荆州地区HPV-52型E7基因多态性分析和T细胞表位预测

目的 研究湖北荆州地区人乳头瘤病毒52型(HPV-52)E7基因变异特征以及预测T细胞表位.方法 扩增HPV-52阳性样本E7基因,测序并与GenBank参考序列比对,分析序列变异性,构建E7基因系统发育树,估算基因选择压力以及预测E7蛋白T细胞表位.结果 HPV-52 E7基因突变序列中检测到19个单核苷酸突变,包括...     

HPV-16 E6E7抗原表位嵌合体DNA疫苗黏膜免疫抑制宫颈癌的效果研究

目的 评价泛素及热休克蛋白70(HSP 70)C融合人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7表位嵌合体DNA疫苗鼻内黏膜免疫对宫颈癌移植瘤的预防和治疗效果。方法 建立TC-1小鼠肿瘤模型,以壳聚糖为发送载体,通过滴鼻免疫给药免疫C57BL/6小鼠。MTT法和淋巴毒性T细胞(CTL)反应检测小鼠脾脏T淋巴细胞增殖、流式细胞术检测细胞因子表达水平、肿瘤生长曲线和荷瘤小鼠存活时间评价壳聚糖包裹的HPV-16 E6E7嵌合体DNA疫苗鼻内黏膜免疫后对HPV-16型相关宫颈癌移植瘤的预防和治疗效果。结果 与对照组pcD-UH相比,实验组pcD-UE和pcD-UEH均具有显著的CTL反应,延缓HPV-16型相关宫颈癌移植瘤生长,但对已生成肿瘤无影响。鼻内黏膜途径发送壳聚糖包裹HPV-16 E6E7抗原表位嵌合体DNA疫苗仅能产生较弱的细胞免疫应答。结论 HPV-16 E6E7抗原表位嵌合体DNA疫苗通过鼻腔免疫,具有一定的肿瘤治疗和显著的肿瘤预防效果,为新型HPV疫苗的研制奠定了基础。     

川渝地区HPV-33 L1和L2基因多态性研究

目的研究川渝地区人乳头瘤病毒(HPV)33亚型L1和L2基因多态性,为相关探针和疫苗设计提供基础数据。方法用PCR方法扩增HPV-33阳性样品中HPV-33L1和L2基因,测序并与Genenbank中常用参考序列进行对比,分析突变位点。结果和参考序列相比,本地区HPV-33L1突变率为70.69%(41/58)。在58例样品中,共发现单核苷酸突变20个,其中非同义突变8个,同义突变12个。本地区HPV-33L2突变率为100.00%(58/58)。在58例样品中,共发现单核苷酸突变12个,其中非同义突变7个,同义突变5个。结论川渝地区HPV-33L1和L2基因多态性具有自己的特点,疫苗和探针设计时需要因地制宜提高效率和准确率。     

HPV16 E6和E7基因序列多态性与宫颈癌临床病理特征相关性

目的探讨宫颈癌人乳头瘤病毒16型（HPV16）E6和E7转化基因序列多态性,及其与宫颈癌临床病理特征的相关性。方法从77例宫颈癌组织中筛选出51例HPV16阳性标本,扩增E6及E7基因,PCR产物进行序列测定。应用DNAStar生物软件进行核苷酸和氨基酸序列的分析。结果宫颈癌组织中HPV16 E6共测得6个突变位点,均为错义突变;最常见的突变位点为T178G/A（D29E）,突变频率为56.00%,T178G/A突变在不同分化程度、不同分期、不同肿瘤大小及有无淋巴结转移组的分布频率差异无显著性（P〉0.05）。宫颈癌组织中HPV16 E7共测得4个突变位点,2个为错义突变;最常见的突变位点为A647G（N29S）,突变频率为68.09%,A647G在中分化及低分化组的突变频率分别为56.67%、88.24%,两组间突变频率差异有显著性（χ2=4.98,P〈0.05）;A647G在不同分期、不同肿瘤大小、有无淋巴结转移组的分布频率差异无显著性（P〉0.05）。结论青岛地区HPV16 E6基因T178G/A突变与宫颈癌的发生发展无关,HPV16 E7基因A647G突变与宫颈癌的分化程度呈负相关,可以作为评估宫颈癌恶性程度的指标。     

宫颈癌与人乳头瘤病毒16 E6、E7基因多态性相关性

目的探讨宫颈鳞状细胞癌HPV16 E6、E7基因突变的位点及发生频率。方法前瞻性研究宫颈鳞状细胞癌标本108例,癌临床分期Ⅰ期44例,Ⅱ-Ⅲ期39例,Ⅳ期25例;肿瘤分化为中高分化的87例,低分化21例;有淋巴结转移的19例,无淋巴结转移的89例。均确认为HPV16感染阳性标本,针对HPV16 E6、E7基因设计合成引物、PCR扩增、产物DNA纯化、测序、基因突变检测。结果 HPV16 E6 T178A/G和HPV16 E7A647G突变是HPV16 E6、E7基因的常见突变位点,突变例数分别为46例和63例,突变率为42.6%和63.9%,这两个突变位点的突变率分别与是否有淋巴结转移和肿瘤分化程度相关(P0.05),与肿瘤病理分期不相关(P0.05)。结论 HPV16 E6 T178A/G和HPV16E7A647G突变与是否有淋巴结转移和肿瘤分化程度有关,其相关检测可作为提示及评估宫颈癌严重程度的指标。     

120例高危HPVE6/E7mRNA检测结果分析

目的 分析高危人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA检测结果在宫颈病变的不同情况时的意义。方法 应用支链DNA技术检测宫颈脱落细胞和宫颈组织中的HPV E6/E7mRNA。结果 细胞学异常组阳性率显著高于细胞学正常组(P<0.05);宫颈癌前病变和宫颈癌之间阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 宫颈上皮的异常与高危HPV E6/E7mRNA的转录有关,在宫颈癌筛查中检测高危HPV E6/E7mRNA的转录具有临床应用价值。     

人乳头瘤病毒E6/E7在宫颈癌中的研究进展

正宫颈癌是世界上第3常见的妇科恶性肿瘤,在我国居女性生殖系统恶性肿瘤发病率第1位[1]。99%以上的宫颈癌患者伴有人乳头瘤病毒(HPV)感染[2],但是90%的HPV感染可以自行治愈,仅有5%左右的HPV感染会发展为持续性感染,且仅有持续的高危型HPV(HR-HPV)感染才能引起宫颈癌[3],所以早期筛选、诊断和治疗是预防和控制宫颈癌发病和死亡的关键[4]。目前,宫颈癌筛查的发     

HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的价值

目的:分析在宫颈癌筛查中HPV E6/E7 mRNA检测的意义。方法:统计2018年10月至2020年5月于安徽省妇幼保健院行HPV分型检测妇女的检测结果。将上述妇女中HPV分型检测结果为高危型阳性、TCT结果示宫颈炎及以上者的患者纳入研究。所有患者行HPV E6/E7 mRNA检测及阴道镜下宫颈组织活检。采用SPSS 23.0软件行数据分析。结果:2018年10月至2020年5月共有17 648名妇女于安徽省妇幼保健院行HPV分型检测,累计检出了3 877例HPV DNA感染(包括单一和多重感染),其中感染频率最高的前3种为HPV52(3.42%)、HPV16(3.33%)、HPV58(2.50%)。HPV检测结果为高危型阳性、TCT结果为慢性宫颈炎及以上的患者共有360例,其中HPV E6/E7 mRNA检测阳性的有195例,总阳性率为54.17%,包括宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ～Ⅲ组、宫颈癌组,阳性率分别为42.04%、54.55%、70.1 0%、75%。CINⅡ～Ⅲ组阳性率显著高于宫颈炎组及CINⅠ组,差异有统计学意义(P<0.05)。单独分析TCT结果为不典型鳞状...     

HPV-16 E7 but not E6 oncogenic protein triggers both cellular immunosuppression and angiogenic processes.

HPV-16 E6 and E7 oncoproteins impair the cell cycle in human uterine cervix carcinoma cells (HUCC) by acting on p53 and retinoblastoma proteins, respectively. We recently reported that E7 related into the extracellular compartment by HUCC SiHa cells could inhibit immune T-cell response to recall and alloantigens by a mechanism involving an overproduction of the immunosuppressive IFN alpha by antigen presenting cells (APCs). In this study, we found that besides E7, E6 protein and the vascular endothelium growth factor (VEGF) were released into the SiHa cell supernatants, and we further showed that extracellular E7 but not E6 oncoprotein 1) inhibits the immune cell response to recall and alloantigens, and 2) enhances the release of angiogenic cytokines, including TNF alpha, IL-1 beta and IL-6 by macrophages and/or dendritic cells. VEGF unexpectedly released by cancer cells could also contribute to angiogenesis. Thus in HUCC the same E7 oncoprotein which contributes to controlling the cancer cell cycle has the means in its extracellular configuration to contribute to microenvironmental immunosuppressive and angiogenic processes. Neutralizing anti-E7 antibodies either passively administered or induced by active immunization could represent a new immunotherapeutic endeavour to combat the immunosuppression and/or neoangiogenesis effects of extracellular E7 protein.     

Induction of human papilloma virus E6/E7-specific cytotoxic T-lymphocyte activity in immune-tolerant, E6/E7-transgenic mice

Despite promising preclinical results of various therapeutic anticancer immunization strategies, these approaches may not be effective enough to eradicate tumors in cancer patients. While most animal models are based on fast-growing transplantable tumors, malignancies in, for example, cervical cancer patients in general develop much more slowly, which may lead to immune suppression and/or immune tolerance. As a consequence, the immunomodulating signal of any therapeutic immunization regimen should be sufficiently potent to overcome this immunocompromised condition. In previous studies, we demonstrated that an experimental vaccine against human papillomavirus (HPV)-induced cervical cancer, based on Semliki Forest virus (SFV), induces robust HPV-specific cellular immune responses in mice. Now we studied whether this strategy is potent enough to also prime a cellular immune response in immune-tolerant HPV transgenic mice, in which CTL activity cannot be induced using protein or DNA vaccines. We demonstrate that, depending on the route of immunization, SFV-expressing HPV16 E6 and E7 indeed has the capacity to induce HPV16 E7-specific cytotoxic T cells in HPV-transgenic mice.     

HPV-16 E7负载的DC-CIK对宫颈癌细胞的杀伤效应研究

目的研究HPV-16 E7抗原肽负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞共培养Ag-DC-CIK对人宫颈癌细胞siha的杀伤效应。方法采集健康人外周血,分离提取单个核细胞(PBMC),分别诱导生成DC和CIK细胞,观察细胞形态,流式细胞仪检测DC摄取能力及其表面分子CD83、CD86和CIK细胞CD3、CD8、CD56的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白细胞介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)的水平。实验分为5组:效应细胞CIK、DC-CIK、Ag^1-DC-CIK、Ag^2-DC-CIK、Ag^M-DC-CIK,分别与靶细胞siha共培养,细胞计数试剂盒(CCK8)法检测效应细胞对siha活性的影响,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测效应细胞对siha的杀伤效应。结果DC成熟后,摄取能力减弱,CD86、CD83表达上调,上清液中IL-12水平增高;与DC共培养的CIK细胞,CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+细胞比例提高,分泌IFN-γ能力增强;与CIK细胞、DC-CIK组相比,Ag^1-DC-CIK、Ag^2-DC-CIK、Ag^M-DC-CIK组均表现出对siha细胞更强的杀伤效应。结论成功构建Ag-DC-CIK共培养体系,获得两组有效的HPV-16 E7蛋白抗原肽,为治疗宫颈癌提供了新思路。     

HPV38E6／E7对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的：明确 HPV38E6/E7感染对 HaCaT 细胞增殖和凋亡的影响。方法通过构建 pGCMV和pGCMV-HPV38E6/E7质粒,建立HaCaT稳定转染细胞系并进行鉴定;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果与对照组相比,转染HPV38E6/E7的HaCaT细胞增殖明显增加,S期细胞增多,凋亡减少,以上差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论 HPV38E6/E7对角质形成细胞增殖及凋亡的影响,可能是β-HPV引起非黑素瘤性皮肤癌发生的重要病理生理学基础。     

载脂蛋白E等位基因多态性对徐州地区高血压患者的影响

目的 探讨载脂蛋白E(ApoE)等位基因多态性对徐州地区高血压患者的影响.方法 选取徐州地区临床确诊的高血压患者97例作为高血压组,另选取106例非高血压患者作为对照组.应用PCR-荧光探针法对2组ApoE基因型分别进行检测并统计分析检测结果.结果 ApoE表型和ApoE等位基因频率在2组患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05).在高血压人群中,ε4等位基因携带者的收缩压较其他等位基因携带者高(P<0.05),而ApoE基因多态性对舒张压影响不大(P>0.05).结论 徐州地区ApoE表型和ApoE等位基因频率与高血压疾病无关,ApoE等位基因ε4可能是高血压发生、发展的危险因素.     

高危型人乳头状瘤病毒E6/E7mRNA检测对宫颈病变的诊断研究

目的探讨高危型人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA检测对宫颈病变的诊断价值。方法选择我院2019年3月-11月接诊的疑似宫颈病变患者,筛选163例患者,采用电脑随机分组的方式,163例分为81例对照组以及82例研究组,对照组接受高危型人乳头瘤病毒(human papollomavirus,HPV)DNA检测,研究组患者均接受高危型人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA检测,对比两组患者的检测准确率。结果研究组慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)I型宫颈癌诊断准确率均高于对照组,有统计学意义(P<0.05);研究组与对照组在CIN Ⅱ型、CIN Ⅲ型诊断准确率上虽无统计学意义,但是研究组的准确率高于对照组。结论对于疑似宫颈病变的患者而言,接受高危型人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA检测,不仅能够有效的判断疾病的类型,且诊断准确率较高,值得推广。     

HPV E6／E7 mRNA 检测在葫芦岛地区宫颈癌筛查中的应用

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA 检测在宫颈癌筛查中的应用。方法选取于该院妇科治疗的160例患者的超薄液基细胞学检查（thin prep cytology test,TCT）标本,根据患者的检查结果将其分为4个组：正常组（32例）、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ组（44例）、CINⅡ组（67例）、CINⅢ组（17例）。除了 CIN 分级外,又根据不同的病理学类型对患者进行分组。在不同的组别中,比较 HPV E6/E7 mRNA 检测和 HPV DNA 检测阳性率的差异;并比较不同病理学分组间 HPV E6/E7 mRNA 和HPV DNA 水平的差异。结果在不同 CIN 分级的患者及对照组人群中,HPV E6/E7 mRNA 和 HPV-DNA 的阳性率比较,差异均有统计学意义（P ＜0．05）。对不同病理学分组间 HPV E6/E7 mRNA 和 HPV DNA 水平进行比较,差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论在宫颈癌的筛查中 HPV E6/E7 mRNA 检测可以作为筛选手段之一,该项检测和细胞学检测联合运用有助于诊断准确性的提高。