌纤维化的病理基础,而Bcl-2家族基因及蛋白表达变化在此过程中起主要调控作用。     

阿魏酸钠对大鼠缺血心肌tTG表达的影响

目的：探讨组织型转谷氨酰胺酶（tTG）在大鼠缺血心肌的表达及阿魏酸钠（SF）对其表达治疗的影响。方法：60只大鼠随机分为12 组,每组5只：正常对照组;模型组包括注射盐酸异丙肾上腺素（Iso）2 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、1周及3周组;贝那普利（Bena）阳性对照组;SF治疗组。除正常对照组外,其他各组大鼠均皮下注射 Iso (15 mg·kg^-1);阳性对照组同步注射贝那普利;SF治疗组同步注射SF。并于给药后对应时间取大鼠心脏,采用免疫组织化学法及RT-PCR方法检测各组大鼠心肌组织中tTG的表达。结果：注射Iso 2 h后,大鼠心肌组织中tTG表达较正常对照组增加,但差异无显著性（P>0.05）;随着注射Iso时间的延长,3周达到高峰,与正常对照组比较差异有显著性（P<0.01）。tTG mRNA表达量在24 h达到高峰,与正常对照组比较差异有显著性（P<0.01）;自48 h后其表达逐渐下降,但与正常对照组比较差异仍有显著性（P<0.05）。SF治疗组tTG的表达量降低,其基因表达亦明显减少,与Iso组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：在大鼠心肌缺血模型中,心肌组织tTG表达增加,加速了心肌缺血的进程;SF抑制tTG的表达,可降低心肌缺血的进程。     

大鼠心肌缺血性纤维化后NF-κB的表达及其意义

目的：探讨大鼠发生心肌缺血性纤维化后转录因子（NF-κB）的表达及作用,阐明其与心肌缺血性纤维化发生发展的关系。方法：20只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、盐酸异丙肾上腺素注射液(Iso)12 h组、Iso 72 h组和Iso 1周组,每组5只。除正常对照组外,其他各组大鼠皮下均注射 Iso (2 mg /kg体质量)。按对应时间点取心脏组织,采用常规染色,免疫组织化学染色方法分析NF-κB蛋白表达。结果：HE染色结果显示正常对照组心肌排列整齐,横纹清晰,胞核明显,无细胞肿胀。注射Iso　12 h后,心肌出现较多点状坏死。注射Iso 1周后,出现界限清晰、多发散在坏死灶。Masson三色染色结果显示正常对照组胶原仅有少量表达,而注射Iso 12　h后,胶原量明显增加(P<0.01),直至1周达到高峰。NF-κB免疫组织化学染色结果显示正常对照组中可见呈浅黄色或综黄色阳性物质。注射Iso 12 h后,NF-κB阳性物质表达明显增加。注射1周后,NF-κB阳性表达达到最大值(P<0.05)。结论：NF-κB表达随Iso注射时间的延长而明显增加,提示NF-κB参与了大鼠心肌坏死后纤维化的发生及发展过程。     

阿魏酸钠干预对Rho/Rock信号通路的影响及其对肝脏的保护作用

［摘 要］ 目的：探讨阿魏酸钠(SF)干预后对Rho/Rock信号通路相关蛋白表达及肝脏的影响,阐明其对脏器的保护作用。方法：雄性Wistar大鼠20只,分为正常对照组、模型组、阳性药组及SF干预组。除正常对照组外,其余组大鼠注射盐酸异丙肾上腺素（Iso）15 mg/kg诱发大鼠心肌纤维化模型;稳定2 d后,除模型组外,其余2组给予SF和贝那普利。利用Masson染色分析给予SF后心肌胶原的含量变化;RT-PCR法分析Rho A和Rock mRNA表达;采用免疫组织化学染色分析心肌Rock蛋白表达;拉曼光谱分析肝脏的损伤。结果：与正常对照组比较,注射Iso后3周,Rho A和Rock mRNA表达即有所增加 (P<0.01);给予SF和贝那普利后,Rho A和Rock基因和蛋白表达水平较模型组明显降低(P<0.01);拉曼光谱分析结果显示,给予SF后大鼠肝脏组织的峰位较模型组向右移动1个单位,趋近正常对照组峰位。结论：SF可能通过阻断Rho/Rock信号通路进而起到抑制纤维化的作用,同时又起到肝脏保护作用。     

大豆皂苷对糖尿病大鼠心肌组织中NOX4和p22phox表达的影响及其对心肌的保护作用

［摘 要］ 目的：探讨大豆皂苷对糖尿病大鼠心肌组织中NOX4和p22phox表达的影响,阐明其对心肌的保护作用。方法：将雄性Wistar 大鼠建立糖尿病模型后随机分为糖尿病组和大豆皂苷给药组,仅注射等体积0.1 mol?L-1柠檬酸缓冲液的大鼠作为对照组,对照组、糖尿病组和大豆皂苷给药组动物分别每日灌胃给予生理盐水、生理盐水和大豆皂苷（10 mg/kg）,共3个月。取心肌组织并采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定大鼠心肌组织中NOX4和p22phox mRNA表达;免疫组织化学方法检测心肌组织中铜-锌超氧化物歧化酶（Cu-Zn-SOD）和结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达;HE染色检测心肌病理学改变。结果：与对照组比较,糖尿病组大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phox mRNA和CTGF蛋白表达均显著升高（P<0.01）,而Cu-Zn-SOD蛋白表达显著降低（P<0.01）;与糖尿病组比较,大豆皂苷给药组大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phox mRNA和CTGF蛋白表达均显著降低（P<0.01）,但Cu-Zn-SOD蛋白表达显著增加（P<0.01）;对照组和大豆皂苷给药组上述指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。HE染色可见对照组大鼠心肌细胞排列紧密整齐,糖尿病组大鼠心肌细胞排列疏散紊乱,间质可见炎细胞浸润;大豆皂苷给药组大鼠心肌细胞基本整齐紧密。结论：大豆皂苷能降低糖尿病大鼠心肌组织中NOX4 mRNA、p22phox mRNA和CTGF蛋白的表达,提高Cu-Zn-SOD蛋白的表达,减轻氧化应激对心肌的损害,从而对心肌有一定的保护作用。     

促红细胞生成素及其受体在大鼠视网膜光损伤后的表达

目的 观察大鼠视网膜光损伤后促红细胞生成素（EPO）及其受体（EPOR）的表达变化。方法 选用32只雄性SD大鼠,其中29只建立视网膜光损伤大鼠模型（光损伤组）,另3只作为正常对照组。取正常对照组大鼠视网膜组织以及光损伤组大鼠光损伤后0、6、12、24、48、72 h和7、14 d的视网膜组织,分别采用Western blotting和RT-PCR法检测EPO、EPOR蛋白和mRNA的表达,并采用免疫组织化学法定位观察EPO和EPOR蛋白表达。结果 Western blotting检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR蛋白表达增加,光损伤后48 h达到高峰;光损伤组EPO蛋白的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR蛋白的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。RT-PCR检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR mRNA表达增加,分别于光损伤后24 h和48 h达到高峰;光损伤组EPO mRNA的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR mRNA的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学定位观察显示：视网膜光损伤后24 h,光感受器内外段EPOR蛋白表达略增强,EPO蛋白表达相对较弱。结论 大鼠视网膜光损伤后EPO和EPOR蛋白及mRNA表达增加,有一定的时效性,提示内源性EPO和EPOR参与视网膜光损伤的修复机制。     

丹芪合剂对糖尿病大鼠肾小管p38MAPK表达的影响

目的：观察丹芪合剂对糖尿病大鼠肾小管p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响,从而探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法：设立正常对照组（NG）、糖尿病组（DG）和糖尿病丹芪合剂治疗组（DQT）,链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型,12周后测定大鼠血糖、血肌酐和24 h尿蛋白及肾脏指数;PAS染色观察肾脏病理变化;免疫组织化学方法检测肾小管p38MAPK和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质p38MAPK mRNA的水平。结果：与NG相比,DG大鼠血糖、血肌酐、24 h尿蛋白及肾脏指数均显著升高,肾小管上皮细胞p38MAPK蛋白及mRNA和FN蛋白表达明显增多,DQT除血糖外,血肌酐和24 h尿蛋白均显著下降,p38MAPK蛋白及mRNA和FN蛋白表达明显减少。结论：丹芪合剂可能通过抑制p38MAPK的表达而减少FN的分泌和沉积,延缓糖尿病肾小管间质损害的进程。     

急性心肌梗死大鼠心肌组织p38的表达及其意义

目的探讨大鼠急性心肌梗死后不同时间点心肌组织中p38mRAN、p38蛋白的表达水平及意义。方法健康成年雄性SD大鼠36只,将其随机分为对照组、假手术组和心肌梗死模型组,模型组大鼠开胸结扎冠状动脉前降支以建立心肌梗死模型,成功结扎冠状动脉前降支后1、3、6、12h无痛处死大鼠并获取大鼠心肌组织;对照组大鼠不做任何处理;假手术组大鼠开胸冠状动脉穿线但不结扎冠状动脉;术后均无痛处死并获取心肌组织;分别采用RT-PCR、Western blot测定大鼠心肌组织p38mRNA及蛋白的表达水平。结果对照组与假手术组之间p38mRNA及蛋白表达的差异均无统计学意义(P>0.05);AMI组大鼠各亚组心肌组织中p38mRNA及蛋白表达均高于假手术组(P<0.05);AMI组中不同时间点亚组大鼠心肌组织中p38mRNA及蛋白的表达差异均有统计学意义(P<0.05),其表达量随结扎冠状动脉前降支时间的延长而增加,并于6h表达量达到高峰,随后下降,至12h其表达水平与假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 p38可能在心肌梗死后的病理过程中发挥作用。     

牛磺酸对心肌纤维化的抑制作用及机理

目的：研究牛磺酸（Tau）对心肌纤维化的抑制作用及机制。方法：体内实验以丙肾上腺素（Iso）皮下注射建立心肌纤维化模型，分为正常对照组、模型组及Tau治疗组（80、160和320 mg•kg ^-1•d ^-1),取心肌组织测定羟脯氨酸含量并进行HE 染色。体外实验用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(CFb)增殖,分为正常对照组、模型组及Tau治疗组（40、80和160 mmol•L^-1）。 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖程度；ELISA法测定转化生长因子β₁（TGF-β₁）蛋白的含量；流式细胞仪检测细胞周期素依赖性激酶抑制〖JP3〗因子P27的变化。结果：体内实验显示Tau〖JP3〗(160和320 mg•kg^-1•d ^-1)组羟脯氨酸含量低于Iso组(P<0.01或P<0.001)；HE染色可见Iso组心肌纤维增生、排列紊乱、肌浆肿胀；Tau组明显减轻Iso引起的心肌损伤。体外实验表明，各剂量Tau组CFb增殖程度及TGF-β₁蛋白含量均低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)，且呈现剂量依赖性；流式细胞仪检测证实Tau（80和160 mmol•L^-1）组P27蛋白表达量高于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论：Tau通过抑制TGF-β₁蛋白含量的增多、促进P27的表达，抑制CFb增殖和胶原合成，最终抑制心肌纤维化。     

大鼠非梗死区心肌Dock1蛋白表达改变

目的探讨大鼠非梗死区心肌Dock1蛋白的表达改变。 方法建立SD大鼠实验性心肌梗死(22只)及假手术模型(20只)。分别于术后24 h和12周时处死心肌梗死组和假手术组大鼠(各8只),获取心脏标本,应用免疫印迹法检测非梗死区心肌及假手术组心肌Dock1蛋白的表达。 结果术后24 h时,心肌Dock1蛋白表达在梗死组(0.13±0.03)与假手术组(0.10±0.04)间的差异无统计学意义(P>0.05);但术后12周时,梗死组(0.17±0.04)较假手术组(0.11±0.05)表达增加,差异有统计学意义(P<0.05); 术后12周时的梗死组心肌Dock1蛋白表达较24 h时的梗死组和假手术组均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论心肌中存在Dock1蛋白的表达;梗死后12周时非梗死区心肌Dock1蛋白表达增加。     

川芎嗪对大鼠缺血心肌Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的：研究心肌缺血时凋亡相关基因Bcl—2和Bax蛋白表达水平的变化及川芎嗪对它们的影响。方法：大鼠随机分对照组、缺血组和川芎嗪保护组。采用皮下注射异丙肾上腺家(ISP，5mg／kg)，24h后再注射同剂量一次，造成心肌缺血损伤模型。采用免疫组化法检酗Bcl—2和Bax蛋白水平的变化。结果：缺血组Bcl-2和Bax蛋白表达均高于正常组(P＜0．05和P＜0．01)，川芎嗪可显著提高缺血心肌组织Bcl—2的表达(P＜0．01)，对Bax的表达影响不大(P＞0．05)。结论：在异丙肾上腺素所致的心肌缺血性损伤中，凋亡相关基因表达异常，川芎嗪对该模型大鼠心肌Bcl—2基因的异常表达有一定的调控作用。     

盐酸异丙肾上腺素诱发大鼠心肌缺血性纤维化后肝脏损伤的拉曼光谱分析

目的:探讨盐酸异丙肾上腺素(Iso)诱发大鼠心肌缺血性纤维化后拉曼光谱对肝脏损伤的分析,为拉曼光谱的应用提供依据。方法:20只Wistar 大鼠随机分为对照组、Iso-4h模型组、Iso-24h模型组和Iso-1周模型组(n=5);除对照组外,其余各组大鼠均一次性皮下多点注射Iso。HE染色分析心脏和肝脏的病理学改变;紫外光谱和拉曼光谱分析肝脏组织的蛋白吸收谱。结果:病理学观察,对照组大鼠心肌细胞排列整齐,横纹清晰,胞核明显,无细胞肿胀;Iso-24h组大鼠心肌出现较多的坏死,局限于心内膜下;Iso-1周组大鼠心肌出现界限清晰、多发散在坏死灶,坏死灶内有旺盛的成纤维细胞增生,并可见一定量的胶原纤维。对照组大鼠肝小叶界限清晰,无坏死灶;Iso各组大鼠肝小叶内有灶性坏死区,肝细胞出现水样变性,且随着Iso注射时间的延长,肝脏病变程度加重。紫外检测,与对照组比较,Iso-24h组大鼠心脏组织吸收峰向左或向右移动1个单位,Iso-1周组由1个峰位趋于正常;与对照组比较,Iso-24h组大鼠肝脏组织吸收峰移动了2个单位,Iso-1周组吸收峰位逐渐趋于平稳。拉曼光谱法,与对照组比较,Iso-24h组大鼠肝组织仅在1 590 nm处见明显吸收峰,Iso-1周组未检测到相同吸收峰。结论:Iso诱发心肌损伤时,肝脏亦有损伤;拉曼光谱是更为灵敏的检测肝损伤的方法。     

Change and significance of nuclear factor-κB in adriamycin induced cardiomyopathy in rats

Background This study aimed at investigating the change and significance of nuclear factor-κB (NF-κB) in eardiomyopathy induced by adriamyein (ADR) in rats. Methods Sixty male Wistar rats were randomly divided into three groups: control, ADR and ADR pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) groups. After 30-day experiment, myocardial histopathological observation was performed. Location and distribution of NF-κB p50 was examined by immunohistochemical assay. Expression of NF-κB p50 protein was examined by immunoboh assay. Electrophoretic Mobility Shift Assay examined activity of NF-κB; Myocardium p53 gene expression was examined by RT-PCR analysis. Results The myocardial lesions of rats were less pronounced in ADR PDTC group than in ADR group. Compared with control group, there were many myocardium nucleuses, which expressed NF-κB p50 and distribute under epicardium. Expression of NF-κB p50 protein in nucleus increased significantly in ADR group. The NF-κB binding activity increased significantly in ADR group. Myocardium expressions of p53 mRNA increased in ADR group. Conclusions The NF-κB binding activity increased significantly in cardiomyopathy induced by ADR in rats. Moreover, NF-κB plays an important role in causing degeneration of myocardial tissue and regulating expression of related-apoptosis genes.