工频磁场对细胞缝隙连接通讯功能的影响

为了探讨极低频（ＥＬＦ）磁场可能存有的促癌作用或协同促癌作用，观察了５０Ｈｚ磁场对ＣＨＬ细胞间缝隙连接通讯（ＧＪＩＣ）功能的影响。利用离子电渗注射法将荧光染料引入细胞内，以５分钟后的荧光偶合细胞（ＤＣＣ）数作为ＧＪＩＣ功能的指标。研究了不同浓度的十四酰基咐拜醇酯（ＴＰＡ）、不同强度的工频磁场及工频磁场与ＴＰＡ（５ｎｇ／ｍｌ）共同作用对ＣＨＬ细胞ＧＪＩＣ的影响。结果表明，ＴＰＡ对ＧＪＩＣ的抑制具有浓度依赖关系，ＴＰＡ抑制ＣＨＬ细胞ＧＪＩＣ的阈浓度在１～５ｎｇ／ｍｌ之间；ＣＨＬ细胞经０.８０ｍＴ的工频磁场暴露２４小时后的ＤＣＣ数降至６．０８±１．５９，与空白对照组（９．８４±２．２７）比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；０．２０，０．４０，０．８０ｍＴ强度的工频磁场与５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ共同作用后的ＤＣＣ数分别降至５．５２±１．５３，５．００±１．２２，４．００±１．２９，与单用５ｎｇ／ｍｌＴＰＡ组（６．３８±１．３９）比较，差异也有显著性（Ｐ＜０．０５）。说明一定强度的工频磁场具有抑制或协同抑制ＧＪＩＣ的作用，提示其可能存有促癌或协同促癌作用。     

四氯乙烯对人原代角质形成细胞的细胞毒性作用

[目的]研究体外培养条件下有机溶剂四氯乙烯(perchloroethylene,PERC)对正常人表皮角质形成细胞(normalhumanepidermiskeratinocyte,NHEK)的细胞毒性作用。[方法]用0.25%的胰蛋白酶经冷温两步消化皮肤,分离得到NHEK,进行体外无血清培养;用中性红吸附试验(NRU)测定PERC对NHEK的中性红吸附减少50%的浓度(NR50值),并据此确定PERC细胞毒性试验的染毒剂量;测定乳酸脱氢酶(LDH)活力反映其对细胞膜的损害,测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力反映细胞脂质过氧化作用。[结果]PERC可引起NHEK细胞活力剂量依赖性降低,PERC对NHEK的NR50值为2.16mmol/L(95%可信区间为1.27~3.07);0.05、0.10、0.20、0.40、0.80mmol/LPERC处理NHEK1、2、3、4h后,LDH的释放呈明显剂量-反应和时间-反应关系;以上浓度的PERC处理NHEK4h,可引起MDA含量增加和SOD活力抑制,且均显示剂量-反应关系,与空白对照组、溶剂对照组相比,引起差异有显著性的最低浓度分别为0.20mmol/L(MDA升高)和0.10mmol/L(SOD降低),均为P<0.05。[结论]在体外培养条件下,PERC可能通过氧化应激和脂质过氧化作用对人角质形成细胞产生细胞毒性作用。     

极低频磁场对细胞缝隙连接通讯功能影响的超微结构观察

50Ｈｚ连续或脉冲磁场对培养细胞的细胞缝隙连接通讯(ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ,ＧＪＩＣ)功能影响的研究表明 ,0 .4ｍＴ以上强度的磁场具有抑制ＧＪＩＣ功能的作用 ,该作用与磁场强度及辐照时间相关 ,具有剂量 -效应关系 ,脉冲磁场抑制效应较正弦磁场强[1 3 ] 。我们在已往实验的基础上 ,应用透射电子显微镜 (ＴＥＭ)及计算机图像分析系统进一步观察在 0 .8ｍＴ、5 0Ｈｚ脉冲磁场辐射 2 4ｈ的条件下 ,极低频磁场对ＧＪＩＣ功能影响的超微结构变化。一、材料与方法1 磁场辐射系统 :…     

砷对人皮肤角质形成细胞抗氧化能力影响

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO₂)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)抗氧化能力的影响。方法 用流式细胞仪检测细胞内二氯荧光素(DCF)的荧光强度;用改良硫代巴比妥酸荧光法测定细胞内丙二醛(MDA)含量;用Nitrite-kit法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;用紫外速率直接法测定过氧化氢酶(CAT)的活性。结果 各实验组(2.5,5,10和20μmol/LNaAsO₂)的DCF荧光强度均显著增高(P<0.05),分别是对照组的1.3,1.6,1.7和1.8倍;各实验组的MDA含量显著增高(P<0.05),分别是对照组的1.1,1.4,1.5和2.2倍;10和20μmol/LNaAsO₂组SOD活性显著下降,分别为对照组的78%和61%;10和20μmol/LNaAsO₂组SIOD和CAT活性显著下降,分别为对照组的50%和34%。结论 砷可以引起人皮肤细胞的氧化损伤,降低抗氧化能力。     

三氯乙烯对角质形成细胞线粒体功能和形态的影响

目的探讨三氯乙烯（TCE）对皮肤细胞的毒性机制。方法以不同浓度（0．125、0．500和2．000mmol／L）TCE处理体外分离培养的正常人角质形成细胞（KC），同时设培养基对照组和体积分数为1％的丙酮对照组，然后：（1）分别进行四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）试验和ATP酶活力测定来检测细胞毒性和线粒体的代谢变化；（2）采用罗丹明123染色方法，借助流式细胞仪检测线粒体膜电位变化情况；（3）通过透射电子显微镜观察线粒体形态学的改变。结果TCE染毒后，细胞活力随着时间延长和剂量的增加而减小，线粒体酶活力抑制率增加，ATP酶活力减小；线粒体膜电位水平从染毒开始到8h迅速下降2．000mmol／LTCE染毒8h后Rh123荧光强度（8．20±0．66）与对照组（18．73±0．45）相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；8h以后则变化不大，12和24h Rh123荧光强度与8h组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），线粒体膜电位随染毒剂量的增加呈明显的剂量-效应关系。电镜下可见，TCE处理组线粒体出现肿胀，空泡变性，基质减少，部分嵴消失，对照组线粒体结构完整，基质分布均匀，可见线粒体嵴。结论TCE可以导致KC线粒体功能和形态发生明显改变，这些变化在TCE诱导的KC毒性中具有重要的意义。     

工频磁场抑制细胞缝隙连接通讯功能的机制探讨

目的　研究工频磁场抑制细胞缝隙连接通讯（ ＧＪＩＣ） 功能的可能作用机制。方法　中国仓鼠肺成纤维（ ＣＨＬ） 细胞受０ ．８ ｍ Ｔ５０ Ｈｚ 脉冲磁场作用２３ 小时后,加入不同浓度的蛋白激酶Ｃ（ ＰＫＣ）抑制剂———斯特罗斯孢啉（ Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ,ＳＴＳ） 或十六酰基肉毒硷（ ＰａｌｍｉｔｏｙｌＤＬｃａｒｎｉｔｉａ ,ＰＭＣ） 共同作用１ 小时,中止作用后,用微注射方法检测ＧＪＩＣ 功能。结果　５０ Ｈｚ 脉冲磁场对ＧＪＩＣ 的抑制作用能被ＳＴＳ或ＰＭＣ 所拮抗,拮抗程度与 ＳＴＳ 或ＰＭＣ 的浓度有关,当ＳＴＳ、ＰＭＣ 分别达到１０ ｎｍｏｌ／ Ｌ、１０μｍｏｌ／ Ｌ 时,ＧＪＩＣ 功能恢复至（８ ．７１ ±１ ．０７） 个、（９ ．００ ±１ ．０７） 个,接近于辐照前水平（１０ ．０１ ±２ ．０１） 个。结论　工频磁场抑制ＧＪＩＣ 与ＰＫＣ 激活有关。     

三氯乙烯对人原代角质形成细胞的细胞毒作用

目的研究体外培养条件下有机溶剂三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)对正常人表皮角质形成细胞(normal human epidermal keratinocyte,NHEK)的毒性作用。方法用0.25%的胰蛋白酶经冷温两步消化皮肤,分离得到NHEK,进行体外无血清培养;根据中性红吸附试验测定的NR50结果,确定TCE染毒剂量。测定乳酸脱氢酶(LDH)活力,反映其对细胞膜的损害,测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,反映细胞脂质过氧化作用。结果TCE可引起NHEK细胞活力剂量依赖性降低,TCE对NHEK的NR50值为4.525 mmol/L(3.922~5.128 mmol/L);NHEK细胞用0.125,0.250,0.500,1.000,2.000 mmol/L的TCE处理1,2,3,4 h后,LDH的释放显示明显的时间-剂量-反应关系;同样剂量的TCE处理NHEK,4 h后可引起MDA含量呈浓度依赖性增加(最低浓度为0.500 mmol/L),SOD活力呈浓度依赖性抑制(最低浓度为0.250 mmol/L),与空白对照和溶剂对照组相比较,两者差异均有显著性(P<0.05)。结论在体外培养条件下,有机溶剂三氯乙烯可通过脂质过氧化和氧化应激作用对人角质形成细胞产生明显的细胞毒作用。     

镉对中国仓鼠成纤维细胞活力和缝隙连接通讯功能的影响

目的　探讨致癌物镉对中国仓鼠肺成纤维细胞（Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒａｂｌａｓｔｓ,ＣＨＬＦ） 缝隙连接通讯（ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍ ｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ,ＧＪＩＣ） 功能的影响。方法　细胞毒性实验采用常规的噻唑蓝（ ＭＴＴ） 法,同时观察显微镜下细胞形态的变化。细胞ＧＪＩＣ 水平用划痕标记染料示踪（ＳＬＤＴ）技术测定。结果　ＣｄＣｌ２ 染毒２４ 小时和１２ 小时对ＣＨＬＦ 活力的半数抑制浓度ＩＣ５０ 分别为２０ ．８ μｍｏｌ／Ｌ和０ ．１５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ。ＣｄＣｌ２ 在不产生明显细胞毒性的浓度下即可抑制ＣＨＬＦ 的ＧＪＩＣ 功能,该作用具有一定的剂量时间效应关系。细胞持续接触低浓度ＣｄＣｌ２ 一定时间后,受抑的ＧＪＩＣ 有恢复倾向,而在出现明显细胞毒性的情况下,ＧＪＩＣ 抑制是不可逆的。结论　ＧＪＩＣ 功能抑制可能在镉化合物致癌过程中起了一定的作用。     

三种氯代烯烃对人角质形成细胞的细胞毒性作用

目的　探讨三氯乙烯(trichloroethylene ,TCE )、四氯乙烯(perchloroethylene ,PCE )和二氯乙烯(dichloroethylene ,DCE)对人角质形成细胞(keratinocyte ,KC)的细胞毒性作用以及其时间 剂量 效应关系。方法　利用中性红吸收(neutralreduptake ,NRU)试验测定TCE、PCE和DCE对人KC的中性红半数吸收浓度(5 0 %neutralreduptake ,NR50 ) ,用乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase ,LDH)释放试验研究三者对人KC细胞毒作用,并探讨其时间 剂量 效应关系。结果　TCE、PCE和DCE对人KC的NR50 分别4 .5 3mmol/L、2 . 16mmol/L和5 . 5 7mmol/L ,LDH释放试验表明三者对人角质形成细胞具有明显的细胞毒作用,且具有时间 剂量 效应关系。结论　TCE、PCE和DCE都对人KC具有细胞毒性,且PCE >TCE >DCE。这可能与三者对人KC的细胞膜损伤有关。     

三氯乙烯和四氯乙烯对体外培养人皮肤角质形成细胞脂质过氧化的影响

目的探讨有机溶剂三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)、四氯乙烯(perchloroethylene,PCE)对体外培养的皮肤角质形成细胞(keratinocyte,KC)的脂质过氧化的作用。方法利用中性红吸附(neutral red uptake,NRU)实验确定TCE和PCE对人KC的中性红半数吸收浓度(50%neutral red uptake,NR50),并根据此确定染毒浓度。分别使用2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mmol/L的TCE或0.8、0.4、0.2、0.1、0.05 mmol/L的PCE对体外培养的人KC染毒4 h,利用MDA、SOD和ROS试剂盒测定细胞中MDA、SOD和ROS水平。结果TCE、PCE对人KC的NR50分别为4.53 mmol/L和2.16 mmol/L。经不同浓度TCE、PCE作用4 h后,细胞内MDA水平和ROS水平随TCE或PCE浓度增加呈上升趋势,而SOD活性呈下降趋势,与溶剂对照组相比较差异有显著性,且存在浓度-反应关系。结论TCE、PCE对人KC有氧化损伤作用。     

二氧化硅刺激肺成纤维细胞间隙连接功能下调的研究

目的　探索矽肺发病过程中二氧化硅(SiO     

几种植物雌激素对细胞间隙连接通讯的影响

目的 了解植物雌激素对细胞的细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响。方法 用荧光漂白后恢复技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察典型的植物雌激素(槲皮素、染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)对正常人皮肤角质形成细胞株(HaCaT细胞)GJIC的影响。结果 不同种类的植物雌激素在不同浓度下对GJIC的影响不完全相同。槲皮素在0．1—10．0μmoly/L浓度下对HaCaT细胞的GJIC功能无明显影响。染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂在0．1—10．0μmob/L浓度下,能不同程度地抑制GJIC功能,荧光恢复率为31．77％-37．06％,显著低于溶剂对照组(44．74％)。结论 除黄酮类槲皮素外,常见的植物雌激素(染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)在人体可能达到的血清浓度下,对HaCaT细胞的GJIC功能都有不同程度的抑制,提示在一定条件下可能有促癌作用。因此,将其用作药品或保健食品时应该慎重。     

无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响

目的 探讨无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。方法 采用细胞划痕染料标记示踪技术,以荧光染料在细胞间的扩散作为评价缝隙连接通讯的指标,观察亚砷酸和砷酸对原代培养的人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。结果 亚砷酸可显抑制人皮肤成纤维细胞间荧光黄染料的扩散,在0．005-5．0μmol／L浓度范围内有明显的剂量依赖关系。砷酸也可明显抑制荧光黄染料在人皮肤成纤维细胞间的扩散,但剂量依赖关系不明显。进一步的研究发现,亚砷酸可显增高人皮肤成纤维细胞胞膜和胞浆蛋白激酶C的活性,其中对胞膜蛋白激酶C活性的作用更为明显。结论 无机砷可显抑制人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯,提示它们在癌症发生的促长阶段扮演重要角色。无机砷对细胞缝隙连接通讯的抑制可能与其引起细胞内蛋白激酶C的异常活化有关。     

噪声磁场阻断工频磁场对佛波酯的协同抑制效应

目的　研究噪声磁场对低强度工频磁场诱导或增强致癌物 12 氧 14 酰佛波 13酯(TPA)对细胞缝隙连接通讯功能 (GJIC)抑制作用的干预。方法　NIH3T3小鼠成纤维细胞分别受5 0Hz 0 2mT、0 2mT TPA极低频磁场或 (和 )同等强度的噪声磁场作用 2 4h后 ,采用激光共聚焦显微镜 ,用荧光漂白后恢复技术测定细胞的GJIC功能。结果　 0 2mT工频磁场与TPA可协同抑制GJIC功能 ,其荧光恢复率为 (2 3± 11) % ,与对照组的 (46± 19) %及TPA组的 (34± 17) %比较 ,均差异有非常显著性 ;当叠加 0 2mT噪声磁场后 ,荧光恢复率为 (35± 19) % ,可显著拮抗 0 2mT磁场对TPA的协同抑制作用。结论　 0 2mT噪声磁场可以阻断同等强度磁场协同TPA抑制细胞GJIC的作用。     

SiO2刺激肺泡上皮细胞间隙连接功能下调的研究

目的探索矽肺发病过程中,SiO2对肺泡上皮细胞增殖和间隙连接通讯功能(GJIC)的影响.方法不同剂量的SiO2刺激SD大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)培养上清液,作用于正常貂肺泡上皮细胞株CCL-64细胞.用四唑盐(MTT)法测定CCL-64细胞增殖(以A570nm值表示);采用激光扫描共焦显微镜(LSCM,LeicaTCS SP)用荧光光漂白后再恢复(FRAP)技术测定CCL-64细胞GJIC功能[以荧光扩散率K(×10-3/s)]表示.结果体积分数为5%的SiO2刺激的PAM上清液能诱导CCL-64细胞增殖(F=9.679,P＜0.01),并抑制CCL-64细胞间GJIC功能(F=20.587,P＜0.01).在50～500 μg/mlSiO2范围内,随SiO2浓度增加,两者均呈良好的剂量依赖性关系(GJICr=-0.943,P＜0.05;增殖r=0.891,P＜O.05).结论SiO2刺激PAM培养上清液可以抑制肺泡上皮细胞的GJIC功能,并诱导细胞增殖.推论肺泡上皮细胞GJIC功能下调在SiO2介导的肺泡上皮组织损伤中有重要的作用.     

丙烯腈对中国仓鼠肺细胞细胞活力和间隙连接通讯功能的影响

目的：探讨丙烯腈（ACN）对中国仓鼠肺细胞（CHL）细胞活力及细胞间隙连接通讯（GJIC）功能的影响。方法：镜下观察细胞形态学改变,采用MTT法测定细胞生长半数抑制浓度（IC50）,应用荧光染料示踪技术观测ACN对CHL细胞GJIC的影响。结果ACN染毒12和24h,细胞生长IC50分别为435．73和251．09μg/ml。低剂量组（12．5和25．0μg/ml）细胞形态与对照组相比无明显改变,较高剂量组（50．0－200．0μg/ml）细胞轻度受损（0－Ⅰ级）,高剂量组（800．0μg/ml）细胞明显受损（Ⅲ级）。ACN原形在无明显细胞毒辣性剂量（10．0－50．0μg/ml）时即可抑制GJIC,并呈持续抑制作用,存在剂量－效应和时间－0效应关系。ACN经代谢活化后,可加重对细胞GJIC的抑制作用和细胞受损程度,但在染毒12h后停止接触,该作用在一定程度上可逆转,牛磺酸作为一种重要的抗氧化剂,预处理细胞（牛磺酸剂为10和20mmol/L)可明显抑制ACN对细胞GJIC的下调作用。结论ACN在较高剂时对CHL人有毒性作用,但在无明显细胞损伤剂量时即明显抑制细胞GJIC功能,该抑作用停止接触ACN或有抗氧化剂存在可逆转,提示氧化应激在ACN所致细胞GJIC功能下调中具有重要作用。     

甲基对硫磷对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯和孕酮分泌的影响

目的 探索甲基对硫磷(methyl parathion,MP)对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯(gapjunctional intercellularcommunication,GJIC)和孕酮分泌的影响.方法 体外培养5周龄SPF级BALB/c小鼠黄体细胞,分别设MP暴露组(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L的MP处理3h)和GJIC促进剂——1 μmol/L异丙肾上腺素预处理组及蛋白激酶A(PKA)专一抑制剂——10 μmol/L H89预处理组与蛋白激酶C(PKC)专一抑制剂——10 μmol/L恩扎妥林预处理组(预处理5 min,0.8 mmol/L MP处理3h).采用ELISA法检测培养液中孕酮含量,划痕标记染料转移法测定贴壁细胞的GJIC.结果 高浓度(0.2～1.6 mmol/L)MP可明显抑制小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌(P＜0.05);异丙肾上腺素、H89和恩扎妥林均能缓解MP对体外小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌的抑制作用(P＜0.05).结论 MP可通过抑制小鼠黄体细胞的GJIC导致孕酮分泌受抑制,而PKA与PKC参与该过程.     

甲基丙烯酸环氧丙酯对细胞间隙连接通讯的影响

为探讨甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）诱导细胞转化的机理,选用划痕染料示踪技术（ＳＬＤＴ０初步研究了ＧＭＡ对人胚肺成纤维细胞间隙连接通讯（ＧＪＩＣ）的影响。用０．;５,２．５和５．０ｍｇ／Ｌ的ＧＭＡ给细胞染毒１２ｈ,经划痕导入荧光黄染料并测定各组细胞中该荧光染料向其相邻细胞扩散的程度。结果表明,在染毒剂量及时间范围内,ＧＭＡ对人胚肺成纤维细胞ＧＪＩＣ产生较强的抑制作用,呈良好的剂量－效应关系。     

Astaxanthin diminishes gap junctional intercellular communication in primary human fibroblasts

Astaxanthin is a carotenoid found in plants and algae; it provides the color of marine seafood such as salmon, lobster, or shrimp. Carotenoids are antioxidants and exhibit other biological functions, including effects on gap junctional communication important for homeostasis, growth control, and development of cells. Cancer cells have an impaired gap junctional intercellular communication. The objective of the present study was to determine the effects of astaxanthin and canthaxanthin on gap junctional intercellular communication in vitro. Primary human skin fibroblasts were exposed to carotenoids from 0.001 to 10 micromol/L, and gap junctional communication was measured with a dye transfer assay. After incubation with canthaxanthin for 24 and 72 h, intercellular communication increased, whereas it was strongly diminished by astaxanthin at levels > 0.1 micromol/L. Inhibition was reversed when astaxanthin was withdrawn. Western blot analysis showed that after exposure to canthaxanthin, the amount of the gap junction protein connexin43 was increased. Incubation with astaxanthin led to a change in the phosphorylation pattern of connexin43, shifting from higher to lower phosphorylation states. We suggest that astaxanthin affects channel function by changing the phosphorylation pattern of connexin43.