QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定稻田水产品中二甲戊灵残留

建立了QuEChERS一种分散型固相萃取（QuEChERS）与高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）联用测定水产品中二甲戊灵的方法。样品采用含0.1%（体积分数）甲酸的乙酸乙酯提取,提取液经0.6 g聚苯乙烯-二乙烯基苯和0.2 g乙二胺-N-丙基硅烷分散固相萃取净化,40℃下氮吹浓缩近干,加入乙腈1.0 mL复溶,经0.22μm滤膜过滤,高效液相色谱-串联质谱测定。目标化合物采用Kinetex C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,2.6μm）分离,采用乙腈和0.1%（体积分数）甲酸水溶液进行梯度洗脱,在电喷雾离子源（ESI）、选择反应监测（SRM）模式下进行测定,基质匹配内标法定性定量。结果表明,目标物在2～100μg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 5,检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别为0.5μg/kg和1.0μg/kg。以鲤鱼、克氏原螯虾和中华鳖为样品基质,在3个不同的添加水平下,二甲戊灵的平均回收率为78.9%～110.6%,RSD为3.8%～6.8%。该方法具有快速、准确度与灵敏度高的优点,满足稻田水产品中二甲戊灵的残留检测需求。     

热带假丝酵母木糖醇脱氢酶的分离纯化

探讨了热带假丝酵母中木糖醇脱氢酶的分离纯化工艺。分步采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶层析以及Hi Trap Blue HP亲和层析等纯化方法,得到电泳纯的木糖醇脱氢酶。经SDS-PAGE和native-PAGE分析表明,木糖醇脱氢酶分子质量约为90ku,由2个分子质量为45ku的亚基组成。最终酶蛋白纯化倍数达到60·8倍,回收率为10·9%。     

油脂降解菌的选育与鉴定

从学校餐厅下水道口、油脂加工厂及屠宰场的含油废水及土壤中采集6个土样,根据油脂平板上是否有水解圈及水解圈的大小得到9株菌,复筛结果显示C-3-2菌株的降解率最大。通过对该酵母菌进行形态学观察及生理生化特征的测试,初步鉴定为假丝酵母属(Candidaspp)。在此基础上进行了离子束诱变,以筛选出的Candidaspp为出发菌株,经离子束辐照后得到一株高降解率的菌株。结果表明:离子束诱变后,其降解率提高了11.09%。     

邻苯二甲酸二丁酯高效降解菌H-2的分离鉴定及其降解特性

为了获得高效广谱的邻苯二甲酸二丁酯（di-n-butyl phthalate,DBP）降解菌,本研究从长期受食品塑料垃圾污染的土壤中通过富集培养和分离纯化,获得一株DBP高效降解菌,命名为H-2。根据菌株的形态、生理生化特征和16S rRNA序列分析,将其鉴定为类芽孢杆菌属（Paenibacillus sp.）。运用高效液相色谱法分析了菌株H-2对DBP的降解特性及对邻苯二甲酸酯类化合物的广谱性降解情况。结果表明：菌株H-2降解DBP的最适温度为30 ℃,最适pH值为7.0;在此最适条件下,菌株H-2在3 d内对100 mg/L DBP的降解率高达87.6%。菌株H-2能高效降解短链邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯和DBP,而对长链邻苯二甲酸二辛酯的降解效果较差。     

亚硝酸盐降解菌的分离及其降解特性

从发酵初期的天津冬菜中分离到1株乳酸菌,经形态观察及生理生化等实验验证,初步鉴定其为肠膜明串珠菌（Leuoconostoc mesenteroieds）W-58,对其降解亚硝酸盐的过程进行了初步研究。结果表明,该株菌对亚硝酸盐有明显的降解作用,进一步研究温度和底物浓度与分离菌株去除亚硝酸盐量的关系,表明W-58菌株对亚硝酸盐的降解主要为产酶降解。     

一株发酵木薯酒糟的热带假丝酵母菌株的分离及营养分析

采用富集培养方法分离到一株对木薯酒糟具有良好发酵性能的耐高温酵母菌株WHCZ.经形态、生理生化及分子分类鉴定为热带假丝酵母.氨基酸分析结果表明,该菌株的总氨基酸和必需氨基酸含量均高于产朊假丝酵母1807.对木薯酒糟的发酵试验结果表明,该菌株对木薯酒糟液的COD去除率比产朊假丝酵母更高;接种酵母菌株WHCZ后,经33℃摇床培养24h,木薯酒糟固形物的粗蛋白含量由原糟的12.48％升至19.6％,粗蛋白含量提高了57.77％.     

高产核酸的热带假丝酵母诱变选育及其发酵条件优化

以热带假丝酵母（Candida tropicalis）HY4-17为出发菌株,采用电子束辐射技术诱变,经过初筛、复筛及遗传稳定性试验选育核酸高产菌株,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及响应面法优化培养基,并优化接种量和发酵时间以提高核酸产量。结果表明,获得一株生长快速,遗传稳定的突变菌株EBI-21,其核酸含量较出发菌株HY4-17提高了25%。最佳培养基组成为：糖蜜185 g/L,硫酸铵3 g/L,硫酸锌0.05 g/L,硫酸镁0.5 g/L,硫酸亚铁0.05 g/L,磷酸1 mL/L,pH值为4.5。在优化培养基及接种量8%,发酵时间12 h条件下,核酸产量达到1.73 g/L,较未优化前提高了80.21%,培养时间缩短了10 h。     

热带假丝酵母辅酶Q10高产菌的选育研究

以热带假丝酵母(Candida tropicalis)AS 2.1387为出发菌株,研究紫外线、硫酸二乙酯单因素及复合诱变对出发菌株的诱变效应,并根据辅酶Q10合成的反馈调节途径,建立了高产突变菌株的快速筛选方法,通过放线菌素D对突变菌进行广谱抗性初筛,并以高浓度前体物质对羟基苯甲酸以及终产物结构类似物维生素K3进行特异性筛选,选育得到了遗传稳定性良好的辅酶Q10高产突变株APV.12,使得APV.12菌株辅酶Q10的发酵产量达到23.958mg/L,比出发菌株提高了1.76倍.     

热带假丝酵母辅酶Q10高产菌的选育研究

以热带假丝酵母(Candida tropicalis)AS2.1387为出发菌株,研究紫外线、硫酸二乙酯单因素及复合诱变对出发菌株的诱变效应,并根据辅酶Q10合成的反馈调节途径,建立了高产突变菌株的快速筛选方法,通过放线菌素D对突变菌进行广谱抗性初筛,并以高浓度前体物质对羟基苯甲酸以及终产物结构类似物维生素K3进行特异性筛选,选育得到了遗传稳定性良好的辅酶Q10高产突变株APV.12,使得APV.12菌株辅酶Q10的发酵产量达到23.958mg/L,比出发菌株提高了1.76倍。      

高甾醇含量热带假丝酵母细胞的培养条件研究

以大豆油脱臭馏出物为唯一碳源,研究了高产甾醇的热带假丝酵母（Candida tropicalis）1253细胞的培养条件。研究发现,无机氮源培养使得菌体甾醇含量显著高于有机氮源培养。当尿素与牛肉膏复合作为氮源时,菌体甾醇含量最高（7.55%）。最佳培养基配方为：脱臭馏出物50.0 g/L、尿素1.0 g/L、牛肉膏1.0 g/L、甘氨酸0.02 g/L、十二烷基苯磺酸钠0.5 g/L、MgSO4 0.1 g/L、K2HPO4 0.2 g/L、KH2PO4 0.2 g/L。最适培养条件为：初始pH 7.0、摇床转速200 r/min。采用上述最适的发酵条件,按10%（V/V）接种量接入热带假丝酵母1253种子液,30 ℃摇床振荡培养96 h。发酵结束后,经过测定,酵母细胞中甾醇含量为8.83%。     

氯氰菊酯降解菌的分离鉴定及其降解底物谱研究

采用富集培养法,从长期受氯氰菊酯农药污染的果园土壤中,分离筛选得到1 株可降解氯氰菊酯的菌株N-02。经形态、生理生化特征及16S rDNA序列分析,初步鉴定为点状气单胞菌（Aeromonas punctata）。菌株N-02在35 ℃、pH 7.5、氯氰菊酯质量浓度为20 mg/L的LB培养基中培养96 h,对氯氰菊酯的降解率达到62.31%。该菌株N-02对拟除虫菊酯的降解谱较宽,培养96 h对20 mg/L高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和氟氯氰菊酯降解率分别达到40.17%、33.26%和30.45%。     

邻苯二甲酸二丁酯降解菌株的筛选鉴定及其降解特性研究

从四川省雅安市使用过地膜的蔬菜田地的土壤中筛选得到一株以邻苯二甲酸二丁酯(DBP)为唯一碳源和能源生长的高效降解菌株JF,经形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。在LB培养基的动力学研究表明,菌株JF降解邻苯二甲酸二丁酯的过程满足一级动力学方程模型,在测试的底物(DBP)浓度、温度、pH范围内,DBP的半衰期为3.11~6.98 h,且该反应的速率受底物浓度和温度的影响较大,受pH值影响不大。菌株JF可降解DBP及其中间产物邻苯二甲酸,此外,菌株JF在72 h内对200μg/mL的邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)、邻苯二甲酸二辛酯(DOP)和邻苯二甲酸丁苄酯(BBP)降解率为90.10%、79.10%和76.30%。该研究为消除或减少环境、农产品中邻苯二甲酸酯残留提供了理论依据。     

一株新的尼古丁降解菌的分离鉴定及降解特性

针对降解高毒、高危害的尼古丁微生物种类较少的实际情况筛选出具有高尼古丁降解活性的菌株,探究其降解条件及降解特性,为尼古丁的生物降解提供新的微生物资源。从烟草种植大田土壤分离纯化得到一株具有高尼古丁降解能力的菌株,对其形态学、生理生化特征、16S rRNA基因序列同源性进行了分析鉴定,探究了不同条件下尼古丁降解特性并对其动态降解过程进行了HPLC分析。经鉴定命名为Stenotrophomonas sp.ZUC-3,适宜的发酵条件为：温度30℃、起始pH 7.0、接种量10%、培养转速180 r/min,此条件下尼古丁降解率可达到91.53%,HPLC分析显示了ZUC-3降解尼古丁过程的动态变化及其高效性。研究结果为尼古丁生物降解提供了新的微生物资源,对烟草行业可持续发展具有理论意义与实际应用价值。     

环丙沙星降解菌的筛选及其降解特性探究

为获取一株有效降解环丙沙星的菌株,并探究其在降解过程中的降解特性,利用高效液相色谱法筛选环丙沙星降解菌,根据菌落形态、生理生化特性以及16S rDNA基因序列分析,对降解菌进行鉴定;并研究菌株活性、胞内外物质以及细胞壁对质量浓度为4 μg/mL环丙沙星的降解作用。结果表明,罗伊氏乳杆菌WQ-Y1在物理吸附和生物降解的共同作用下,降解率最高可达70.2%,其胞内物质、胞外物质以及细胞壁对环丙沙星的降解率分别为17.7%、23.4%和37.0%,远低于活菌的降解率。可见罗伊氏乳杆菌WQ-Y1对环丙沙星的物理吸附作用和菌株体内的酶都并非是菌株降解环丙沙星的单一途径,而是依赖于完整的菌株活性。     

降解展青霉素的乳酸菌的筛选鉴定及其降解特性研究

目的:筛选鉴定具有降解展青霉素作用的乳酸菌,并揭示其降解展青霉素的特性。方法:将从青海泡菜中分离得到的2株乳酸菌活化后与展青霉素共培养,利用高效液相色谱(HPLC)法检测共培养过程中体系中展青霉素的含量,筛选出对展青霉素具有较高降解能力的一株乳酸菌。通过对该乳酸菌形态学观察及对16S rDNA序列同源比对,确定该乳酸菌的分类进化地位。进一步准备该乳酸菌的活菌、胞内物质、胞外代谢物以及细胞壁并分别与展青霉素共培养,利用HPLC研究上述各组分对展青霉素的降解作用,探究该乳酸菌降解展青霉素的特性。结果:本研究从2株青海泡菜分离得到的乳酸菌中筛选到一株乳酸菌YZU02能够高效降解展青霉素,经微生物形态学观察及16S rDNA测序比对表明YZU02菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。YZU02活菌对展青霉素降解效果较好,可在36 h内将展青霉素由10.87 μg/mL降至2.94 μg/mL。YZU02胞内物质、经展青霉素刺激后的YZU02胞内物质、YZU02胞外代谢物对展青霉素几乎没有降解作用,推测该乳酸菌去除展青霉素与生物降解无关。YZU02细胞壁可将展青霉素含量由10.84 μg/mL降低至5.10 μg/mL。结论:植物乳杆菌YZU02可通过其细胞壁的吸附作用去除溶液状态中的展青霉素,在36 h内对10.87 μg/mL的展青霉素的清除效率达到72.95%,在防治展青霉素污染方面极具应用价值。     

一株高效烟碱降解内生菌的分离及降解特征研究

为了解烟草内生菌的烟碱降解机制,以一株具有高效烟碱降解功能的内生菌G16为对象,通过降解培养及代谢产物分析,对其烟碱降解特征进行研究。结果表明,该菌株经鉴定为Rhizobium sp.G16,在烟碱培养基中的生长符合Slogistic模型,烟碱对G16菌株的最大生长抑制浓度为4000 mg/L;G16菌株的烟碱降解受到pH、接种量及烟碱浓度的影响,其降解过程可采用一级动力学模型进行描述;对G16菌株降解烟碱的中间代谢产物进行分析,发现主要为尼古丁提林、3-（3,4-dihydro-2H-pyrrol-5-yl） pyridine、脱甲基尼古丁、2,3-联吡啶、可铁宁等物质。     

一株降解恩诺沙星菌株的筛选鉴定及其降解条件的优化

从长期处理含恩诺沙星猪粪的黑水虻肠道中,筛选出可降解恩诺沙星的菌株,并对菌株降解过程中的环境因素进行优化,获得较优的降解条件,为研究恩诺沙星生物降解的途径提供理论基础.将黑水虻肠液加入含有恩诺沙星的培养基中培养,经过两次筛选,从若干株具有降解恩诺沙星能力的菌种中挑选降解能力最强的一株菌株,通过单因素实验确定该菌株最适降...     

3-苯氧基苯甲酸降解真菌的筛选及其降解特性

以传统发酵食品为菌源,经不同质量浓度3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)梯度驯化,筛选出6株具有3-PBA降解能力的霉菌,其中从砖茶中分离的降解菌YAT1可在22h内完全降解PD培养基中100mg/L的3-PBA,根据其形态特征和ITS序列分析(GenBank Accession No.JQ366070),将其鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。动力学研究表明,YAT1降解3-PBA的过程符合一级动力学方程,在测试的底物(3-PBA)质量浓度、温度、pH值范围内,3-PBA半衰期为5.635～12.160h,远远低于其自然降解半衰期(180d),且该反应的速率受pH值影响不大,受底物质量浓度和温度的影响较大。     

紫外诱变选育高效降解甲醛菌株及其降解特性

以甲醛降解菌--拟青霉菌（Paecilomyces variotii）CSLG1为出发菌株,对其进行紫外诱变,并考察突变株对甲醛的降解特性。选用功率15 W的紫外灯、照射距离30 cm、照射时间30 s、致死率为88%的诱变强度对出发菌株进行紫外诱变;通过初筛、复筛选育出一株甲醛抗性及其降解能力明显提高的诱变菌株F1-23。结果表明：F1-23临界甲醛抗性质量浓度为7.88 g/L,比诱变前提高22.2%;甲醛脱氢酶酶活力为83.6 U/mg,提高了23.8%。连续传代5 代,诱变菌株F1-23的甲醛抗性和降解力基本不变,证实其具有良好的遗传稳定性。诱变菌株F1-23对甲醛的抗性及降解能力均较出发菌株高。