急性髓系白血病患者T淋巴细胞内细胞因子表达特性

T淋巴细胞在抗肿瘤的免疫反应中起着重要作用，而大部分肿瘤患者往往存在免疫功能低下。本研究通过对急性髓系白血病（AML）患者T淋巴细胞胞内细胞因子特性的研究，以了解AML患者在不同状态下T淋巴细胞的功能。18例不同状态下初诊AML患者和10例健康成人外周血中的T淋巴细胞在莫能霉素存在的情况下，体外经PMA和离子霉素（ionomycin）刺激后，分别进行CD4-FITC、CD8-FITC荧光单克隆抗体染色和IFNγ-PE、IL4-PE荧光单克隆体胞内染色，最后进行流式细胞仪分析。结果表明：初诊AML患者中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞胞内IFNγ分泌水平均明显低于健康成人外周血T淋巴细胞，CD4^＋和CD8^＋T细胞胞内IL-4分泌水平与成人外周血细胞无显著差异。处于临床缓解状态的AML患者，CD8^＋T淋巴细胞刺激后胞内产生IFNγ的量明显高于初诊AML患者（P〈0、05）．但与健康成人无显著差异（P〉0、05）。复发的AML患者外周血中CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞刺激后胞内产生IFNγ量明显低于健康成人外周血T淋巴细胞以及处于完全缓解状态的AML患者CD8^＋T淋巴细胞（P〈0、05）．而IL-4的量明显高于健康成人和初诊AML患者CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞（p〈0．05）。结论：处于不同状态下的AML患者T细胞亚群分泌的细胞因子发生了改变，与之相应的是，初次诊断的AML患者外周血中CD4‘和CD8’T淋巴细胞刺激后Th1／Tcl细胞反应低下，Th2／Tc2细胞反应与健康成人T淋巴细胞无差异；完全缓解状态的AML患者T细胞Thl反应虽然仍低下，但Tcl反应明显增强，与健康成人无差异；复发的AML患者CD4^＋和CD8^＋T细胞Th2／Tc2样反应较Thl／Tcl样反应明显增强。     

急性髓系白血病患者树突状细胞诱导抗自身白血病T细胞免疫的实验研究

目的　探讨自体白血病细胞裂解物 (ACL)冲击的完全缓解期的急性髓系白血病 (AML CR)患者骨髓细胞衍生的树突状细胞 (DC)体外能否刺激自体T细胞产生特异性抗AML细胞的细胞毒活性。方法　应用羊红细胞玫瑰花结程序从AML CR患者的骨髓中分离出去T细胞的骨髓单个核细胞 (TD BMNC) ,并培养在含联合细胞因子 (GM CSF、IL 4、SCF或TNF α)的条件下以产生DC ,并在培养的第 5天用ACL进行冲击。培养 7d后收获细胞 ,用流式细胞仪测定其成熟DC表型。同时 ,这些细胞与经抗CD3抗体激活过的自体T细胞在低浓度IL 2条件下共培养 7d ,以产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用乳酸脱氢酶释放实验测定溶细胞活性。结果　 1 2例AML CR患者培养的骨髓单个核细胞均分化为成熟DC。其中 6例完成CTL活性实验。当效∶靶 =2 0∶1时 ,ACL冲击的DC致敏的自体T细胞与单纯IL 2或IL 2加无抗原冲击的DC组比较对自体AML细胞有明显的杀伤活性 ,而对K562细胞均无明显影响 (P <0 .0 1 )。结论　用AML CR患者白细胞裂解物冲击的骨髓细胞衍生的DC体外致敏自体T细胞可以产生AML细胞相关抗原特异性的CTL。     

急性髓系白血病细胞总RNA冲击的树突细胞诱导抗自身白血病的T细胞免疫

目的探讨白血病细胞RNA冲击的完全缓解期的急性髓系白血病(AML-CR)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)衍生的树突细胞(mRNA-DC)体外刺激自体T细胞抗白血病免疫的可行性及有效性。方法应用联合细胞因子(GM-CSF、IL-4)培养法从AML-CR患者贴壁BMMNC诱导DC,在诱导的第5天用脂质体DOTAP介导法以自体白血病细胞的总RNA冲击DC,然后以含10 ng/m l的TNF-α的培养基继续培养24 h促进其成熟,培养7 d后收获细胞,作为mRNA-DC。以流式细胞术检测DC特征性表型的表达;以MTT法测定mRNA-DC对自体T细胞的促增殖活性;将mRNA-DC与T细胞按1∶3混合,共培养7 d,收获活化的T细胞,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定分泌γ干扰素(IFN-γ)阳性细胞数;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定细胞毒活性。结果14例AML-CR患者BMMNC均可在体外分化为具有特征性形态和表型的成熟DC;当刺激细胞与反应细胞比例为1∶16时,mRNA-DC可刺激自体T细胞产生明显的增殖活性[(36.84±5.68)%],与未冲击DC组[(12.20±3.16)%]比较差异具有统计学意义(P<0.05,n=9);ELISPOT分析显示分泌IFN-γ的mRNA反应性的T细胞得到明显扩增;体外活化的T细胞在效靶比为20∶1时,对自体白血病细胞显示明显的杀伤活性[(45.46±6.34)%],与未冲击的DC组[(12.32±1.32)%]及单纯IL-2组[(13.26±2.28)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05,n=5)。结论应用白血病细胞RNA冲击的DC疫苗免疫可以作为一种可行、有效的防治微量残留白血病的方法。     

急性髓细胞白血病细胞来源的树突状细胞的诱导及功能研究

为了研究急性髓细胞白血病(AML)细胞诱导成树突状细胞(DC)的方法及其DC的功能，分离25例AML患者骨髓或外周血单个核细胞，在含有细胞因子rhGM—CSF，rhIL-4，rhTNF—α的IMDM完全培养基中培养8—12天，进行细胞形态学、表型、遗传学及功能测定。结果表明：20／25例自诱导培养的第3天起，在倒置显微镜下可观察到部分细胞体积增大，形态由圆形变得不规则，可见驼峰样或细刺状胞浆突起；在第8—9天，该类细胞所占的比例达到峰值。至第12天，细胞总数及上述形态的细胞数量明显减少。诱导培养结束时收集细胞，应用流式细胞术检测11／20例诱导前后细胞表面标志的表达，结果表明诱导前细胞不表达CD1a、CD80及CD83，低表达CD86、CD54和HLA—DR；诱导后细胞CD1a、CD80、CD83、CD86、CD54及HLA—DR的表达明显上调。在同种异体混合淋巴细胞反应(Allo-MLR)中，该类细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖一对^3H-TdR的摄取能力明显高于AML细胞。FISH证实诱导生成的具有DC特征细胞的AML起源。结论：体外联合应用细胞因子可将AML细胞诱导成具有DC形态、表型及功能特征的细胞(AML—DC)。     

细胞色素C对柔红霉素诱导AML细胞凋亡的影响

为了研究细胞色素C体外作用急性非淋巴细胞性白血病(AML)细胞的效应及其对柔红霉素(DNR)诱导 AML细胞凋亡的影响,分别采用瑞氏-姬姆萨染色和硝基四氰唑蓝还原试验观察细胞色素C引起AML细胞的分化 效应;用流式细胞术检测和荧光染色方法检测AML细胞的凋亡效应。结果表明:①不同浓度的细胞色素C单独作 用AML细胞产生的效应不同:浓度为10μl／ml的细胞色素C作用AML细胞可产生分化效应;浓度为20μl/ml的 细胞色素C作用AML细胞,产生明显的凋亡效应;浓度为40μ/ml的细胞色素C作用AML细胞,可导致细胞的坏 死。②浓度为10.0μg／ml的细胞色素C预先作用AML细胞导致DNR诱导的细胞凋亡率明显降低(P<0.01),浓 度为20.0μg／ml的细胞色素C预先作用对DNR诱导的细胞凋亡率影响不大(P>0.05)。③如果DNR预先作用 AML细胞后再经细胞色素C处理,两种浓度的细胞色素C均可使DNR诱导的细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。 结论:细胞色素C对柔红霉素(DNR)诱导AML细胞凋亡可能有一定的影响。     

急性白血病患者IFN-γ IL-10水平的测定及临床意义

目的 探讨急性白血病(AL)免疫逃逸的机制及测定IFN-γ、IL-10水平的临床意义。方法 用ELISA方法测定急性白血病初发患者血浆中IFN-γ、IL-10的水平。结果 ①急性白血病初发患者血液中IFN-γ浓度较正常对照组明显降低，IL-10浓度较正常对照组显著升高；②急性白血病患者经化疗后完全缓解(CR)组、部分缓解(PR)组、耐药死亡组治疗前血浆中IFN-γ浓度依次降低，IL-10浓度依次升高，其中CR组、PR组IFN-γ浓度明显高于耐药死亡组，3组间IL-10相比差别有显著性。结论 初发急性白血病患者体内以Th2型细胞因子占优势状态，造成肿瘤局部的免疫抑制状态，可能是急性白血病免疫逃逸的机制之一。肿瘤局部Thl型细胞因子严重缺乏，而Th2型细胞因子明显升高，提示预后不良。因此临床上可通过对Th1,Th2型细胞因子的测定来评估患者的免疫状态和预后。     

AML—M2a型细胞诱导自本及导体优势增殖TCRVβ亚家族T细胞的研究

目的：研究急性髓细胞性白血病M2a亚型（AML－M2a）患者外周血白血病细胞反应性T细胞受体V区β链（TCRVβ）亚家族T细胞体内外优势表达情况及其体外细胞毒性分析。方法：采用混合淋巴细胞／肿瘤细胞培养法（MLTC）将AML－M2a细胞与自体或正常人外周血T细胞体外混合培养和扩增,用反转录－多聚酶链反应（RT－PCR）分析MLTC前后患者和正常人T细胞TCR24个Vβ亚家族的表达情况,同时用四甲基偶氮唑盐（MTT）法对其进行细胞毒性分析。结果：AML－M2a患者和正常人T细胞在MLTC培养后均出现了TCRVβ亚家族优势表达情况,与淋巴因子激活镣伤细胞（LAK细胞）相比具有较高特异性的细胞毒性（P＜0．01）。结论：AML－M2a细胞可以诱导自体与异体特异性细胞毒性T细胞（CTL）,且其主要为一些优势的TCRVβ亚家族T细胞。     

原始细胞低于20％伴RUNX1-RUNX1T1阳性AML 1例报道

急性髓细胞性白血病(acu te myel o id leukemia,AML)的骨髓或外周血原始细胞一般需≥20%,但是伴t(8;21)(q22;q22.1);RUNX1-RUNX1T1(AML1-ETO)、inv(16)(p13.1q22)或t(16;16)(p13.1;q22);CBFB-MYH11和PML-RARA的AML,原始细胞比例可以低于20%,但临床上少见。本研究报道1例原始细胞<20%伴RUNX1-RUNX1T1(AML1-ETO)阳性的AML病例。     

冠心病患者血清PA和hs-CRP水平变化的探讨

目的 探讨冠心病患者血清PA和hs-CRP水平的变化及实验检测价值.方法 选取临床确诊为冠心病患者107例,其中稳定型心绞痛(SAP)患者39例,不稳定型心绞痛(UAP)患者36例,急性心肌梗死(AMI)患者32例,采用免疫比浊法检测PA和hs-CRP的水平浓度.结果 SAP,UAP与AMI患者PA水平浓度逐渐降低,AMI患者血清PA水平浓度明显低于SAP,UAP患者(P＜0.01);血清hs-CRPP水平浓度逐渐升高,AMI患者hs-CRP水平明显高于SAP与UAP患者(P＜0.01);随病情严重程度增加hs-CRP浓度显著升高,PA浓度显著降低,差异均有统计学显著性意义(P＜0.01).结论 血清PA和hs-CRP水平变化与冠心病发生、发展及预后密切相关.     

慢性肾脏病患者不同肾损害期血清Cystatin C表达水平

目的探讨慢性肾脏病（CKD）患者不同肾损害期血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cystatin C）的表达水平。方法根据临床分期将研究对象分为CKDⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期组,采用胶乳增强免疫透射比浊法分别检测各组患者血清Cys-tatin C水平,同时测定血清肌酐（SCr）及内生肌酐清除率（Ccr）,并与正常对照组比较。结果各期CKD患者血清CystatinC及Ccr与期组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;各组患者血清Cystatin C水平与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;相关分析显示,血清Cystatin C与SCr之间呈正相关（r=0.781,P〈0.01）,与Ccr呈负相关（r=-0.815,P〈0.01）。在肾功能损害早期血清Cystatin C改变较SCr更敏感（P〈0.01）。结论Cystatin C是一种优于SCr的反映肾小球滤过功能的指标,能反映CKD不同阶段肾脏滤过功能的损害程度。     

全喉切除患者术后不同时期抑郁状况的调查

目的了解全喉切除患者出院后不同时期的抑郁状况。方法选取2005年10月至2006年12月的全喉切除患者共82例,采用队列研究法,对所有研究对象跟踪随访,在出院时及出院后1、3、6、12个月,用Carroll抑郁自评量表进行问卷调查。将测量结果进行统计分析,了解全喉切除患者术后不同时期的抑郁状况。结果全喉切除患者在出院时至出院后12个月内,其抑郁发生率有所下降(P<0.05),但总体抑郁均分差异无统计学意义(P>0.05)。结论虽然喉癌切除患者出院后1年抑郁发生率有所下降,但仍有53.3%的患者存在抑郁症状,总体抑郁状况不容乐观。医护人员及社会支持系统应适时给予相应的心理指导,减轻其抑郁程度,帮助患者尽快适应新的自我形象和生活。     

荆州地区不同文化程度糖尿病患者疾病控制状况调查

目的了解荆州地区不同文化程度糖尿病患者疾病控制现状,为不同文化程度糖尿病患者的早期干预及治疗、护理决策提供依据。方法选择荆州地区病程1年以上的糖尿病患者600例,按文化程度分为“初中及以下”和“高中及以上”两组各300例。测量两组患者空腹血糖（FPG）、早餐后2 h血糖（P2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、尿微量白蛋白（UAb）及眼底情况,并进行比较;使用糖尿病控制状况量表（CSSD-70）进行测评,比较不同文化程度患者的疾病控制情况差异。结果初中及以下文化程度糖尿病患者FPG、P2hPG、HbA1c高于高中及以上文化程度患者（P〈0.05）;初中及以下文化程度糖尿病患者CSSD-70量表总分及生活习惯、生存技能、治疗目标、疾病知识维度得分均低于高中及以上文化程度患者（P〈0.05）。结论初中及以下文化程度的糖尿病患者疾病控制状况差于高中及以上文化程度的患者,因此要加强文化程度较低的糖尿病患者的治疗和管理水平,加强糖尿病健康教育,大力推广新的治疗策略,预防晚期并发症,提高生活质量,降低医疗费用。     

垂体瘤转化基因在急性髓系白血病患者中表达的研究

本研究探讨垂体瘤转化基因（pituitarytumor-transforming gene,pttg）在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中的表达及其与AML发生的关系,以及pttg基因在FAB亚型中的表达是否存在差异性。采用实时荧光定量PCR方法检测47例AML患者及28例正常对照者骨髓中pttg基因的表达水平。结果表明：AML患者pttg基因的表达水平[（1.1323±1.3934）×105]明显高于正常对照组[（4.5766±1.1817）×103]（p〈0.05）,急性早幼粒细胞细胞白血病（M3）患者中pttg基因的表达水平高于其他FAB亚型,其中包括急性髓系白血病未分化型（M1）、急性粒细胞白血病部分分化型（M2）、急性粒细胞单核细胞白血病（M4）、急性单核细胞白血病（M5）。结论：pttg基因的过度表达可能与AML的发生发展有关,其中可能与M3发生的关系更加密切,本研究为AML的发病机制及其基因靶向治疗的研究提供了新的思路。     

冠心病患者血清VASP和PAPP-A的表达水平与冠状动脉病变程度的相关性研究

目的　研究冠心病（ coronary heart disease, CHD）患者血清血管扩张刺激磷蛋白（ vasodilator stimulated phosphoprotein,VASP)和妊娠相关血浆蛋白 A（pregnancy associated plasma protein-A,PAPP-A）的表达水平与病变程度的关系。方法　纳入 2017年 12月～ 2019年 12月期间咸阳市第一人民医院心内科收治的 200例 CHD患者作为研究对象,另纳入同期健康体检受试者 100例作为对照组,收集和检测所有受试者的一般资料、生化指标、血清 VASP和 PAPP-A的表达水平,以心脏外科与介入治疗狭窄冠状动脉研究（ SYNTAX）积分评价冠状动脉病变严重程度,对各指标进行 Pearson相关性分析和多元线性回归分析。结果　与对照组相比,研究组患者 FBG（6.55±1.33 mmol/L vs 4.92±0.83 mmol/L）, FINS（9.92±3.11 mIU/L vs 5.34±2.09 mIU/L）, HbA1c（8.50％±1.30％ vs 6.24％±0.26％）和 PAPP-A（17.93±5.14 mIU/L vs 10.43±2.96 mIU/L）的水平均显著升高,血清 VASP（290.77±57.88 ng/L vs 406.64±81.81 ng/L）的表达水平显著降低,差异均有统计学意义（ t=11.208～ 23.657,均 P＜ 0.001）。与 SAP组相比, UAP组和 AMI组患者血清 VASP（286.21±59.78 ng/L,225.85±54.09 ng/L vs 352.22±66.12ng/L）的表达水平较低 ,而 PAPP-A（18.01±4.52 mIU/L,26.71±5.59 mIU/L vs 13.23±3.14mIU/L）的表达水平均较高,差异有统计学意义（ F=69.261, 144.405,均 P＜ 0.001）;三组其余指标相比差异均无统计学意义（ F=0.210～ 2.363,均 P＞ 0.05）。SYNTAX积分 23～ 32分患者组的血清 VASP表达水平显著低于、而 PAPP-A显著高于 0～ 22分患者组; ≥ 33分患者组的血清 VASP表达水平显著低于、而 PAPP-A显著高于 0～ 22分以及 23～ 32分患者组,差异均有统计学意义（ F=67.098 ,139.984,均 P＜ 0.001）。 Pearson相关性分析显示,血清 VASP的表达水平与 SYNTAX积分呈负相关（ r=-0.208,P＜ 0.05）,PAPP-A的表达水平与 SYNTAX积分呈正相关（ r=0.233,P＜ 0.05）。多元线性回归分析显示,血清 VASP（β=0.620,P=0.008）和 PAPP-A（β=0.884,P=0.005）的表达水平是 SYNTAX积分的独立影响因素。结论　CHD患者血清 VASP和 PAPP-A的表达水平与冠状动脉病变严重程度密切相关,可作为早期诊断和评估病情的重要生物学指标。     

假性球麻痹后不同时间针刺风池穴的疗效比较

目的：观察假性球麻痹患者病程不同时期针刺的疗效。方法：240例假性球麻痹患者根据发病的不同时期给予针刺风池穴治疗，治疗前后按洼田氏饮水试验标准评分。结果：240例中发病〈10d的患者针刺治疗有效率达100％，：〉10～30d有效率97％，〉1～3月有效率83％，〉3～6月有效率77％。结论：针刺风池穴治疗假性球麻痹各时期均有疗效，但早期治疗的效果明显优于晚期（P〈0．05）。     

系统性红斑狼疮患者B淋巴细胞刺激因子及其受体表达水平的研究

目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）患者B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及其受体的表达水平，并探讨其与系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDAI）的关系。方法：检测缓解组（14例）和活动组SLE患者组（23例）血清BLyS及其受体的表达水平，以健康志愿者（30例）作为对照。结果：SLE患者BLyS、穿膜蛋白活化物（TACI）和B细胞活化因子受体（BAFF—R）mRNA的表达明显高于正常人（P〈0．01），活动期患者的表达高于缓解期（P〈0．01）。结论：SLE患者BLyS、TACI和BAFF—R mRNA表达含量升高，提示BLyS、TACI和BAFF—R可能与SLE的发病有关。     

慢阻肺患者血清IL-17，IL-27和IL-33水平表达及与不同临床分期FeNO和肺功能的相关性研究

目的　探讨慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD) 患者血清IL-17,IL-27 和IL-33表达水平与不同临床分期肺功能指标第一秒用力呼气容积占预计值的百分比（forced expiratory volume/predictedvalue,FEV1%pred）及呼出气一氧化氮（FeNO）的相关性。方法　收集100 例COPD 患者,分为稳定期COPD 患者（n=50）和急性加重期COPD 患者(n=50),同时收集健康者(n=40) 为正常组。测定各组血清白介素-17(interleukin-17,IL-17),白介素-27（interleukin-27,IL-27）和白介素-33（interleukin-33,IL-33）的表达水平;应用FeNO 检测仪测定FeNO 水平;应用肺功能仪检查各组肺功能指标FEV1%pred;分析血清IL-17,IL-27 和IL-33 表达水平与FEV1%pred 和FeNO的相关性。结果　COPD 组FeNO 及血清IL-17,IL-27,IL-33 的表达水平高于正常组,COPD 急性加重期组的血清IL-17,IL-27,IL-33 及FeNO 的表达水平高于稳定期组,差异有统计学意义(F=15.275,18.429,24.716 和31.143,均P<0.05)。COPD 组FEV1%pred 低于正常组,慢阻肺急性加重期组FEV1%pred 低于COPD 稳定期组,差异有统计学意义（F=724.642,P ＜ 0.05）;COPD 患者血清中IL-17,IL-27 和IL-33 表达水平与FEV1%pred 呈负相关（r=-0.682,0.743 和-0.718,均P ＜ 0.05）,与FeNO 呈正相关（r=0.685,0.714 和0.695,均P ＜ 0.05）;COPD 急性加重期组与稳定期组患者血清IL-17 与IL-27,IL-33 水平呈正相关（r=0.636 ～ 0.846,均P ＜ 0.05）;正常组血清IL-17 与IL-27及IL-33 无明显相关性（r=-0.237,-0.283,均P ＞ 0.05）。结论　血清IL-17,IL-27 和IL-33 均参与了COPD 的发病过程, 可作为评价COPD 的有效指标。