bcl—2、P53和p21基因蛋白在肝细胞癌中的表达及意义

目的：了解抑凋亡基因bcl-2、抑癌基因p53和癌基因p21基因蛋白在肝细胞癌（HCC）中的表达状况及意义。方法：用bcl-2、p53和p21基因蛋白抗体对55例肝细胞癌合并结节性肝硬变手术标本进行S－P免疫组化检测,分析基因蛋白表达率与病理分级和预后的关系。结果：bcl-2基因蛋白在HCC和结节性肝硬变中的表达率分别为72．7％（40／55）和36．4％（20／55）,两者存在差异（P＜0．05）;p53蛋白在HCC中表达率为54．5％（30／55）,而肝硬变组织均呈阴性表达,两者存在显著差异（P＜0．01）;p21蛋白在HCC和结节性肝硬变中的表达率分别为63．6％（35／55）和38．2％（21／55）,两者无差异（P＞0．05）;而bcl-2、p53和p21的表达率和表达强度均与HCC的病理分级无关（P＞0．05）。另外,在随访29例HCC患者中发现生存率短组（6个月至1年）的16例中,bcl-2、p53和p21的共同表达率为50％（8／16）。研究结果提示：HCC的发生、发展与bcl-2、p53和p21蛋白的异常表达或突变有关;bcl-2、p53和p21之间可能存在相互协同作用,对HCC的预后有一定的影响;bcl-2、p53和p21蛋白过度表达反应了HCC癌细胞的分化程度及增殖情况,因而可作为HCC诊断和预后的参考指标之一。     

p53、bcl—2基因在喉鳞癌中的蛋白表达及其临床意义

目的 探讨细胞凋亡相关基因p53,bcl-2与喉鳞癌的关系。方法 应用免疫组化ABC法对60例喉鳞癌和8例声带息肉标本中的p53,bcl-2基因的蛋白表达进行检测。结果 60例喉鳞癌中p53,bcl-2基因蛋白的表达阳性率均较高,分别为61．7％（37／60）和43．3％（26／60）,并且其阳性表达率与喉鳞癌的病理分化程度和预淋巴结转移有关（P＜0．05）。而与喉鳞癌的临床分期和分型无关（P＞0．05）。8例声带息肉标本的p53,bcl-2基因蛋白的表达均为阴性。结论 本实验从蛋白水平上证实了喉鳞癌与p53,bcl-2基因的关系,提示此两种基因可能参与了喉鳞癌细胞凋亡的调节,对喉鳞癌的发生可能起着重要的作用。     

宫颈癌中p53、p21WAF1/CIP1、MDM2的表达及其与HPV16感染的关系

目的：探讨子宫颈鳞状细胞癌中p53、p21^WAF1／CIP1、MDM2的表达及其与HPV16感染的关系。方法：采用免疫组化Envision二步法检测p53、p21^WAF1／CIP1及MDM2在43例子宫颈鳞状细胞癌、20例子宫颈上皮内瘤变（CIN）和15例正常对照组中的表达，高危HPV16DNA的检测应用原位杂交法。结果：HPV16、p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2在子宫颈癌中的阳性表达率分别为46．51％、34．88％、30．23％、25．58％；在CIN中的阳性表达率分别为45％、5％、60％、15％；HPV16在对照组中的阳性表达率为6．67％，p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2未见阳性表达。HPV16、p53、p21^WAF1／CIP1在3种不同组织中表达差异有统计学意义（P〈0．05），MDM2在3种不同组织中表达差异无统计学意义（P〉0．05）。p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2在子宫颈癌HPV阳性组和阴性组间表达差异无统计学意义（P〉0．05），p21^WAF1／CIP1蛋白表达与p53有关（P〈0．05），MDM2蛋白表达与p53无关（P〉0．05）。结论：在HPV16感染的子宫颈癌中，p53的转录功能仍然存在。     

大肠腺瘤及腺癌细胞凋亡与p53和bcl-2的表达

目的探讨大肠粘膜癌变中细胞增殖和凋亡的特征以及凋亡相关调控基因的表达。方法对60例大肠腺瘤．癌用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测PCNA增殖指数（proliferative index,PI）及bcl-2和p53蛋白的表达。另选大肠高分化腺癌和正常粘膜20例作为对照检测。结果①正常粘膜、腺瘤和腺癌的p53蛋白表达率为5％、33．3％和70％。三组间有显著的差异（P均〈0．05）。②正常粘膜、腺瘤和腺癌的bcl-2蛋白表达率分别为15％、70％和65％．腺瘤和腺癌组均高于正常对照组（P均〈0．01）,腺瘤与腺癌组间差异不显著（P均〉0．05）。③大肠腺瘤和腺癌细胞的凋亡指数（AI）均高于正常粘膜（P均〈0．01）,bcl-2和p53蛋白的表达率与细胞AI呈显著负相关（rs=-0．66,rs=-0．62）。结论凋亡和增殖在肿瘤的发生、发展、转化中起着重要作用,上述指标的联合检测可以作为临床早期判断人肠腺瘤癌变的重要参考指标。     

细胞凋亡调控因子-2、p53基因、细胞增殖因子-67、细胞角蛋白-7在腺性膀胱炎与膀胱上皮癌组织中表达的研究

目的：探讨细胞凋亡调控因子-2（bcl-2）、p53基因（p53）、细胞增殖因子-67（ki-67）、细胞角蛋白-7（ck-7）在腺性膀胱炎与膀胱上皮癌组织中表达的相关性。方法用免疫组化法检测46例腺性膀胱炎、21例膀胱上皮癌组织以及11例正常膀胱黏膜组织中bcl-2、p53、ki-67、ck-7的表达情况,并进行相关性分析。结果在膀胱上皮癌、腺性膀胱炎、正常膀胱黏膜组织中,bcl-2表达阳性率分别为4．76％、69．57％、90．91％;p53表达阴性率分别为9．52％、84．78％、81．82％;ki-67表达阴性率分别为23．81％、71．74％、72．73％;ck-7表达阴性率分别为9．52％、21．74％、9．09％。 bcl-2在腺性膀胱炎中表达明显低于膀胱上皮癌组织,但明显高于正常膀胱黏膜;p53、Ki-67在腺性膀胱炎中表达明显高于正常膀胱黏膜,但明显低于膀胱上皮癌组织;ck-7在膀胱上皮癌、腺性膀胱炎与正常膀胱黏膜组织中表达差异不明显（P＞0．05）。结论 bcl-2、p53、ki-67在腺性膀胱炎的生物转归中占有重要地位,对临床诊断与治疗具有指导意义。     

放疗前后宫颈癌细胞凋亡及Fas,p53及bcl—2的表达

目的：探讨Fas ,p53及 bcl-2放疗前后的变化及与细胞凋亡的关系。方法：采用免疫组织化学SP法和脱氧核糖核酸转移介导的缺口末端标记（TUNEL）技术,分别检测40例宫颈鳞癌患者放疗前后同一位点凋亡阳性率及Fas,p53和bcl-2的表达。结果：放疗前后凋亡阳性率有显著性差异（P＜0．01）,放疗后Fas与p53表达明显升高（P＜0．01）,而bcl-2表达明显降低（P＜0．01）;放疗后p53与Fas及bcl-2表达有相关性（P＜0．05）,结论：Fas,P53及bcl-2对放射线诱导的宫颈癌细胞凋亡均具有重要调控作用。P53可能通过上调Fas在宫颈癌中的表达参与了放疗诱导的细胞凋亡过程。     

乳腺导管癌及癌前病变中端粒酶基因与p53,bcl-2的表达及相关性

目的观察端粒酶基因（hTR、hTRT）、凋亡相关基因（p53、bcl-2）在乳腺癌及癌前病变中的表达及相互关系。方法应用原住杂交方法检测端粒酶基因（hTR、hTRT）和凋亡相关基因（p53、bcl-2）mRNA在44例乳腺导管非典型增生组织中的表达，应用免疫组化方法检测p53基因蛋白在上述病例中的表达，并与6例乳腺良性乳腺增生及26例乳腺癌病例进行了比较。结果端粒酶基因（hTR、hTRTmRNA）在乳腺导管重度非典型增生组织中表达增强（60．90,6，52．1％），其表达与在轻、中度非典型增生中（分别为22．2％，11．1％和33．3％。25．0%）和乳腺癌组织中（88．5％，80．896）的表达差异显著（P〈0．05）．p53mRNA在乳腺导管非典型增生组织中的表达随着异型性的增加而下降，而p53基因蛋白则相应增加。Bcl-2在乳腺导管非典型增生组织中呈中度表达，其中以在重度中表达明显。结论端粒酶基因hTR、hTRT的表达与乳腺非典型增生细胞的恶性转化密切相关。同时可检测到p53mRNA的表达缺失、p53蛋白突变及bcl-2mRNA的过表达，且表达水平与端粒酶活性有相关关系。     

p53、Ki-67基因表达与膀胱癌相关性的回顾性研究

目的：探讨p53、Ki-67基因表达与膀胱癌（BTCC）病理学分级、临床分期及膀胱癌复发的关系。方法：回顾性分析149例膀胱癌患者的临床病历资料和p53、Ki-67（≥20为阳性）表达值。结果：I、Ⅱ级阳性表达率p53为58．8％,Ki-67为64．7％,Ⅲ级阳性表达率p53为80．0％,Ki-67为90．0％;两组p53、Ki-67基因表达率差异有统计学意义（P〈0．05）。浅表型BTCC（T0～T1）表达率p53为50．0％,Ki-67为52．4％;浸润型BTCC（T2～T4）表达率p53为80．0％,Ki-67为92．3％。浸润型BTCC的p53、Ki-67基因表达均高于浅表型BTCC（P〈0．05）。在高分级、高分期BTCC组p53、Ki-67联合表达率（73．3％、73．8％）高于低分级、低分期BTCC组（44．5％、32．1％）,P〈0．005。p53、Ki-677共同表达阳性者复发率为37．5％,单一阳性或阴性表达者复发率15．6％,两组复发率有显著性差异（x2=7．46,P〈0．01）。结论：p53、Ki-67基因表达与膀胱癌的临床分期、病理学分级相关,提示p53、Ki-67蛋白过度表达的膀胱癌高度恶性和预后不良;p53、Ki-67基因共同表达阳性组复发率较单一阳性或阴性组复发率高,提示p53和Ki-67基因联合表达与膀胱癌复发可能有相关性。     

90例贲门腺癌p53、bcl—2和PCNA异常表达的病理生物学意义

目的：了解p53、bcl-2蛋白和PCNA的异常表达在不同民族贲门癌发生发展中的作用,为该病的发病学环节提供研究依据。方法：应用免疫组化LSAB法检测90例贲门腺癌和21例非癌组织的p53、bcl-2、PCNA的表达及变化。结果：90例贲门腺癌中p53、bcl-2蛋白、PCNA的表达检出率分别为75．56％（69／90）、87．78％（79／90）、97．78％（88／90）;这些指标在贲门非癌良性组织中的表达检出率分别为4．76％（1／21）、52．38（11／21）、0％（0 ／21） 。阳性表达率在癌和非癌组织间存在显著差异（P＜0．05）。贲门腺癌中bcl-2与p53蛋白之间未发现有相关关系（P＞0．05）。bcl-2与PCNA相关（P＜0．05）。结论：（1）突变型p53、癌基因bcl-2和PCNA的异常表达在贲门癌变过程中具有重要作用。（2）贲门癌组织中p53、bcl-2、PCNA表达在肿瘤分化程度、民族分布方法无统计学差别。     

肾透明细胞癌中Survivin表达及其与bel-2和p53的相关性研究

目的探讨Survivin蛋白、bcl-2蛋白、p53蛋白在肾透明细胞癌（RCCC）组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测Survivin、bel-2、p53在53例RCCC和12例正常对照的表达,计算阳性细胞百分率,并进行组间比较。结果Survivin在RCCC组织中阳性表达率为77、4％,高于正常肾组织的阳性率（0）,P〈0．01。不同病理分级及临床分期比较Survivin表达差异有统计学意义,P〈0．05。bcl-2在RCCC组织表达阳性率为66％,正常肾组织中16．7％,差异有统计学意义,P〈0．01。p53在RCCC组织中阳性率39．6％,高于正常肾组织的0,P〈0．01。不同病理分级及临床分期之间bcl-2和p53表达差异均无统计学意义。Survivin表达阳性和阴性者bcl-2阳性率分别为73．2％和41．7％,P〉0．05。Survivin表达阳性和阴性者p53阳性率分别为41．5％和33．3％,P〈0．05。结论Survivin蛋白在RCCC肿瘤细胞中表达升高,与RCCC病理分级、临床分期密切相关,有可能作为判断病情和评价预后的指标;bcl-2及p53蛋白在RCCC肿瘤细胞中表达升高,与RCCC病理分级、临床分期无明显相关性。Survivin蛋白的表达与bcl-2蛋白的表达无明显相关性;与p53蛋白的表达明显相关,两者在RCCC的发生发展中可能存在协同作用。     

p16、p21、p27基因多态性与上皮性卵巢癌易感性关联的研究

目的探讨抑癌基因p16、p21和p27的多态性与上皮性卵巢癌易感性的关联.方法选取2007年3月-2011年4月间120例卵巢癌患者作为考察对象,同时选取120例健康女性人群作为对照组.分别采集外周静脉血5ml,提取基因组DNA,分析每个样本的基因型,并做统计学分析.结果两组的p16基因C540G的C/C、C/G和G/G基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组的p16基因C580T的C/C、C/G和G/G基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组p21基因的T/T、T/C和C/C基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组的p27基因的V/V、V/G和G/G基因型频率分布有显著性差异(P<0.05).结论 p16基因和p21基因型的多态性上皮性卵巢癌的易感性有关;p27基因的V/V纯合型可能会增加卵巢癌的发病风险,值得临床关注.     

INK4系列抑癌基因(p16、p15、p18、p19)在白血病中的甲基化

目的 探讨p16基因家族失活与白血病发生、发展及预后的关系，进一步阐明白血病发病机制，监测发病过程。方法 采用甲基化敏感限制内切酶Hpa Ⅱ或Msp Ⅰ结合PCR技术研究白血病患者p16、p15、p18、p19基因甲基化状况：(1)研究不同类型、不同阶段白血病p16基因家族外显子1和／或外显子2纯合子缺失，(2)用REP-PCR分别对上述病例中无外显子1缺失的病例进行甲基化研究，探讨甲基化发生频率，分析与白血病发病关系。结果 p16、p15基因外显子1在急性白血病(AL组)甲基化率分别为35．29％，48．65％，急性非淋巴细胞白血病(ANLL组)为25％，37．5%，急性淋巴细胞白血病(ALL组)为60％，69．23％，初治AL组为29．09％，42．10％，复发AL组为61．54％，70．59％，慢性粒细胞白血病(CML)慢性期、急变期、白血病完全缓解(CR-AL)、对照组均无甲基化。p18、p19基因无论在AL组、ALL组、ANLL组、复发AL组、初治AL组，或是在CML的慢性期、急变期、CR-AL、对照组均无甲基化。结论 (1)在p16基因家族中，p16、p15基因甲基化在AL的发生频率较高，ALL甲基化率明显高于ANLL，以复发ALL组最高。p18、p19基因在AL组中未见甲基化。(2)在ALL中，p15甲基化率高于p16甲基化率，在ANLL中，p16、p15基因的甲基化率高于对照组。(3)p16、p15基因甲基化可作为AL病程进展、复发、预后的指标之一。(4)p16、p15基因甲基化在CML病程中(慢性期、急变期)意义不大。     

对二乙烯基偶氮苯的合成

目的合成对二乙烯基偶氮苯(DVAB)。方法用对硝基苄溴和三苯基磷合成的Wittig试剂,与甲醛反应,生成对硝基苯乙烯。对硝基苯乙烯再进行还原偶联反应,得到DVAB。结果用红外光谱、核磁共振谱和元素分析确定其结构;用紫外光谱测其光谱性质。结论该合成路线优化,产率较高。     

p16、p21、p53蛋白在肺癌组织中的表达及其意义

目的 探讨肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达及其意义。方法 采用免疫组化方法检测30例肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达情况。以上标本中有7例呼吸道合胞病毒(RSV)N基因片段扩增阳性。结果 30份肺癌标本中p16、p21、p53蛋白阳性表达率分别为36．7％(11／30)、43．3％(13／30)、53．3％(16／30)；各种蛋白阳性表达例数在鳞癌与腺癌组织间差异无显著性意义；不同临床分期的肺癌标本，其p16、p21阳性表达，差异具有显著性意义；晚期肿瘤组织较早期p53阳性表达增强。p16、p21在肿瘤Ⅲ Ⅳ期较Ⅱ期阳性表达率下降。p16、p21、p53蛋白在RSV N基因片段扩增阳性肺癌标本中的表达与扩增阴性的肺癌标本比较差异无显著性意义。结论 p16、p21可能作为判断肺癌分期及预后的参考指标。RSV感染对肺癌组织细胞癌基因无明显影响。     

食管癌前病变和癌组织中p15、p16、mdm2和p53蛋白的表达

目的:探讨食管癌高发区河南林州市食管癌患者p15、p16、mdm2和p53的表达变化特征及其与各级病变的关系.方法:取食管癌高发区河南林州市居民156例的食管内镜黏膜活检组织(包括正常食管上皮(NOR)21例,基底细胞过度增生(BCH)45例,不典型增生(DYS)23例,原位癌组织(CIS)45例和鳞状细胞癌(SCC)22例),采用免疫组化ABC法分析p15、p16、mdm2和p53蛋白的表达情况.结果:NOR和各级癌前病变组织及SCC组织中均出现不同程度的p15、p16、mdm2和p53表达.随着病变发展(从NOR→BCH→DYS→CIS→SCC),p15和p16的表达逐渐降低,mdm2和p53的表达逐渐增高(P＜0.05).结论:p15、p16的低表达和p53、mdm2的高表达可能是导致病变持续向癌方向发生发展的机制之一.     

p27、p21、PTEN与BRCA1在卵巢癌中的表达

目的探讨p27、p21、PTEN和BRCA1在卵巢癌发生发展中的表达。方法应用免疫组织化学方法及半定量分析方法,检测53例卵巢癌、10例正常卵巢组织中的p27、p21、PTEN和BRCA1表达,分析它们与年龄、组织类型、病理学分级及淋巴转移的相关性,并分析它们在卵巢癌中的相互关系。结果p27、p21、PTEN和BRCA1在正常卵巢组织中高表达,在卵巢癌中表达降低（P〈0．05）,且随着肿瘤病理学分级增高及发生淋巴转移时,阳性表达率逐渐下降,四种蛋白在肿瘤中,尤其是浆液性囊腺癌中的表达呈正相关（P〈0．01）。结论p27、p21、PTEN和BRCA1表达下降可能在卵巢癌的发生发展中起重要作用,联合检测p27、p21、PTEN和BRCA1在卵巢癌中的表达可预测肿瘤生物学行为特征,并作为判断预后的指标。     

人脑星形细胞瘤中增殖细胞核抗原、p53、p2lras及EGFR蛋白的表达

目的探讨人脑星形细胞瘤中多种基因蛋白异常表达及意义.方法应用免疫组化技术检测102例手术切除人脑星形细胞瘤组织标本中增殖细胞核抗原(PCNA)及p53、p21ras及EGFR蛋白的表达.结果星形细胞瘤组织PCNA标记指数(PCNALI)为55.6±15.5,p53、p2lras及EGFR蛋白的表达率分别为58.6%、52.3%、42%,均显著高于正常脑组织.PCNALI及EGFR蛋白表达与星形细胞瘤恶性程度相关(P<0.01),p53、p21ras蛋白的表达与星形细胞瘤恶性程度无关(P>0.05).星形细胞瘤中PCNALI与EGFR蛋白表达无明显相关(P>0.05),而与p53、p21ras表达相关(P<0.05).结论 p53、p21ras、EGFR异常表达与星形细胞瘤的发生发展相关,PCNALI是评估星形细胞瘤增殖活性良好指标.     

p14ARF、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌中表达的研究

目的探讨p14ARF、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌中的表达及其意义。方法应用免疫组化法检测58例鼻咽癌组织和20例慢性鼻咽炎症组织中p14ARF、mdm2、p53蛋白的表达情况。结果p14ARF、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎症组织中的阳性表达率分别为31.0%、41.4%、65.5%和100%、0、0,各个蛋白在两组之间表达的差异有统计学意义(P<0.05)。结论p14ARF蛋白低表达以及mdm2、p53蛋白高表达与鼻咽癌有关。     

p15、p16基因在胆管癌中的表达及临床意义

目的研究p15、p16在胆管癌中的表达并探讨其临床意义。方法应用超敏SP免疫组化方法检测38例胆管癌和8例胆总管囊肿中p15、p16蛋白的表达情况。结果p15、p16蛋白在胆管癌中的表达阳性率分别为52．63％和57.89％,均低于在胆总管囊肿中的表达阳性率100％,有显著统计学差异（P〈0．05）;p15、p16蛋白阳性率在胆管癌Ⅰ～Ⅲ级逐级下降,Ⅰ级的阳性率高于Ⅲ级（P〈0．05）;在Ⅰ～Ⅳ期阳性率逐期下降,Ⅰ＋Ⅱ期的阳性率高于Ⅲ＋Ⅳ期的阳性率（P〈0．05）;有淋巴结转移癌组织中的表达阳性率为25．00％和31．25％,显著低于在无淋巴结转移癌组织中的阳性率72．73％,77．27％（P〈0．05）。结论p15、p16可能参与了胆管癌的发生、发展和转移,检测p15、p16蛋白的表达对评估胆管癌的分级、分期及淋巴结转移有重要意义、     

对二乙烯基偶氮苯的合成

目的；合成对二乙烯基偶氮苯（DVAB）。方法：用对硝基苄溴和三苯基磷合成的Wittig试剂，与甲醛反应，生成对硝基苯乙烯，对硝基苯乙烯再进行还原偶联反应，得到DVAB。结果：用红外光谱，核磁共振谱和元素分析确定其结构。用紫外光谱测其光谱性质。结论：该合成路线优化，产率较高。