一种快速诊断呼吸道合胞病毒感染的方法

应用引物设计原则，选择呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）基因组中高度保守的Ｆ基因作为扩增靶序列，独立设计合成了两对引物，建立了一个逆转录套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＲＳＶ ＲＮＡ的方法。提示：该方法具有快速、敏感，特异和观察结果客观等优点。     

套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸

对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８例阴性，阳性率为７４．２％。１０例助血员血样ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，阳性ＰＣＲ产物为ＨＣＶ－ＲＮＡ所特异。作者认为，采用高保守区核苷酸序列引物作套式ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ，可提高实验的敏感性和特异性。     

用PCR技术及常规病毒学检测诊断呼吸道合胞病毒感染的方法学比较

分别采用病毒分离法，免疫荧光法及ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ，ＲＴ－ＰＣＲ十核酸探针杂交实验对７８例呼吸性疾病患儿鼻腔抽吸物一中呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的感染水平进行了检测。结果表明，在这４种检测方法中，以ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ（巢式ＰＣＲ）法最为敏感，稳定，ＲＳＶ感染的阳性率为２９．４９％，各省时，准确。     

反转录—聚合酶链反应在呼吸道合胞病毒感染检测的应用

为呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染的临床诊断寻求敏感，特异的检测方法，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增毒培养液和急性呼吸道感染患者鼻咽分泌物中的ＲＳＶ基因，并应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针对扩增产物进行鉴定。结果成功地提取了ＲＳＶｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经扩增得到４７１ｂｐ左右ｃＤＮＡ区带。流感病毒Ｂ，副流感病毒２型，腺病毒７对照无扩增带，ＲＳＶ培养液１０倍连续稀释至１：１０００，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增仍可见４     

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒肇庆市第一医院（５２６０２０）蔡定邦，郭亮，李誉成，张传顺，陈享，陈伟红巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染后引起巨细胞包涵体病（ＣＩＤ），致全身多个器官损害并出现临床症状，使受损器官组织内出现巨细胞包涵体改变，多见于小婴儿。人巨...     

聚合酶链反应检测血清丁型肝炎病毒核酸

目的为建立一种特异性强、敏感性高的检测丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染的方法，提高丁型肝炎的诊断水平。方法根据ＨＤＶＲＮＡ保守区（６５４～９６３位核苷酸）设计合成两对引物，采用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－“ｎｅｓｔｅｄ”ＰＣＲ）对３５例肝炎患者血清进行检测。结果二次ＰＣＲ扩增的特异性和敏感性均较一次ＰＣＲ高。１９例丁型肝炎抗原阳性者ＨＤＶＲＮＡ均为阳性，９例丁型肝炎抗体阳性者中有６例阳性，７例单纯ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性者均未检出ＨＤＶＲＮＡ。结论这一检测方法特异性强、敏感性高，可广泛用于临床检测。     

多重PCR技术检测病毒性肝炎相关病毒的研究

目的建立一种快速、特异的可同时检测血中多种病毒性肝炎相关病毒的多重PCR方法。方法参照各病毒特异性核酸序列,按多重PCR引物设计的特殊要求设计引物,以核酸测序确证扩增产物,用标准病毒株及临床阳性血清样本DNA、RNA为模板优化PCR反应体系和反应条件,建立病毒性肝炎相关病毒多重PCR检测方法。应用建立的多重检测方法对120例ALT升高的血清标本进行多重检测,并将检测结果与单一PCR检测结果进行比较。结果采用多重PCR技术可同时对EBV、TTV、HBV、HSV 4种DNA病毒进行扩增;采用多重RT-PCR技术可同时对Cox-V、HEV、HCV 3种RNA病毒进行扩增。各病原体单一及多重扩增条带均清晰、均一,无非特异性扩增条带,片段长度与理论值一致;核酸测序证实各扩增产物属各病原体特异性基因片段。临床标本检测多重感染率为19.2%,与单一检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法稳定可靠,敏感度、特异度好,适用于病毒性肝炎相关病毒的实验室诊断与临床筛查。     

犬细小病毒核酸诊断方法的建立和应用

目的建立犬细小病毒的核酸诊断方法（PCR方法）并应用于临床诊断。方法根据犬细小病毒VP2基因序列设计引物，以犬细小病毒标准株、犬传染性肝炎病毒和正常增殖细胞DNA为模板，犬细小病毒扩增出221bp的特异带，将PCR产物连接到pMD18-T Vecter，转化大肠杆菌JM109菌株。重组质粒经测序并经blast比较，与GenBank中已登录的犬细小病毒VP2基因序列进行比较。同时将建立的PCR方法应用于30份犬粪便和病犬组织的检测，并测序。结果PCR产物测得的序列与GenBank的基因序列同源性为100％，粪便检测均无犬细小病毒的特异带，从病犬组织中有6份样品扩增出221bp的特异带，经测序比较，同源率为100％。结论建立了犬细小病毒的PCR检测方法，并能应用于临床诊断。     

TT病毒核酸和抗体在肝病患者中的检测及临床意义

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,分别检测１３２例各型肝病患者和１２０例献血员血清ＴＴＶ－ＤＮＡ和抗ＴＴＶ－ＩｇＧ。结果两种方法的检出率有较大的差异。ＰＣＲ法的敏感度和重复性均优于ＥＬＩＳＡ法。病毒在肝病患者中的阳性率显著高于献血员（Ｐ〈０．０５）,提示ＴＴ病毒可能与肝脏疾病有相关性。     

诺瓦克病毒ORF1-ORF2序列核酸片段克隆的构建

目的 构建诺瓦克病毒核酸片段克隆.方法 选取诺瓦克病毒阳性标本,应用 RT-PCR方法 扩增目标片段,将其克隆到质粒,通过酶切、测序鉴定.结果 成功构建诺瓦克病毒核酸片段克隆.结论 成功地获得了可作为核酸检测阳性对照的诺瓦克病毒核酸片段克隆,为该病毒的分子生物学检测和进一步研究奠定了基础.     

呼吸道病毒分离培养检测技术的研究进展

急性呼吸道感染是世界范围内的常见疾病,呼吸道病毒是其主要的致病病原体。近年来,呼吸道病毒的检测方法日益广泛,培养法作为病毒检测方法中的"金标准",也有了多方面的发展。该文综述了传统呼吸道病毒培养法及新兴方法,如病毒离心培养法、Pre-CPE检测、混合细胞培养法及转基因细胞培养法。这些新方法提高了呼吸道病毒培养法的效率及灵敏度,提高了该方法的实用性,将促进新型呼吸道病毒的发现。     

呼吸道合胞病毒检测技术的研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体,可引起严重的呼吸道疾病。但感染后与其他呼吸道感染有相似的临床表现和X线胸片特征,不易鉴别。因此,需要快速准确的方法诊断RSV感染,这将有助于感染的控制,改善预后。目前实验室的检测方法主要有传统检测技术和分子生物学技术。     

PCR技术在呼吸道病毒检测中的应用进展

反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)在病毒监测中的作用随着其自身的发展越来越重要,它从最初的RT-PCR到与其他各项新兴技术相结合,逐渐发展成实时荧光定量RT-PCR、多重RT-PCR、多重实时荧光RT-PCR、多重PCR技术为基础的反式线点杂交、环介导的反转录等温扩增、反转录为基础的电喷雾电离质谱技术、扩增片段长度多态性分析等各项技术。现对这几项技术在病毒检测中的优点与不足予以综述。     

人博卡病毒的研究进展

人博卡病毒(HBoV)是一种新的呼吸道致病病毒,它主要引起儿童上、下呼吸道感染,可与其他病毒合并感染,也可单独感染而致病。目前检测HBoV的方法主要是通过普通聚合酶链反应技术。本文就HBoV的发现、基因组结构特征及其流行病学特征等方面进行综述。     

云南省部分HIV感染者唾液EBV检出率分析

目的探讨HIV感染者唾液EB病毒存在情况及其与免疫抑制的关系.方法采用横断面研究,利用巢氏PCR方法对245例HIV感染者和30例健康对照者唾液EBV DNA的存在情况进行检测,并分析检出率与CD4淋巴细胞计数的关系.结果 HIV感染者和健康对照人群唾液EBV检出率分别为82.0%与30.0%,二者有统计学差异(P<0.05);CD4淋巴细胞计数小于200、200～400和大于400个/μL的患者唾液EBV检出率分别为93.0%、75.8%和45.7%,3组间检出率有显著差异(P<0.05);但是否使用高效抗逆转录病毒治疗对唾液EBV的检出率无明显影响.结论 HIV感染者唾液中EB病毒检出率高,与免疫指标CD4淋巴细胞计数水平有关.     

应用分子信标荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒核酸的评价

目的：分子信标(Molecular Beacon)是近年新发展的一种荧光标记发夹形寡核苷酸探针。本目的在于对国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒(厦门泰伦生物工程有限公司的“乙型肝炎病毒荧光PCR定量检测试剂盒”)的主要性能进行评价。方法：以Roche公司的乙型肝炎病毒(HVB)定量检测试剂盒AMPLICOR HBV MONITOR^TM Test Kit为参比,对分子信标定量检测临床血清标本HBV DNA的结果,进行比较和分析。结果：根据两种试剂盒定量检测34份乙型肝炎和非肝炎血清及一份系列10倍稀释血清(含高水平HBV DNA)的数据,并以Roche试剂盒的结果为参比标准,分子信标试剂盒定量检测HBV DNA的相对敏感性、特异性和符合率均为100％(分别为：19／19,15／15和34/34);其定量检测HBV DNA的线性范围和下限分别为10^3～10^3copies/ml和10^3copies/ml;两种试剂盒定量检测HVB DNA的相关系数(r)＝0．987。结论：初步结果表明：该国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒的主要性能,与Roche公司的AMPLICOR HBV MONITOR^TM Test试剂盒相似,并具有较后更宽的线性定量范围。     

TTV核酸和抗体在肝病患者中的检测及临床意义

本文采用聚合酶链反应（PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测了116例各型肝病患者和105例献血员血清中的TTV-DNA和TTV-IgG,结果显示两种方法的检出率有较大的差异,PCR法的敏感度和重复性均优于ELISA法.TT病毒（TTV）在肝病患者中的阳性率显著高于献血员（P〈0.05）,提示TTV与肝脏疾病有相关性.     

小鼠痘病毒的聚合酶链反应检测法

根据正痘病毒属血凝素基因保守区设计了一对引物，建立了鼠痘病毒的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测法。结果表明，扩增产物长度为８４６ｂｐ，经限制性内切酶分析证实为鼠痘病毒。用本法可检出０．１ｐｇ鼠痘病毒基因。     

体外基因扩增制备艾滋病毒核酸探针

作者利用DNA合成仪合成艾滋病毒ARV—2前病毒序列6 310～6 328,6 666～6 684及HT_LV-Ⅲ前病毒序列6339～6374,6385～6419两对寡核苷酸引物,应用体外基因扩增(Polymerase chainreaction,PCR),以pARV-2/7A质粒为模板扩增出两个DNA片段。~(32)P标记后,以pCP10(含HBV基因)、M56(含出血热汉坦株M片段cDNA)、人染色体DNA乙型脑炎病毒(JEV)为对照,经Southern杂交及斑点杂交,证明PCR扩增制备HIV核酸探针特异性强、敏感性高。     

聚合酶链反应技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒

目的建立聚合酶链反应(PCR)技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。方法提取感染REV-T和脾坏死病毒(SNV)的SPF鸡胚成纤维细胞DNA为模板,利用前病毒长末端重复序列(LTR)区引物进行扩增。采集肿瘤病鸡,以及人工感染REV 28 d后鸡肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸腺、法氏囊等器官,进行扩增。同时将采集的脏器组织,进行HE染色和免疫组化试验(IHC)。结果REV-T感染的组织未检测出电泳条带,而SNV感染的细胞中检测到了一条300bp特异而清晰的电泳条带,而且SNV感染的鸡组织中,PCR方法检测到了特异的条带。通过HE染色和免疫组化技术观察到了肿瘤组织,肿瘤细胞的形态、分布。结论PCR检测REV更快捷,特异更好。