分步酶解法制备菜籽降血压肽

以菜籽蛋白为原料,用两种蛋白酶将其分步水解制备降血压肽。从4种酶的两两组合中筛选出了最佳酶组合碱性蛋白酶和中性蛋白酶,采用紫外检测法对酶解产物中血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽活性进行测定。对酶解工艺进行优化,在单因素试验的基础上采用Box-Behnken模型响应面设计试验,运用Design-Expert软件处理,建立制备菜籽降血压肽的三元二次回归正交模型。结果确定最佳酶解条件为:碱性蛋白酶和中性蛋白酶为分步水解的酶、底物的质量浓度5.65g/100mL、加酶量6.5%、酶解温度54.9℃,ACE抑制率理论值为50.303%,在此条件下进行验证实验制备出ACE抑制率为50.12%的菜籽降血压肽。     

分步酶解法制备菜籽肽及其分子量分布与抑制ACE活性关系研究

选取胰蛋白酶和Flavourzyme风味蛋白酶,采用超声波辅助分步酶解法制备菜籽肽;测试不同条件下的水解度、混合肽分子量分布和ACE活性抑制率。结果显示随着酶解液的水解度提高,混合肽中小分子量(3ku以下)的可溶性肽含量不断提高,ACE活性抑制率也不断升高,也说明使用该方法制备的菜籽肽具有ACE活性抑制作用。同时,这一结果有助于菜籽蛋白的开发将更加广泛。     

预处理对胶原蛋白水解和血管紧张素转化酶抑制肽段释放的影响

以胰蛋白酶为工具酶,研究短时热处理、超高压处理对胶原蛋白水解和血管紧张素转化酶（angiotensinconverting enzyme,ACE）抑制肽段释放的影响。结果表明：热处理可显著促进胰蛋白酶对胶原蛋白的水解和ACE抑制活性肽段释放,超高压处理组水解物水解度（degree of hydrolysis,DH）与无处理组无显著差异,ACE抑制活性显著低于无处理组。水解物DH和ACE抑制活性关系研究显示,胰蛋白酶水解胶原蛋白过程中,水解度小于5%时,ACE抑制率随水解度呈明显上升趋势,水解度大于5%后,其上升趋势不再明显。肽谱分析进一步证明热处理可有效促进胶原蛋白的水解,超高压处理可改变胰蛋白酶作用位点。热处理组水解物序列分析显示,获得序列均来源于胶原蛋白三螺旋区域,且大部分序列都具有潜在的ACE抑制活性。说明短时热处理可以有效破坏胶原蛋白的三螺旋结构,促进ACE抑制肽段的释放。     

固定化碱性蛋白酶水解花生蛋白制备ACE抑制肽

采用固定化碱性蛋白酶水解花生蛋白制备ACE抑制肽。以短肽生成率和ACE抑制率作为评价指标,通过响应面优化设计获得最佳的酶解条件为:加酶量1767μ/g蛋白,酶解时间143min,酶解pH为10.00,酶解温度取45℃,获得的短肽生成率和ACE抑制率为82.67%和83.48%。此外,适当增加水解度可以提高酶解产物的ACE抑制活性,但过度水解会导致ACE抑制率下降。     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。     

菜籽蛋白水解物及其膜分离组分的降血压相关活性

应用商业化蛋白酶Alcalase水解菜籽分离蛋白(RPI),并通过膜分离技术将水解物分离成4种不同分子质量大小的多肽组分(<1kD、1～3kD、3～5kD和5～10kD);评价水解物(RPH)和多肽组分的血管紧张素转化酶-Ⅰ(ACE)、肾素抑制活性和氧自由基吸收能力(ORAC)。结果表明:分子质量大小与菜籽肽的氧自由基吸附能力成负相关;<1kD的组分具有最大的ACE抑制活性(抑制率为(83.42±0.35)%)和氧自由基吸附能力;与膜分离组分相比,Alcalase水解物具有最高的肾素抑制活性。研究认为,菜籽蛋白Alcalase水解物及其<1kD的膜分离组分可能作为功能性成分用于降血压相关的功能食品和保健品的开发。     

木瓜蛋白酶制备广昌白莲降血压活性肽的研究

为探讨木瓜蛋白酶对广昌白莲蛋白的水解特性及所获多肽的降血压活性,以广昌白莲蛋白为原料,以水解度(hydrolysisdegree,DH)为指标,选用木瓜蛋白酶水解白莲蛋白获得多肽,通过测定多肽对血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的抑制活性,得到广昌白莲ACE抑制活性肽.通过正交实验Ln(34)因素水平实验法确定木瓜蛋白酶水解白莲的最优条件为pH6.5,温度55℃,底物浓度5％,酶浓度8％.由极差值R可知各因素的主次关系是温度＞pH＞底物浓度＞酶浓度.对不同水解度下的多肽进行了降血压活性的研究,结果表明,ACE抑制率与水解度呈正相关.对多肽进行大孔吸附树脂静态乙醇分级洗脱后测定降血压活性,结果表明,经25％乙醇洗脱后,多肽降血压活性最高,为55.78％,其IC50为0.045mg/mL.     

热处理对鱼鳞蛋白酶解特性的影响

采用碱性蛋白酶酶解罗非鱼鱼鳞,研究热处理温度、时间、底物浓度对鱼鳞蛋白酶解前、后的蛋白回收率、水解度、ACE抑制率的影响,确定最佳热处理工艺,探讨热处理鱼鳞蛋白酶解前、后相对分子质量分布的影响。结果表明:热处理可显著提高鱼鳞蛋白酶解特性,最佳热处理条件为:处理温度121℃,处理时间15 min,底物质量分数2%。在此条件下罗非鱼鱼鳞水解液蛋白回收率为65.93%,水解度10.54%,比未处理组分别提高了78.29%和89.23%。此时ACE抑制率为73.80%,比未处理组提高66.78%。鱼鳞蛋白酶解产物相对分子质量主要分布在5 ku以下,其中1 ku以下的小分子胶原肽占39.46%。     

酶解鲢肉制取ACE抑制肽工艺条件的优化

采用复合风味酶水解鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肉制取血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,通过正交试验对水解工艺进行优化,并用SephadexG-15凝胶柱对酶解产物进行分离。结果表明:复合风味酶在温度50℃、pH8.0、料液比1:6、加酶量5000U/g.pr、水解12h的条件下,酶解产物的水解程度及对ACE的抑制率最高,其水解度为34.40%,氮利用率为92.01%,抑制率为66.52%;该酶解产物中相对分子质量较大和较小部分的ACE抑制活性偏低,只有相对分子量在一定范围内的短肽才对ACE具有较好的抑制作用,其中在第3洗脱峰处得到的ACE抑制肽活性最高,其ACE抑制率为63.04%。     

鱿鱼肝脏蛋白水解液及ACE 抑制肽的制备

为高效利用鱿鱼及其下脚料肝脏蛋白水解物,采用酶解技术和凝胶过滤分离等技术对鱿鱼肝脏蛋白水解液中抑制肽进行研究。结果表明：胃蛋白酶为鱿鱼肝脏蛋白水解的最佳酶类,同时以水解度和ACE 抑制活性为指标,得出胃蛋白酶水解的最佳条件：在36℃条件下酶解22h,酶与底物的质量比2%,底物质量分数2.5%。经过上述条件处理的水解液再经超滤处理(截留分子质量为20kD)后,用Sephadex G-50 进行分离,洗脱得到5 个峰,其中组分B 的ACE 抑制活性最高,其半抑制浓度(IC50)达到1.80mg/mL。     

中草药复配乳蛋白ACE抑制肽的试验研究

为了将具有降血压功效的药食同源中草药与具有降血压活性的牛奶蛋白酶解液复配,以完成一款具有辅助降压功效的功能性牛奶的实验研究提供理论依据和技术参数。试验以ACE抑制率为指标,优化胰蛋白酶酶解脱脂乳的最佳工艺,并从15味中草药中筛选出具有较高ACE抑制活性的提取液,再将优化所得酶解液和筛选出的中草药提取液进行复配,获得高ACE抑制率的活性功能乳组方。结果表明:胰蛋白酶酶解脱脂乳的最佳酶解工艺为底物质量浓度7 g/100 mL、酶解时间6 h、加酶量5%、酶解温度31℃、pH6.9,脱脂乳酶解液的ACE抑制率为58.51%;筛选得出山楂、决明子的ACE抑制率较高,分别为50.88%、45.34%;且当山楂提取液和决明子提取液混合时ACE抑制活性提高,两者为2:1时,ACE抑制率较高为52.52%;酶解液和中草药提取液(山楂提取液:决明子提取液为2:1)按1:1进行复配,ACE抑制率最高为59.09%,对研究具有辅助调节血压效应的保健功能性乳制品具有理论和实践探讨意义。     

龙须菜蛋白的提取工艺优化及降血压组分制备

目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分.方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影响,采用响应面法确定最佳工艺条件,采用超滤膜分离技术龙须菜蛋白酶解液中制备血管紧张素转换酶(a...     

酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化

以牡蛎为原料,采用酶解联合Plastein反应修饰的方法,获得高活性血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率和水解度为指标,对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5种蛋白酶对牡蛎肉的酶解效果,筛选出木瓜蛋白酶最佳。通过单因素试验和正交试验对酶解工艺进行优化,得到最佳酶解工艺为料液比1∶8(g/m L)、加酶量2.0%、温度65℃、时间1.0 h、pH6.0,此条件下酶解产物的ACE抑制率可达到63.30%,在此基础上采用Plastein反应对酶解产物进行修饰,以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为指标,考察反应过程中酶种类、底物质量分数、加酶量、时间和温度对修饰结果产生的影响。通过该反应的修饰,得到选用中性蛋白酶、底物质量分数40%、加酶量1.0%、温度30℃、时间2.5h、pH7.0时,ACE抑制率最高可达82.31%,比修饰前提高了19%。     

大蒜降压肽的制备及超滤分离

为了研究大蒜降压肽的酶解制备与超滤分离工艺,采用响应面法优化制备工艺,酶解后利用超滤技术获得不同分子量范围的组分并进行ACE抑制活性评价。最佳制备工艺为碱性蛋白酶处理、温度50℃、pH11、底物浓度45 g/L、酶底比3%、酶解时间1 h,该条件下ACE抑制率为83.91%±0.13%,半抑制浓度为(157.87±0.44)μg/mL。分子量3 kDa以下部位活性最为显著(P<0.05),优化后的超滤工艺为操作压力0.25 MPa,温度25℃,溶液浓度4%,此时3 kDa超滤膜的膜通量为7.32 L/(m2·h),ACE的半抑制浓度为(63.27±0.25)μg/mL。氨基酸分析结果表明酸性氨基酸、疏水性氨基酸及天冬氨酸、谷氨酸含量较高,分别为35.78、32.86、21.66、14.12 mg/100 mL,分子量分布显示2000~2500 Da部分最为丰富,占比为49.50%。本研究为大蒜蛋白的开发利用提供了新的思路,具有一定的理论水平和实际应用价值。     

Effects of high‐pressure processing and enzymatic dephosphorylation on phosvitin properties

BACKGROUND: Egg phosvitin could be a good source of functional peptides. Enzymatic dephosphorylation and high‐pressure processing combined with thermal treatment applied before proteolysis could produce phosvitin hydrolysates with different properties compared to its native form. RESULTS: Phosvitin structure was maintained overall during high‐pressure treatment of 600 MPa applied at an initial temperature of 65 °C regardless of the pH and duration of treatment, confirming the high structural stability of this phosphoprotein. Treatment of phosvitin with phosphatase increased the degree of dephosphorylation from 24% to 63%, after 2 and 18 h, respectively. Moderate dephosphorylation of phosvitin prior to proteolytic digestion improved its hydrolysis, allowing formation of peptides with a molecular weight lower than 17,000 kDa as determined by size exclusion chromatography. Angiotensin‐converting enzyme (ACE) inhibition and antioxidant activity of dephosphorylated and protease‐treated phosvitin was increased by 52% and 39%, respectively, as compared to protease‐digested native phosvitin. CONCLUSION: Enzymatic dephosphorylation before proteolysis mimicking in vivo gut conditions improved ACE inhibition and antioxidant activity of phosvitin hydrolysates. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry     

血管紧张素转化酶抑制剂产生菌的筛选及发酵条件优化

以大豆分离蛋白为基质,以血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性和多肽含量为评价指标,筛选高产ACE抑制剂的菌株,并以 ACE和蛋白水解度（DH）为考察指标对其产ACE抑制剂的发酵条件进行单因素优化。 通过微生物发酵法筛选出一株具有高ACE抑制 活性的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS90。 经单因素试验确定最优发酵条件为：采用液态发酵,大豆蛋白含量5%,初始pH值9.0,培 养温度35 ℃,培养时间40 h。 在此发酵条件下,DH和ACE抑制活性分别达到89.1%和81.8%,较优化前分别提高69.5%、13.4%。 为后续 ACE抑制肽的分离制备奠定了基础。     

High‐pressure microfluidisation pretreatment disaggregate peanut protein isolates to prepare antihypertensive peptide fractions

High‐pressure microfluidisation (HPM) pretreatment was applied to increase in vitro antihypertensive activity of peanut peptide fractions (PPF). The morphology of protein in aqueous dispersion revealed that peanut protein isolate (PPI) disaggregated at relatively low pressure (≤120 MPa) and re‐aggregated at relatively high pressures (150–210 MPa). The treated pressure of 120 MPa could lead to the most disaggregation of PPI. Small peptides contents, trichloroacetic acid‐nitrogen soluble index (TCA‐NSI) and degree of hydrolysis (DH) of peanut protein hydrolysates (PPH) all reached the highest at 120 MPa. Consequently, it possessed the highest angiotensin converting enzyme (ACE) and renin inhibitory activity. The highest surface hydrophobicity occurred at 120 MPa pretreatment samples. Thirty‐nine oligopeptides at 120 MPa pretreatment were identified by ultra‐performance liquid chromatography‐quadrupole time‐of‐flight (UPLC‐Q‐TOF) mass spectrometer combined with Progenesis QI for Proteomics software compared with 29 and 35 at control and 210 MPa, respectively. This meant that disaggregation of PPI at 120 MPa resulted in the release of new hydrophobic peptide.