拟康氏木霉菌YIM PH30002铁载体活性化学成分

通过双层琼脂平板法对拟康氏木霉菌YIM PH30002在三种培养基条件下产铁载体能进行了半定量分析检测,该菌株在PDB培养基中,产铁载体成分的量最多。利用多种色谱技术从菌株YIM PH30002的PDB发酵液的乙酸乙酯提取物中共获得了5个聚酮类代谢产物,经波谱数据分析与文献比对,化合物分别鉴定为:konginginin A(1)、konginginin B(2)、konginginin D(3)、konginginin F(4)、konginginin M(5)。化合物1~4表现有铁载体活性,其中化合物2的铁载体活性相对较强,MTC值约为300μg/m L。但化合物均无显著抗菌生物活性。     

从拟康氏木霉中提取壳聚糖的初步研究

本实验以拟康氏木霉菌丝为原料,采用碱法提取壳聚糖,通过正交实验分析碱浓度和反应时间对壳聚糖产率、脱乙酰度和分子量的影响.结果表明:随着碱浓度的增加和反应时间的延长,产率在一定范围呈先上升后下降的趋势,而壳聚糖的脱乙酰度均增加;碱浓度一定时,壳聚糖的分子量随着反应时间的延长呈先上升后下降的趋势.壳聚糖产率占菌丝体干重达14.4%,纯度为90.2%,脱乙酰度达95.2%.     

拟康氏木霉中内切葡聚糖苷水解酶的化学修饰

动力学研究揭示两个Ｐ来４．４和５．８的氨基酸残基可能对内切酶活性起重要作用,化学修饰研究结果表明一个羧基氨基酸对内切葡聚糖苷水解酶活力的必需的,且可能位地或接近酶的催化位点。     

拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）UV Ⅲ产纤维素酶液体发酵研究

以拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii)TH为出发菌株,经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株UV Ⅲ,其液体发酵最适产酶培养基为（W／V）：豆皮粉3％,硝酸铵0．6％,磷酸二氢钠0．65％,硫酸镁0．25％,氯化钙0．15％,pH5.0;最佳发酵条件为：30℃,125r/min。发酵7d CMCase活力可达103．55IU／mL,滤纸酶活可达5．51IU／mL,β-葡萄糖苷酶活可达0．96IU／mL,分别比出发菌株TH提高了1．40、2．34、0．60倍。     

拟康氏木霉eg1基因的克隆及在酿酒酵母中的分泌表达

从拟康氏木霉3.3002基因组中克隆了内切葡聚糖酶EGI基因,该基因全长1566 bp,由3个外显子2个内含子组成,编码461个氨基酸.编码蛋白EGI的N端为22aa组成的信号肽,其后依次为催化结构域、连接肽和结合结构域.采用重叠PCR法获得无内含子的内切葡聚糖酶基因eg1,并将其成熟肽编码序列插入酿酒酵母分泌型表达载体pYEα中,构建成pYEα-Peg1重组质粒,转化酿酒酵母.重组转化子经β-半乳糖诱导,检测表达产物的分子大小以及酶活,结果表明,转化子在刚果红平板上可产生明显的水解圈;酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EG I并分泌到胞外;SDS-PAGE电泳显示EGI蛋白分子量比预期目的蛋白稍偏大.     

拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)UV III纤维素酶合成的诱导与阻遏

拟康氏木霉 (T .pseudokoningii)TH经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株UVIII,纤维素酶产量显著提高。研究表明 ,UVIII对诱导物的敏感性增加了 10 0倍 ,并且对葡萄糖的吸收能力明显下降 ,导致部分解除了葡萄糖阻遏作用 ,这可能都是该突变株产酶提高的原因     

拟康氏木霉(Trichoderma psudodoningii)UV III产纤维素酶液体发酵研究

以拟康氏木霉(Trichoderma psudodoningii)TH为出发菌株,经紫外诱变荻得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株uV III,其液体发酵最适产酶培养基为(w/V)豆皮粉3%,硝酸铵0.6%,磷酸二氢钠0.65%,硫酸镁0.25%,氯化钙0.15%,pH5.0;最佳发酵条件为30℃,125r/min发酵7d CMCase活力可达103.55 IU/mL,滤纸酶活可达5.51 IU/mL,β一葡萄糖苷酶活可达0 96IU/mL,分别比出发菌株TH提高了1.40、2.34、0.60倍.     

拟康氏木霉eg1基因的克隆及在酿酒酵母中的分泌表达

从拟康氏木霉3.3002基因组中克隆了内切葡聚糖酶EGI基因,该基因全长1566 bp,由3个外显子2个内含子组成,编码461个氨基酸.编码蛋白EGI的N端为22aa组成的信号肽,其后依次为催化结构域、连接肽和结合结构域.采用重叠PCR法获得无内含子的内切葡聚糖酶基因eg1,并将其成熟肽编码序列插入酿酒酵母分泌型表达载...     

拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)UV Ⅲ纤维素酶合成的诱导与阻遏

拟康氏木霉（T．pseudokoningii)TH经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖遏突变株UVⅢ,纤维素酶产量显著提高。研究表明,UVⅢ对诱导物的敏感性增加了100倍,并且对葡萄糖的吸收能力明显下降,导致部分解除了葡萄糖阻遏作用,这可能都是该突变株产酶提高的原因。     

拟康氏木霉和微紫青霉纤维二糖水解酶基因I(Cbh1)启动子的初步分析

应用PCR技术,分别扩增拟康氏木霉(T.pseudokoningii S38)和微紫青霉(P.janthinellumAs3.510)Cbh1启动子的284 bp和215 bp两个片段,并通过凝胶阻滞试验,初步分析了在槐糖和葡萄糖两种培养条件下Cbh1启动子上参与Cbh1基因表达的调控信息.凝胶阻滞试验结果表明,S38 Cbh1启动子片段与葡萄糖和槐糖培养/诱导条件下的无细胞提取物,均形成了蛋白质-DNA复合物,而As3.510,只有葡萄糖培养条件下的无细胞提取物与其启动子片段,形成了蛋白质-DNA复合物.表明在S38 Cbh1启动子的一302/一18 bp处,可能存在与槐糖和葡萄糖介导的调控蛋白相互作用的特定核酸基元,而在As3.510 Cbh1启动子上的一280/一65 bp处有与葡萄糖介导的阻遏蛋白相互作用的特定核酸基元.竞争性阻滞试验结果表明,S38和As3.510 Cbh1启动子片段与胞内调控蛋白的相互作用是特异性的.     

拟康氏木霉和微紫青霉纤维二糖水解酶基因Ⅰ(Cbh1)启动子的初步分析

应用 PCR技术 ,分别扩增拟康氏木霉 (T.pseudokoningii S38)和微紫青霉 (P.janthinellumAs3.51 0 ) Cbh1启动子的 2 84bp和 2 1 5bp两个片段 ,并通过凝胶阻滞试验 ,初步分析了在槐糖和葡萄糖两种培养条件下 Cbh1启动子上参与 Cbh1基因表达的调控信息 .凝胶阻滞试验结果表明 ,S38Cbh1启动子片段与葡萄糖和槐糖培养 /诱导条件下的无细胞提取物 ,均形成了蛋白质 - DNA复合物 ,而 As3.51 0 ,只有葡萄糖培养条件下的无细胞提取物与其启动子片段 ,形成了蛋白质 -DNA复合物 .表明在 S38Cbh1启动子的 - 30 2 /- 1 8bp处 ,可能存在与槐糖和葡萄糖介导的调控蛋白相互作用的特定核酸基元 ,而在 As3.51 0 Cbh1启动子上的 - 2 80 /- 65bp处有与葡萄糖介导的阻遏蛋白相互作用的特定核酸基元 .竞争性阻滞试验结果表明 ,S38和 As3.51 0 Cbh1启动子片段与胞内调控蛋白的相互作用是特异性的 .     

拟康氏木霉和微紫青霉纤维二糖水解酶基因Ⅰ(Cbh1)启动子的初步分析

应用 PCR技术 ,分别扩增拟康氏木霉 (T.pseudokoningii S38)和微紫青霉 (P.janthinellumAs3.51 0 ) Cbh1启动子的 2 84bp和 2 1 5bp两个片段 ,并通过凝胶阻滞试验 ,初步分析了在槐糖和葡萄糖两种培养条件下 Cbh1启动子上参与 Cbh1基因表达的调控信息 .凝胶阻滞试验结果表明 ,S38Cbh1启动子片段与葡萄糖和槐糖培养 /诱导条件下的无细胞提取物 ,均形成了蛋白质 - DNA复合物 ,而 As3.51 0 ,只有葡萄糖培养条件下的无细胞提取物与其启动子片段 ,形成了蛋白质 -DNA复合物 .表明在 S38Cbh1启动子的 - 30 2 /- 1 8bp处 ,可能存在与槐糖和葡萄糖介导的调控蛋白相互作用的特定核酸基元 ,而在 As3.51 0 Cbh1启动子上的 - 2 80 /- 65bp处有与葡萄糖介导的阻遏蛋白相互作用的特定核酸基元 .竞争性阻滞试验结果表明 ,S38和 As3.51 0 Cbh1启动子片段与胞内调控蛋白的相互作用是特异性的 .     

康氏木霉(Trichoderma koningii)纤维素酶系中的Cx酶的定位

本文研究了康氏木霉Cx酶的定位。用超声和差速离心法得出Cx酶活力大量存在于培养液的上清液,一部分附着于细胞表面,少量存在于菌丝细胞内。用电镜细胞化学法得出Cx酶位于菌丝细胞壁的表面,较易脱落;有时发现位于质膜内侧与细胞壁之间。     

绿色木霉菌LTR-2孢子提取物的抑菌活性及化学成分分析

通过研究绿色木霉菌LTR-2分生孢子提取物的抑菌活性及化学成分,为进一步提取纯化新型抗生素提供依据。采用固体麸皮培养基培养绿色木霉菌LTR-2,以二氯甲烷浸提法提取分生孢子中的抗菌物质,采用菌丝生长法测定提取物的抑菌活性,并用气相色谱-质谱联用仪进行分析,峰面积归一法计算有关成分的相对含量。绿色木霉菌LTR-2分生孢子的提取物抑菌谱广,对供试11种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用;抑制效果好,对禾谷丝核菌的抑制率为89.3%。从提取物中分离鉴定出60多种化学成分,其中烷烃类成分数量最多,为43种,其他成分有酮类、有机酸类、醇类、烯类等,主要成分是麦角固醇,含量为41.90%。结论:绿色木霉菌LTR-2分生孢子提取物具有抑菌作用。通过化学成分分析,提取物中含有化合物5,6-二氢-6-戊基-2H-吡喃-2-酮,含量为2.35%,结合文献报道,推测5,6-二氢-6-戊基-2H-吡喃-2-酮是提取物中起抑菌作用的物质。     

康氏木霉B－7纤维素酶的产生条件及酶学性质研究

野生型康氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｋｏｎｉｎｇｉ）８５４－Ｂ２经多种理化诱变因子及空间微重力辐射等因素的处理,选育到１株高活力纤维素酶变异株Ｂ－７。其固体培养物的纤维素酶,以滤纸为底物酶活力为３４μ／ｇ,以羧甲基纤维素（ＣＭＣ）为底物酶力为１４７２μ／ｇ。与野生菌８５４－Ｂ２相比,产酶活力水平分别提高５倍和７倍多。酶在滤纸上作用的最适条件为ｐＨ４．５—５．０,温度５５—６０°Ｃ;２５°Ｃ,保温２４ｈ,ｐＨ稳定范围为ｐＨ４．０—６．５;７０°Ｃ保温３０分钟,剩余酶活力３４．４％。     

拟康氏木霉胞壁多糖对黄瓜抗病性的诱导作用

为了更全面地认识拟康氏木霉菌（Trichoderma pseudokoningii SDTP1）的抗病机理,为该菌的开发和科学的施用提供依据,通过灌根处理和人工接病的方式研究了拟康氏木霉菌胞壁多糖（TPWS）对黄瓜幼苗抗病性的诱导作用。结果表明用浓度为200mg／L的TPWS处理后对人工接种尖镰孢分生孢子悬液的黄瓜幼苗的保护作用达到53．8％,浓度进一步提高保护作用升高不明显;用200mg／L的TPWS处理后,黄瓜幼苗下胚轴内苯丙氨酸解氨酶（PAL）和多酚氧化酶（POD）的活性及木质素的含量分别于6、30、30h后开始迅速升高,最高值时分别是对照的2．2、3．1、4．4倍;用200mg／L的TPWS处理后需要4d黄瓜幼苗才能表现出抗病性,不仅降低了伤根接种尖孢镰刀菌分生孢子悬液幼苗的枯萎病发病率,也能降低在茎部和叶面穿刺接种灰葡萄孢分生孢子悬液幼苗的灰霉病发病率。而TPWS在体外对两种病原菌无抑制作用,我们认为经处理的幼苗枯萎病和灰霉病发病率的降低与TPWS诱导了幼苗的抗病性有关,且这种抗性是系统的、非特异性的。抗病性可能与木质素含量的升高有关。     

康氏木霉TN-27饲用木聚糖酶制剂的制备及其性质研究

以康氏木霉为出发菌株 ,经亚硝基胍 (NTG)和60 Co辐射交替诱变处理 ,获得 1株木聚糖酶高产菌TN 2 7,在优化培养条件下 ,产酶活力可达 3 61 7U/g。对该酶的性质研究表明 ,其米氏常数为 4.76g/L ,最适温度 5 0℃ ,最适pH 5 .2 ,热稳定性较好 ,适合于用作饲料酶制剂。     

康氏木霉B—7和黑曲霉X—15原生质体的形成和再生

研究了康氏木霉B－7和黑曲霉X－152株纤维素酶高产菌株的原生质体制备与再生。结果表明,采用纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合酶液,可成功地制备2株真菌的原生质体。其中,B－7以这3种酶的配比6：5：2为最佳,X－15以8：4：2为最佳。原生质体形成的缓冲液系统均以0．2mol/L,pH6．0磷酸盐缓冲液为宜,渗透压稳定剂则分别以0．6mol/LNaCl和0．6mol/L蔗糖为宜。以菌龄18h（B-7）和16h（X－15）2株真菌的菌丝体,在37℃下酶解90min可获得最适量的原生质体,产量分别达9×106个／ml和1．9×107个／ml,且其再生率也较高,均达95％左右。     

康氏木霉REMI突变株的差异表达蛋白分析（简报）

纤维素占植物干重的35%-50%,是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物,它的利用与转化对于解决目前世界能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义.     

拟诺卡氏放线菌YIM90087的代谢产物研究北大核心CSCD

对拟诺卡氏菌YIM90087的固体发酵提取物进行了化学成分研究,从中分离得到10个化合物。通过波谱数据分析,鉴定其结构分别为:(3S)-3-苄基-2,5-哌嗪二酮(1)、(3S,6S)-3-(2-丁基)-6-(1-羟乙基)-2,5-哌嗪二酮(2)、(3S,6S)-3-(2-丁基)-6-羟甲基-2,5-哌嗪二酮(3)、(4S)-4-苄基-1,3-恶唑-2,5-二酮(4)、6'-羟基-4,2',3',4'-四甲氧基-对三联苯(5)、(3S,6S)-3-(4-羟苄基)-6-异丁基-2,5-哌嗪二酮(6)、(3R,8aS)-3-异丙基-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(7)、(3S,6S)-3-异丁基-6-甲基-2,5-哌嗪二酮(8)、(3S,6S)-3-苄基-6-(1-羟乙基)-2,5-哌嗪二酮(9)和(3S,6S)-3-苄基-6-(1-羟丙基)-2,5-哌嗪二酮(10)。化合物4目前只见化学合成报道,为新天然产物。