应用TFF微孔过滤澄清白喉、破伤风毒素培养液及超滤浓缩的试验

用ＴＦＦ微孔过滤系统对白喉、破伤风毒素培养液分别进行了两次澄清过滤试验,澄清过滤后的毒素上清液立即用ＴＦＦ超滤系统浓缩至原培养液体积的１／１０－１／２０。白喉毒素总回收率分别为８６％、７６．６％,破伤风毒素总回收率为９４．１％、９２％。澄清过滤中白喉毒素平均Ｆ１ｕｘ分别为２３．４、１４．３Ｌ／ｍ２／ｈ,破伤风毒素平均Ｆｌｕｘ为２４及２２．９Ｌ／ｍ２／ｈ。结果表明破伤风两次试验有很好的一致性,白喉毒素回收率差别不甚明显,而两次试验Ｆｌｕｘ相差较大,ＴＦＦ微孔过滤系统用于澄清白喉培养液,滤膜使用后的清洗程序仍需改良,以提高膜滤过功能的恢复。     

破伤风毒素C部分的克隆及在大肠杆菌中的表达

用ＣＲ方法从破伤风杆菌基因组ＤＮＡ上坟增出破伤风毒素Ｃ部分（ｔｅｔａｎｕｓ ｔｏｘｉｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｃ,ＴＴＣ）,经测序其基因片段由１３５６ｂｐ组成,可编码４５１个氨基酸残基的多肽。将其插入原核表达载体ｐＥＴ－２８ａ（＋）中,并在大肠杆力ＢＬ２１９ＤＥ３）中表达,其表达量占可溶性总蛋白质的８．２％;ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫印迹分析表明,ＴＴＣ基因（该基因ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＡＦ１５４８２）表     

不同降温温度对抗破伤风毒素抗体重组CHO工程细胞株生长及蛋白表达的影响

目的 摸索适合抗破伤风毒素抗体重组CHO工程细胞株生长和抗体蛋白表达的降温温度,为细胞培养工艺的建立提供参考。方法 在体积为125 mL的培养瓶中,按50万个/mL的初始密度接种CHO工程细胞种子,采用补料分批培养模式,在转速125 r/min, CO₂浓度5.0%,湿度80%的温控培养摇床中进行细胞培养。对照组培养温度设定为37℃恒温;试验组初始培养温度设定为37℃,待培养瓶中的细胞密度达到1 000万个/mL时,将培养瓶分别转到35℃、34℃和33℃的摇床继续培养。每日取样,分别检测培养液的活细胞密度、细胞活率、葡萄糖、乳酸、NH⁺₄、渗透压和抗体蛋白滴度。当细胞活率<80%时,停止培养。与对照组比较,选择细胞生长较好,代谢副产物浓度较低且抗体蛋白滴度最高的温度为最终降温温度。结果 对照组的最高活细胞密度为2 000万个/mL,试验组37℃转到35℃、37℃转到34℃和37℃转到33℃培养条件下的最高活细胞密度分别为2 210万、1 940万和1 890万个/mL;与对照组相比,试验组培养后期的细胞活率维持较高...