不同培养因素对蝉花培养物中麦角甾醇的影响

目的 建立HPLC法对不同培养阶段及不同培养基培养的蝉花培养物中麦角甾醇水平进行测定。方法 建立麦角甾醇HPLC检测方法,应用Agilent Eclipse XDB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相为100%甲醇,等度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;进样量10 μL;检测波长281 nm;外标法测定麦角甾醇水平。对液体、固体培养基不同培养阶段,假单胞菌选择培养基（PSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDAY,1 000 mL中含葡萄糖量分别为20、30、40 g）,以及包括江苏农垦、烟农24、烟农15和济麦22在内的固体培养基培养的蝉花培养物中麦角甾醇的水平进行测定,利用SPSS 16.0统计软件对测定结果进行多重统计分析,验证并找出引起差异的原因。结果 建立的HPLC法,麦角甾醇分离度良好,精密度、稳定性、重复性的RSD分别为0.30%、0.07%、1.37%,加样回收率为104.3%,实验重现性、耐用性良好,均符合要求,可用于蝉花培养物中麦角甾醇的检测;液-固不同培养阶段麦角甾醇生长曲线的表现特征不同;不同培养基培养的蝉花培养物中麦角甾醇水平差异显著,斜面培养基中,随着葡萄糖量的增加,麦角甾醇水平增加;固体培养基济麦22和烟农15的麦角甾醇的水平显著高于烟农24和江苏农垦。结论 液-固培育阶段麦角甾醇的生长曲线特征不同,且对于培养基具有一定的选择性,为人工蝉花培养工艺的确定及优化提供了依据,也为针对性的药物开发奠定基础。     

冬虫夏草及其虫草菌粉中核苷类成分的HPLC测定

采用反相高效液相色谱法、SpherisorbC18柱，甲醇-pH4．0磷酸盐缓冲液（10∶90）为流动相，检测波长258um，测定冬虫夏草、发酵虫草菌粉与虫草头孢菌粉中尿苷、鸟苷及腺苷的含量。平均回收率为96．1％～99．1％；此方法简便、准确、重现性好。     

天然与发酵培养冬虫夏草中核苷类成分的含量及其变化

目的比较天然和人工培养冬虫夏草中核苷类成分的含量,并考察其变化.方法用高效毛细管电泳法测定天然和人工冬虫夏草中核苷类成分的含量;考察湿热对冬虫夏草中核苷类成分含量的影响.结果人工冬虫夏草的核苷含量明显高于天然冬虫夏草;新采集的天然冬虫夏草中核苷类物质含量极低,而采集日久者核苷类成分含量较高;湿热可明显增加天然冬虫夏草中核苷类物质的含量,但对人工冬虫夏草中核苷类成分的含量无明显影响.结论天然和人工冬虫夏草中核苷类成分存在一定差异,天然冬虫夏草中核苷类物质可能主要来源于大分子核苷(酸)的降解.     

UPLC法测定西洋参不同部位中8个核苷类成分

目的:建立超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-PDA)法同时测定西洋参中鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2’-脱氧鸟苷、β-胸苷、腺苷8个核苷类成分,并对山东省威海市7个地区11批西洋参不同部位的核苷含量进行测定,以期为西洋参质量控制与评价提供科学依据。方法:采用Acquity UPLC HSS T₃(100 mm×2.1 mm, 1.8μm)色谱柱,流动相为水-乙腈,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长为260 nm,进样量2μL。结果:8个核苷的质量浓度在1.00～200.00μg·mL^-1范围内线性良好,相关系数均>0.999 6,平均加标回收率为98.1%～99.9%,RSD范围为1.2%～2.6%,灵敏度、准确度及精密度均符合要求。山东省威海地区西洋参芦头、须根和主侧根部位样品核苷含量分别为2 556.18、1 829.93和1 100.67 mg·kg^-1,结果具有显著性差异(P<0.05)。结论:该方法可用于西洋参中核苷含量测定及不同部位的...     

HPLC法测定冬虫夏草中核苷类成分的含量

目的建立用HPLC法测定不同方法(熏干、新鲜和阴干)处理冬虫夏草样品中核苷类成分(腺苷、尿苷、肌苷、鸟苷和胸苷)含量的方法。方法样品用纯化水超声提取,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,柱温:30℃,流速:1.0mL·min-1。结果虫草中含有的5种核苷标准曲线的相关系数均在0.999 0以上,精密度检测RSD值为0.31%~1.95%(n=5),重复性检测RSD值为0.50%~2.56%(n=5),回收率在99.46%~100.11%之间。结论该方法灵敏、简便、快速、准确、重复性好,能有效测定虫草中核苷类成分的含量,可为评价虫草的质量提供依据。     

RP-HPLC法同时测定熟地黄中5个核苷类成分的含量

目的:建立同时测定熟地黄中次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷5个核苷类成分的RP-HPLC法。方法:采用Dia-monsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.04 mol·L-1磷酸二氢钾溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm;柱温30℃。结果:次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷浓度分别在1.0～16.0μg·mL-1(r=0.9999)、5.0～80.0μg·mL-1(r=0.9999)、1.0～16.0μg·mL-1(r=0.9997)、1.25～20.0μg·mL-1(r=0.9999)、1.0～16.0μg·mL-1(r=0.9999)范围内线性良好。加样回收率为98.1%～101.0%。结论:该方法可以用于熟地黄中次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷的含量测定。     

宁心宝胶囊中5种核苷类成分的RP-HPLC定量分析

目的:测定与分析宁心宝胶囊中5种核苷类成分的含量。方法:采用 RP-HPLC 法,色谱条件:Lichrospher C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇-0.05 mol·L~(-1)磷酸二氢钾溶液(8:92),流速为1.0 mL·min~(-1);检测波长为260 nm;柱温:25℃。结果:尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷5个成分进样量分别在0.008～0.128μg,0.126～1.900μg,0.008～0.119μg,0.043～0.649μg,0.080～1.212μg范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9998～1.000,平均回收率(n=9)为95.0%～103.8%;RSD 均小于3.0%。结果:利用建立的 RP-HPLC 方法,测定26个企业生产的68批宁心宝胶囊中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷和腺苷的含量分别为0.01～0.03,0.95～2.15,0.01～0.05,0.61～1.57,0.63～1.57 mg·粒~(-1)。结论:本法灵敏度高,重复性好,提取方法与色谱条件均较简单,能有效鉴别并测定宁心宝胶囊中5种主要核苷类成分的含量。     

宁心宝胶囊指纹图谱研究及4种核苷类成分的含量测定

摘 要 目的： 研究宁心宝胶囊的HPLC指纹图谱,并建立同时测定宁心宝胶囊中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、腺苷含量的方法。方法: 采用Agilent Zorbax SB Aq C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,甲醇 0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^-1,检测波长为212 nm（指纹图谱）、260 nm（含量测定）,柱温为30 ℃。对10 批宁心宝胶囊进行了指纹图谱及含量测定研究,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件进行分析。结果: 建立了宁心宝胶囊的HPLC 指纹图谱,标定了10个共有色谱峰。4种核苷类成分的分离度良好。结论:此方法简便、可靠,指纹图谱结合含量测定可以更好地控制宁心宝胶囊的内在质量。     

薄盖灵芝发酵菌丝体中主要核苷及其碱基的反相高效液相色谱测定

本文报道用反相高效液相色谱法测定薄盖灵芝发酵菌丝体中主要核苷及其碱基的含量。菌丝体用50%乙醇超声提取,脱脂后通过十八烷基键合相柱,用磷酸盐缓冲液(pH 6.98)—四氢呋喃(100:1)为流动相,对甲基苯磺酸为内标,峰面积内标法定量。方法灵敏、快速、重现性好,与薄层紫外法比较结果一致。     

RP-HPLC同时测定暗紫贝母中10个核苷及碱基类成分的含量

目的:建立RP-HPLC-DAD同时测定暗紫贝母药材中5个核苷类活性成分(尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、肌苷)及5个游离的碱基(腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶)含量的方法。方法:采用Agilent Zorbax Bonus-RP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇和水,梯度洗脱,流速1 mL·min-1;检测波长260 nm;柱温30℃。结果:胞嘧啶、尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷、腺嘌呤、肌苷、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶的质量浓度分别在1.78～56.80 mg·L-1、1.84～59.00 mg·L-1、1.58～50.60 mg·L-1、1.73～55.30 mg·L-1、1.78～57.10 mg·L-1、1.63～52.10 mg·L-1、1.79～57.20 mg·L-1、1.80～57.70 mg·L-1、1.63～52.30 mg·L-1、1.63～52.30 mg·L-1范围内与峰面积呈良好线性关系,平均回收率为97.7%～103.2%,RSD≤2.2%。结论:建立了RP-HPLC-DAD同时测定暗紫贝母药材中10个核苷及碱基类成分含量的方法,该方法简单,重复性好,准确可靠;暗紫贝母药材中鸟苷、尿苷、胸苷、腺苷含量较高;青海久治、大通产暗紫贝母药材中核苷含量均高于四川松潘;青海2个产地比较,大通产暗紫贝母药材中核苷含量又明显高于久治。     

冬虫夏草人工繁育品、野生品及亚香棒虫草中氨基酸比较

目的：比较冬虫夏草人工繁育品、野生品与亚香棒虫草中水解和游离氨基酸的含量。方法：采用氨基酸分析仪测定冬虫夏草人工繁育品、野生品以及亚香棒虫草中17种氨基酸的含量。结果：冬虫夏草人工繁育品的水解氨基酸含量为16.776%~19.080%,野生冬虫夏草为14.857%~21.959%,亚香棒虫草为13.043%~14.933%。冬虫夏草人工繁育品的游离氨基酸含量为1.767%~2.373%,野生冬虫夏草为1.753%~2.521%,亚香棒虫草为2.856%~3.197%。结论：冬虫夏草人工繁育品和野生品中氨基酸含量基本一致,和亚香棒虫草有显著性差异。本研究为冬虫夏草的鉴别及人工繁育品的进一步开发利用提供科学依据。     

蝉花孢梗束的毒性研究

目的 对人工培植的蝉花孢梗束进行毒理学研究,评价其口服安全性。方法 利用急性毒性试验、体外中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验、骨髓细胞微核试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验和孕鼠致畸试验进行毒理学评价。结果 急性毒性试验结果表明蝉花孢梗束对雌、雄大鼠急性经口最大耐受量（MTD）均>10 g/kg,属于无毒级;中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验、骨髓细胞微核试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验以及3项遗传毒性试验的结果皆为阴性,未显示致突变性;蝉花孢梗束各剂量组在大鼠孕期体质量、死胎率、吸收胎率与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05）,各剂量组胎鼠质量、胎鼠身长、前囟宽度与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05）;各剂量组在胎鼠外观、内脏发育、骨骼发育检查上与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05）。结论 在本研究条件下,未见蝉花孢梗束有急性毒性、遗传毒性,对孕鼠无致畸作用,具有良好的安全性。     

蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究

以5月和6月两个不同时段采集的分别产于青海省化隆县和四川省康定县的冬虫夏草(Cordyceps sinensis)新鲜子实体为材料，采用分子生物学方法，以rDNA-ITS序列为分子标记，对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)与冬虫夏草之间的关系进行了探讨。以真菌通用引物ITS1/ITS4分别对蝙蝠蛾拟青霉及冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA进行PCR扩增，获得的片段克隆到pMD18-T Vector上进行测序，结果表明，随机挑取的46个克隆与某些已在GenBank中注册的中国被毛孢(Hirsutella sinensis) 或冬虫夏草的rDNA-ITS序列的一致性均在99%以上，但与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列的一致性约为72%。根据蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列设计了两对特异引物，分别以不同产地及不同生长时期共4个批次的冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA为模板，进行PCR及巢式PCR扩增，均得到了相应片段，该片段与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列具有100%的一致性。在GenBank中注册号为AB067740的另一个标明为冬虫夏草的rDNA-ITS序列与注册号为AJ309353的中国被毛孢的rDNA-ITS序列一致性仅为87.3%，但根据AB067740序列设计特异引物，也从冬虫夏草基因组DNA中扩增到其相应序列。研究结果表明，在天然冬虫夏草中除了中国被毛孢之外，还普遍存在着蝙蝠蛾拟青霉等内寄生菌。     

发酵虫草菌粉指纹图谱研究

目的通过对发酵虫草菌粉指纹图谱的深入研究,为发酵虫草菌粉类产品的质量提高提供思路。方法液质联用确定发酵虫草菌粉类产品(百令胶囊)指纹图谱中6个主色谱峰的化学成分;采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统,比较天然虫草和不同厂家发酵虫草菌粉指纹图谱相似度及不同干燥方式对指纹图谱的影响。结果百令胶囊指纹图谱中的6个主色谱峰成分为尿苷5-单磷酸、鸟苷酸、5’-腺嘌呤核苷酸、尿苷、鸟苷、腺苷。发酵虫草菌粉的指纹图谱与天然虫草均存在差异,其中百令胶囊的指纹图谱与天然虫草最接近。干燥方式对指纹图谱影响较大,采用沸腾干燥方式对应的指纹图谱主色谱峰的面积比最接近天然虫草晒干方式。结论指纹图谱可准确反映发酵虫草菌粉质量及质量控制方式的有效性。     

半夏药材中鸟苷和尿苷的含量测定及半夏指纹图谱研究

目的建立不同产地半夏的指纹图谱,对主要核苷类成分含量进行测定。方法采用Hanbon Science & Technolog Co.Ltd.色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,检测波长为254 nm,所得不同样品的指纹图谱用相似度评价软件进行分析。结果确定了10个共有峰,建立了半夏药材的指纹图谱。但各主要核苷类成分的含量有较大的差异,其中宜兴半夏的鸟苷、尿苷含量均为最高,达到0.061%和0.052%。结论该方法简单、快速、准确,可作为半夏质量控制的方法。     

冬虫夏草繁育品质量控制和药理活性研究进展

冬虫夏草为传统的名贵中药材,在中国有悠久的药用历史,具有补肾、益肺、止血、化痰的功效。近年来,冬虫夏草繁育品的研究获得突破,实现了冬虫夏草的大规模产业化繁育。冬虫夏草繁育品基原符合中国药典规定,与野生冬虫夏草相比,冬虫夏草繁育品不仅具有相似的化学成分和药理活性,还具有较低的重金属含量,安全性更容易控制。     

蛹虫草菌丝体多糖与子实体多糖体外免疫调节活性的研究

目的 分析蛹虫草菌丝体多糖（mycelia polysaccharides of Cordyceps militaris,MPS）与蛹虫草子实体多糖（polysaccharides from fruiting body of Cordyceps militaris,FPS）的体外免疫活性。方法 以RAW264.7细胞株为受试对象,从细胞增殖、中性红吞噬能力、NO释放水平角度系统考察不同浓度的MPS与FPS的免疫调节活性,并分析其量化关系。结果 MPS与FPS均可明显促进RAW264.7细胞株的增殖、对中性红的吞噬能力和NO释放水平,且均呈现出浓度依赖性的特征。二者对RAW264.7细胞株增殖的促进作用无显著性差异,但在免疫调节最佳作用浓度方面却存在一定差异,MPS在100μg·mL^-1时表现出最好的细胞吞噬能力,而FPS在200μg·mL^-1时表现出最高的细胞吞噬能力。结论 MPS与FPS均具有显著的体外免疫活性。     

不同培养基对北虫草氨基酸含量影响分析

目的比较小麦、大米两种培养基栽培的北虫草中氨基酸的含量差异。方法采用氨基酸自动分析仪对经盐酸水解北虫草进行分析。结果小麦培养基栽培的北虫草中氨基酸总量为20.431%,高于大米培养基栽培的北虫草中氨基酸总量;除个别氨基酸外,小麦培养基栽培的北虫草子实体中各种氨基酸的含量总体上都高于大米培养基栽培的北虫草子实体中各种氨基酸的含量。结论小麦作为培养基栽培的北虫草不仅质量好,而且成本低,故采用小麦作为培养基更具有优势。     

基于网络药理学和分子对接探讨冬虫夏草抗肿瘤的作用机制

目的 基于网络药理学方法和分子对接技术探究冬虫夏草抗肿瘤的作用机制。方法 利用TCMSP、CNKI、PubMed、Drugbank、Stitch和Swiss target prediction等平台检索冬虫夏草的化学成分和作用靶点;通过GeneCards、OMIM等数据库筛选肿瘤相关基因,运用Cytoscape 3.7.2构建冬虫夏草活性成分-靶点网络,通过String数据库对关键靶点构建网络互作(PPI)网络,并进行基因本体(GO)基因和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,最后利用AutoDock Vina软件和Pymol软件对药物有效活性成分和关键靶点进行分子对接验证。结果 共得到冬虫夏草22个化合物,86个抗肿瘤共同靶点,主要包括环加氧酶(PTGS)2、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、过氧化物酶体增生激活受体γ(PPARG)、胱天蛋白酶3(CASP3)、JUN基因等关键靶点。GO分析与KEGG通路结果显示,冬虫夏草抗肿瘤涉及到多种生物学过程以及PPAR、花生四烯代谢、5-羟色胺信号通路等多种信号通路。将关键化合物和靶点进行分子对接,提示冬虫夏草抗肿瘤可能的前5个主要活性成分11,14-二十碳二烯酸、花生四烯酸、黄豆黄素、胆甾醇和豆甾醇与关键靶点PTGS2、PTGS1、PGR、HMGCR和CNR1均能自发结合。结论 初步探讨了冬虫夏草抗肿瘤的主要活性成分、相关靶点及相关通路,发现冬虫夏草可以通过多成分、多靶点、多通路抗肿瘤,为后期实验验证提供了参考依据。