miRNA-195靶向调控 CCND2和 MYB抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的机制研究

目的　研究 miRNA-195在宫颈癌组织和细胞中的表达,分析其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响和作用机制。方法　检测 35例临床宫颈癌组织及其对应癌旁正常组织中 miRNA-195,通过 Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与宫颈癌患者预后的关系;采用细胞增殖实验和划痕迁移实验验证 miRNA-195对宫颈癌 siHa,Hela细胞增殖、迁移的影响;通过 microRNA数据库预测 miRNA-195的靶基因,双荧光素酶基因实验验证靶向结合关系; qRT-PCR验证 miRNA-195对靶基因的调控;分析宫颈癌中靶基因的表达作用及与 miRNA-195的相关性,通过细胞回补实验验证 miRNA-195是否通过靶向调控蛋白表达在宫颈癌中发挥功能。结果　宫颈癌组织中 miRNA-195相对表达低于癌旁正常组织（ 21.03±5.17 vs 40.67±7.92）,差异有统计学意义（ t=12.285,P<0.001）,且具有低表达预后差的临床特征（ Logrank P=0.032）。过表达 miRNA-195抑制了宫颈癌细胞的增殖（ t=6.725~21.433,均 P＜ 0.01）和迁移速率（ t=12.443,16.749,均 P<0.001）。CCND2和 MYB是 miRNA-195的靶基因,过表达 miRNA-195显著抑制了 CCND2和 MYB mRNA的蛋白表达（ P<0.01）。宫颈癌组织中 CCND2较癌旁正常组织显著高表达（ 52.67±4.79 vs 39.86±6.39）,差异有统计学意义（ t=12.453,P<0.001）;MYB较癌旁正常组织显著高表达（ 43.06±6.43 vs 22.07±6.85）,差异有统计学意义（t=13.217,P<0.001）;且分别与 miRNA-195表达呈负相关（ r=-0.726,-0.592,均 P<0.05）。过表达 CCND2和 MYB显著促进了宫颈癌细胞的增殖和迁移速率,敲低 CCND2和 MYB表达则得到与之相反的结果（ F=144.947,875.160,均 P<0.001）;在过表达 miRNA-195细胞中分别回补过表达 CCND2和 MYB后细胞增殖、迁移速率基本回归到正常水平。结论　miRNA-195可通过靶向调控 CCND2和 MYB表达抑制宫颈癌癌细胞的增殖和迁移,进而参与宫颈癌的发生发展。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

miR-128-3p靶向调控ZEB1表达对结肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的 探讨miR-128-3p在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响和可能的作用机制.方法 选取2015年6月至2017年5月我院手术切除的56例结直肠癌组织及癌旁组织标本,并收集结直肠癌细胞系和人正常结直肠黏膜细胞,采用qPCR法检测miR-128-3p相对表达水平并分析其与结直肠癌临床病理特征的关...     

hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴促进胰腺癌细胞增殖与迁移的机制研究

目的　检测环状核糖核酸（circular RNA ,cicrRNA）hsa_circ_0006950 在胰腺癌（pancreatic cancer,PC）中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖、迁移的影响及其潜在分子作用机制。方法　利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 检测hsa_circ_0006950 在胰腺癌组织及细胞中的相对表达水平;转染hsa_circ_0006950 干扰载体构建低表达细胞系,通过CCK-8实验、克隆斑点形成实验和Transwell 实验检测hsa_circ_0006950 对胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移的影响;利用生物信息学网站预测hsa_circ_0006950 的miRNA 分子靶标及其调控网络（hsa_circ_0006950-miR-124-3p-EZH2）,双荧光素酶基因报告实验验证hsa_circ_0006950 和miR-124-3p,miR-124-3p 和EZH2 的靶向结合关系;转染过表达/ 干扰miR-124-3p 和过表达EZH2 细胞系,探究miR-124-3p 和EZH2 及hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴对胰腺癌细胞克隆形成及迁移的影响。结果　胰腺癌组织中hsa_circ_0006950 表达明显高于癌旁正常组织（3.57±0.52 vs 1.01±0.03）,差异有统计学意义（t=21.980,P ＜ 0.001）。胰腺癌细胞PANC-1（7.51±0.62）,AsPC-1（5.26±0.45）,Capan-2（3.69±0.38）,SW1990（3.25±0.32）and BXPC-3（3.86±0.35）中hsa_circ_0006950 相对表达明显高于正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7（1.00±0.01）中的表达,差异有统计学意义（F=88.585,P ＜ 0.001）。与对照组相比,干扰hsa_circ_0006950 表达组细胞增殖能力（0.79±0.17 vs 1.83±0.42）,克隆形成率（51.42%±5.84% vs 78.76%±13.65%）和迁移数目（104.64±24.73 vs 218.21±31.57）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.976,3.190,4.905,P=0.016,0.033,0.008）。miR-124-3p 是hsa_circ_0006950 的下游靶基因,EZH2 是miR-124-3p 的直接靶标。hsa_circ_0006950 靶向负调控miR-124-3p,miR-124-3p 靶向负调控EZH2。与对照组相比,过表达miR-124-3p 组PC 细胞增殖（0.21±0.16 vs1.75±0.47）,克隆形成率（47.85%±4.13% vs 81.54%±2.33%）和细胞迁移数目（118.74±24.65 vs 202.36±31.45）明显降低,差异均有统计学意义（t=5.378, 14.317, 3.390, 均P ＜ 0.001）;共转染过表达EZH2 后,miR-124-3p 对细胞增殖、克隆形成率及迁移能力的抑制作用被逆转。在干扰hsa_circ_0006950 组细胞中同时下调miR-124-3p 或过表达EZH2 后,hsa_circ_0006950 对细胞克隆形成及迁移的抑制作用被逆转恢复。结论　胰腺癌中hsa_circ_0006950 显著高表达,抑制其表达可以抑制胰腺癌细胞的增殖及迁移;hsa_circ_0006950 可能通过靶向下调miR-124-3p 表达,进而上调EZH2 表达来发挥作用,参与胰腺癌的发生发展。     

miR-125b靶向STAT3调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移、侵袭机制的研究

目的 对miR-125b靶向STAT3调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移、侵袭的机制进行研究.方法 采用实时荧光PCR法检测miR-125b在舌鳞状细胞癌癌组织及癌旁组织中的表达,采用MTT法检测细胞的增殖能力;采用Transwell法检测miR-125b对舌鳞状细胞癌细胞的侵袭作用;采用划痕实验检测舌鳞状细胞癌细胞的迁移能力...     

乳腺癌组织中ZEB2、E-Cad表达与患者预后的关系

目的 探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和上皮型钙黏蛋白（E-Cad）在乳腺癌组织中的表达及其在患者预后评估中的价值。方法 收集80例乳腺癌患者的癌组织样本及对应的癌旁组织（距癌组织≤3 cm）样本。采用免疫组化法和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测癌组织和癌旁组织中ZEB2和E-Cad蛋白及mRNA的表达。收集所有患者的临床病历资料。对所有患者随访5年,记录生存情况。采用Kaplan-Meier生存曲线分析ZEB2、E-Cad表达与乳腺癌患者生存率之间的关系。采用Cox比例风险模型分析乳腺癌患者5年生存率的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析ZEB2和E-Cad判断乳腺癌预后的效能。结果 癌组织ZEB2阳性率显著高于癌旁组织（P<0.05）,E-Cad阳性率显著低于癌旁组织（P<0.05）。乳腺癌组织ZEB2表达与E-Cad表达呈负相关（r=-0.265,P=0.018）。癌组织ZEB2 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）,E-Cad mRNA相对表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）。ZEB2表达与肿瘤直径、淋巴结转移、...     

miR-190通过调控细胞因子信号转导抑制因子5促进肝细胞癌发生的机制

目的探讨微RNA-190(miR-190)通过调控细胞因子信号转导抑制因子5(SOCS5介导肝细胞癌(HCC)发生的机制。方法选取84例HCC患者的肝癌组织及癌旁组织,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-190表达水平,并分析其与患者临床特征和预后的相关性。将miR-190模拟物/抑制物或SOCS5 siRNA(siSOCS5)转染至SNU398和HepG2细胞中,CCK-8检测细胞的增殖,Transwell对细胞的侵袭与迁移进行检测,RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测SOCS5基因和蛋白的表达水平,双荧光素酶测定验证miR-190与SOCS5的靶向关系。通过异种移植肿瘤验证SOCS5体内抑癌作用。结果 HCC中miR-190水平上调,且miR-190高表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、预后不良有关(P均<0.05)。CCK-8和Transwell结果表明,过度表达的miR-190可促进细胞增殖、侵袭及迁移。RT-PCR、蛋白免疫印迹法和双荧光素酶测定结果证实了SOCS5是miR-190的真正靶点。此外,SOCS5在体内外均有促进HCC发展的作用。结论 miR-1...     

Skp2通过调控Snaill水平对上皮性卵巢癌细胞EMT的作用研究

目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)通过调控转录因子Snaill水平对上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用.方法 分别检测15例上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织中Skp2和Snaill mRNA水平;体外培养SKOV3细胞,将其分为阴性对照组(只加脂质体)、Skp2干扰表达组(加Skp2干扰表达载体和脂质体)...     

血液外泌体携带miR-140-3p负调控泛素结合酶E2C抑制小细胞肺癌的增殖和上皮-间质转化

目的 探究血液外泌体携带miR-140-3p是否能够通过靶向泛素结合酶E2C(ubiquitin-conjugating enzyme E2C, UBE2C)调控小细胞肺癌（small cell lung cancer, SCLC）的恶性进展。方法 该研究由生物信息学分析、临床研究、细胞分析和动物实验构成。从GEO数据库下载SCLC相关的微小RNA(microRNA, miRNA)数据集GSE19945、mRNA数据集GSE40275和GSE60052。采用T-test检测miR-140-3p在数据集中的正常组织和SCLC组织中的表达差异,并通过数据库分析miR-140-3p在不同组织和细胞外泌体中的表达情况。收集2021年12月—2022年12月在永州市中心医院切除的SCLC组织和配对癌旁组织,并于研究开始前7 d选择健康志愿者。通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测SCLC患者和健康志愿者组织样本中miR-140-3p和UBE2C的表达水平分布情况,并根据表达量的中位数将SCLC患者分为低表达组和高表达组,分析miR-140-3p和UBE2C的表达水平与患者病理参数的相关性。选择20只...     

白藜芦醇对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响及机制研究

【目的】探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及迁移的影响及其机制。【方法】分别培养SHR及其对照鼠（WKY）VSMCs,对SHR组VSMCs进行不同浓度Res药物处理。噻唑蓝（MTT）检测各组细胞增殖能力差异,细胞划痕检测细胞迁移能力变化,流式细胞术检测各组细胞周期情况,ELISA检测细胞上清液中白介素‐6（IL‐6）分泌情况,Real‐timePCR检测细胞中miR‐21及IL‐6mRNA表达水平,WesternBlot检测细胞信号传导与转录激活因子（STAT3）及磷酸化STAT3（p‐STAT3）表达情况。【结果】与WKY组相比,SHR组大鼠VSMCs增殖及迁移能力显著升高,细胞周期检测结果提示细胞G1期比例降低、S期及G2／M期比例升高,细胞上清液中IL‐6分泌增强,miR‐21及IL‐6mRNA表达上升,STAT3磷酸化程度增强（P＜0．05）;经过Res干预后,VSMCs细胞增殖及迁移能力减弱,细胞周期阻滞在G1期,细胞上清液中IL‐6分泌减弱,miR‐21及IL‐6mRNA表达降低,STAT3磷酸化程度减弱,并且呈一定浓度依赖关系（P＜0．05）。【结论】Res可能通过抑制IL‐6／STAT3／miR‐21途径影响自发性高血压大鼠VSMCs增殖及迁移。     

HOXB3促进骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和抑制细胞凋亡的机制研究

目的　探究同源异型盒基因 B3（homeobox genes B3, HOXB3）对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和凋亡的影响及其潜在分子机制。方法　检测 2020年 1月～ 12月在雅安市第二人民医院骨科行手术治疗的 30例骨肉瘤患者病理组织及邻近正常组织中 HOXB3表达;通过转染干扰 siRNA敲低 HOXB3表达,验证其转染效率;采用细胞增殖实验、克隆形成实验、细胞划痕实验及细胞凋亡实验分别探究敲低 HOXB3对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和凋亡的影响;分析 CDCA3在骨肉瘤中的表达特征及与 HOXB3的相关性,通过染色质免疫共沉淀技术（ chromatin immunoprecipitation, ChIP）分析和荧光素酶报告基因实验验证 HOXB3和细胞分裂周期相关蛋白 3（cell division cycle associatedfprotein 3, CDCA3）结合关系;验证 HOXB3和 CDCA3表达调控对骨肉瘤细胞生物学行为的作用机制。结果　30例骨肉瘤临床组织中 HOXB3表达（ 41.154±8.626）较邻近正常组织（22.857±7.512）显著升高,差异有统计学意义（t=8.975,P＜ 0.001）。敲低 HOXB3表达后,骨肉瘤细胞增殖率、克隆形成率和迁移率明显降低（ F=37.477～ 399.842,均 P＜ 0.001）,细胞凋亡率显著升高（F=10.556,P=0.011）。骨肉瘤组织中CDCA3表达（ 38.624±7.736）明显高于邻近正常组织（21.875±6.482）,差异有统计学意义（ t=9.090,P＜ 0.001）;HOXB3与 CDCA3表达呈正相关（ r=0.736,P＜ 0.01）。CDCA3是 HOXB3的靶基因;敲低 HOXB3表达显著降低了骨肉瘤细胞中 CDCA3表达（ F=694.283,P＜ 0.001）。HOXB3可结合 CDCA3的启动子区域正调控 CDCA3的表达;在敲低 HOXB3表达的细胞中回补 CDCA3,逆转了 HOXB3对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移、凋亡的抑制 /促进作用。结论　HOXB3在骨肉瘤中表达上调,其可能通过与 CDCA3启动子区域结合,正向调控 CDCA3表达促进了骨肉瘤细胞的增殖、克隆形成及迁移,抑制了细胞凋亡,可作为临床骨肉瘤治疗的潜在药物靶点。     

EGF诱导肝癌细胞系HepG2增殖及其作用机制

目的观察表皮生长因子（EGF）对肝癌细胞系HepG2增殖的影响,初步探讨C-erbB2在其中的作用机制。方法以不同浓度（0、0.1、1、10、100μg.L-1）EGF作用于肝癌细胞系HepG2,采用MTT法观察EGF对HepG2增殖的影响;采用RT-PCR检测C-erbB2 mRNA的表达变化。结果 EGF能呈剂量依赖方式诱导肝癌细胞系HepG2的增殖;10μg.L-1EGF可显著增强肝癌细胞系HepG2 C-erbB2 mRNA的表达。结论 EGF可诱导肝癌细胞株HepG2的增殖,其机制可能与上调原癌基因C-erbB2的表达有关。     

HLA-G 参与羊膜间充质干细胞抑制淋巴细胞增殖的机制研究简

本研究旨在探讨羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,HAMSC）抑制淋巴细胞增殖的作用机制,证明人类白细胞抗原G（HLA-G）参与了HAMC的免疫抑制功能.从胎膜上分离、培养和扩增HAM-SC,用流式细胞术进行表型鉴定,同时检测膜表面和胞质中HLA-G的含量;用ELISA法检测培养上清中HLA-G的含量;MTT法检测混合培养后HAMSC对淋巴细胞增殖的影响.结果表明,HAMSC膜表面和胞质均表达HLA-G,膜表面和胞质HLA-G的含量分别是（16.75±3.871）％和（39.14 ±4.274）％,在细胞培养上清中的含量是5.2ng/ml.HAMSC及其上清加入淋巴细胞混合培养后,淋巴细胞抑制率增高,当HLA-G特异性抗体加入后这种抑制效应减低.结论：HAMSC表面和胞质都表达HLLA-G,同时也分泌HLA-G到上清液中.HLA-G是HAMSC的免疫抑制功能的关键因素之一,这为HAMSC在移植后抑制排斥反应的临床应用提供了理论依据.     

miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖抑制及克隆形成的机制研究

目的　检测骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤（ osteosarcoma,OS）细胞增殖、克隆形成的影响及潜在分子作用机制。方法　选取 2018年 1月～ 2020年 12月内蒙古自治区巴彦淖尔市医院病理科 30组临床骨肉瘤组织及邻近正常组织标本,采用实时荧光定量 PCR实验（ qRT-PCR）法检测组织中 miR-146b-5p表达水平;通过介导转染 miR-146b-5p mimics和 miR-146b-5p ASO分别过表达和敲低 miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤细胞增殖及克隆形成的影响。通过生物学信息数据库预测 miR-146b-5p的潜在靶基因,荧光素酶实验验证两者结合关系,分析 miR-146b5p对靶基因的调控作用。分析靶基因在骨肉瘤中的表达特征及与 miR-146b-5p的相关性,通过细胞增殖实验验证两者的调控作用,以其探究在骨肉瘤中发挥功能的潜在分子机制。结果　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达（ 4.096±1.237）显著低于邻近正常组织（ 5.895±0.834）,差异有统计学意义（ t=6.605,P＜ 0.001）。miR-146b-5p过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖能力（ t=13.233～ 34.599,均 P＜ 0.01）。miR-146b-5p过表达组克隆形成数目（ 48.912±2.032）较对照组（160.834±9.031）明显降低,差异有统计学意义（ t=20.942,P＜ 0.001）。DUSP16是 miR-146b-5p的潜在靶基因, miR-146b-5p负向调控双特异性磷酸酶（ dual speci.city phosphatase 16, DUSP16）表达。骨肉瘤组织中 DUSP16表达（5.683±0.457）较邻近正常组织（ 4.665±0.531）显著升高,差异有统计学意义（ t=7.959,P＜ 0.001）,与 miR-146b5p表达呈负相关（ r=-0.667,P<0.05）。共转染过表达 DUSP16逆转了 miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。 miR-146b-5p过表达组 P21水平（ 4.995±0.214）较对照组（ 1.001±0.002）显著升高,差异有统计学意义（ t=32.325,P＜ 0.001）;当共转染 DUSP16过表达后, P21表达（ 0.986±0.012）较单独过表达 miR-146b-5p组（4.995±0.214）显著降低,差异有统计学意义（ t=32.398,P＜ 0.001）。结论　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p显著低表达,其过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖及克隆形成; miR-146b-5p通过靶向负调控 DUSP16表达参与 P53信号通路从而在骨肉瘤发生发展起重要作用。