葡萄糖调节蛋白75对缺糖诱导的凋亡相关基因Bax和NF-κB改变的影响

目的 通过已获得稳定表达葡萄糖调节蛋白(Grp75)的PC12细胞株,检测Grp75对缺糖诱导的细胞凋亡过程中Bax和NF-κB的影响. 方法 Grp75过表达组和对照组细胞无糖培养6h、12h、24h和48h后,进行相关的实验.免疫印迹法检测缺糖状态下两组细胞中Grp75的表达水平和NF-κB的活性;应用半定量RT-PCR和免疫印迹法比较Bax表达水平的变化;免疫细胞化学通过构象特异性的Bax 6A7抗体检测Bax的活化. 结果 Bax活化和 NF-κB活性的下降在缺糖诱导的PC12细胞凋亡过程中发挥了重要的作用.而Grp75通过阻止Bax的活化和NF-κB活性的下降抑制缺糖诱导的凋亡.缺糖状态下Grp75过表达组和对照组细胞中Bax表达水平均未发生改变. 结论 Bax活化和NF-κB活性下降与缺糖诱导的PC12细胞凋亡关系密切,Grp75通过阻止Bax的活化和维持NF-κB的活性保护PC12细胞.     

依托度酸诱导SMMC7721细胞凋亡的分子机理研究

目的：探讨选择性环氧合酶抑制剂依托度酸（etodolac）诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡的分子机理。 方法： 采用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳法测定细胞凋亡情况；Western blotting法检测不同浓度etodolac处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的变化；流式细胞术检测半胱氨酸酶-3 (caspase-3)活性的变化；TransAMTM NF-κB p65/p50核转录因子活性检测试剂盒检测核因子-κB (NF-κB)活性变化。 结果： 流式细胞术显示etodolac（0.25、0.50、1.0、2.0 mmol/L）作用SMMC7721细胞48 h后，与对照组（0 mmol/L）相比，出现明显凋亡峰（P<0.01 vs control）；高浓度etodolac处理后DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNA Ladder, 凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降，Bax表达增加；与对照组相比，低浓度组（0.25 mmol/L）caspase-3活性未明显活化（P>0.05），NF-κB活性也未受明显抑制（P>0.05），随着etodolac浓度的增大（0.50、1.0、2.0 mmol/L），caspase-3活性明显活化（P<0.05 vs control）； NF-κB活性明显受到抑制（P<0.05 vs control）。经Pearson 相关分析，caspase-3活性和NF-κB活性呈显著负相关（r=0.919, P<0.01）。 结论： 选择性COX-2抑制剂etodolac可能通过抑制NF-κB结合活性，调节Bcl-2、Bax蛋白表达，活化caspase-3，从而诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡。     

白桦脂酸对 H2O2 诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡影响 #br#

目的探讨白桦脂酸对 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和凋亡的影响。 方法PC12 神经细胞分成 Control、 Model (H2O2刺激)、 BA-L (1 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-M (2 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2刺激)、 BA-H (4 μmol / L 的白桦脂酸和 H2O2 刺激)、 BA-H + PMA 组 (1 μmol / L 的白桦脂酸、H2O2 、 NF-κB 信号通路激活剂 PMA 刺激), CCK-8 方法分析细胞增殖活性变化, 流式细胞术分析细胞凋亡水平变化, Western 印迹分析细胞中 Bax、 Bcl-2、 P65 蛋白表达变化, 黄嘌呤氧化法检测 SOD 水平, 比色法检测 GSH-Px 水平、 硫代巴比妥酸法检测 MDA 水平、 CellROX Green 荧光法检测 ROS 水平。 结果与 Control 组比较, Model 组 PC12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax 蛋白表达水平升高, Bcl-2蛋白表达水平降低, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高, P65 蛋白水平升高。 与 Model 组比较,BA-L、 BA-M、 BA-H 组 PC12 神经细胞增殖活性逐渐升高, 细胞凋亡率逐渐降低, 细胞中 Bax 蛋白表达逐渐减少, Bcl-2 蛋白表达逐渐增加, SOD、 GSH-Px 活性逐渐升高, MDA、 ROS 水平逐渐降低, P65 蛋白水平逐渐降低。 与 BA-H 组比较, BA-H + PMA 组 C12 神经细胞增殖活性降低, 细胞凋亡率升高, 细胞中 Bax、P65 蛋白表达增多, Bcl-2 蛋白表达减少, SOD、 GSH-Px 活性降低, MDA、 ROS 水平升高。 结论白桦脂酸通过下调 NF-κB 信号抑制 H2O2诱导的 PC12 神经细胞氧化损伤和细胞凋亡。     

Xaf1调节TNFR信号转导而诱导细胞凋亡的机制研究

目的： 利用基因开关调节的Xaf1-Saos诱导细胞株， 检测Xaf1对TNFR信号转导通路的影响，探索Xaf1与TNF-α协同诱导细胞凋亡的机制。方法： 以免疫印迹法和RT-PCR检测Xaf1对TNFR1 表达的影响，细胞周期 DNA 含量流式细胞术检测NF-κB对Xaf1诱导细胞凋亡的影响，gel mobility shift assay 检测NF-κB的DNA结合活性， luciferase 活性检测法及RT-PCR检测NF-κB的转录活性，激酶分析法检测SAPK/JNK 激酶的活性。结果： Xaf1不影响TNFR1蛋白及mRNA水平的表达，细胞内诱导活性的NF-κB可抑制Xaf1诱导的细胞凋亡， Xaf1的表达抑制TNF-α所介导的NF-κB的DNA结合活性和转录活性，也抑制了SAPK/JNK 激酶的活性。结论： Xaf1 对TNFR信号转导的抑制是Xaf1协同TNF-α诱导细胞凋亡的机制之一。     

大黄素通过TLR4/NF-κB信号通路减轻缺糖/缺氧对小胶质细胞的损伤

目的:探讨大黄素对缺糖/缺氧小胶质细胞的保护作用及机制。方法:建立缺糖/缺氧小胶质细胞模型;给予大黄素(20、40和80μmol/L)和/或过表达TLR4质粒(pcDNA-TLR4)对细胞进行干预;MTT法检测细胞活力;ELISA实验检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、TLR4、p-IκB和IκB的蛋白水平。结果:与DMSO处理的缺糖/缺氧组相比,大黄素处理的缺糖/缺氧小胶质细胞的活力显著升高,LDH和TNF-α的含量、细胞凋亡率及Bax、TLR4、p-IκB的蛋白水平均显著降低,Bcl-2的蛋白水平显著升高(P0.05);过表达TLR4可抑制大黄素处理的缺糖/缺氧小胶质细胞的细胞活力并增加其凋亡率。结论:大黄素对缺糖/缺氧诱导的小胶质细胞具有保护作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路失活有关。     

JAK—STAT通路调制NF-κB介导H2O2预处理的细胞保护作用

目的：探讨核因子-κB（nuclearfactor-κB，NF-κB）在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用中的作用及JAK—STAT通路对NF-κB的调制。方法：在PC12细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激（300μmol／LH2O2）损伤细胞的实验模型。应用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫印迹法（Westem blotting）测定NF-κB和STAT3的表达水平。结果：用1000μmol／L H2O2预处理PC12细胞90min可显著地抑制300panol／L H2O2作用12h引起的细胞凋亡，并明显地上调NF-κB和STAT3的表达，NF-κB抑制剂MG-132（100μmol／L）和JAK2抑制剂AG-490（10izmol／L）均可抑制H2O2预处理引起的适应性细胞保护作用及上调NF-κB表达的作用。结论：JAK-STAT通路调节NF-κB介导的H2O2预处理的细胞保护作用。     

氧固醇诱导巨噬细胞J774A.1的凋亡依赖于NF-κB的活化

目的:探讨7-酮基胆固醇(7-KC)作用小鼠巨噬细胞J774A.1后,NF-κB的活化与细胞凋亡的关系.方法:细胞经7-KC处理后,通过形态学观察,MTT检测法,DNA电泳,流式细胞术检测细胞凋亡水平.用Western blot和免疫组织化学方法检测NF-κB活化情况,采用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制实验检测NF-κB活化对7-KC诱导的细胞凋亡的影响.结果:7-KC能抑制小鼠巨噬细胞的生长并促进细胞凋亡,同时能诱导小鼠巨噬细胞NF-κB的活化,且NF-κB特异性抑制剂PDTC能显著抑制7-KC诱导的细胞凋亡.结论:7-KC能通过活化NF-κB途径诱导巨噬细胞发生凋亡.     

Trx-1过表达通过NF-κB信号通路减轻MPP~+所致PC12细胞的氧化应激损伤

目的:探讨硫氧还蛋白1(Trx-1)过表达通过NF-κB信号通路减轻1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞氧化应激损伤的作用,探讨帕金森病的发病机制。方法:采用1、3和5 mmol/L MPP~+损伤PC12细胞,MTT法检测细胞活力,商用试剂盒检测细胞上清液中氧化应激指标乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测细胞中Trx-1蛋白的表达。以3 mmol/L MPP~+损伤PC12细胞,以含Ad-Trx-1-GFP序列的慢病毒感染建立Trx-1过表达的帕金森病细胞模型,采用MTT法、商用试剂盒和Western blot分别检测Trx-1过表达对PC12细胞活力、氧化应激反应和NF-κB信号通路的影响。给予NF-κB信号通路激活剂佛波酯(PMA)作用于经MMP~+处理的P12细胞,观察激活NF-κB信号通路对PC12细胞活力和氧化应激反应的影响;给予NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)作用于Trx-1过表达的MPP~+损伤PC12细胞,观察Trx-1过表达通过NF-κB信号通路对PC12细胞活力和氧化应激反应的影响。结果:1、3和5 mmol/L MPP~+能够明显降低PC12细胞活力、细胞上清液中SOD活性和细胞内Trx-1蛋白的表达,升高细胞上清液中LDH活性和MDA含量,且3 mmol/L MPP~+和5 mmol/L MPP~+的作用明显大于1 mmol/L MPP~+(P0.05),而3 mmol/L MPP~+和5 mmol/L MPP~+间的差异无统计学显著性。Trx-1过表达能够明显减弱MPP~+对PC12细胞活力的抑制作用及其诱导的氧化应激损伤和NF-κB信号通路活化。NF-κB信号通路的激活促进了MPP~+对PC12细胞活力的抑制作用及其诱导的氧化应激损伤,而抑制NF-κB信号通路则增强了Trx-1过表达对MPP~+损伤的PC12细胞的保护作用。结论:Trx-1过表达可通过NF-κB信号通路减轻MPP~+作用下PC12细胞的氧化应激损伤。     

藁本内酯通过下调miR-292-5p表达改善氧糖剥夺对PC12细胞的促凋亡和炎症因子表达效应

目的 探讨藁本内酯对氧糖剥夺（OGD）诱导的PC12神经细胞炎症因子表达的影响及分子机制。方法 将PC12细胞缺糖缺氧处理6 h、12 h、24 h,用MTT法检测细胞存活率;将缺糖缺氧处理24 h的PC12细胞作为模型组,不处理的细胞作为对照组;用0.1、1、10μmol/L藁本内酯处理再进行缺糖缺氧,记为低、中、高剂量藁本内酯组;将miR-NC、miR-292-5p转染至PC12细胞后用1μmol/L藁本内酯处理,再进行氧糖剥夺,记为中剂量藁本内酯+miR-NC组、中剂量藁本内酯+miR-292-5p组。MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-6、IL-1β和TNF-α水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-292-5p表达水平。结果 氧糖剥夺处理后PC12细胞存活率显著降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,IL-6、IL-1β和TNF-α水平升高,miR-292-5p表达水平升高（P<0.05）。不同剂量藁本内酯处理后,OGD诱导的PC12细胞中细...     

虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系Eca109凋亡

目的研究虫草素与顺铂联合用药对食管癌细胞Eca109凋亡的影响及其作用机制。方法将食管癌细胞Eca109分为对照组、不同浓度虫草素处理组、不同浓度顺铂处理组和虫草素(70μg/m L)与顺铂(0.8μg/m L)联合处理组。MTS法检测Eca109细胞增殖;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测Eca109细胞凋亡;Western blot法检测细胞核内NF-κB P65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平;ELISA法检测细胞核内NF-κB P65与DNA的结合活性。结果虫草素与顺铂联合应用使顺铂对Eca109细胞的抑制率由29.30%增加至70.41%(P0.05),增强了顺铂对Eca109的敏感性;与顺铂单独用药相比,联合用药能够显著增加顺铂诱导的细胞凋亡(P0.05);与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κB P65的活性,而虫草素却能抑制NF-κB P65的活性,联合用药后NF-κB P65的活性下调;与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达则显著增高(P0.05)。结论虫草素可能通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子Bcl-2和Bax的表达,增强顺铂对Eca109的凋亡诱导效应。     

NF-κB抑制剂PDTC抗白血病细胞增殖的实验研究

目的： 观察核转录因子NF-κB活性特异性抑制剂PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐)对急性白血病细胞系K562细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法: 利用Trans AMTM NF-κB/p65活性测定试剂盒,检测PDTC作用K562细胞12 h、24 h后NF-κB亚基p65活性的变化;采用WST-1细胞增殖试验观察不同浓度PDTC作用24 h、48 h、72 h对细胞增殖的影响;用单细胞凝胶电泳(彗星检测)方法检测PDTC对K562细胞DNA损伤的影响;利用免疫印迹法(Western blotting)检测PDTC对K562细胞中pro-caspase-3和活化型caspase-3蛋白表达的影响。结果: 与对照组相比,经PDTC处理的实验组K562细胞NF-κB/P65的活性受到明显抑制(P＜0.01);且PDTC能以时间和剂量依赖方式抑制K562细胞的增殖(P＜0.05);单细胞凝胶电泳显示实验组细胞DNA受损,浓度为25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/LPDTC处理后,实验组细胞DNA总损伤细胞百分率分别为43.50％、84.00％、95.63％,明显高于对照组(9.75％),P＜0.05,且存在明显的剂量依赖关系;Western blotting结果显示经PDTC处理后的K562细胞胞质中可检测到pro-caspase-3和活化型caspase-3蛋白的表达。结论: NF-κB参与白血病细胞的增殖与凋亡调控,PDTC抗肿瘤机制可能与抑制NF-κB活性,上调caspase-3表达,从而诱导细胞凋亡有关。     

葡萄糖调节蛋白75在缺糖损伤PC12细胞中的表达

目的观察葡萄糖调节蛋白75(GRP75)在缺糖条件下在PC12细胞中的表达。方法体外模拟能量代谢障碍建立细胞缺糖模型,MTT检测PC12细胞活率;LDH测定细胞膜损伤程度;流式细胞仪PI单染色法和An-nexinV/PI双染色法检测细胞的损伤形式;RT-PCR和W estern b lot分别检测GRP75基因在RNA和蛋白水平上的表达。结果随着缺糖时间的延长细胞活力逐渐降低,LDH释放率明显增加,缺糖死亡的细胞有部分凋亡细胞,并出现明显的凋亡峰,GRP75 mRNA在24 h内表达上调,同时蛋白表达上调。结论GRP75在缺糖损伤PC12细胞中有一定的保护作用。     

蛋白酶体抑制剂依沙佐米对胰腺癌细胞凋亡及NF-κB通路的影响

目的:探讨蛋白酶抑制剂依沙佐米对胰腺癌细胞凋亡和NF-κB通路的影响。方法:培养人胰腺癌细胞系CFPAC-1和PANC-1,加入浓度为0、10、20、30和40 nmol/L的依沙佐米培养12、18、24和48 h,RT-qPCR检测细胞中NF-κB p65、IκB激酶(IκB kinase, IKK)、Bax和caspase-3的mRNA表达,Western blot检测细胞中凋亡相关因子NF-κB p65、IKK、Bax和caspase3的蛋白水平,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:CCK-8实验的检测结果显示,添加10～40 nmol/L依沙佐米均对PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的活力具有抑制作用(P0.05),呈时间和剂量依赖性;细胞凋亡检测结果显示随着依沙佐米浓度的增加,PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的凋亡率均显著增加(P0.05);与添加0 nmol/L抑制剂的对照细胞比较添加依沙佐米后PANC-1细胞和CFPAC-1细胞NF-κB p65和IKK的mRNA表达水平显著降低(P0.05);凋亡因子Bax和caspase-3的表达水平均显著升高(P0.05)。添加依沙佐米后PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的NF-κB p65和IKK的蛋白水平均显著降低(P0.05),与mRNA检测结果一致;CFPAC-1细胞的凋亡因子Bax和caspase-3蛋白表达水平均显著升高(P0.05),PANC-1细胞的caspase-3蛋白表达水平显著升高,Bax蛋白在依沙佐米为10 nmol/L浓度时变化的差异无统计学显著性。结论:蛋白酶体抑制剂依沙佐米可能通过抑制NF-κB通路的激活抑制胰腺癌细胞的活力,促进细胞凋亡,且作用效果呈时间和剂量依赖性。     

核因子-κB激活与细胞凋亡在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)活化及细胞凋亡与肺损伤的关系.方法:SD大鼠随机分为对照组、SAP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预处理组.建立各组模型后取肺组织行光镜和电镜下病理观察,免疫组织化学观察NF-κB的表达,TUNEL法观察细胞凋亡情况.结果:对照组细胞结构基本正常,仅极少量NF-κB活化,且只有少量肺泡间质细胞和肺泡上皮细胞凋亡.SAP组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞及血管内皮细胞有线粒体肿胀、基膜增宽、核染色质边集、间质水肿、电子密度升高等病理改变.NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显升高,并呈动态变化,6h达高峰,NF-κB表达及凋亡细胞主要见于中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞及部分血管内皮细胞.PDTC预处理组病理改变减轻,NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显下降,但仍高于对照组.结论:SAP时肺组织NF-κB活化并通过诱导细胞凋亡参与肺损伤.PDTC可能通过抑制NF-κB活性及细胞凋亡,对肺损伤具有保护作用.     

TLR7基因沉默通过NF-κB炎症通路对缺氧缺糖再给氧诱导的大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的 探讨Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)基因对缺氧缺糖再给氧诱导的大鼠海马神经细胞凋亡的影响及机制.方法 根据TLR7mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,转染入大鼠海马神经细胞中,实验分为4组:对照组(Control)、缺氧缺糖再给氧模型组(Model)、TLR7基因沉默组(Model+TLR7-siRNA)、转染阴性对照组(Model+NC).qRT-PCR检测沉默TLR7基因情况,Hoechst33258染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR7、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量.结果 与Control组相比,Model组和NC-TLR7组TLR7基因及蛋白表达水平明显增加,Caspase-3、NF-κ B蛋白表达水平及细胞凋亡率明显增加;与Model组相比,Model+TLR7-siRNA组TLR7基因及蛋白表达水平明显降低,Caspase-3、NF-κB蛋白表达及细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).结论 沉默缺氧缺糖再给氧诱导的大鼠海马神经细胞TLR7基因抑制细胞的凋亡,与下调Caspase-3、NF-κB表达有关.     

绞股蓝皂苷减轻脂多糖诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12损伤

目的 探讨绞股蓝皂苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用及其机制。方法 LPS处理PC12细胞建立神经元炎性损伤模型;实时定量PCR检测炎性因子表达,CCK-8法检测细胞活力,蛋白印迹检测NF-κB蛋白。结果 不同剂量(0、100、300和1 000 ng/mL)的LPS刺激PC12细胞12 h后,TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平随剂量的增加而逐渐升高。LPS导致细胞活力下降到85.7%,不同浓度绞股蓝皂苷(30, 100μg/mL)预处理细胞6 h后,30和100μg/mL绞股蓝皂苷能够使细胞活力分别恢复至96.2%和97.9%。绞股蓝皂苷预处理后,LPS诱导的TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平升高都受到不同程度的抑制。LPS刺激导致NF-κB通路信号蛋白p65的磷酸化(p-p65)水平上调,但绞股蓝皂苷预处理能够使升高的p-p65下调。结论 绞股蓝皂苷通过抑制NF-κB信号通路减轻LPS诱导的PC12细胞炎性反应,从而起到保护神经元损伤的作用。     

过表达SIRT1抑制脂多糖诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及NF-κB信号通路激活

目的研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及核因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响。方法用LPS处理胰岛β细胞,qRT-PCR和Western blot测定细胞中SIRT1表达变化。用pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染胰岛β细胞,qRT-PCR检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)mRNA和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、核因子-κBp65亚型(NF-κBp65)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果 LPS处理后的胰岛β细胞中SIRT1表达水平降低。pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染可以提高LPS条件下胰岛β细胞中SIRT1表达水平。LPS处理后的胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平升高,凋亡率升高,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达升高。过表达SIRT1可以降低LPS条件下胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平,抑制细胞凋亡,减少细胞中Bax、cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达。结论 SIRT1减少LPS诱导的胰岛β细胞炎症因子表达并下调细胞中NF-κB信号激活水平。     

热休克蛋白参与NF-κB介导的H2O2预处理的细胞保护作用

目的探讨热休克蛋白(HSP)是否参与核因子-κB(NF-κB)介导的H2O2预处理的细胞保护作用。方法应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Westernblot)测定NF-κB的表达水平,免疫细胞化学染色法测定NF-κB的核转移。结果100μmol/LH2O2预处理PC12细胞90min可显著地抑制300μmol/LH2O2引起的细胞凋亡,并可明显地上调PC12细胞NF-κB的表达及促进NF-κB的核转移,同时也能上调HSP70和HSP90的表达。NF-κB的抑制剂TPCK阻断NF-κB表达,并显著地阻断H2O2预处理的细胞保护作用及HSP70和HSP90的表达。结论HSP70和HSP90参与NF-κB介导的H2O2预处理的适应性细胞保护作用。     

缺糖在PC12细胞中诱发的细胞毒性及bcl-2基因的表达

目的:研究PC12细胞缺糖损伤的分子生物学特征。方法:建立细胞缺糖模型,电镜观测PC12细胞形态;SOD法检测超氧化物歧化酶活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR测定bcl-2、bcl-xl基因表达。结果:缺糖细胞有凋亡现象发生;细胞缺糖24 h后,培养液内的SOD和细胞内的SOD活力明显降低;bcl-2、bcl-xl基因在6~16 h表达上调,此后表达下调。结论:缺糖损伤的PC12细胞既有形态的变化也有功能的变化,细胞膜受到自由基的攻击,细胞抗氧化能力下降,细胞同时伴随着凋亡和坏死两种死亡方式,bcl-2、bcl-xl基因的表达具有一定的时序和范围特点。     

同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞组织因子表达增强

目的: 研究同型半胱氨酸（Hcy）诱导人血管平滑肌细胞（VSMCs）组织因子（TF）表达的作用，及其对核转录因子（NF-κB）活性和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。 方法: 培养人脐动脉VSMCs，将不同浓度的Hcy和/或NF-κB抑制剂PDTC与VSMCs孵育不同时间，用RT-PCR方法检测TF mRNA表达，用Western blotting检测核NF-κB水平，用流式细胞术（FCM）检测细胞表面TF蛋白水平和iNOS水平。 结果: 10 μmol/L Hcy作用4 h，TF表达开始升高，500 μmol/L达峰值，Hcy能显著诱导VSMCs表达TF mRNA；对照组VSMCs细胞膜表面有低水平的TF蛋白表达，10 μmol/L Hcy作用4 h即可诱导VSMCs表达TF蛋白，500 μmol/L 达高峰，Hcy能显著诱导VSMCs表达TF；500 μmol/L Hcy作用1 h，细胞核NF-κB水平明显升高，Hcy可诱导VSMCs NF-κB活化;NF-κB抑制剂PDTC可明显抑制Hcy对TF mRNA和细胞TF表达的诱导作用；单独Hcy作用不能诱导VSMCs表达iNOS。 结论: Hcy能显著诱导VSMCs表达TF，增强VSMCs的NF-κB活化，从而介导TF基因表达和蛋白合成，通过NF-κB介导VSMCs表达TF可能是Hcy导致AS、血栓形成的重要机制。