苦参碱诱导人结肠癌SW1116细胞凋亡及机制探讨

目的观察苦参碱（Ma）诱导结肠癌SW1116细胞凋亡的作用，并探讨其机制。方法采用不同浓度的Ma处理SW1116细胞48h，并设正常对照组，MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，半定量RT-PCR检测Fas和Bax mRNA表达水平。结果与正常对照组相比，不同浓度Ma处理的SW1116细胞抑制率、胞凋亡率显著升高（P均〈0.01），Fas和Bax mRNA表达上调（P〈0.05，P〈0.01）。结论Ma可诱导SW1116细胞凋亡，其作用机制可能与上调Fas和Bax mRNA表达有关。     

三氧化二砷诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及对OPN表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）治疗肝癌的可行性及机制。方法将一定浓度梯度的As2O3与人肝癌细胞株SMMC-7721孵育后,采用MTT法、荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡变化,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝癌细胞株中骨桥蛋白基因（OPN mRNA）表达水平。结果As2O3作用后SMMC-7721细胞生长明显受抑,且呈时间-浓度依赖性;荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变;在流式细胞仪上可见“凋亡峰”,细胞周期阻滞于G2／M期;细胞OPN mRNA表达阳性,OPN mRNA表达水平明显下调。结论As2O3体外能有效抑制肝癌细胞株生长;其机制可能为诱导细胞凋亡、下调OPN mRNA表达。     

相关基因在苦参碱诱导人肺腺癌细胞凋亡中的表达

目的 探讨苦参碱对肺腺癌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 肺腺癌A549细胞进行传代培养后,分别加入30、60、120、240 mg/L的苦参碱,MTT法检测其对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关.苦参碱可诱导A549细胞凋亡,与作用时间呈正相关.苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01),而显著升高Bax蛋白表达水平.结论 Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达增高可能在苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡中起重要作用.     

氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的机制

目的探讨氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用及机制。方法以不同剂量的氧化苦参碱作用于人结肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞的增殖能力,Hoechst 33258染色法观测细胞凋亡。免疫印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,荧光法测定半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的活性。结果氧化苦参碱可剂量依赖性地抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡。Western印迹方法显示氧化苦参碱可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,提高促凋亡蛋白Bax的表达,同时激活凋亡效应分子caspase-3。结论氧化苦参碱能够抑制结肠癌SW480细胞的增殖,通过提高Bax的表达、抑制Bcl-2的表达、激活caspase-3发挥其诱导细胞凋亡的作用。     

苦参碱诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其对Bax表达的影响

目的 探讨苦参碱在体外诱导乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用及其机制.方法 用MTT方法检测乳腺癌MCF-7细胞生长抑制率,用流式细胞仪(FCM)分别检测MCF-7细胞凋亡情况,MCF-7细胞线粒体跨膜电位及MCF-7细胞Bax蛋白表达情况.结果 苦参碱对乳腺癌MCF-7细胞生长抑制率测定结果显示,不同浓度的苦参碱对MCF-7细胞生长抑制率与对照组相比存在明显差异(P＜0.05),呈剂量-效应正相关及时间-效应正相关,流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡,与对照组相比均有显著差异(P＜0.05),随着苦参碱浓度的增高,凋亡的发生率也相应提高,呈正相关.线粒体跨膜电位检测,苦参碱处理组MCF-7细胞罗丹明染色阳性数明显低于对照组,存在显著差异(P＜0.05),并随苦参碱浓度的增高而减少,呈负相关.流式细胞仪检测Bax蛋白表达显示,Bax蛋白表达上调,与对照组相比,存在显著差异(P＜0.05),且随作用浓度增高表达增强,呈正相关.结论 中药苦参碱在体外能抑制乳腺癌MCF-7细胞之生长抑制,并能诱导该细胞凋亡.     

苦参碱对体外诱导人结肠HT29细胞凋亡作用的实验研究

[目的]研究苦参碱（matrine,MA）对体外诱导人结肠癌HT29细胞的凋亡作用及其机制。[方法]不同浓度MA（0-32mg／m1）作用HT29细胞24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,线粒体跨膜电位检测试剂盒（3C-1）检测线粒体膜电位（Apm）变化,分光光度法检测caspase-3,9酶活性,Westernblot法检测线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl-2表达。[结果]MA显著诱导HT29细胞凋亡;16mg／mlMA作用HT29细胞24h后,caspase-9,-3酶活性明显升高;Westernblot结果显示：MA处理组促凋亡蛋白Pax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达明显降低。[结论]MA具有促进结肠癌细胞凋亡的作用,且具有剂量依赖性,其机制与线粒体凋亡途径有关。     

氧化苦参碱对肿瘤坏死因子诱导的人L02肝细胞凋亡的影响

观察氧化苦碱（Oxy）对rhTNF-a诱导的L02肝细胞凋亡的影响。体外培养人L02肝细胞,采用H^3-TdR法、台盼蓝染色及流式细胞仪观察Oxy对rhTNF-a引起的L02肝细胞的毒性作用影响。以rhTNF-a15ng/ml作用于细胞24h,细胞出现细胞核固缩,染色体凝集等凋亡样改变,台盼蓝染色阴性率在95%以上,应用流式细胞仪检测分析细胞周期,出现亚G1期峰（凋亡AP峰）,G2-M期细胞明显减少。同时加入Oxy时,细胞生长率明显高于rhTNF-a处理组,并呈剂量相关性,在细胞周期图上未出现明显亚G1期峰。Oxy对rhTNF-a诱导的细胞凋亡有抑制作用。     

氧化苦参碱调控CDK4/cyclinD1通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的 研究氧化苦参碱对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及CDK4/cyclinD1通路调控方面的作用,探讨其对前列腺癌可能产生的作用机制。方法 噻唑蓝(MTT)法观察前列腺癌PC-3细胞增殖情况;荧光染色观察前列腺癌PC-3细胞核形态改变情况;流式细胞仪观察前列腺癌PC-3细胞凋亡率与细胞周期情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)观察细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1基因表达情况;Western印迹观察CDK4、cyclinD1表达情况。结果 与对照组相比,8μmol/L氧化苦参碱组作用72 h前列腺癌PC-3细胞的增殖活力最弱。荧光染色发现,氧化苦参碱使前列腺癌PC-3细胞核形态改变,且细胞核皱缩程度随氧化苦参碱浓度增加而加深。与对照组相比,氧化苦参碱组前列腺癌PC-3细胞的凋亡率显著上升且随浓度增加而显著上升(P<0.05);与对照组相比,2、4、8μmol/L氧化苦参碱组G1期比例明显增加,S期、G2的比例显著降低(P<0.05)。PCR法发现,与对照组相比,氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1 mRNA的...     

苦参碱对人膀胱癌EJ细胞株凋亡的影响及机制

目的为苦参碱用于膀胱癌治疗提供依据。方法将EJ细胞贴壁培养于10％胎牛血清、10万U／L青霉素、100mg／L链霉素的1640培养液中,37℃、5％CO2饱和湿度培养箱中培养,取对数生长期细胞随机分为两组,苦参碱组加入质量浓度为0．5、1．0,2．0mg／ml的苦参碱;对照组不加苦参碱,每天更换RPM11640培养液。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率;荧光显微镜观察EJ细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;并对凋亡相关Bcl-2蛋白表达进行检测。结果0．5—2．0mg／ml苦参碱可有效抑制EJ细胞增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性,作用72h时2．0mg／ml的抑制率为50．65％±2．78％,凋亡率为36．35％±2．06％,与对照组比较,P均〈0．01;荧光显微镜下可观察到细胞内空泡与核碎裂现象;Bcl-2蛋白表达随药物浓度增高和作用时间延长而下降。结论苦参碱能诱导EJ细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。     

氧化苦参碱及苦参碱对大鼠肝细胞凋亡的影响

随着对细胞凋亡研究的深入 ,人们认识到肝细胞的异常凋亡与各种急、慢性肝病的发生密切相关。尤其是病毒性肝炎 ,虽然其发病机制十分复杂 ,但是由病毒感染后所引起的肝细胞凋亡是不容忽视的一个重要因素。在多种细胞凋亡相关因子中肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)是一种重要的炎症介质。我们将临床上用于治疗肝病的氧化苦参碱 (Ｏｘｙ ｍａｔｒｉｎｅ)及苦参碱 (Ｍａｔｒｉｎｅ)应用于体外肝细胞培养体系 ,观察其对ＴＮＦ α及放线菌素Ｄ(ＡｃｔＤ)所诱导的肝细胞凋亡的影响 ,以期从肝细胞凋亡的角度探讨其保肝的作用机制是否与抑制肝细胞凋亡有…     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对苦参碱诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的 观察二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制核因子-κB(NF-κB)活化后对苦参碱诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法 MTT法观察苦参碱(分0.8、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L组)及PDTC联合苦参碱对HepG2细胞增殖的抑制作用.将HepG2细胞随机分为细胞对照组、PDTC组(20μmol/L)、苦参碱组(1.5 g/L)和PDTC+苦参碱联合组,流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法检测细胞凋亡;电泳迁移率改变实验检测细胞核内NF-κB的活化水平.结果 PDTC增强了苦参碱对细胞增殖的抑制作用(F=183.92,P＜0.01).苦参碱同时具有诱导HepG2细胞凋亡和NF-κ B活化的作用;PDTC能显著增加苦参碱诱导的HepG2细胞凋亡和抑制苦参碱诱导的HepG2的NF-κB活化,细胞凋亡率由6.11%±0.81%增加至12.95%±0.02%(χ2=9.67,P＜0.05),NF-κB活化的灰度值由38.82±0.17降至32.01±0.69(χ2=10.38,P＜0.05).结论 苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的同时激活NF-κB;PDTC可通过抑制NF-κB活化,增强苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的作用.     

吴茱萸碱诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的实验研究

目的 探讨吴茱萸碱诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的不同机制。方法 应用MTT法检测吴茱萸碱对PC-3细胞生长的抑制作用,Western blot法检测吴茱萸碱诱导PC-3细胞凋亡的信号通路。结果 吴茱萸碱（≥1μmol/L）明显抑制PC-3细胞生长,吴茱萸碱作用24 h后,caspase蛋白酶凋亡通路被激活,caspase-3和caspase-9的表达增加,同时bcl-2蛋白表达减少而bax蛋白表达增加。结论 吴茱萸碱对前列腺癌PC-3细胞主要是通过激活caspase通路及下调bcl-2表达和增加bax表达等信号通路诱导细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

目的为维生素E琥珀酸酯（VES）用于前列腺癌的治疗奠定基础。方法将不同浓度的VES培养液作用于体外培养的前列腺癌PC-3细胞。噻唑兰（MTr）比色法检测细胞增殖活性,计算细胞移植率;光镜下观察细胞形态变化,流式细胞术（FCM）分析细胞周期并测定Fas蛋白表达水平;酶联免疫法检测TGF-β表达水平。结果VES作用后细胞抑制率明显增加,且呈浓度及时间依赖性;光镜下PC-3细胞呈典型凋亡的形态学改变;FCM细胞周期分析显示,G2／M期细胞增加而S期细胞明显减少（P〈0．05）。Fas蛋白和TGF—β表达明显上调。结论VES可抑制PC-3细胞生长增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能为上调Fas、TGF-β的表达。     

抗凋亡因子XIAP和PED/PEA-15在前列腺癌(PC-3)中的表达及对细胞凋亡的影响

目的 检测抗凋亡因子XIAP与PED／PEA-15在前列腺癌细胞（PC-3）中的表达，探讨二者对前列腺癌细胞凋亡的影响。方法 应用半定量RT—PCR法检测前列腺癌细胞（PC-3）中PED／PEA-15和XIAP的表达。设计并构建PED／PEA-15和XIAP特异的siRNA载体，以脂质体法转染二者的siRNA载体至前列腺癌细胞（PC-3）中，半定量RT-PCR法检测特异siRNA载体对PED／PEA-15和XIAP转录的影响；光镜观察细胞形态改变；流式细胞法检测细胞凋亡的变化。结果 半定量RT-PCR显示PED／PEA-15和XIAP均在前列腺癌细胞（PC-3）中高表达。酶切和DNA测序证实XIAP和PED／PEA-15siRNA载体构建成功。共转染XIAP和PED／PEA-15siRNA载体入PC-3细胞，可导致XIAP和PED／PEA-15的转录抑制，并增加PC-3细胞对阿霉素的敏感性，凋亡明显增加，处理组凋亡率为79％，对照组为46％，两组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 PED／PEA-15和XIAP在前列腺癌的凋亡中可起重要作用。     

苯乙酸钠诱导人前列腺癌细胞凋亡及其机理的研究

目的　探讨苯乙酸钠 (Na PA)诱导人前列腺癌细胞株 (PC- 3)凋亡及其分子机理。方法　应用流式细胞术 (FCM)观察不同剂量 Na PA对 PC- 3细胞周期改变的影响 ,通过 RT- PCR检测 bcl- 2和增殖细胞核抗原 (PCNA)在 m RNA水平的表达。结果　 PC- 3细胞体外经不同剂量 (0m M/ L,1 .5m M/ L,3.0 m M/ L,6.0 m M/ L) Na PA处理后 ,细胞周期的 G0 / G1 期升高 ,S期、G2 / M期相对下降 ,G0 / G1 峰前有明显的亚二倍体峰 ,即凋亡峰 ,且随着 Na PA浓度的增加 ,凋亡细胞数逐渐增多 (P<0 .0 0 1 ) ;bcl- 2和 PCNA在 m RNA水平随 Na PA剂量的增加 ,表达量下降。结论　Na PA可能通过下调 bcl- 2和 PCNA在 m RNA水平的表达诱导 PC- 3细胞凋亡。     

青蒿琥酯对人前列腺癌PC3细胞的增殖抑制作用及机制探讨

目的探讨青蒿琥酯（Art）对人前列腺癌PC3细胞株增殖的抑制作用及机制。方法用不同浓度Art干预PC3细胞。采用MTT法检测用药后细胞增殖水平;用流式细胞术（FCM）检测细胞周期的改变和凋亡率;采用Western blot法检测不同浓度Art作用48h后PC3细胞Livin和Caspase-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,Art可显著抑制PC3细胞增殖（P〈0．01）。PC3细胞主要被阻滞在G0／G1期,PC3细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组（P〈0．01）,且呈时间剂量依赖性。与对照组相比,各实验组PC3细胞survivin的表达显著下调（P〈0．01）,而Caspase-3的表达增加（P〈0．01）。结论Art可抑制PC3细胞增殖,其作用机制可能与调控细胞周期以及下调Livin的表达、上调Caspase-3而诱导PC3细胞凋亡有关。     

DIM联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的 探讨3,3-二吲哚基甲烷(DIM)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞的抑制作用.方法 CCK-8法测定DIM、TRAIL及DIM联合TRAIL作用于PC-3细胞后的细胞生存率,同时用流式细胞术测定细胞凋亡率,Western印迹检测caspase-3表达水平的变化.结果 各给药组与对照组比较均能不同程度抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡,且caspase-3表达上调;DIM与TRAIL联用明显增强诱导凋亡作用.结论 DIM与TRAIL联用均可明显增强PC-3细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其凋亡作用机制可能与其上调caspase-3表达有关.     

苦参碱诱导H466肺癌细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响

目的探讨苦参碱诱导H466肺癌细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响。方法将肺癌H466细胞分为三组,对照组为H466细胞,低处理组为H466细胞+0.5g的苦参碱;高处理组为H466细胞+2.0g的苦参碱,采用MTT、免疫双荧光、流式细胞仪、免疫印迹及qRT-PCR检测肺癌H466细胞的凋亡率、细胞周期及Wnt的蛋白表达及β-cateninmRNA表达。结果 MTT实验证明,低处理组的肺癌H466细胞活性低于对照组(P0.05),高处理组的肺癌H466细胞活性低于低处理组(P0.05),说明苦参碱对肺癌H466细胞具有抗肿瘤作用;对照组为正常的肺癌H466细胞呈蓝色荧光表达的活细胞,低处理组发现H466细胞呈现早期凋亡并细胞核破碎形成凋亡小体,凋亡程度高于对照组(P0.05),死亡的肺癌细胞呈现荧红色,在高处理组中的死亡率高于低处理组(P0.05);H466细胞在苦参碱作用下,在G0/G1期细胞比例升高,S期呈现下降趋势,对照组与低处理组相比差异较小(P0.05),高处理组与低处理组比较有差异(P0.05),但在G2/M无明显改变,G0/G1在高处理组凋亡率呈现增高的趋势;低处理组中的Wnt-2信号通路中的表达少于对照组(P0.05),与低处理组相比高处理组中表达最低(P0.05);qRT-PCR显示:低处理组的β-catenin mRNA表达少于对照组,在高处理组中β-catenin mRNA表达少于低处理组。结论苦参碱可以加快肺癌H466细胞凋亡,在这过程中可能与阻断Wnt信号通路传导有关,苦参碱可以阻断Wnt信号表达,抑制肺癌细胞分化。     

苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的研究苦参碱对体外培养肝星状细胞(HSC)增殖与凋亡的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化作用机制。方法用0.125、0.25、0.5mgml的苦参碱分别处理HSC细胞系rHSC99和肝细胞株HL770224h后,MTT比色法检测细胞增殖,AnnexinVFITCPI双染色流式细胞分析法检测早期细胞凋亡,TUNEL法原位检测DNA断裂,透射电镜观察形态改变。结果①苦参碱对HSC增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量依赖性;苦参碱对肝细胞增殖有促进作用,但促增殖作用不随浓度增加而增强。②AnnexinVFITCPI双染色流式细胞分析:对照组、苦参碱0.125mgml组、0.25mgml组、0.5mgml组凋亡率分别为0.99%±0.45%、5.00%±0.98%、13.6%±2.19%、17.2%±2.17%,差异有显著性(F=63.14,P<0.05)。苦参碱处理组细胞TUNEL检测发现DNA断裂,透射电镜下见核仁消失,染色质浓缩并凝聚成团块状,沿核膜排列。结论苦参碱可抑制HSC增殖、诱导HSC凋亡,可能是其抗肝纤维化机制之一。     

氧化苦参碱对喉癌细胞株Hep-2抑制增殖及诱导凋亡的实验研究

目的观察氧化苦参碱（Oxy）对喉癌细胞株（Hep-2）的抑制增殖及诱导凋亡作用。方法培养喉癌细胞株（Hep-2）,MTT比色法及流式细胞术测定Oxy对喉癌细胞株Hep-2抑制增殖及诱导凋亡的作用。免疫沉淀法纯化蛋白并ERK1／2试剂盒测定细胞外调节信号激酶（ERK）活性;Western blot测定p-ERK、Bax及Bcl-2表达。结果Oxy明显抑制Hep-2细胞增殖,诱导Hep-2细胞凋亡;Oxy可抑制ERK活性及p-ERK表达,同时上调Bax表达,降低Bcl-2表达。结论Oxy可以抑制Hep-2增殖,机制与抑制ERK活性及p-ERK表达有关;同时可诱导凋亡,其途径与上调Bax表达,降低Bcl-2表达有关。