体外扩增法分离培养兔骨髓来源的血管内皮祖细胞

背景：体外扩增法培养血管内皮祖细胞操作简便、费用低廉是实验中获取内皮祖细胞的主要方法。 目的：拟从兔的骨髓中通过体外扩增法分离培养出血管内皮祖细胞，为进一步观察自体血管内皮祖细胞移植促进血管内皮的修复提供细胞学基础。 设计、时间及地点：开放性实验，于2005-03/2006-02在解放军第二军医大学长征医院内科实验室完成。 材料：6~8月龄新西兰大白兔8只，雌雄不拘，体质量 (2.5±0.5) kg，抽取骨髓，密度离心法分离骨髓单个核细胞 方法：将骨髓单个核细胞接种于密度为1×106 cm-2，加入含有血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的M199培养基中体外扩增培养7 d，通过DiL标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的凝集素BS-1双染法鉴定血管内皮祖细胞，显示红色荧光的为吞噬了乙酰化低密度脂蛋白的细胞，绿色荧光为结合BS-1的细胞，双染色为橙色荧光。免疫荧光染色及流式细胞仪检测CD133，CD34，Flk-1的表达。 主要观察指标：①细胞形态观察。②血管内皮祖细胞的增殖能力。③乙酰化低密度脂蛋白和凝集素BS-1双染法鉴定血管内皮祖细胞结果。④血管内皮祖细胞免疫组织化学鉴定结果。⑤血管内皮祖细胞表面标志物流式细胞仪检测结果。 结果：①细胞形态观察：新分离的骨髓单个核细胞呈圆形，培养72 h后可见贴壁细胞呈集落样生长，细胞呈圆形或不规则形，核分裂相明显，至培养第7天成片生长的细胞集落相互连接，呈梭形的内皮样细胞。②血管内皮祖细胞的增殖能力：培养2~4 d血管内皮祖细胞增殖较快，之后增殖速度减缓，生长曲线呈典型“S”形外观，培养第6，7天血管内皮祖细胞生长再次增快，吸光度值分别达到0.58±0.15和0.62±0.23。③在血管内皮祖细胞的胞质中，出现与乙酰化低密度脂蛋白结合的红色荧光聚集，阳性率达95%以上；与凝集素BS-1结合率几乎达100%；两者双染色率达90%以上。④血管内皮祖细胞免疫组织化学及流式细胞仪检测细胞表面标志物CD133，FlK-1，CD34均呈阳性。 结论：体外扩增法成功地从兔骨髓中分离培养出具有血管内皮祖细胞特征的细胞群体。     

骨髓基质细胞及血管内皮祖细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响

目的 观察经静脉移植骨髓基质细胞(BMSCs)及血管内皮祖细胞(EPCs)后,缺血性脑损伤大鼠神经系统功能恢复情况.方法 40只健康成年Wistar大鼠按随机数字表法分为模型组、移植BMSCs组、移植EPCS组、移植BMSCs/EPCs组,每组10只.线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.造模后24h取1 mLBMSCs、EPCs、BMSCs/EPCs细胞悬液(3×10~6个/mL)分别经尾静脉注射移植入后3组大鼠.模型组大鼠注射等量生理盐水.移植前、移植后1、7、14、28 d,采用旋转试验、躯体感觉试验、神经系统功能评分(NSS)评估各组大鼠神经功能的恢复情况.移植后28d,免疫荧光染色检测各组大鼠缺血脑组织的微血管密度(MVD).结果 移植后第7天,旋转试验显示移植BMSCs/EPCs组大鼠旋转时间长于其他3组,躯体感觉试验和NSS评分分别显示移植BMSCs/EPCs组大鼠移物时间和NSS评分低于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);移植后28 d,免疫荧光染色检测结果显示缺血脑组织MVD明显高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 静脉BMSCs/EPCS联合移植可增强缺血性脑损伤功能的恢复.     

骨髓基质细胞及血管内皮祖细胞共移植对局灶性脑缺血大鼠系列生长因子表达的影响

目的 观察经静脉移植骨髓基质细胞(BMSCs)及血管内皮祖细胞(EPCs)后血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、转化生长因子β(TGF-β)、血小板源性生长因子(PDGF)、脑源性生长因子(BDNF)、胶质源性生长因子(GDNF)和神经生长因子(NGF)这9种细胞因子的表达. 方法 80只健康成年Wistar 大鼠按照随机数字表法分为模型对照组、BMSCs移植组、EPCs移植组及联合移植组,每组20只.线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型.造模24h后,分别取浓度为3x106个/mL的BMSCs、EPCs悬液及两者混合液1mL经鼠尾静脉移植入BMSCs移植组、EPCs移植组及联合移植组;模型对照组鼠尾静脉注射1 mL生理盐水.移植后7d,实时荧光PCR、Western boltting检测各组大鼠脑内生长因子的表达. 结果 联合移植组中bFGF、VEGF、BDNF mRNA表达水平最高,与其他3组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).BMSCs移植组中NGF、GDNF、TGF-β mRNA表达水平最高,与其他3组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),联合移植组次之.EPCs组中PDGF-BB、IGF-1、SDF-1 mRNA表达水平最高,与其他3组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),联合移植组次之. 结论 BMSCs及EPCs联合静脉移植可上调脑内生长因子表达水平,为提高细胞移植效率提供了新的尝试途径.     

自体骨髓单个核细胞移植起搏器诱导心力衰竭犬心功能变化

背景：干细胞再生可修复受损心肌,但目前利用骨髓单个核细胞移植治疗非缺血性心力衰竭的研究相对甚少。 目的：探讨自体骨髓单个核细胞心肌移植后,对起搏器诱导的心力衰竭模型犬心功能的影响。 方法：细胞移植组、模型对照组犬均通过快速右室心尖部起搏建立心力衰竭模型。造模后,细胞移植组通过心肌直接注射法分多点注入CM-DiI标记的骨髓单个核细胞悬液,模型对照组同法注入等量生理盐水。4周后取材,取心尖、前壁和室间隔心肌,FITC标记心肌肌钙蛋白,观察心肌纤维化程度,测定心肌胶原容积分数,并进行血流动力学检查。 结果与结论：细胞移植组可见CM-DiI和FITC双重染色的双阳性的细胞,呈黄色荧光;模型对照组仅可见FITC染色的绿色荧光图像。苏木精-伊红及Masson染色结果示,模型对照组间质中可见炎性细胞浸润,呈显著间质纤维化和心肌细胞纤维化;而细胞移植组未见明显间质炎性细胞浸润,间质无心肌细胞纤维化,提示快速右室心尖部起搏可成功建立犬心力衰竭模型。与模型对照组比较,移植后4周细胞移植组心尖、前壁、室间隔的胶原容积分数均明显降低(P < 0.05),射血分数明显升高 (P < 0.05),左室舒张末期内径及左室收缩末内径均无明显变化(P > 0.05)。说明自体骨髓单个核细胞在心力衰竭犬心肌中可增殖分化为心肌样细胞,并改善心功能,其机制可能与抑制心力衰竭心肌纤维化进程有关。     

骨髓单个核细胞移植治疗急性脊髓损伤*

目的：研究已证实，各种干细胞移植治疗损伤脊髓，都可以一定程度的恢复脊髓中枢神经的功能。但对骨髓单个核细胞移植治疗损伤脊髓以及长期效果的研究少见。利用大鼠抽取新鲜分离的骨髓单个核细胞,将其移植入脊髓损伤大鼠模型,评价脊髓功能恢复情况、神经再生和新生血管形成及长期预后效果。 方法：实验于2005-10/2006-04在上海第二医科大学发育生物学研究中心实验室完成。实验室级别：生物安全一级。①实验材料：8周龄SD雌性大鼠，体质量200~220 g，清洁级，由中国科学院实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：从大鼠胫骨及股骨采集骨髓细胞,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞备用。制作大鼠脊髓损伤动物模型，将造模成功22只大鼠随机分成2组:模型+细胞组（n =11）：脊髓完全横断T9~10后，椎管内注射骨髓单个核细胞；模型+DMEM组（n =11）：脊髓完全横断T9~10后在损伤邻近区注射DMEM。假手术组（n =9）：仅剪除T9-10棘突和椎板后，不损伤脊髓，逐层缝合。③实验评估：采用原位杂交和免疫组织化学技术检测移植细胞在宿主脊髓内的存活情况，BBB评分评估大鼠脊髓神经功能恢复情况。 结果：①假手术组在术后各时间点观察中评分无明显差异，属评分正常。模型+DMEM组评分为0分，其脊髓功能无明显恢复。模型+细胞组在2，4，6，8周脊髓功能处于逐渐恢复的过程。与模型+DMEM组及假手术组比较，差异有显著性意义 (P < 0.01)。②原位杂交和免疫组织化学检测显示，移植的细胞能在宿主体内存活，并嵌合到宿主脊髓组织表达血管标志。 结论：骨髓单个核细胞移植后8周，不仅能够在损伤脊髓内存活，而且还能分化新生血管，促进脊髓功能的恢复。     

经冠状动脉移植自体骨髓单个核细胞治疗犬急性心肌梗死

背景：近年的研究表明,细胞移植可以修复受损的心肌组织,促进缺血区域新生血管的形成,改善缺血心肌的灌注和收缩功能。 目的：观察自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植至犬心肌梗死模型后在体内的分化及对心功能的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-09/2008-04在天津泰达国际心血管病医院动物实验室完成。 材料：成年杂种犬16只,体质量15~25 kg,通过结扎冠状动脉前降支中段建立急性心肌梗死模型。 方法：16只杂种犬投币法随机分为移植组(n=10)和对照组(n=6),移植组于心肌梗死后2 h经冠状动脉内移植CM-DiI标记的骨髓单个核细胞;对照组注射等量生理盐水。冠状动脉结扎后2 h及6周时行超声心动图检查,移植后6周处死所有动物于梗死区及其邻近部位取材。 主要观察指标：①心肌梗死后6周两组心功能指标比较。②荧光显微镜下观察骨髓单个核细胞在心肌组织中的分化情况。③透射电镜观察移植组梗死区心肌组织的变化。 结果：纳入杂种犬16只,全部存活。左前降支结扎2 h后可见结扎点远端心肌组织变紫,室壁活动减弱,心电图出现ST段弓背样抬高。①对照组心肌梗死后6周和心肌梗死后2 h相比各项指标均无显著改善(P > 0.05)。移植组术后6周时左心室射血分数、左心室收缩期末内径及左心室短轴缩短率均较心肌梗死后2 h有明显改善(P < 0.01),其中左心室射血分数与对照组相比亦有明显改善(P < 0.05),移植组射血分数较对照组提高7%左右。②荧光显微镜下可见移植组自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植后可分布于梗死区及梗死周边区,并表达肌球蛋白重链;正常心肌组织及对照组心肌组织内未见移植细胞。③透射电镜下可见移植组分化完全的血管内皮细胞及类心肌样细胞。 结论：骨髓单个核细胞可在梗死区梗死周边区存活并逐渐分化成心肌样细胞,促进缺血心肌血管新生,改善心功能。     

自体骨髓内皮祖细胞移植治疗动脉粥样硬化大鼠急性脑缺血的实验研究

目的 探讨自体骨髓内皮祖细胞移植治疗动脉粥样硬化大鼠急性局灶性脑缺血的有效性.方法 高脂膳食制备20只动脉粥样硬化大鼠模型,采集骨髓,分离血管内皮祖细胞(EPCs)并扩增培养,检测其表面标记物的表达;第7天采用线栓法制作急性局灶性脑缺血模型,造模后3 h进行移植,其中实验组经颈静脉自体移植BrdU标记的EPCs,对照组给予等量的PBS.急性脑缺血术后6 h和第1、3、7、10、14天通过神经功能缺损评分(mNSS)量表行行为学评价,免疫组化染色观察BrdU标记的EPCs在缺血脑组织的分布和血管密度.结果体外培养大鼠骨髓来源的EPCs,细胞数目可达到5×106;CD34免疫荧光和FLK-1免疫组化鉴定呈阳性,并能特异性吸附FITC-UEA和内吞DIL-Ac-LDL.第14天实验组mNSS得分为6.13±0.30.对照组为8.50±0.46,比较差异具有统计学意义(P<0.05),实验组神经功能的恢复优于对照组.第28天实验组脑缺血区和血管壁可见BrdU标记的EPCs,而对照组则为阴性.免疫组化染色显示实验组大鼠缺血脑组织血管数为16.87±5.52,对照组大鼠缺血脑组织血管数为12.76±4.94,比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 从活体大鼠骨髓中分离的EPCs通过自体移植后可以进入脑缺血区并长期存活,其能够促进神经功能恢复,这可能与血管再生有关.     

经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死40例

选择南昌大学第二附属医院心内科2004-01/2006-12收治的急性前壁心肌梗死患者40例，经皮腔内冠状动脉成形术后立即将提取的骨髓单个核细胞群分3次缓慢注入左冠状动脉前降支，进行骨髓单个核细胞移植。应用超声心动图检测移植前、移植后5 d患者左心室舒张末径、左心室收缩末径和左心室射血分数。移植5 d后左心室舒张末径较移植前缩小(1.20±3.77) mm (P > 0.05)，左心室收缩末径较移植前缩小(4.50±4.52) mm (P < 0.01)，左心室射血分数较移植前提高(10.65±9.83)% (P < 0.01)。冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死能明显改善左心室收缩功能，短期疗效良好。     

脐血血管内皮祖细胞移植对心肌梗死血管形成的影响

背景：人体内存在一种能以血管发生方式形成新生血管的内皮祖细胞,更新了传统意义上的出生后血管生成、血管损伤修复的理论。 目的：观察犬脐血血管内皮祖细胞移植对梗死心肌血管形成的影响。 设计、时间及地点：细胞学体内实验,于2006-05/2007-03在新华医院实验中心完成。 材料：接近足月的妊娠杂种犬1只,用于制备脐血血管内皮祖细胞;成年犬36只,随机分为细胞移植组、模型对照组,18只/组。 方法：2组犬均于冠状动脉前降支第1对角支分出后结扎建立急性心肌梗死模型。细胞移植组向冠状动脉内注射含5×106个血管内皮祖细胞(经BrdU标记)的生理盐水2 mL,模型对照组同法注射单纯等量生理盐水。移植后1,4,8周处死取材。 主要观察指标：心肌标本苏木精-伊红染色确认梗死模型,BrdU免疫组化染色观察心肌血管新生情况,vW因子染色观察梗死心肌血管数。 结果：心肌梗死区可见大量的瘢痕组织、成纤维细胞以及小血管形成。细胞移植组梗死心肌区小血管上可见部分细胞核内有棕黄色颗粒,BrdU呈阳性表达;模型对照组无明显新生血管。细胞移植组在心肌缺血区和梗死区血管内皮细胞的胞浆内有棕黄色颗粒,vW因子呈阳性表达;模型对照组不表达vW因子。心肌梗死后第1,4,8周,细胞移植组和模型对照组的心肌缺血区、梗死区的血管数均无明显差异(P > 0.05)。 结论：犬脐血血管内皮祖细胞移植至梗死心肌后可参与血管形成,但尚不能够促进心肌的血管再生。     

骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭的效果评估

背景：目前关于干细胞移植的疗效与分化机制尚未达成共识,但大量临床研究结果均显示干细胞移植可以改善心脏功能。 目的：探讨自体骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭患者的效果。 设计：病例分析。 对象：河南省人民医院2003/2008收治的慢性心力衰竭患者80例,分为2组：骨髓细胞移植组48例,标准药物治疗组32例,2组患者在性别、年龄、接受标准药物治疗、移植前超声心动图、血浆脑钠肽和心肌灌注显像检测结果等基线资料方面比较无明显差异(P > 0.05),具有可比性。 方法：在细胞移植前和移植后1年随访期间,2组患者均根据临床需要给予标准的药物治疗。骨髓细胞移植组患者在标准药物治疗的基础上,将自体骨髓单个核细胞悬液10 mL经造影导管缓慢注入冠状动脉内,细胞数(3.1±1.6)×108。 主要观察指标：采用超声仪测定心功能指标的变化,通过双抗夹心免疫荧光法全定量测定血浆脑钠肽含量变化,应用单光子放射计算机断层显像术检测心肌灌注缺损区面积。 结果：2组患者均完成1年随访,移植前后无不良反应和并发症发生。①与移植前比较,1年后骨髓细胞移植组左室收缩末容积明显降低(P < 0.05),左室射血分数明显提高(P < 0.05);标准药物治疗组此2项指标无明显变化(P > 0.05)。与标准药物治疗组比较,1年后骨髓细胞移植组左室收缩末容积、左室射血分数均有明显改善(P < 0.05)。②与移植前比较,2组患者血浆脑钠肽含量均明显降低(P < 0.05或0.01),心肌灌注缺损面积均明显缩小(P < 0.05或0.01),且骨髓细胞移植组变化幅度大于标准药物治疗组(P < 0.05)。 结论：自体骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭安全可行,移植后1年内能明显改善心功能及心肌血流灌注情况。     

Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are involved in aneurysm repair in rabbits

Endothelial progenitor cells (EPC) are believed to be involved in aneurysmal repair and remodeling. The aim of this study was to test this hypothesis and, if true, explore how EPC contribute to aneurysm repair in a rabbit model of elastase-induced carotid aneurysm. Rabbits were divided randomly into an in situ carotid EPC transfusion group (ISCT group, n = 5), and an intravenous EPC transfusion group (IVT group, n = 5). Autologous EPC were double-labeled with Hoechst 33342 and 5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester before injection into the animals in either the carotid artery (ISCT group) or marginal ear veins (IVT group). Three weeks later, labeled cells in the aneurysms were observed with respect to location, adhesion, and growth to detect signs of aneurysm repair. Labeled EPC were detected within the neointima in all five aneurysms in the ISCT group and in three of the five aneurysms in the IVT group, but there was no endothelial growth in the aneurysmal neointima in either group. These results show that bone marrow-derived EPC are involved in the process of aneurysm repair in this rabbit model.     

骨髓基质干细胞与骨缺损的修复

背景：骨髓基质干细胞来源广泛,分离方便,扩增迅速,具有多向分化潜能,适合自体移植的特点,同时是骨组织工程中合适的种子细胞。 目的：总结分析采用骨髓基质干细胞作为种子细胞,并利用转基因或其复合支架修复骨缺损所具有的优势。 方法：检索1990/2009 西文生物医学期刊文献数据及CNKI数据库有关骨髓基质干细胞分离、培养,在骨缺损方面的应用,骨组织工程方面的文献,英文检索词为“Bone marrow stem cells,Repairing,Bone defect”,中文检索词为“骨髓基质干细胞,修复,骨缺损”。排除重复性研究,保留28篇进一步归纳总结。 结果与结论：文章从骨髓基质干细胞作为种子细胞的优势,骨髓基质干细胞的分离和培养,骨髓基质干细胞的成骨诱导及骨髓基质干细胞修复骨缺损等方面进行了总结。利用骨髓基质干细胞作为种子细胞,与适当的支架材料结合,或用骨髓基质干细胞作为靶细胞,导入外源目的基因诱导成骨的基因治疗来修复骨缺损的方法,给骨缺损的治疗带来光明的前景。但同时也存在骨髓基质干细胞存化,骨髓基质干细胞的增殖、分化合适的条件,哪些因子能有效促进新骨形成,载体材料及体内植入方式,以及如何将骨组织工程与基因治疗的方法结合起来等问题需要进一步的研究。     

骨髓间充质干细胞在软骨缺损修复中的应用

学术背景：骨髓间充质干细胞由于其易于获取,并可以在体外短期内大量扩增,是目前最有希望应用于软骨组织工程的干细胞。 目的：对骨髓间充质干细胞在软骨缺损修复中的应用状况进行综述。 检索策略： 由该论文的研究人员应用计算机检索1982-10/2006-12 Pubmed数据库与骨髓间充质干细胞修复软骨缺损相关文献，检索词“Marrow; Mesenchymal stem cells；cartilage defect”，限定语言种类为English, 同时检索1982-10/2006-12 中国科技成果数据库检索词“骨髓；间充质干细胞；软骨缺损”，并限定文章语言种类为中文。共检索到126篇文献，对资料进行初审，纳入标准：①综述类及实验类文章；②中文核心期刊收录文献。排除标准：重复性研究。 文献评价：文献的来源主要来自Pubmed数据库及中国科技成果数据库。文献类型为综述类及实验研究。 资料综合：骨髓间充质干细胞在体内具有分化产生软骨的能力已被证明,而在体外培养条件下软骨表型的分化却是一个受多种因素限制的复杂过程,目前调控机制仍不明确。动物实验表明,骨髓间充质干细胞能够修复具有临床意义的骨和软骨缺损。虽然近年来对骨髓间充质干细胞及其在软骨组织工程方面的研究已取得较大进展,但对骨髓间充质干细胞分化各阶段细胞标志物、骨髓间充质干细胞的增殖、分化的控制及基因转染技术及临床应用的评估结果都有待进一步研究。 结论：动物实验表明,骨髓间充质干细胞能够修复具有临床意义的骨和软骨缺损，虽然近年来对骨髓间充质干细胞及其在软骨组织工程方面的研究已取得较大进展,但对骨髓间充质干细胞的基础和临床研究中仍存在诸多问题需要解决。     

Potential implications of vascular wall resident endothelial progenitor cells

A rapidly increasing body of data suggests an essential role of endothelial progenitor cells (EPCs) in vascular regeneration, formation of new vessels in cardiovascular diseases and also in tumor vasculogenesis. Moreover, recent data obtained from clinical studies with anti-angiogenic drugs in tumor therapy or with pro-angiogenic stimuli in ischemic disorders implicate a predictive role of the number of EPCs circulating in the peripheral blood in monitoring of these diseases. However, there is still some controversial data regarding the relevance of the EPCs in vascular formation depending on models used and diseases studied. One of the essential prerequisites for a better understanding of the whole contribution of EPCs to vascular formation in adult, a process called postnatal vasculogenesis, is to identify their exact sources. We could recently discover the existence of EPCs in a distinct zone of the vascular wall of large and middle sized adult blood vessels and showed that these cells are capable to differentiate into mature endothelial cells, to form capillary sprouts in arterial ring assay and to build vasa vasorum-like structures within the vascular wall. They also can be mobilized very rapidly from the vascular wall by tumor cells. This review will discuss the functional implications of these vascular wall resident endothelial progenitor cells (VW-EPCs) in relation to those of EPCs circulating in peripheral blood or derived from the bone marrow in cardiovascular and neoplastic diseases.     

骨髓间充质干细胞移植修复肾损伤

背景：研究发现外源性骨髓间充质干细胞能够定居于肾脏并且分化为肾脏细胞，参与损伤肾组织的修复，但对其修复作用途径尚无公认。 目的：探讨外源性骨髓间充质干细胞移植对肾损伤的可能治疗作用。 设计、时间及地点：细胞学体内实验，于2007-03/09在南昌大学泌尿外科研究所完成。 材料：清洁级SD大鼠56只。雄鼠8只用于制备骨髓间充质干细胞，雌鼠48只随机分为细胞移植组、模型对照组、假手术组，16只/组。荧光染料DAPI为Biotium Inc产品，蓖麻血凝素为Vector Laboratories产品，BrdU为Sigma产品。 方法：以密度梯度离心法分离鼠骨髓间充质干细胞，加入DAPI进行标记，调整细胞数为1.5×1010 L-1。细胞移植组、模型对照组建立缺血再灌注肾损伤模型，假手术组开腹后不予结扎肾血管。缺血45 min后，细胞移植组经下腔静脉注入用DAPI标记的骨髓间充质干细胞悬液1 mL，模型对照组、假手术组输入1 mL无菌生理盐水。移植后各组每天腹腔注射BrdU，其后留取血标本和肾组织。 主要观察指标：荧光显微镜及免疫组织化学染色观察移植细胞在肾组织中的分布，采用能与肾小管内腔壁特异结合的蓖麻血凝素鉴定移植细胞的分化，以免疫组化方法检测Brdu反映肾组织细胞的增殖状况，检测血清肌苷、尿素氮水平。 结果：移植后第3天可见少量DAPI阳性细胞，第4天DAPI阳性细胞数明显增加（P < 0.05），且多数DAPI标记细胞能结合蓖麻血凝素，DAPI阳性细胞主要分布于肾脏外髓质肾小管中，肾皮质和内髓质阳性细胞很少，而肾小球内则未见DAPI阳性细胞。假手术组肾组织细胞增殖非常弱，移植后第4天Brdu阳性细胞数明显低于模型对照组（P < 0.05）；移植后第2，3，4天细胞移植组Brdu阳性细胞均明显多于模型对照组（P < 0.05），其分布类似于DAPI阳性细胞。与模型对照组比较，细胞移植组大鼠血清尿素氮水平移植后第1，2天明显降低（P < 0.05）；细胞移植组大鼠血清肌苷水平移植后第1，2，3天均显著降低（P < 0.05）。 结论：移植的外源性骨髓间充质干细胞能够迁移、定居于缺血再灌注损伤后的肾组织中并分化为肾小管上皮细胞；骨髓间充质干细胞移植可促进损伤肾脏本身的细胞增殖再生；对肾损伤后早期肌苷、尿素氮的升高具有一定抑制作用，这种早期对肾功能的保护与其迁移定居到肾脏局部、分化修复损伤的肾小管无关。     

Bone marrow mesenchymal stem cells and spinal cord injury repair

Totally three articles focusing on bone marrow mesenchymal stem cell transplantation under hypothermia, gene-modified bonemarrow mesenchymal stem cell transplantation and simple bone marrow mesenchymal stem cell transplantation     

血管内皮生长因子表达载体的构建及在内皮祖细胞中的表达

背景：血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)具有很强的促进血管生成作用，但构建其真核表达质粒是否可转染血管内皮祖细胞并完整表达还不清楚。 目的：构建VEGF表达载体,并观察其在内皮祖细胞中的表达情况。 设计、时间及地点：观察性试验，于2007-12/2008-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心实验室完成。 材料：质粒PDC315-VEGF165自备，质粒pIRES2-EGFP由美国国立卫生研究院Stanko Stojilkovic教授惠赠。 方法：运用DNA重组技术构建VEGF表达载体pIRES2-EGFP-VEGF，应用脂质体包裹的方法将载体转染猪外周血血管内皮祖细胞。 主要观察指标：采用荧光显微镜观察VEGF在内皮祖细胞内的表达，反转录-聚合酶链反应法检测VEGFmRNA表达水平， ELISA检测VEGF165蛋白表达情况。 结果：成功构建VEGF真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF。转染重组质粒pIRES2-EGFP-VEGF后,在内皮祖细胞内有VEGF的表达，VEGFmRNA和VEGF165 蛋白表达水平均明显增加。 结论：VEGF 表达载体转染猪外周血血管内皮祖细胞后能有效增加VEGF基因的表达，能够获得较高水平的VEGF蛋白。     

骨髓间充质干细胞对大鼠胰腺损伤的修复

背景：胰腺缺血性损伤是临床常见但又难以解决的实际问题,常规的预防和治疗方法收效甚微。骨髓间充质干细胞是近年来兴起的治疗损伤公认有效的手段,因此,有必要寻找利用干细胞治疗缺血性胰腺损伤的方法。目的：观察骨髓间充质干细胞对胰腺缺血损伤的修复作用。方法：采用贴壁培养和组织块培养相结合的方法得到高纯度的骨髓间充质干细胞,在含体积分数为20%胎牛血清的L-DMEM培养液中扩增培养,传3代后用增强型绿色荧光蛋白重组腺病毒标记细胞,注入胰腺缺血性损伤动物模型胰腺局部,观察动物存活率,冰冻切片共聚焦显微镜观察标记细胞位置。结果与结论：实验分离获得了高纯度贴壁生长的骨髓间充质干细胞。注入细胞的动物模型存活率明显高于对照组;共聚焦显微镜观察显示,注入细胞24 h后,细胞可到达受损部位,并聚集在微循环系统中,以后逐渐大量进入受损部位,在循环系统及导管系统中有较高表达。提示采用骨髓间充质干细胞局部注入,可明显增加模型动物的存活率,有利于损伤的胰腺修复。     

Bone marrow-derived endothelial progenitor cells protect postischemic axons after traumatic brain injury

White matter sparing after traumatic brain injury (TBI) is an important predictor of survival and outcome. Blood vessels and axons are intimately associated anatomically and developmentally. Neural input is required for appropriate vascular patterning, and vascular signaling is important for neuron development and axon growth. Owing to this codependence between endothelial cells and axons during development and the contribution of endothelial progenitor cells (EPCs) in ischemic injury, we hypothesized that EPCs are important in axonal survival after TBI. We examined the effects of allogenic-cultured EPCs on white matter protection and microvascular maintenance after midline fluid percussion injury in adult Sprague–Dawley rats. We used two in vitro models of injury, mechanical stretch and oxygen–glucose deprivation (OGD), to examine the effects of EPCs on the mechanical and ischemic components of brain trauma, respectively. Our results indicate that EPCs improve the white matter integrity and decrease capillary breakdown after injury. Cultured cortical neurons exposed to OGD had less axon degeneration when treated with EPC-conditioned media, whereas no effect was seen in axons injured by mechanical stretch. The results indicate that EPCs are important for the protection of the white matter after trauma and represent a potential avenue for therapy.