粉防己碱与抗肿瘤药物相互作用对HNE-1细胞周期的影响

目的 观察天然有效成分粉防己碱(Tetrandfine,TET)与常用抗肿瘤药物长春新碱(Vincristine,VCR)、平阳霉素(Bleomycin,BLM)、顺铂(Cisplatin,DDP)、5-Fu相互作用后,对鼻咽癌HNE-1细胞周期的影响.方法 以鼻咽癌HNE-1细胞株为研究对象,分为不加任何药物的对照组、抗肿瘤药物与TET合用组以及维拉帕米(Verapamil,VRP)与抗肿瘤药物合用组,采用流式细胞仪检测各组细胞周期的变化.结果 TET与抗肿瘤药物相互作用使实验细胞株发生明显的Go/G1期阻滞.TET与药物相互作用使实验细胞株也发生G0/C1期阻滞.TET与VRP与药物相互作用结果相似.结论 TET联合抗肿瘤药物后,可使鼻咽癌细胞株产生G1期阻滞,抑制细胞增殖,其作用与经典化疗增敏剂VRP相似,此结果为TET作为化疗增敏剂提供了依据.     

EGCG对两株耐药肿瘤细胞的细胞毒增敏作用及抑瘤作用研究

目的:研究EGCG对人耐药肝癌细胞BEL7404/Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒增敏作用及对裸鼠移植瘤的抑瘤作用。方法:MTT法检测药物对体外培养细胞的毒性作用,采用BEL7404/ADR或KBV200细胞种植于裸鼠皮下,建立耐药肿瘤模型,观察用药后对裸鼠体重、抑瘤率、病理改变以及RTPCR和免疫组化法分别检测瘤组织mdr1和P糖蛋白的表达。结果:EGCG在100mg/L以下剂量对两株耐药肿瘤细胞的抑制率均小于10%,EGCG与抗肿瘤药物联合应用可明显提高抗肿瘤药物的细胞毒作用;体内与抗肿瘤药物联合应用对两种肿瘤抑瘤率明显高于单用抗肿瘤药物组,mdr1mRNA和Pgp的表达下降。结论:EGCG与抗肿瘤药物联合应用可增强化疗药物对耐药肿瘤细胞BEL7404/Adr和耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒作用,机制可能与降低MDR1mRNA表达、降低Pgp表达有关。     

鲜壁虎水提物联合环磷酰胺对BEL-7402细胞增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的:探讨鲜壁虎水提物(aqueous extracts of gecko,AG)与化疗药物环磷酰胺(CTX)联用对人肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用,比较两药联用的疗效是否优于单药,并检测两种药物联用对BEL-7402细胞P-糖蛋白(permeability-glycoprotein,P-gp)表达的影响,为二者临床联用提供实验依据。方法:MTT法检测药物对BEL-7402细胞株的增殖抑制作用,通过计算药物联合作用指数(combination index,CI)分析两种药物联用的效应;Western Blot检测两药联用后BEL-7402细胞株P-gp表达的变化,Quantity One软件对结果进行半定量分析。结果:当抑制率达到90%时,0.830或0.996 mg/m L的AG分别与10或5μmol/m L CTX合用显示为低度协同作用;CTX与AG联用后可降低BEL-7402细胞P-gp的表达,当4μmol/m L CTX与1.162 mg/m L的AG联用时抑制率达67.3%。结论:AG与CTX联合后对BEL-7402细胞增殖的抑制作用优于二者单用,显示为低度协同作用;同时能降低细胞P-gp的表达水平,提示AG与CTX联用可能有较好的抗肿瘤效果,并可逆转由Pgp介导的肿瘤细胞耐药的作用。     

姜黄素逆转伊立替康耐药结肠癌LoVo/CPT-11R细胞对伊立替康的敏感性

目的:探讨姜黄素增加伊立替康耐药结肠癌LoVo/CPT–11R细胞对伊立替康敏感性的效果。方法:采用药物浓度递增法建立LoVo/CPT–11R细胞株,采用CCK8法测定每孔光密度值,计算姜黄素及伊立替康对LoVo/CPT–11R细胞的增殖抑制率及抑制浓度,计算两药联合后LoVo/CPT–11R细胞的增殖抑制率、半抑制浓度(IC_(50))、逆转耐药指数。结果:通过药物浓度递增法建立LoVo/CPT–11R细胞株方法可行;两药联合对LoVo/CPT–11R细胞的增殖抑制作用显著强于单用伊立替康;姜黄素联合不同浓度伊立替康后对LoVo/CPT–11R细胞增殖抑制作用明显增强,两药联合后LoVo/CPT–11R细胞对伊立替康的IC_(50)降为40.30μg·mL~(-1),逆转耐药指数为4.91,因此LoVo/CPT–11R细胞对伊立替康的敏感性显著增强。结论:姜黄素与伊立替康联合应用后能有效提高LoVo/CPT–11R细胞对伊立替康的敏感性。     

复方浙贝浸膏联合奥沙利铂对人结肠癌耐奥沙利铂移植瘤及细胞膜耐药相关蛋白表达的影响

目的观察复方浙贝浸膏(CZBE)联合奥沙利铂(L-OHP)对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L-OHP移植瘤小鼠的抑瘤作用,以及对移植瘤细胞耐药相关蛋白MDR1、MRP1及LRP5表达的影响。方法将人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L-OHP细胞接种于Balb/C裸鼠右前腋皮下构建人结肠癌耐L-OHP移植瘤模型,成模后按随机数字表法将移植瘤小鼠分成模型组、L-OHP组(L-OHP 3 mg/kg)、CZBE高剂量(CZBE 10 g/kg)联合L-OHP组、CZBE中剂量(CZBE 5 g/kg)联合L-OHP组、CZBE低剂量(CZBE 2.5 g/kg)联合L-OHP组。分组当日开始给药,CZBE灌胃给药,每日1次;L-OHP腹腔注射,隔日1次。连续给药2周。实验结束后处死小鼠,称重后完整剥离瘤体并称瘤质量,计算肿瘤抑制率。将瘤块组织制成切片,免疫组化检测HCT116/L-OHP移植瘤细胞膜耐药相关蛋白表达。结果各剂量CZBE联合L-OHP均可有效抑制HCT116/L-OHP裸鼠移植瘤的增长。L-OHP组肿瘤抑制率为27.239%,CZBE高剂量联合L-OHP组肿瘤抑制率为45.031%,与L-OHP组比较差异有统计学意义(P<0.05),CZBE中剂量联合L-OHP组肿瘤抑制率为37.669%,CZBE低剂量联合L-OHP组肿瘤抑制率为32.147%。与模型组比较,L-OHP组移植瘤细胞MDR1、MRP1、LRP5的IOD/Area值差异无统计学意义(P>0.05);与模型组及L-OHP组比较,各剂量CZBE联合L-OHP组移植瘤细胞MDR1、MRP1、LRP5蛋白表达量均不同程度降低,其中,CZBE中、高剂量联合L-OHP组移植瘤细胞MDR1、MRP1蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),CZBE高剂量联合L-OHP组移植瘤细胞LRP5蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CZBE联合L-OHP可提高人结肠癌耐L-OHP细胞株移植瘤的肿瘤抑制率,其机制可能是通过减少人结肠癌耐L-OHP细胞膜耐药相关蛋白表达,增加结肠癌细胞对化疗药物的敏感性,从而起到协同增效作用。     

疏肝益肾方对人乳腺癌TAM耐药细胞株MCF-7 TAM-R的作用及其机制的研究

目的:研究疏肝益肾方对他莫昔芬耐药乳腺癌细胞MCF-7 TAM-R的作用,并探讨其可能的机制。方法:采用中药血清药理学方法制备大鼠含疏肝益肾方高中低剂量血清、TAM阳性对照血清、空白阴性对照血清,体外培养MCF-7 TAM-R细胞。CCK8法观察各组含药血清对MCF-7 TAM-R细胞株的抑制率,基因芯片检测MCF-7 TAM-R耐药细胞株可能的作用机制。结果:CCK8实验结果显示疏肝益肾方高中低剂量均可不同程度抑制MCF-7 TAM-R细胞株的增殖,且中药高剂量组在48小时抑制作用最强(P0.05)。基因芯片结果显示高剂量疏肝益肾方可以下调MCF-7 TAM-R耐药细胞株MAPK通路、VEGF通路等通路的表达。结论:1疏肝益肾方对TAM耐药乳腺癌细胞MCF-7 TAM-R的增殖有抑制作用。2疏肝益肾方逆转MCF-7 TAM-R细胞他莫昔芬耐药的机制涉及多条通路,可能与抑制MAPK通路、VEGF通路等通路有关。     

藏药柳茶水提物对胃癌耐药细胞BGC823/5-FU增殖及药物敏感性的影响

研究藏药柳茶水提物(Liu Tea extracts,LTE)对人胃癌氟尿嘧啶耐药细胞株BGC823/5-FU的增殖和药物敏感性的影响。将LTE作用于人胃癌耐药细胞BGC823/5-FU,采用MTT检测其对细胞增殖、化疗药物敏感性的影响以及与5-氟尿嘧啶(5-FU)的联用效应,应用CompuSyn软件计算联合用药指数(combination index,CI);流式细胞术(FCM)检测LTE对BGC823/5-FU细胞凋亡的作用;Western blot检测不同质量浓度(100,200,400 mg·L-1)LTE对5-FU作用下胃癌耐药细胞中P-gp,Bcl-2,Bax及Caspase-3(17KD)蛋白表达的影响。结果显示,LTE能够有效的抑制胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU的生长,抑制率与药物浓度及作用时间呈正相关;LTE能够促进细胞发生凋亡,800 mg·L-1的LTE作用细胞24 h后凋亡率可高达46.2%(P0.01)。LTE与5-FU联用后CI1,说明两药具有较好的协同抑制耐药细胞增殖的作用。非细胞毒性剂量LTE可显著降低化疗药物5-FU,CDDP,PTX,ADM对BGC823/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC50,P0.05),一定程度上逆转耐药细胞对化疗药物的耐药性,逆转倍数分别为2.35,1.68,1.96,0.52。蛋白检测结果显示,随着柳茶水提物浓度的增加,耐药细胞内Bcl-2表达逐渐下降,Bax和Caspase-3蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P0.01)。但耐药蛋白P-gp的表达在实验组和对照组细胞中无显著变化。LTE能有效抑制胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU的生长,并在一定程度上逆转其化疗耐药。抑制抗凋亡蛋白的表达、激活促凋亡蛋白、诱导耐药细胞发生凋亡可能是其作用的主要机制。     

复方苦参注射液对结直肠癌多药耐药性逆转作用的机制研究

目的本研究旨在探讨复方苦参注射液对大肠癌5-FU、L-OHP耐药细胞株5-FU/SW480、L-OHP/SW480耐药的逆转作用,并初步研究其机制。方法采用浓度梯度实验筛选无毒剂量复方苦参注射液的浓度,无毒剂量的复方苦参注射液作用于5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞48 h后,检测5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞对5-FU、L-OHP耐药的变化。同时,观察细胞凋亡、周期变化情况,采用RT-PCR、Western blot检测P-gp、P-170和MRP的mRNA及蛋白的表达水平。结果复方苦参注射液作用48 h后对5-FU/SW480、L-OHP/SW480的5%抑制率浓度分别为0.85和0.92μg/mL,以此作为无毒剂量。5-FU、L-OHP分别对5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞IC_(50)为(5.5±0.2)、(6.2±0.3)g/mL,分别加入无毒剂量的复方苦参注射液后,5-FU、L-OHP分别对5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞的IC_(50)值分别为(2.8±0.2)、(3.2±0.1)μg/mL,IC_(50)值均显著下降(P值均0.05),其逆转耐药倍数分别为1.96及1.91。流式细胞术检测发现,复方苦参注射液处理后G1期细胞减少,S期细胞增加(P0.05)。细胞凋亡率略有上升,但无统计学意义(P0.05)。RT-PCR、Western blot检测发现,加入无毒剂量的复方苦参注射液与未加入复方苦参注射液的细胞株5-FU/SW480、L-OHP/SW480比较,P-gp、P-170、MRP mRNA及蛋白表达明显升高;具有统计学差异(P0.05)。结论复方苦参注射液能逆转5-FU/SW480、L-OHP/SW480细胞株对5-FU、L-OHP的耐药,复方苦参注射液逆转机制可能通过降低P-gp、P-170和MRP等蛋白表达,为结直肠癌临床耐药研究奠定基础。     

肝力注射液逆转人肝癌细胞获得性多药耐药的体外研究

目的研究肝力注射液体外逆转人肝癌细胞5-Fu获得性多药耐药的作用。方法MTT法检测肝力注射液对人肝癌BEL-7402/5-Fu耐药细胞株的增殖抑制率及对5-Fu获得性多药耐药的逆转指数,倒置显微镜及Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞内阿霉素荧光强度。结果人肝癌BEL-7402/5-Fu细胞株对临床常用化疗药物显示出不同程度的交叉抗药性,肝力注射液(以苦参碱计)在0.230、0.115、0.058mg/mL3个质量浓度对人肝癌BEL-7402耐药细胞株72h的增殖抑制率分别为(9.25±2.38)%、(8.46±1.90)%、(4.23±2.05)%,对5-Fu的逆转指数分别为5.50、3.83、2.25,肝力注射液在0.230mg/mL质量浓度预处理细胞2h能提高细胞内阿霉素的量约38.61%。结论肝力注射液在体外具有逆转人肝癌细胞5-Fu获得性多药耐药的作用。     

氯化两面针碱体外逆转KB/ADM细胞多药耐药性的研究

目的:探讨氯化两面针碱(nitidine chloride,NC)对人口腔鳞癌耐阿霉素(ADM)细胞株KB/ADM多药耐药性(MDR)的逆转作用,开发低毒高效的抗肿瘤药物多药耐药逆转剂。方法:人口腔鳞癌多药耐药细胞KB/ADM常规培养至细胞数为1×106,随机分为多药耐药细胞组(KB/ADM细胞组),阳性药物维拉帕米组(VRP,5μmol·L-1),NC低剂量组(0.375mg·L-1),NC中剂量组(0.75 mg·L-1),NC高剂量组(1.5 mg·L-1)5组,每组3个平行样本。分别加入同体积的培养基,5μmol·L-1VRP,0.375,0.75,1.5 mg·L-1NC处理48 h,MTT法分别检测各组细胞对化疗药物ADM,长春新碱(VCR),依托泊苷(VP-16),羟基喜树碱(HCPT)敏感性;流式细胞仪检测P糖蛋白的表达;RT-PCR法检测多药耐药基因-1(MDR1)的表达。结果:与多药耐药细胞组比较,阳性药物VRP组,NC低、中、高剂量组KB/ADM细胞对ADM,VCR,VP-16,HCPT的IC50值明显下降(P0.01,P0.05);阳性药物VRP组,NC低、中、高剂量组KB/ADM细胞P糖蛋白的表达分别为(10.60±1.11)%,(68.57±2.56)%,(28.29±1.98)%,(8.03±1.46)%,与多药耐药细胞组(97.33±1.61)%比较明显下降(P0.01);阳性药物VRP组、NC低、中、高剂量组分别使KB/ADM的多药耐药性基因(MDR1)相对表达下降39%,22%,46%,69%(P0.01)。结论:氯化两面针碱能有效逆转KB/ADM多药耐药性,具有良好的抗肿瘤药物多药耐药逆转作用。     

茶叶抑制六种抗肿瘤药物诱变性的实验研究

本文报告依据超氧化物歧化酶(SOS)反应原理,采用诱变及抗诱变同步试验方法,检测了茶叶的诱变性和对六种抗肿瘤药物诱变性的抑制作用。结果表明,茶叶无诱变毒性并有抗诱变作用。茶叶对丝裂霉素C(MMC)、平阳霉素氟尿嘧啶顺氨氯铂、阿糖胞苷及盐酸氮芥六种治疗肿瘤药物的诱变毒性均有抑制作用。为进一步研究茶叶的抗癌作用及临床应用提供了参考依据。     

Tetrandrine and arsenic trioxide synergistically inhibit proliferation of HCC1937 triple negative breast cancer cells

OBJECTIVE: To evaluate the effects of tetrandrine plus arsenic trioxide on HCC1937 cells, a triple negative breast cancer cell line, and to explore possible mechanisms.METHODS: The 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide method was used to compare the antiproliferative effects of tetrandrine,arsenic trioxide alone and tetrandrine plus arsenic trioxide on HCC1937 cells. The median-effect principle(Chou-Talalay combination index method) was used to examine the interaction between the two drugs. Flow cytometry was used to evaluate effects of treatment with tetrandrine, arsenic trioxide or the combination of both on HCC1937 cell apoptosis. Real-time polymerase chain reaction and western blotting were performed to evaluate changes in apoptosis-related gene expression and protein levels.RESULTS: Tetrandrine and arsenic trioxide each in-hibited HCC1937 cell proliferation in a dose-dependent manner. The cell inhibition rate of HCC1937 cells treated with a combination of tetrandrine and arsenic trioxide was significantly higher than with either compound alone. The two drugs produced a synergistic effect when the inhibition rate was20%-40%. Flow cytometry results showed that treatment with the two drugs increased the proportion of apoptotic cells. In the combination treated group, caspase-3 activation and PARP cleavage were significantly higher than in the other groups.Moreover, Bcl-2 and survivin expression were decreased, whereas that of both Bid and Bax was increased.CONCLUSION: These findings demonstrated that tetrandrine plus arsenic trioxide had synergistic efficacy on induction of apoptosis in HCC1937 cells.     

汉防己甲素对阿霉素或长春新碱耐药株人癌细胞的逆转抗药性作用

在敏感株和阿霉素耐药株ＭＣＦ－７和ＭＣＦ－７／Ａｄ以及敏感株和长春新碱耐药株ＫＢ和ＫＢｖ２００两种人癌细胞的体外试验中，发现汉防己甲素对耐药细胞株的ＭＣＦ－７／Ａｄ具有明显的选择性作用，而且基本上可以完全逆转ＭＣＦ－７／Ａｄ或ＫＢｖ２００对阿霉素或长春新碱的抗药性。     

茶多酚EGCG对人骨髓基质干细胞成骨分化基因表达的影响

目的:观察茶多酚EGCG对人骨髓基质干细胞成骨分化基因ALK、COL1A1、RUNX2、BMP-2表达的影响.方法:培养人骨髓基质干细胞,用浓度为10-5M、10-6M茶多酚EGCG以及空白对照组分别作用人骨髓基质干细胞21 d后,采用荧光定量PCR的方法检测成骨相关基因ALK、COL1A1、RUNX2、BMP-2的表达变化.结果:BMP-2基因的表达水平为:10-5M茶多酚组>10-6M茶多酚组>DMSO对照组;ALK、RUNX2、COL1A1基因在茶多酚EGCG组与空白对照组之间表达无明显变化.结论:茶多酚EGCG可以提高人骨髓基质干细胞BMP-2基因的表达水平,有可能是茶多酚促进人骨髓基质干细胞成骨分化的重要基因.     

Synergistic effect of green tea polyphenols on their protection against FK506-induced cytotoxicity in renal cells

FK506 (tacrolimus) is a widely used immunosuppressant first employed in the management of rejection in organ transplantation, but now used for autoimmune disease. However, the nephrotoxicity induced by FK506 remains a serious clinical problem. We previously demonstrated that FK506 caused a significant increase in apoptosis of LLC-PK1 cells, a porcine proximal tubule cell line, but the addition of green tea extract and its polyphenolic components suppressed the cell death. Here, we examined the synergistic effect of tea polyphenols on the protection of FK506-induced cell death. The combined treatment with 5 microM (-)-epigallocatechin-gallate (EGCG) and 5 microM of (+)-catechin (C), (-)-epicatechin (EC), (-)-epigallocatechin (EGC) or (-)-epicatechin-gallate (ECG) reduced FK506-induced cytotoxicity in LLC-PK1. Similarly, the combined treatment with 5 microM EGC and 5 microM of C, EC, EGCG or ECG also reduced the cytotoxicity. These results showed that the co-treatments with EGCG and EGC, EGCG or ECG, and EGC and ECG have stronger synergistic effects on the protection of FK506-induced cell death. Furthermore, the combined treatment of EGCG (5 microM) and EGC (5 microM) showed a significant time-dependent suppression of the increased intracellular ROS levels 15 min after the addition of FK506, as well as on caspase activation. The results of these synergistic effects of the constituents of green tea extract suggest that its protective effects may reside in more than just one of its constituent.     

7种中草药提取物抗过敏功效及刺激性研究

目的:考查地肤子皂苷、防风多糖、桃仁和金银花水提物、茶多酚、洋甘菊和仙人掌提取物的抗皮肤过敏作用,探究其刺激性大小,为作为具有抗过敏功效化妆品添加剂提供依据.方法:采用透明质酸酶体外抑制试验和红细胞溶血试验,对7种中草药提取物抗过敏特性及其刺激性进行探究.结果:7种中草药有效部位或成分的抗过敏抑制率分别为洋甘菊提取物(77.04％)＞金银花水提物(69.54％)＞茶多酚(68.01％)＞仙人掌提取物(62.67％)＞防风多糖(55.51％)＞地肤子皂苷(43.09％)＞桃仁水提物(32.74％);其中只有茶多酚添加浓度超过6 g·L-1时显示出一定的刺激性,其他有效成分的溶血率均低于20％,刺激性很小.结论:7种中草药有效部位或成分均表现一定的抗过敏特性,且在规定添加量范围内刺激性均很小,适合作为抗过敏化妆品添加剂使用.     

Antineoplastic agents. 380. Isolation and X-ray crystal structure determination of isoaaptamine from the Republic of Singapore Hymeniacidon sp. and conversion to the phosphate prodrug hystatin 1

By use of bioassay (murine P388 lymphocytic leukemia cell line) guided isolation procedures, extracts of the Republic of Singapore marine sponge Hymeniacidon sp. were found to contain demethyloxyaaptamine (1) and aaptamine (3) as prominent cancer cell growth inhibitory constituents accompanied by the trace, albeit more active, component isoaaptamine (4). The isolation, X-ray structure elucidation, and antineoplastic and antimicrobial activities of isoaaptamine (4) have been summarized. Because of instability, isoaaptamine (4) was converted to a stable sodium phosphate prodrug designated hystatin 1 (7).     

茶多酚对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨茶多酚对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,应用不同剂量的茶多酚作用 2 4 h后 ,采用 MTS/ PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,茶多酚对血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 0 1)。流式细胞术检测结果表明 ,茶多酚可以使血管平滑肌细胞大部分处于 G0 / G1 期 ,与对照组相比有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,并且可以诱导其凋亡。结论　茶多酚可明显抑制离体大鼠血管平滑肌细胞的增殖。