甜瓜黑斑病菌的拮抗细菌筛选、鉴定及发酵条件优化

从健康甜瓜植株的根、茎、叶和果实分离内生细菌,明确优良拮抗菌株的分类地位及其最优发酵条件。利用平板稀释法分离内生细菌,平板对峙法筛选黑斑病菌(Alternaria tenuissima)的优良拮抗细菌,通过形态学和分子生物学鉴定,并使用单因素和正交试验方法优化发酵条件。分离共得到50株内生细菌,21株对细极链格孢具有拮抗作用,11株的抑制率达到70%以上,其中菌株G2的抑菌率最高,达76.41%,室内离体防效达44.90%,经形态特征和基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其最优发酵培养基为葡萄糖20 g、硝酸钠30 g、酵母膏10 g和水1 000 mL,最优发酵条件为摇床转速150 r/min,温度32℃,150 mL摇瓶装液50 mL,最佳接种量为0.2%,培养基初始pH为7.5,其最佳发酵时间为18 h。该结果为甜瓜黑斑病生物防治提供了菌种资源,也为甜瓜内生细菌G2的产业化开发提供了依据。     

草珊瑚炭疽病拮抗细菌的鉴定及其抑菌机理

【背景】草珊瑚炭疽病发生严重,目前尚未有植物内生细菌对该病原菌生物防治的研究报道。【目的】筛选对肿节风炭疽病Colletotrichumdematium具有拮抗作用的内生细菌,并对其抑菌机理进行研究。【方法】采用平板稀释法从广西不同地区采集健康肿节风植株的不同组织分离、纯化获得内生细菌。【结果】平板对峙试验结果表明,来自茎的RJ-4和JJ-5对草珊瑚炭疽病具有较强的拮抗作用,其中拮抗作用最强的菌株是RJ-4,其抑制率达到84.10%。抗菌谱测定结果表明,RJ-4、JJ-5对供试的14种病原真菌均有明显的拮抗效果,拮抗作用最强的是RJ-4,平均抑制率达到95.30%;抑菌机理研究结果表明,该菌株可以分泌蛋白酶和纤维素酶以及几丁质酶,破坏病菌菌丝,抑制病菌生长;含有拮抗细菌的发酵液对病原菌菌丝抑制明显,菌丝扭曲、断裂且分枝缠绕、菌丝颜色加深等。通过形态学特性和16S rRNA基因鉴定,RJ-4菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。【结论】RJ-4菌株具有抑菌抗病功能,并能产生多种抗菌活性物质,这可为新型抗菌物质提供资源。     

库尔勒香梨黑头病拮抗菌的筛选和鉴定

【背景】库尔勒香梨黑头病是近年来发现的一种由芸薹生链格孢菌(Alternaria brassicicola)XL2引起的采后病症,由于其高侵染率和高腐烂率造成了极大的经济损失,目前已成为库尔勒香梨采后储运的主要防治病症之一。【目的】发掘高效的库尔勒香梨黑头病拮抗菌,探索拮抗菌株的抑菌作用,为其生物防治提供潜在资源菌。【方法】从采后健康果蔬表面分离不同微生物,采用平板对峙法,以A.brassicicola XL2为靶标菌筛选具有拮抗作用的菌株,结合形态学观察、生理生化检测和16S rRNA基因序列分析鉴定拮抗菌株分类地位;检测拮抗菌无菌滤液对A. brassicicola XL2的抑制效应,显微观察拮抗菌对A.brassicicola XL2菌丝生长的影响;验证拮抗菌发酵液在库尔勒香梨果实上的抑菌活性。【结果】从新疆油桃表面分离获得90株菌,其中菌株Y2对A. brassicicola XL2有较强拮抗作用,经鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株Y2的无菌滤液对A. brassicicola XL2菌落生长具有明显抑制作用,2%的无菌滤液抑菌率达到70.96%;Y2无菌滤液造成A.brassicicola XL2菌丝扭曲变形、分枝增加、尖端出现致密结构等异常现象;Y2发酵液和无菌滤液明显抑制A.brassicicola XL2的孢子萌发;Y2发酵液在库尔勒香梨果实上具有较高抑菌活性,对库尔勒香梨病斑直径抑制率达到37.66%,深度抑制率达到42.74%。【结论】枯草芽孢杆菌(B.subtilis)Y2能有效抑制A. brassicicola XL2的生长,对库尔勒香梨黑头病具有显著的生物防治效果。     

拮抗细菌XM2的鉴定及其对梨采后黑斑病的生防作用

【目的】对从西梅(Prunus domestica L.)果实表面分离到拮抗细菌XM2进行鉴定,研究其对链格孢(Alternaria alternata)引起的梨采后黑斑病的生防作用。【方法】根据形态特征、理化性质及16S rDNA序列比对分析,鉴定XM2的种类;在梨果伤口上进行活体(in vivo)的抑菌试验;在显微镜下观察XM2对病原菌丝的影响。【结果】XM2鉴定为成团泛菌(Pantoea agglomeran);XM2各种处理液对梨黑斑病防效均显著好于对照,效果由强到弱依次是:菌悬液、发酵液、过滤液和热杀死液,其中,菌悬液防效达97.73%;XM2使用浓度越大、病原菌接种浓度越低,防效越好;XM2接种时间相对早的处理防效显著优于相对时间晚的处理,即预防效果优于治疗效果。菌株XM2可以较好的定殖于梨果伤口;显微镜观察发现,XM2可使病原菌丝部分断裂,细胞内含物外溢,扭曲变形。【结论】本文首次报道成团泛菌菌株XM2,其活菌体和代谢产物对梨采后黑斑病均有生防作用。     

向日葵菌核病根际拮抗菌的筛选与鉴定及其拮抗机理的初步研究

利用梯度稀释和对峙试验的方法,从向日葵根际土壤筛选到18株对向日葵菌核病病原菌—核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)有拮抗效果的细菌,其中1株具有较强的拮抗效果,命名为XRK4。经过形态观察及16S rDNA序列分析,将XRK4鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。研究表明XRK4具有β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性。设计引物以XRK4的基因组DNA为模板扩增得到长度为732 bp的β-1,3-1,4-葡聚糖酶的完整基因,其开放阅读框架编码243个氨基酸。XRK4可能因产生葡聚糖酶,降解病原菌细胞壁而具有拮抗活性。     

红树林内生细菌的分离及拮抗菌筛选

红树林内生细菌及拮抗菌分离筛选结果表明:各品种红树体内均有大量的内生细菌,不同红树品种及部位内生细菌的数量不同,其中以红海榄体内的含量最高,达4．225×104cfu／g(fw),其它依次为木榄、桐花树、秋茄和白骨壤等;不同部位以茎组织体内内生细菌的含量最多,达1．649×104cfu/g(fw),其次为根和叶。获得的内生细菌中约有43．53％的内生细菌菌株对枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、炭疽病菌(Colletotrichum sp．)等病原真菌及番茄青枯病菌(Ralstonia solanaceance)具有较强拮抗作用。对番茄生长测定发现,13株菌株中有9株(69．23％)表现为促进生长效果,4株(30．77％)表现为抑制生长作用。经初步鉴定,上述拮抗细菌均为芽孢杆菌(Bacillus sp．)。     

向日葵菌核病拮抗菌XRK5的筛选与鉴定

从向日葵根际分离了640个细菌分离物,以向日葵菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)为靶标菌,通过平板对峙法获得了18个具有拮抗性能的细菌,其中XRK5具有较强拮抗能力,且拮抗性能稳定,具有较好的生防应用潜力。经过形态观察、生理生化特征及16SrRNA序列分析,将XRK5鉴定为辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici),XRK5的16SrRNA序列在GenBank中的注册号为FJ959348。     

稻瘟病拮抗菌的筛选及抑菌活性的研究

利用对峙法和牛津杯法从大连近海海域分离得到1株对稻瘟病菌有拮抗作用的菌株BCHN-15,经生理生化实验和16S r DNA方法鉴定,该菌株为解淀粉芽胞杆菌。实验结果显示,BCHN-15能显著抑制稻瘟病菌的生长,与稻瘟病菌作用48 h后,稻瘟病菌的菌丝干重与对照组相比减少了74.36%。该菌产生的抑菌成分可破坏稻瘟病菌的细胞膜,且对热稳定,其活性成分能被盐酸沉淀。结果表明,BCHN-15可通过破坏稻瘟病菌的细胞膜,引起菌丝畸形和断裂来发挥其抑菌作用。     

大蒜内生细菌的分离及拮抗菌筛选与鉴定

利用常规分离方法对大蒜鳞茎进行内生细菌的分离,采用对峙法和平板涂布法对分离的内生菌进行拮抗试验研究,并对菌株DSP6进行16S rDNA全序列鉴定。结果表明:分离得到19株内生细菌,其中10株菌对2种以上植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占分离菌总数的52.6%,DSN7对番茄早疫病的抑菌圈半径最大,为13mm;17株菌对5种病原细菌中至少1种有抑制作用,占分离菌总数的89.5%,其中菌株DSP3对大肠杆菌的抑菌圈半径最大,达到10 mm;菌株DSP6对供试的9种病原菌有较强的抑菌作用,且抑菌圈平均半径最大,为6.88mm;16S rDNA全序列鉴定显示,菌株DSP6与芽孢杆菌属Bacillus axarquiensis相似性为100%,表明菌株DSP6为Bacillus axarquiensis。     

昆明美人蕉黑斑病菌——链格孢Alternaria alternata

美人蕉是重要的园林绿化植物和生物资源。为了明确美人蕉黑斑病的病原菌种类,并为病害防治提供理论指导,调查了昆明市美人蕉黑斑病的发生情况,采用组织分离法对病原物进行了分离和纯化,并进行了致病性测定。通过形态学和rDNA ITS序列分析,将昆明美人蕉黑斑病的病原菌鉴定为链格孢Alternaria alternata。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选及在玉米贮藏中的应用

【目的】本研究分离筛选出一株对黄曲霉既有抑制作用又能降解其毒素的拮抗细菌菌株,并将其应用于玉米中的黄曲霉污染防治研究。【方法】试验通过平板筛选法结合玉米活体筛选法对黄曲霉毒素B1 (AFB1)的拮抗细菌进行初筛,以AFB1的降解率和抑制率为指标进行复筛。【结果】分离到的菌株对黄曲霉菌的抑制率为79.20%,对1μg/mL的黄曲霉毒素B1的降解率为68.39%。贮藏期玉米含水量在15%–30%时,该菌株对黄曲霉污染的抑制率与玉米含水量成反比,即玉米含水量在15%时其抑制率达92.46%,玉米含水量在30%时其抑制率为19.41%。玉米含水量在28%时,菌株对黄曲霉污染玉米的防治效果达到36.39%。【结论】筛选出的拮抗菌株为枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对黄曲霉菌有抑制作用,而且能减少AFB1对玉米的污染。     

马铃薯疮痂病菌Streptomyces scabies拮抗细菌的筛选及BKS104鉴定

[背景] 近年来,马铃薯疮痂病的危害态势逐渐上升,在全国各主要产区均有发生,目前由于缺乏有效的防治手段,已造成了严重的经济损失。生物防治是防治土传病害的有效途径,逐渐成为了研究热点。[目的] 筛选对马铃薯疮痂病菌具有较高拮抗效果的菌株,为生防菌剂的开发提供菌种资源,同时也为马铃薯疮痂病的防治奠定理论基础。[方法] 采用平板对峙法和牛津杯试验法对分离得到的菌株进行初筛和复筛,并通过形态特征、生理生化特征及16S rRNA基因、gyrB基因序列分析结果对菌株进行鉴定。通过平板对峙法测定菌株的抑菌谱。[结果] 获得一株具有明显拮抗效果的菌株BKS104,抑菌直径达到43 mm,防效达到85%。其菌落圆形、乳白色、不透明、表面有光泽,边缘整齐,菌体杆状,革兰氏阳性菌。结合16S rRNA基因、gyrB基因的测序结果将其鉴定为贝莱斯芽孢杆菌,并对8种植物病原真菌均具有抑制效果。[结论] 菌株BKS104为贝莱斯芽孢杆菌,可以有效抑制马铃薯疮痂病菌的生长,安全性高,具有良好的生防潜力。     

Influence of phylloplane colonizing biocontrol agents on the black spot of rose caused by Diplocarpon rosae

Abstract

An attempt was made to study the biocontrol efficacy of antagonistic microorganisms in phylloplane of rose cv. Edward to manage the black spot (Diplocarpon rosae) disease. Eight antagonistic microorganisms were tested in vivo against the black spot pathogen. Among these, Trichoderma viride and Pseudomonas fluorescens pf1 reduces the mycelial growth significantly. These two biocontrol agents were evaluated for their ability to induce defense-related enzymes and chemicals in plants. Increased activity of phenylalanine ammonia lyase (PAL), peroxidase (PO), polyphenoloxidase (PPO) and total phenolics were recorded in all the biocontrol agents treated leaves. P. fluorescens Pf1 recorded early and increased synthesis of the entire defense-related enzymes and total phenol within 6 days. The application of biocontrol agents induced the defense-related enzymes involved in phenyl propanoid pathway in addition to direct antagonism, which collectively contribute for enhanced resistance against invasion of Diplocarpon rosae in rose.     

Screening of mulberry germplasm lines against Powdery mildew,Myrothecium leaf spot and Pseudocercospora leaf spot disease complex

Abstract

Fifty-six indigenous and 29 exotic mulberry varieties were screened against powdery mildew, Myrothecium leaf spot, Pseudocercospora leaf spot for a period of three years under field conditions. The percent disease index (PDI) was recorded during the peak season of the diseases. Out of 85 germplasm lines studied four-germplasm lines viz. Thailand lobed (0.43), M. multicaulis (2.63), Italian (2.83) and M. australis (4.56) were found highly resistant; nine lines were resistant; 43 lines were moderately resistant and 29 were susceptible to the disease complex. Powdery mildew showed significant positive correlation with Pseudocercospora leaf spot. Highly resistant varieties may be utilized for future disease resistance breeding programme to evolve multiple disease resistant mulberry varieties.     

一株具有拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及生物学特性研究

本研究以樱桃番茄成熟红果为样本,以极细链格孢菌为指示菌筛选得到一株对番茄采后病原菌有抑制作用的菌株KL-1。通过平板拮抗试验研究了菌株KL-1对番茄采后常见病原真菌极细链格孢菌、黑曲霉、青霉菌、尖侧多隔孢霉、拟康宁木霉、盐生枝孢霉、子囊菌、胶孢炭疽菌等八种病原菌的抑制作用,同时通过形态学、生理生化及16S rDNA分子生物学特征对菌株进行了鉴定,并对其基本生物学特性进行了研究。结果表明:菌株KL-1对于七种病原菌极细链格孢菌、黑曲霉、青霉菌、拟康宁木霉、盐生枝孢霉、子囊菌和胶孢炭疽菌均有明显的抑制作用,其中对黑曲霉的抑制率最大为81%,对其他六种病原菌抑制率也均高于70%,对尖侧多隔孢霉的抑制率为0,说明菌株KL-1可以抑制番茄多种常见病原真菌,具有开发为生防制剂的潜力。经鉴定KL-1为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);该菌培养9 h内生长最旺盛,最适生长pH为7.0,最适生长温度为37℃。     

Isolation and characterization of antagonistic bacteria against bacterial leaf spot of Euphorbia pulcherrima

Aims: To investigate the inhibition potential of leaf‐associated bacteria against the pathogen of bacterial leaf spot of Euphorbia pulcherrima. Methods and Results: Seven out of 200 bacterial strains were effective antagonists by in vitro screening and the two strains PAB241 and PAB242 significantly reduced the disease incidence and severity as foliar treatments of E. pulcherrima. The two effective strains, PAB241 and PAB242, were both identified as Bacillus amyloliquefaciens by a polyphasic approach including phenotypic feature, carbon source utilization profile, fatty acid methyl esters and analysis of 16S rRNA gene sequence. In addition, the suspensions of B. amyloliquefaciens PAB241 and PAB242 showed antibacterial activities against the pathogen of bacterial leaf spot of E. pulcherrima under different treatments. Conclusions: The leaf‐associated bacteria, B. amyloliquefaciens PAB241 and PAB242, markedly inhibited the growth of X. axonopodis pv. poinsettiicola under different treatments and protected E. pulcherrima from pathogen infection in growth chamber conditions. Significance and Impact of the Study: This is the first study that showed B. amyloliquefaciens from plant leaves was a potential bactericide against bacterial leaf spot of E. pulcherrima.     

一株西瓜枯萎病生防菌的鉴定与田间防效

[背景]西瓜枯萎病是由尖孢镰孢菌西瓜专化型(Fusarium oxysproum f.sp.niveum)引起的土传病害,是西瓜最为严重的病害之一.利用拮抗微生物抑制病原菌繁殖,降低其危害程度,已成为西瓜枯萎病防控领域的研究热点.[目的]筛选对西瓜枯萎病病原菌具有拮抗作用的菌株,并探究其抑菌作用,为有效防控西瓜枯萎病提...     

大伏革菌防治小孔异担子菌的菌株筛选

以从芬兰引进的野生大伏革菌、中国的大伏革菌和小孔异担子菌为研究对象,通过平板对峙培养方法,从16株大伏革菌菌株中筛选出3株防治异担子菌的高效菌株,分别为:04052、08076和08077。这3号菌株具有较高的生长速率和拮抗率,能够快速覆盖病原菌,起到显著的生防效果。实验中还发现大伏革菌生长速率和拮抗率之间存在着显著的正相关关系。