中华眼镜蛇毒C组分诱导U251细胞凋亡及P53基因表达的实验研究

目的以人神经胶质瘤细胞系U251为实验对象，研究中华眼镜蛇毒c组分诱导细胞凋亡的机制。方法将中华眼镜蛇毒c组分分为1．5ug/mL（A组），3ug/mL（B组），4．5ug／mL（C组），15ug／mL（D组）和30ug／mL（E组）5个浓度组，以顺铂（DDP）40ug／mL为阳性对照组，另设一阴性对照组，观察光镜下细胞的形态变化，采用DNA凝胶电泳检测法，观察FC诱导细胞凋亡的情况；采用SP免疫组化法和R．T—PCR法检查P53基因的表达。结果中华眼镜蛇毒c组分对U251细胞具有诱导凋亡的作用．FC诱导U251细胞凋亡率与药物浓度密切相关（P〈0．01）。使用FC前后，P53表达有显著增高。结论FC有诱导U251细胞凋亡的作用，但其诱导凋亡依赖于P53基因的改变。     

中华眼镜蛇毒膜毒素诱导人膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究中华眼镜蛇毒膜毒素12(MT-12诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用.方法 不同浓度的MT作用于体外培养的BIU-87和E-J细胞,分别在12、24和36h用HE染色、透射电镜观察细胞的形态变化,Annexin'V-FITC/PI双染流式细胞术定量榆测凋亡率.结果 倒置显微镜和透射电镜下观察到凋亡细胞的核固缩、染色体边集、核碎裂和凋亡小体等形态学变化.MT-12浓度分别为1、2和3μg/mL时,双染法流式细胞术均检测到2株细胞凋亡率,实验组凋亡率和对照组比较有统计学意义(P<0.05).MT-12剂量和作用时间相同时,BIU-87细胞的凋亡率明显高于E-J细胞(P<0.01.结论 MT-12能诱导体外培养的BIU-87和E-J细胞凋亡,2株细胞凋亡率存在差异,可能与肿瘤细胞的生物学行为、MT-12诱导2株细胞凋亡机制的不同有关.     

二甲基亚砜诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的研究

目的 :研究二甲基亚砜 (DMSO)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法 :用不同浓度的DMSO处理体外培养的人肝癌细胞BEL 74 0 2 ,应用普通光镜、荧光显微镜、MTT分析方法和流式细胞技术 (FCM )检测肝癌细胞凋亡的形态学变化、细胞存活率、凋亡百分率和细胞周期分布的变化。结果 :DMSO诱导BEL 74 0 2细胞核DNA凝缩和核片段化 ,最后形成凋亡小体 ;随着DMSO浓度的增加和处理时间的延长 ,细胞存活率明显下降 ,其IC50 为 1.9% ;2 %的DMSO处理细胞 12h ,凋亡率达 17.2 1% ,同时S期细胞明显增加 ,G2 M期细胞明显下降。结论 :DMSO可诱导人肝癌细胞凋亡 ,并使细胞受阻于S期而进入凋亡程序。     

亚砷酸体外对人肝癌细胞株BEL-7402影响的初步研究

目的 体外培养人肝癌细胞株BEL－7402,从多个角度探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肿瘤作用及其机制。方法 应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透谢电镜、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组BEL－7402细胞的存活。形态学改变,细胞DNA含量的分布进行了观察和测定。结果 0.5、1、2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株BEL－7402细胞的生长增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0／G1期细胞减少,S期细胞增多;电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减少、核变圆、胞浆内出现分化良好的细胞器, 0.5、1、2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成。结论 三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡。     

姜黄素对人肝癌Bel7402细胞杀伤动力学及周期时相的影响

目的 研究姜黄素对人肝癌Ｂｅｌ－７４０２细胞杀伤动力学及周期时期的影响，方法 以集落形成法测定药物对增殖期与坪期细胞杀伤的量效关系曲线，以流式细胞仪及ＡＯ／ＥＢ荧光染色法分析药物对Ｂｅｌ７４０２细胞周期时相及凋亡的影响。结果 姜黄素１～１０μｇ／ｍｌ作用２ｈ对不同增殖状态的Ｂｅｌ７４０２细胞均呈单指数型杀伤，但对增殖期细胞敏感，１～１０μｇ／ｍｌ作用２４ｈ，Ｇ０－Ｇ１，期细胞及Ｇ２－Ｍ期细胞的比例     

姜黄素单体影响肝癌BEL-7402细胞凋亡及其周期蛋白D表达的研究

目的 采用细胞学实验观察3种姜黄素单体对肝癌细胞株BEL-7402的抑制增殖及诱导细胞凋亡的作用强度和机制.方法 以四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Annexin Ⅴ-FITC双标记及流式细胞术(FCM)实验观察3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用与细胞周期变化,采用 Western blot实验分析3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402细胞周期蛋白D表达的影响.结果 (1)3种姜黄素均可通过诱导肝癌细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞生长增殖,存在时间与剂量效应,以姜黄素Ⅲ抑制效果最强.(2)3种姜黄素通过影响细胞周期生长的调控信号、降低细胞周期蛋白D表达量致使肝癌细胞停滞于G1/S期.结论 3种姜黄素均可通过抑制肝癌细胞周期蛋白D表达而诱导细胞凋亡,有效地抑制肝癌细胞生长增殖,具有很高的临床治疗价值.     

苦参碱诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究苦参碱对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法苦参碱处理人胃癌细胞株SGC-7901后，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应，显微镜下观察胃癌细胞形态变化，应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和凋亡，用PCR-ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果不同浓度的苦参碱对SGC-7901有明显抑制作用，且呈时间依赖性及剂量依赖性，形态学观察也发现大量神经细胞的染色质凝聚，核碎裂，凋亡小体产生，细胞即出现明显的凋亡形态特征，FCM检测结果显示苦参碱作用后，G0／G1期细胞比例增高，S期、G2／M期细胞比例下降，苦参碱在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调，且随苦参碱浓度增大和时间延长，抑制作用逐渐增强。结论苦参碱对人胃癌细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一。     

雄黄对K562细胞端粒酶活性和凋亡的作用

目的 :探讨雄黄对慢性粒细胞白血病细胞株K5 6 2细胞端粒酶活性及凋亡的调节作用和机制 .方法 :MTT法检测细胞增殖力 ;PCR ELISA法测定端粒酶活性 ;流式细胞仪测量细胞周期和细胞凋亡 .结果 :0 .3,0 .6 ,1.5和 3.0mg·L-1雄黄 (72h)在诱导K5 6 2细胞凋亡的同时可显著抑制细胞端粒酶活性和细胞增殖 ,并呈剂量相关 ;1.5 ,3.0mg·L-1雄黄 (72h)可诱导K5 6 2细胞G2 /M期阻滞 .结论 :雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡达到抑制细胞生长的作用 ,端粒酶活性下降是雄黄诱导K5 6 2细胞凋亡的机制之一 .由大剂量雄黄诱导的K5 6 2细胞G2 /M期阻滞可能与端粒酶活性显著下降有关     

中华眼镜蛇毒组分C与传统TACE化疗药体外抑制人肝癌细胞株作用的差异

目的：研究中华眼镜蛇毒组分Ｃ（Ｆｒａｃｔｉｏｎ Ｃｆｒｏｍ Ｎａｊａ Ｎａｊａ Ａｃｔｒａ Ｖ ｅｎｏｍ,ＦＣ）体外对人肝癌细胞株的细胞毒作用和机理,并与传统肝动脉插管栓塞／灌注化疗（Ｔｒａｎｓｃａｔｈｅｔｅｒ Ａｒｔｅｒｉａｌ Ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ,ＴＡＣＥ）药进行比较。方法：应用ＡＴＴ法、流式细胞仪等方法,观察ＦＣ人肝癌细胞株（Ｂｅｌ－７４０２）、人支气管上皮细胞株（ＨＢＥ１６）     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究紫杉醇对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法 0．001－1μmol/L的紫杉醇处理SGC7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP－银染法测定端粒酶活性变化。结果 不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性,光镜及流式细胞术分析表明,0．01μmol/L的紫杉醇处理后24h,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,24h酶活性即显著受抑制,72h变为阴性。结论 紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一,端粒酶可作为肿瘤化疗的敏感性指标。     

眼镜蛇毒组份M对血液流变学的影响

静脉注射眼镜蛇毒M组份（0．07mg／kg和0．1mg／kg）可使家兔和狗的全血粘度和血浆粘度降低，对家兔红细胞压积和红细胞电泳时间无影响。M组份在体内外均能抑制ADP和花生四烯酸所诱导的血小板聚集。     

眼镜蛇毒M组份对血小板聚集功能的研究

本文用眼镜蛇毒提取的 M 组份,对58例健康人的血小板聚集功能进行研究,发现其能抑制血小板对 ADP 的诱聚,初步认为其作用与其所含之纤溶酶与磷脂酶 A_2有关。     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ诱导多药耐药白血病细胞K562/A02凋亡

目的 :研究中华眼镜蛇毒组分CⅡ (FCⅡNNAV)对多药耐药白血病细胞K5 6 2 /A0 2的抑制作用及机制。方法 :应用MTT法、荧光显微镜法、流式细胞仪法 ,观察FCⅡNNAV单用及联合阿霉素 (ADM)体外对K5 6 2 /A0 2的毒性作用、凋亡作用及对Bcl 2表达的影响。结果 :FCⅡNNAV单用对耐药K5 6 2 /A0 2及敏感K5 6 2细胞均有抑制作用 ,IC50 分别为 (0 .75± 0 .0 1) μg/mL和 (0 .6 7± 0 .11) μg/mL。FCⅡNNAV联合ADM体外对细胞K5 6 2 /A0 2有较强的协同抑制作用。荧光显微镜、流式细胞仪检测FCⅡNNAV能明显诱导细胞K5 6 2 /A0 2凋亡 ,凋亡率呈剂量依赖性增加。流式细胞仪检测发现FCⅡNNAV能使细胞K5 6 2 /A0 2的Bcl 2表达下调 ,表达率呈剂量依赖性减少。结论 :FCⅡNNAV对细胞K5 6 2 /A0 2及细胞K5 6 2均有较强的抑制作用 ,且抑制作用与剂量呈正相关 ,并与抗癌药ADM有较强协同作用。FCⅡNNAV能明显诱导K5 6 2 /A0 2细胞凋亡 ,其机制可能与Bcl 2表达下调有关。     

眼镜蛇毒对大鼠丘脑腹内侧核c-jun表达的影响

目的:探讨眼镜蛇毒对大鼠丘脑腹内侧核(VM)c-jun表达的影响。方法:将18只SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组、眼镜蛇毒组,每组6只。采用免疫组织化学方法观察VM的c-jun表达。结果:与正常对照组和生理盐水组相比,眼镜蛇毒组大鼠VM的c-jun表达增加(P<0.01)。结论:眼镜蛇毒对大鼠VM的c-jun表达有上调作用。     

眼镜蛇毒磷脂酶A_2对兔血小板功能和血液凝固的影响

眼镜蛇毒磷脂酶A2在体内外均对ADP、花生四烯酸，钙离子载体A23187、血小板激活因子所诱导的兔血小板聚集有显著的抑制作用，并能明显延长血液凝固时间，这些作用均呈剂量一效应关系。     

中华眼镜蛇毒F组分对血小板活化时α颗粒膜蛋白的影响

目的：观察中华眼镜蛇毒F组分对血小板α－颗粒膜蛋白表达的影响，确定F组分是否具有抑制血小板活化的功能。方法：实验分成对照组，凝血酶组和各给药组（凝血酶＋F组分），应用酶免疫吸附法（ELISA）测定健康成年人血浆中的α－闰膜蛋白（GMP－140）含量的变化。结果：凝血酶能引起血浆中的GMP－140含量明显升高，中华眼镜蛇毒F组为100、30μg/ml明显降低凝血酶引起的血浆GMP－140含量升高，并呈现一定程度的剂量依赖关系，两组比较P＜0．05），结论：中华眼镜蛇毒F组分能够抑制激动剂引起的血小板活化。     

中华眼镜蛇毒活性组分抑血管内皮细胞增殖和黏附实验研究

目的:研究眼镜蛇毒在抗血管生成方面的生物活性。方法:采用Sephadex阳离子交换柱和分子筛分离中华眼镜蛇毒原毒,以MTT法评价和筛选分离各蛋白峰对培养内皮细胞的抑生长活性;MTT快速测定法测定活性峰对内皮细胞与纤维蛋白原(Fbg)、纤连蛋白(Fn)、Matrigel的黏附作用的影响。结果:经两步分离后从中华眼镜蛇毒中获得一可特异性抑制内皮细胞生长的活性蛋白峰,该活性组分可抑制内皮细胞的黏附功能,对细胞黏附Fn、Fbg和Matrigel等3种物质的作用从1.2μg/ml浓度起即有抑制效应(P<0.05),且均呈浓度依赖性;组分对细胞黏附Fbg和Hatrigel的抑制作用较其对Fn的作用强(P<0.05)。结论;眼镜蛇毒中可能含有可抑制血管生成的活性物质,在抗血管生成方面有良好的研究价值。     

中华眼镜蛇毒F组分对沙鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究中华眼镜它毒F组分脑缺血再灌注损伤的保护作用,方法：结扎沙鼠双侧颈总动脉1h,造成前脑缺血模型,用比色法测定脑匀浆过氧化脂质的最终产物丙二醛（MDA）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）的活性,结果：F组分0．9,0．3,0．1mg/kg可显著抑制脑内脂质过氧化,降低MDA的含量,并提高超化物歧化酶的活,性且呈一定的量效关系,同缺血再灌组比较P＜0．05,同阳性对照药尼莫通比较,P＞0．05,结论：中华眼镜蛇毒F组分对脑缺血再灌注损伤有保护作用,可能与抑制自由基的生成和促进自由基的清除有关。     

青蒿酯钠抗人肝癌（BEL—7402）与诱导凋亡

应用体内外抑瘤实验、细胞形态学观察、流式细胞仪、Westernblot实验进行检测和观察，探讨青蒿酯钠抗肿瘤作用及机制。结果表明，青蒿酯钠对人肝癌有体内、外抗肿瘤作用；诱导人肝癌细胞凋亡，可能是其抗肿瘤作用机制之一；诱导体外人肝癌细胞凋亡通过P53非依赖性途径。     

蜂毒素对肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的影响

目的 :了解蜂毒素诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法 :肝癌细胞BEL 74 0 2经不同浓度的蜂毒素处理后 ,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖的抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白的表达。结果 :16 μg/ml蜂毒素作用肝癌细胞系BEL 74 0 2 ,12h抑制率为 (78.13±6 .15 ) % ,2 4h抑制率为 10 0 % ;4 ,8μg/ml蜂毒素对细胞的生长也有抑制作用 ,并且可诱导细胞凋亡的产生 ,能够增加细胞Fas蛋白的表达。结论 :蜂毒素高剂量有杀伤肿瘤细胞作用 ,低剂量可诱导细胞凋亡