抗人活化血小板单克隆抗体SZ-49的研究

本文报道1株抗人活化血小板的单克隆抗体——SZ-49。SZ-49仪和凝血酶刺激活化的血小板结合,而不与静止的血小板反应,为IgG1亚型。它和活化血小板结合是Ca~(2+)依赖性的,对血小板功能有明显的影响,SZ-49亲和层析获得的纯化抗原为小分子量蛋白。这种新的单克隆抗体为研究血小板活化过程中的系列改变及疾病状态下体内,外血小板活化程度的评估提供了新的方法。     

第二组分泌抗人血小板单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞

用杂交瘤技术获得了第二组抗人血小板的单克隆抗体。这些单克隆抗体在体外对正常人血小板聚集功能有不同程度和性质的影响。其中SZ-21的E亚克隆分泌的单克隆抗体能完全抑制胶原诱导的血小板聚集并能部分抑制肾上腺素、ADP诱导的血小板聚集。SZ-21E单克隆抗体影响血小板功能的性质,提示其识别的抗原决定簇可能是血小板膜糖蛋白Ⅱ/Ⅲ。其他各株细胞及其亚克隆也有进一步研究的价值。     

抗人TPO单克隆抗体的制备

制备抗人血小板生成素单克隆抗体，用于建立ＥＬＩＳＡ方法和检测ＴＰＯ的表达。用基因重组的ｈＴＰＯ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，常规法做细胞融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选出阳性杂交瘤细胞株。结果；获得一杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白亚类为ＩｇＧ１和ＥＬＩＳＡ和免疫印迹技术证明，此单抗能特异识别ＴＰＯ。     

免疫沉淀法鉴定抗人血小板单克隆抗体识别的抗原

以~3H和~175I标记血小板膜蛋白,采用葡萄球菌蛋白A免疫沉淀技术对14株(8株经鉴定为IgG)单克隆抗体所识别的血小板抗原进行鉴定,结果5株单克隆抗体获阳性结果,SZ-1,SZ-2,SZ-3均作用于血小板膜糖蛋白Ib(GPIb),SZ-21和SZ-22所作用的抗原为GPⅡb/Ⅲa     

人胰岛素原C肽单克隆抗体的研究

半抗原人胰岛素原C肽(HCP)对小鼠的免疫原性,以蛔虫蛋白作为载体远比牛或小鼠清蛋白为高。将NS-1瘤细胞与HCP-蛔虫蛋白结合物免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,获得12种抗HCP McAb,对其中8种的Ig类和亚类,亲和力及特异性等进行了详细鉴定。不同的HCP片段置换反应结果表明,HCP McAb的抗原决定簇分别位于HCP分子的23～31.22～31及1～22氨基酸区。20例正常成人空腹血浆HCP测定值,用兔多克隆抗血清RIA(0.47±0.16pmol/ml)明显高于MCAb-1 RIA(0.29±0.13 pmol/ml).     

抗人hER单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人hER单克隆抗体。方法:用原核表达的人雌激素受体(hER)重组蛋白为抗原,免疫BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,进行细胞融合。结果:通过ELISA和免疫组织化学法筛选,有限稀释克隆化,得到一株分泌抗hER单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2B8/1C5/2C3),经鉴定2B8/1C5/2C3分泌的单克隆抗体为IgG2a,利用Western Blot分析,显示在23kU处针对hER重组蛋白位置有一特异性条带;利用乳腺癌组织进行的免疫组织化学染色结果显示该株细胞产生的单克隆抗体与细胞核呈强阳性反应。结论:该单克隆抗体适于乳腺癌组织hER的免疫组化检测。     

抗乳腺癌单抗的制备及应用

目的：制备抗人乳腺癌单克隆抗体（McAb),用于临床肿瘤的免疫病理诊断与分型研究,为药物导向诊断和治疗奠定基础。方法：以乳腺癌细胞系ZR75免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。用免疫荧光、免疫组化和免疫印迹法研究其识别抗原特性。结果：获得恒定分泌抗ZR75的杂交瘤细胞系BM109。单抗BM109属IgC1类型,其识别抗原是分子量为37KD的蛋白性抗原,主要表达在靶细胞膜上。在乳腺癌的免疫反应率为86.7%（26/30）,与胃癌、食管癌、卵巢癌等6种肿瘤的免疫反应率为9.5%（4/42）,而对乳腺纤维瘤、囊性增生症和周围正常乳腺组织未见阳性反应。结论：获得1株较特异的抗乳腺癌单克隆抗体,该McAb对乳腺癌特异性高,对其他肿瘤交叉反应较小,可望进一步用于乳癌的诊断治疗以及发生发展的研究。     

抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121的制备和初步鉴定

目的探讨抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121的制备并对其进行初步鉴定。方法用人胰腺癌细胞株Patu8988作为免疫原,利用杂交瘤技术制备抗人胰腺癌单克隆抗体,应用流式细胞术和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果成功获得一株能够稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系SZ-121,该抗体与胰腺癌组织呈阳性反应,与胰腺良性病变组织呈弱阳性反应。结论单抗SZ-121对胰腺癌的早期诊断可能具有一定的潜在价值。     

粒细胞集落刺激因子及其McAb的研究

利用B细胞杂交瘤技术,用rhG-CSF免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地建立了3株能持续分泌特异抗rhG-CSF McAb的杂交瘤细胞。取其中2D_4-B_4杂交瘤细胞进行染色体数目测定,并将2D_4-B_4瘤细胞注入小鼠腹腔,获得抗体阳性腹水,测定提纯抗体IgG亚型、特异性、稳定性和亲和力,证实该McAb可以和hG-CSF及小鼠G-CSF特异结合。为进一步研究hG-CSF和人工合成G-CSF打下良好的基础。     

重组人L型丙酮酸激酶N末端单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人L型丙酮酸激酶N末端(PK-N)的单克隆抗体并对其特异性进行鉴定.方法 以PK-N-GST-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、免疫组化对此单克隆抗体特性进行鉴定.结果 筛选到两株能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的细胞株,亚类鉴定重链为IgGzb,轻链为kappa链.ELISA法测定腹水效价分别为1:409600和1:102400,抗体相对亲和力分别为3.54×108L/mol和2.72×108:L/mol.Western blot显示抗体能特异识别免疫原和人肝细胞株HL-7702中的天然丙酮酸激酶蛋白.免疫组化进一步显示了其在细胞及组织中的定位,均匀的分布于细胞的胞浆中.结论 成功制备了抗PK-N单克隆抗体.     

抗胰腺癌单克隆抗体的研究

用人新鲜胰腺癌组织免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Agl4融合,获得了分泌抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文重点报道以ABC免疫组织化学法检查YPC1单克隆抗体与人正常组织和肿瘤组织的反应性。结果表明YPC1单克隆抗体与16例被检测的胰腺癌组织发生反应。其中9例(56.3％)呈强阳性反应,与23种正常组织中的10种(43.5％)以及19种非胰腺肿瘤中的8种(42.1％)有不同程度的交叉反应,但多数反应较弱。本研究提示以新鲜人体肿瘤组织作为免疫原制备单克隆抗体是简便可行的,YPC1单克隆抗体可能有助于胰腺癌的诊断和治疗。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体H_(12)的荧光标记

目的 :探讨H1 2 单克隆抗体的不同浓度对FITC荧光标记结果的影响。方法 :紫外吸收法测定抗体蛋白质浓度 ,透析标记法进行抗体荧光标记 ,并以ELISA法对抗体进行特异性鉴定及效价分析。结果 :标记前后抗体特异性经ELISA鉴定未见明显差异。结论 :①FITC荧光标记前抗体蛋白质浓度应达 (10～ 2 0 )mg mL ,才能得到合适的F P比值。②F P值在 1～ 2之间者较为理想 ,如果过标记的抗体F P >2则可导致非特异性染色的增加 ,增加假阳性率 ;标记不足F P <1则可导致假阴性率增加。③标记后虽可出现特异性下降和蛋白量的丢失 ;但特异性鉴定与标记前未见明显差异。故标记后抗体H1 2 的特异性适用于肿瘤组织与正常脑组织间界限的确定     

抗hnRNP B1单克隆抗体的制备与鉴定

目的　建立分泌抗不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hn RNP) B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对分泌的单克隆抗体进行免疫学鉴定。方法　用人工合成的19肽hn RNP B1作为免疫原,采用皮下多点注射及腹腔注射方法免疫BAL B/ c小鼠,取其脾细胞与SP2 / 0小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞采用间接EL ISA法筛选。结果　获得稳定分泌抗hn RNP B1单克隆抗体的杂交瘤细胞2株。EL ISA法检测腹水效价为1∶1.8×10 5,免疫组织化学染色法显示该单克隆抗体特异性强。结论　成功构建hn RNP B1单克隆抗体抗体杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体对肺癌的诊断具有较好的特异性。