丹酚酸B预处理EPCs对AMI大鼠移植骨髓间充质干细胞后心肌微环境的影响

[目的]探讨中药丹酚酸B预处理的内皮祖细胞(EPCs)对急性心肌梗死(AMI)大鼠移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)后心肌微环境的影响。[方法]56只AM I模型大鼠随机分为假手术组、模型组、BM SCs组、EPCs+BM SCs组,其中治疗组用丹酚酸B最佳药物浓度处理的EPCs与BM SCs混合,在大鼠AM I区周边分5点注射。免疫荧光和免疫组化方法检测AM I大鼠梗死区心肌收缩蛋白α型肌球蛋白重链(α-MHC)和I型胶原蛋白的表达。[结果]细胞移植4周后,各细胞联合移植组中,2:14、:1和8:1组在Brdu集中表达区域均有不同强弱程度的α-MHC阳性表达,除假手术组较少外,所有接受冠状动脉结扎的大鼠心肌梗死区I型胶原表达均升高。[结论]BMSCs在丹酚酸B预处理的EPCs干预的心肌微环境下可向心肌细胞分化,可预防或改善心室重塑的发生。     

丹酚酸B预处理EPCs联合BMSc移植对AMI大鼠心功能的影响

[目的]通过建立大鼠急性心肌梗死模型,将中药丹酚酸B预处理的内皮祖细胞(EPCs)按不同比例与骨髓基质细胞(BMSc)进行混合后注射至缺血局部,观察细胞移植后大鼠急性心肌梗死模型心功能的改善情况。[方法]应用密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs与BMSCs;采用结扎大鼠左冠状动脉前降支,制作大鼠急性心肌梗死模型。丹酚酸B最佳药物浓度处理的EPCs,以不同比例(1:1,2:1,4:1,8:1)与BMSc混合,在大鼠心肌梗死区周边分5点注射。[结果]各细胞移植组均能不同程度的改善心肌梗死大鼠心室结构,增强心功能。超声心动图结果:同一时间细胞移植组均能不同程度的改善心肌梗死大鼠心室结构,增强心功能,与模型组相比,4:1组、8:1组左室射血分数及心输出量明显升高(P<0.05)。[结论]丹酚酸B预处理的EPCs联合BMSc的移植促进了AMI大鼠左室功能的恢复。     

心复康联合骨髓间充质干细胞移植对濒死心肌的保护作用

[目的]探讨中药心复康联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植在大鼠急性心肌梗死后对濒死心肌的保护作用及其机制。[方法]经密度梯度离心联合贴壁筛选法培养并纯化BMSCs,采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,移植前以5-溴脱氧尿核苷(Brdu)对移植细胞进行标记,术后采用中药心复康灌胃联合干细胞移植治疗。治疗后2周处死动物,免疫组织化学方法检测心肌损伤区Brdu阳性移植细胞数、CD34⁺新生血管数和细胞增殖核抗原(PCNA)阳性心肌细胞数量。[结果]心复康联合干细胞移植治疗组移植细胞存活率增加(与细胞移植组比较P<0.05),梗死边缘区新生血管数量及PCNA阳性心肌细胞数量均有所增加(与细胞移植组比较P<0.05)。[结论]中药心复康联合干细胞移植对大鼠急性心肌梗死后濒死心肌细胞有明显的保护作用,其机制可能与心复康联合干细胞移植能更有效的促进损伤区血管新生有关。     

滋肾调冲法对大鼠外周血内皮祖细胞影响的实验研究

[目的]观察滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号方对骨髓单个核细胞移植大鼠外周血内皮祖细胞(EPCs)数量的影响,探讨该法对骨髓EPCs的动员作用。[方法]受鼠雌性大鼠经137Cs全身照射后,从尾静脉输注雄性大鼠标记4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光的骨髓单个核细胞。受鼠随机分为移植对照组、功血宁Ⅱ号组和乌鸡白凤丸组,另取未照射大鼠尾静脉输注等量培养液为假孕对照组。骨髓移植24 h后各组给予相应药物或等容积的生理盐水。受鼠造血重建后,各组均制备假孕模型。在黄体早中晚期各组处理1/3数的大鼠,眼内眦取血,流式细胞术检测外周血EPCs的数量。血液涂片,荧光显微镜观察DAPI标记细胞的分布。[结果]荧光显微镜下显示,移植各组黄体各期血液涂片可见DAPI标记细胞,且早期数量为多,功血宁Ⅱ号组尤为明显。各组黄体早期外周血EPCs数目最多,中期略有下降,晚期明显减少(P<0.05或P<0.01)。功血宁Ⅱ号组、乌鸡白凤丸组黄体各期EPCs数目较假孕对照组显著增多(P<0.05或P<0.01);功血宁Ⅱ号组早期较移植对照组和乌鸡白凤丸组显著增多(P<0.05)。[结论]滋肾调冲法能够动员骨髓EPCs,提高外周血中EPCs数量,对EPCs进一步归巢至卵巢黄体,促进黄体血管新生具有重要作用。     

血管内皮生长因子促进慢性心肌梗死血管生成

目的 探索血管内皮生长因子对猪慢性心肌梗死的治疗作用。方法 通过开胸直视下结扎前降支建立猪的心肌梗死模型,1个月后将建模成功的猪分为血管内皮细胞生长因子（VEGF）组和对照组,分别直视下心肌内注射VEGF和磷酸缓冲盐溶液（PBS）,2个月后行MR检查比较两组心功能参数,梗死心肌组织分别做HE染色和免疫组化染色,分析梗死区域微血管生成和细胞增殖情况。结果 因子注射2个月后,两组干预前后的心功能指标差值比较分别为左心室射血分数（LVEF）（4.0%±10.4% vs 1.8%±1.6%,P>0.05）、心排出量（CO）（2.1±1.6L/min vs 1.4±0.8L/min,P>0.05）、左心室后壁舒张期厚度（LVPWTd）（2.8±0.5mm vs 2.0±0.8mm,P>0.05）、左心室舒张末期容积（EDV）（24.0±5.0ml vs 39.6±16.2ml,P>0.05）。通过免疫组化染色分析,VEGF组的微动脉密度比对照组高（87.0±9.1 vs 50.8±7.2,P<0.05）,毛细血管密度比对照组高（367.5±50.8 vs 188.5±14.3,P<0.05）,增殖细胞核数目较对照组多（432.5±37.7 vs 132.0±29.0,P<0.05）。结论 VEGF能够促进梗死心肌的血管新生,促进梗死区域侧支循环建立。     

类风关1号对佐剂关节炎大鼠滑膜VEGF和COX-2表达的影响

[目的]探讨类风关1号对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜血管内皮细胞生长因子(VEGF)和环氧化酶2(COX-2)表达的影响。[方法]建立AA大鼠模型,并给予类风关1号灌胃4周,以免疫组化法检测滑膜组织中VEGF和COX-2的表达。[结果]灌胃4周后类风关1号组大鼠膝关节滑膜VEGF和COX-2表达水平明显降低,与AA模型组及雷公藤多苷组相比差异意义有显著性(P<0.01)。[结论]类风关1号可明显抑制滑膜组织中VEGF和COX-2的表达,减轻关节病理性血管增生。     

心复康促进血管新生对移植骨髓间充质干细胞的保护作用

目的：探讨中药心复康在大鼠急性心肌梗死后对移植骨髓间充质干细胞（BMSCs）的保护作用及其机制。方法：经密度梯度离心联合贴壁筛选法培养并纯化BMSCs,采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,移植前以5-溴脱氧尿核苷（Brdu）对移植细胞进行标记,术后采用中药心复康灌胃联合干细胞移植治疗。移植后2周ELISA法检测大鼠血清血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）含量;处死动物,免疫组织化学方法检测心肌损伤区VEGF、bFGF蛋白表达情况、Brdu阳性移植细胞数和CD34^＋新生血管数。结果：心复康联合干细胞移植治疗大鼠心肌梗死,能提高移植细胞存活率（与细胞移植组比较P〈0.05）,提高大鼠血清VEGF、bFGF含量（与细胞移植组比较P〈0.05）,提高梗死区VEGF、bFGF蛋白表达,增加梗死区新生血管数量。结论：中药心复康对大鼠急性心肌梗死后移植干细胞有明显的保护作用,其机制可能与心复康联合干细胞移植能更有效的促进损伤区血管新生有关。     

大黄藿苓汤对慢性肾衰大鼠成纤维细胞生长因子表达的影响

[目的]探讨大黄藿苓汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏的保护作用及机制。[方法]采用腺嘌呤造模,设空白组、模型组、治疗1、2组。[结果]治疗1、2组肾脏病理改变较模型组轻,尿素氮、肌酐、尿酸、成纤维细胞生长因子(bFGF)表达治疗1组较模型组减少(P<0。05),治疗2组与模型组相比bFGF表达无明显差异。[结论]大黄藿苓汤对腺嘌呤致慢性肾衰大鼠肾脏有保护作用,且早期用药优于晚期用药,其机制可能是抑制bFGF表达。     

益心定悸方含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF表达影响的研究

[目的] 通过观察益心定悸方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响探讨其治疗冠心病快速心律失常的作用机制, 同时为临床应用提供客观依据。[方法] 用20只雄性Wistar大鼠制备含药血清, 将内皮细胞接种在两种血清培养基上, 采用免疫组化方法测定VEGF的表达。[结果] 含药血清组细胞边界和核结构清晰细胞核颜色深染, 正常血清组VEGF仅有微弱表达。[结论] 益心定悸方能够明显促进VEGF表达, 这可能是本方治疗冠心病快速心律失常的作用机制之一。     

金黄膏外敷治疗糖尿病溃疡的实验研究

[目的]从动物实验探讨金黄膏对糖尿病溃疡的治疗作用机制。[方法]SD大鼠,诱发糖尿病皮肤溃疡模型,随机分为A金黄膏组、B普通胰岛素组、C凡士林组,分时段观察肉芽组织中成纤维细胞数、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、CD34、新生毛细血管数。[结果]A组在纤维细胞数、新生毛细血管数及VEGF、CD34等指标与B组、C组比较均有显著性差异。[结论]金黄膏具有明显的促进糖尿病溃疡愈合作用,可能是通过促进成纤维细胞和新生毛细血管的增殖、加快肉芽组织的形成来体现。     

丹酚酸B对离体内皮祖细胞黏附、趋化和增殖的影响*

[目的] 探讨中药单体丹酚酸B对离体内皮祖细胞(EPCs)黏附、趋化和增殖的影响.[方法] 密度梯度离心法和贴壁筛选法培养、纯化EPCs,免疫细胞化学法(CD34/CD133/)鉴定.丹酚酸B最佳药物浓度干预的EPCs,DiI染色法,Transewell小室与DAPI染色法和Brdu免疫细胞化学法测定EPCs的黏附、趋化和增殖能力.[结果]丹酚酸B组EPCs的黏附细胞数量为(37.00±3.27),24 h和48 h趋化的细胞数量分别为(26.32±2.66)和(53.41±3.85),增殖的细胞数量为(41.17±3.43),与对照组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).[结论] 丹酚酸B能够有效促进离体内皮祖细胞的黏附、趋化和增殖能力.     

丹酚酸B对大鼠心肌梗死过程中病理形态学的影响*

[目的]探讨丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)治疗大鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)以后的病理形态学变化.[方法]通过结扎冠状动脉左前降支制作大鼠心肌梗死模型,测定各组心肌梗死面积占总面积的百分比,并且对心肌梗死部位成纤维细胞和毛细血管进行计数,观察Sal B对MI的干预作用.[结果]Sal B可以减少心肌梗死面积,促进毛细血管的生长,加速梗死灶的修复.[结论]Sal B可以减轻MI的面积,是中药丹参起效的重要物质基础之一,具有良好的开发及应用前景.     

骨髓干细胞移植对实验性大鼠急性心肌梗死的影响*

【目的】通过同种异体大鼠骨髓干细胞（BMSCs）移植，观察其对实验性大鼠急性心肌梗死面积的影响。【方法】清洁级Wistar雄性大鼠无菌分离骨髓干细胞；将36只同种雄性大鼠随机分为模型组、对照组和细胞移植组。结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型。细胞移植组在心肌梗死周边分阴点注射BMSCs细胞悬液，对照组心肌梗死区周边注射等容积BMSCs完全培养液。通过心肌组织硝基阴氮唑蓝（N-BT）染色，血中血清肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平检测，观察BMSCs移植对上述各指标的影响。【结果】细胞移植组能减少心肌梗死面积，降低血中CK、LDH、MDA水平，提高血中SOD水平。【结论】BMSCs移植对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致的急性心肌梗死具有保护作用。     

丹酚酸B/三七总皂苷配伍对心肌梗死大鼠左室结构和功能的影响*

[目的]研究丹酚酸B(Sal B)、三七总皂苷(PNS)对心肌梗死大鼠左室结构和功能的影响,探讨中药组分配伍的作用.[方法]结扎冠脉左前降支复制大鼠心肌梗死模型,假手术组作对照,连续灌胃给药7 d.用彩色超声心动仪观察心脏左室结构和功能变化.[结果]Sal B、PNS以及配伍组可以不同程度地降低左室收缩末期内径(LVDs)、左室收缩末期容积(LVESV),升高左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS),配伍组有优于其他中药组的趋势.[结论]Sal B、PNS配伍可以有效改善心肌梗死大鼠的左室结构和功能.     

中药心复康联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心功能的影响*

[目的]探讨中药心复康联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠急性心肌梗死后心功能的影响.[方法]经密度梯度离心和贴壁筛选法培养并纯化BMSCs,采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,术后采用中药联合干细胞移植,24 h检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性,2周后超声心动仪检测大鼠心脏收缩功能[射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、心输出量(CO)];处死动物,硝基四氮唑蓝(N-BT)染色评价梗死面积.[结果]联合治疗组较单纯细胞移植组能明显减小大鼠心肌梗死面积,降低血中MDA水平,提高SOD水平,EF、FS、CO也有不同程度改善. [结论]中药联合骨髓间充质干细胞移植较单纯细胞移植对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致的急性心肌梗死具有更明显的保护作用.     

BMSCs“归巢”在AMI后心肌重塑中的作用及活血化瘀药的干预研究

[目的]通过研究祛瘀生新中药对骨髓间充质干细胞(BMSCs)"归巢"的影响,探讨活血化瘀法对急性心肌梗死(AMI)后心肌重塑的效应机制。[方法]清洁级Wistar大鼠80只随机分为5组,分别为正常组、模型组、假手术组、中药组、西药组,每组16只。中药组大鼠术前3 d给药,1次/d。7 d后,检测外周血BMSCs含量,分析各组非梗死区心肌胶原含量,硝基四氮唑蓝(N-BT)染色评价梗死面积,并观察心肌组织苏木-伊红(H-E)染色结果及免疫组化检测心肌c-kit细胞数。[结果]药物组较模型组c-kit细胞数均明显增多,中药组与西药组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。并能减轻心肌组织的病理损伤及降低心肌胶原含量和梗死面积。[结论]活血化瘀法可能通过对BMSCs"归巢"的动员作用,从而有效的抑制AMI后心肌重塑。     

丹酚酸B诱导体外培养大鼠骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的研究*

[目的]探讨大鼠骨髓基质细胞的体外培养及丹酚酸B(Salvianolic acid B)诱导其向心肌样细胞分化的可能.[方法]取大鼠股骨及胫骨干骨髓基质细胞(MSCs)培养,保留贴壁细胞进行传代;免疫细胞化学行肌动蛋白抗原、肌钙蛋白T抗原染色;观察丹酚酸B对骨髓基质细胞向心肌细胞分化的影响.[结果]大鼠骨髓基质细胞在形态上呈贴壁集落生长,具有成纤维细胞样外观.丹酚酸B加入5-氮胞苷诱导组后细胞死亡较少,长方形、多角形细胞明显增多.[结论]丹酚酸B能够促进体外诱导骨髓基质细胞向心肌样细胞的分化.     

三七总皂苷对心肌缺血大鼠血流动力学影响实验研究

[目的]探讨三七总皂苷(Panax Notoginseny Saponins,PNS)对大鼠急性心肌缺血(acute myocardial ischemia,AMI)模型血流动力学的影响。[方法]Wistar大鼠建立急性心肌缺血模型,随机分为假手术组、模型组、PNS小剂量组、PNS大剂量组。治疗7d后,分别测定左室血流动力学指标,包括左室收缩压(LVSP),左室舒张末期压(LVEDP),左室内压最大上升及下降速率(±dp/dtmax)。[结果]PNS可以降低LVEDP,升高±dp/dtmax。[结论]PNS治疗AMI可以改善心脏功能,大剂量应用对左室收缩和舒张功能均有显著提高作用。