人类去细胞同种异体神经移植物化学萃取方法的研究

背景研究表明应用化学消化剂处理同种异体神经可以有效地清除细胞、髓鞘而不出现宿主免疫排斥反应,但目前这种方法仅在小动物及低等哺乳类实验中取得成功,离临床应用尚有差距.目的清除人类周围神经中的细胞和髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经移植物.设计非随机非对照实验研究.地点和对象实验在解放军第三○四医院骨科完成,对象为急性脑外伤死亡者,男,26岁,体质量75 kg,死者家属同意遗体捐献.干预切取年轻男性遗体捐献者的长段尺神经,以Triton X-100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理.萃取神经及新鲜神经行HE染色、髓鞘染色及纤维素染色,以观察细胞、髓鞘及神经基底膜;免疫组织化学染色以显示许旺细胞基底板层;行半薄切片及超薄切片透射电镜检查,观察超微结构.主要观察指标去细胞神经的物理形状,组织学观察和超微结构.结果去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性良好.细胞和髓鞘被彻底清除,神经基底膜被保留;许旺细胞基底板层保留完好;去细胞神经为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管.结论Triton X-100及脱氧胆酸钠化学处理方法,可有效清除人类周围神经中的细胞及髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经;该神经移植物保持了网管柱状组织结构,保留了许旺细胞基底板层及其主要成分一板层素.     

以Triton X-100和脱氧胆酸钠为萃取剂制备兔脱细胞神经基质:有最佳时间吗?

背景:与其他脱细胞神经基质制备方法相比,化学萃取的去细胞同种异系(体)神经组织内细胞成分可以较完全地清除,进一步减少了发生免疫排斥反应的可能性,并能较好地保留神经支架的完整性,但制备过程中的相关问题有许多尚需讨论.目的:应用Triton X-100和脱氧胆酸钠化学萃取剂处理新西兰大白兔的面神经,提出脱细胞神经基质制备的所需试剂及最佳时间.设计、时间及地点:随机分组,对比观察细胞学实验,于2009-02/06在滨州医学院附属医院口腔科学实验室完成.材料:3月龄新西兰大白兔15只,体质量2.5-3.0 kg.Triton X-100、脱氧胆酸钠由美国Sigma公司提供.方法:取兔双侧面神经,在手术显微镜下去除神经表面的脂肪组织和神经外膜,将其分为每段10 mm长,共66条.将66条神经随机分成11组,每组6条.除正常对照组外,其余10组均放入培养皿中,先用蒸馏水室温下浸浴12 h,以使细胞和髓鞘在低渗液体中膨胀,使部分细胞被胀破:然后将其中5组置于3%Triton X-100 12,24,36,48,60 h,室温下振荡,另外5组用3%Triton X-100和4%脱氧胆酸钠先后作用12 h(为1个周期),室温下反复振荡1-5个周期.主要观察指标:常规苏木精-伊红染色,光镜下观察去细胞程度及纤维管道结构的完整性.结果:单独应用Triton X-100处理神经即使作用60 h,仍不能将神经中的所有细胞成分去除,且许旺细胞基底膜有较大破坏;Triton X-100配合脱氧胆酸钠处理处理2个周期,可有效地去除神经中的细胞成分及神经纤维髓鞘和轴突,保留完整的许旺细胞基底膜,周边可见神经外膜和束膜.结论:大白兔面神经经Triton X-100和脱氧胆酸钠室温处理2个周期,并不停地振荡,可完全去除神经组织中的所有细胞成分,保留完整的许旺细胞基底膜,得到脱细胞的神经基质.     

化学法制备猕猴去细胞同种异体神经支架

目的:应用化学萃取法制备的同种异体神经移植物存小动物及低等哺乳类动物实验中取得良好的效果,但在萃取猕猴粗大、长段周围神经方面尚末形成标准化程序.目的:研究猕猴化学去细胞同种异体神经制备方法,以期获得低免疫反应的同种异体神经移植物.设计、时间及地点:观察实验,于2003 01/09在中山大学动物实验中心完成.材料:取2.5岁,3.5 kg左右,雄性健康猕猴2只,由广州九佛动物研究中心提供.方法:取4段长5 cm,直径3.5～4.0 mm的坐骨神经,以4%triton-100和4%脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行萃取,萃取神经及未萃取神经于中段取材,行苏木精-伊红染色,纤维素染色,砂罗铬花青染色,S-100免疫组织化学染色,在扫描电镜及透射电镜下舰察超微结构.主要观察指标:神经的组织学及形态学观察.结果:萃取2次后的去细胞神经具有良好的黏性和弹性,细胞和髓鞘被彻底清除,神经纤维支架被保留,成为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的基底膜管架结构.而萃取1次不能完全去除抗原成分,萃取3次则破坏神经纤维支架.结论:应用4%triton-100及4%脱氧胆酸钠萃取2次,可去除猕猴长段、粗人周围神经中的细胞和髓鞘而保留神经的基底膜管和纤维支架结构.     

去细胞同种异体神经支架种植许旺细胞的体外培养

背景:前期的研究中分别探讨了使用复合酶消化法及差速贴壁法对许旺细胞培养的影响以及聚氧乙烯辛烷基酚(TritonX.100)制备同种异体神经支架.目的:通过化学萃取法制备同种异体神经支架,并将培养的许旺细胞与支架进行体外结合培养.方法:取Wistar大鼠双侧坐骨神经,运用30 g/L三硝基甲苯和40 g/L脱氧胆酸钠分别萃取1,2和3次,在萃取神经和未萃取神经的中段取材,行苏木精一伊红染色,S-100及Laminin免疫组织化学染色及透射电镜检测.取SD胎鼠坐骨神经及臂从神经,使用复合酶消化,差速贴壁及Arab.c抑制成纤维细胞生长的培养方法获得大量高纯度的许旺细胞.再把许旺细胞注入同种异体神经支架内,并行透射电镜及扫描电镜观察.结果与结论:用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取后,坐骨神经内细胞和髓鞘被清除,神经基底膜被保留.电镜下可见萃取后的神经由空的神经基底膜管和管之间的胶原纤维构成.萃取次数增加后,神经内残留的S-100蛋白显著减少,但反复萃取后支架结构受破坏.去细胞同种异体神经支架适合许旺细胞体外生长,并有迁移排成行的特性.结果提示,用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取2次可去除细胞而保留神经基底膜管,是制备具有仿生结构神经支架的理想方法.神经支架种植许旺细胞后可能成为一种理想的神经缺损修复材料.     

去细胞同种异体神经种植许旺细胞的体外实验:组织工程化人工神经应用的可行性

目的:许旺细胞作为种子细胞在组织工程化人工神经制备中的作用已被学术界所接受.胎兔的神经系统已发育完善,而免疫系统尚未成熟,探讨将胎兔许旺细胞植入去细胞同种异体神经桥接体制备组织工程化人工神经修复周围神经缺损的可行性.方法:实验于2005-03/2006-03在河北医科大学第三医院完成.①实验材料:SPF级怀孕28 d的新西兰白兔2只、成年新西兰白兔1只.②实验过程:包括胎兔许旺细胞培养、去细胞神经桥接体的制备以及许旺细胞与去细胞神经桥接体的体外种植3个步骤.使用双酶消化法培养许旺细胞并将其种植于经3%TritonX-100作用96 h后的同种异体神经中.③实验评估:分别于培养的1,3,5 d通过石蜡切片苏木精-伊红染色观察许旺细胞在桥接体中的生长情况.结果:①采用双差速贴壁法去除绝大部分成纤维细胞后在细胞培养的初期使用阿糖胞苷抑制成纤维细胞生长,后期培养液中加入神经生长冈子促进许旺细胞牛长能获取大量许旺细胞且纯度可达90%以上.②用3%Triton X-100作用96 h可去除周围神经中的细胞和髓鞘而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构,并且对神经基底膜主要成分一层粘连蛋白无明显影响.③采用胎兔坐骨神经培养的许旺细胞能在用成年兔坐骨神经制备的去细胞桥神经接体中生长良好,并且有迁移成行的特性.结论:种植许旺细胞重新细胞化的去细胞同种异体神经将可能成为一种理想的组织工程化人工神经.     

去细胞周围神经移植物的制备及生物相容性评测

目的：制备去细胞周围神经移植物并评测其生物相容性。 方法：实验于2005-05／12在解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室和组织工程实验中心完成。①将猪肋间神经经低渗、-80℃反复冻融和NaOH裂解等方法制备去细胞神经异体移植物；光、电镜观察其结构特征。②材料细胞毒性试验按照GB／T16886．5-2003《医疗器械生物学评价》体外细胞毒性试验的试验方法进行，毒性程度的评估标准参见美国药典。③大鼠皮下植入试验，取成年SD大鼠9只，于脊柱中线两侧约2cm处平行各取2点作为皮下植入点，植入1cm去细胞异体神经移植物。于手术后第1，2，4周时各取1只大鼠麻醉状态下处死，作组织切片检查。 结果：去细胞神经异体移植物的制备：①应用正常猪的周围神经，清除许旺细胞、神经外膜和束膜细胞以及神经纤维的髓鞘和轴突，保存由许旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。②生物相容性测试结果：显示去细胞神经异体移植物细胞毒性试验为1级。③SD大鼠皮下植入试验结果：去细胞神经异体移植物无明显的免疫排斥反应。 结论：该方法所制备的去细胞神经移植物神经膜管结构保存完好，有良好的组织相容性，可能成为自体神经移植的替代材料。     

三种不同方法制备去细胞神经支架的比较

背景：去细胞异体神经移植物具有完全仿真的三维结构,为细胞附着提供了较理想的三维空间,是目前所有人工合成材料所无法比拟的。目的：对比分析液氮冷冻法、化学法及改良法3种方法对大鼠坐骨神经去细胞化的优劣。方法：切取SD大鼠10mm坐骨神经,分别以液氮冻融法、TritonX-100处理化学去细胞法、改良法处理的化学去细胞法分别制作去细胞神经支架,行苏木精-伊红染色,并在扫描电镜下观察支架超微结构。结果与结论：液氮冻融法去细胞支架内有较多许旺细胞残留,有较多轴突及髓鞘,基膜完整,基膜管欠通畅;TritonX-100处理化学法去细胞神经支架内无明显许旺细胞,管内未见明显轴突及髓鞘残留,基膜完整,基膜管通畅;改良法处理的化学去细胞神经支架内许旺细胞及轴突、髓鞘成分几乎完全消失,去细胞效果更好,基膜完整,基膜管更通畅。表明TritonX-100处理化学去细胞法、改良法处理的化学去细胞法脱细胞效果较好,其中以改良法处理的化学去细胞法最好。     

去细胞周围神经移植物的制备及生物相容性评测

目的:制备去细胞周围神经移植物并评测其生物相容性。方法:实验于2005-05/12在解放军第四军医大学口腔医学院组织病理教研室和组织工程实验中心完成。①将猪肋间神经经低渗、-80℃反复冻融和NaOH裂解等方法制备去细胞神经异体移植物;光、电镜观察其结构特征。②材料细胞毒性试验按照GB/T16886.5-2003《医疗器械生物学评价》体外细胞毒性试验的试验方法进行,毒性程度的评估标准参见美国药典。③大鼠皮下植入试验,取成年SD大鼠9只,于脊柱中线两侧约2cm处平行各取2点作为皮下植入点,植入1cm去细胞异体神经移植物。于手术后第1,2,4周时各取1只大鼠麻醉状态下处死,作组织切片检查。结果:去细胞神经异体移植物的制备:①应用正常猪的周围神经,清除许旺细胞、神经外膜和束膜细胞以及神经纤维的髓鞘和轴突,保存由许旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。②生物相容性测试结果:显示去细胞神经异体移植物细胞毒性试验为1级。③SD大鼠皮下植入试验结果:去细胞神经异体移植物无明显的免疫排斥反应。结论:该方法所制备的去细胞神经移植物神经膜管结构保存完好,有良好的组织相容性,可能成为自体神经移植的替代材料。     

许旺细胞对周围神经再生的促进效应

学术背景:许旺细胞是周围神经纤维的鞘细胞,是周围神经不可缺少的一部分.在周围神经损伤修复过程中,如何运用和调控许旺细胞的活性成为周围神经领域内的研究热点.目的:深入认识许旺细胞的作用及其促周围神经再生的研究进展.检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Science Direct及PUBMED数据库1990-01/2007-10的相关文献,检索词"schwann cells,peripheral nerve injury,proliferation,macrophage,activation,neurotrophic factors,extracellular matrix,adhesionmolecule,axon,interaction,myelination,transplantation,gap,transgene,over-expressing,isolation,purification,stem cells",并限定文章语言种类为English.同时计算机检索中国期刊全文数据库1990-01/2007-10的相关文献,检索词"雪旺氏细胞,周围神经再生,人工神经移植物",并限定文章语言种类为中文.共检索到285篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与许旺细胞促周围神经再生密切相关.②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章.排除标准:①重复性研究.②Meta分析.文献评价:文献的来源主要是通过对许旺细胞促周围神经再生的作用机制与应用及其相关研究进展进行汇总分析,所选用的48篇文献中,2篇为综述,其余均为临床或基础实验研究.＃资料综合:①周围神经损伤后,其远侧段轴突及髓鞘崩解,同时许旺细胞大量增殖,增殖的许旺细胞在基底膜管内形成Bungner带,引导再生轴突的生长并最终形成新的髓鞘;增殖的许旺细胞还通过激活单核/巨噬细胞清除组织碎片、分泌神经营养因子以及维持受损神经元的活力、抑制其凋产,进一步促进周围神经的再生;并且通过许旺细胞与再生轴突之间的缝隙连接和紧密连接,使得再生过程中物质交换和信息交换更为便捷和有效的进行.②目前大量研究尝试利用许旺细胞促进周围神经再生,许旺细胞与人工神经移植物共间运用在动物实验中已经取得了显著功效.随着转基因技术的发展,遗传修饰的许旺细胞成为研究热点.③许旺细胞的分离纯化技术从最早的反复植块法、消化法,到以heregulin/forskolin处理细胞然后用神经切断造模法,再到最近的抗体磁珠分选法,体外培养许旺细胞的纯度得到不断提升.④实验证明间充质干细胞诱导后可以分化为表达p75、S100、GFAP等胶质细胞的标志性分子,并能显著促进轴突生长和髓鞘形成.结论:许旺细胞促进周围神经再生的作用已受到广泛肯定,但其作用的信号通路仍不确定.正确诱导许旺细胞分化为成熟的成髓鞘许旺细胞、保证其在损伤局部的存活是修复周围神经损伤的关键.     

脱细胞枪乌贼神经的制备及其生物相容性

背景：脱细胞哺乳动物神经有有髓纤维直径小、细胞成分不易彻底清除、复合细胞不均匀的缺点。目的：制备脱细胞枪乌贼神经,并探讨其生物相容性。方法：用Hasse化学萃取法制备脱细胞枪乌贼神经,观察其脱细胞的效果、管道及基底膜的完整性,用MTT法检测脱细胞枪乌贼神经与细胞相容性,用皮下植入实验检测其组织相容性。结果与结论：制备的脱细胞枪乌贼神经细胞及髓鞘清除彻底、神经纤维膜管及基底膜保留完整,且膜管粗大。脱细胞枪乌贼神经皮下植入植入后1和2周材料周围有炎症细胞浸润。植入后4周材料周围有薄层纤维结缔组织囊,材料内部及周围只有少量炎症细胞。结果证实,采用Hasse化学萃取法制备的脱细胞枪乌贼神经,细胞清除彻底,神经纤维膜管及基底膜保留完整,与异种细胞及组织相容性良好。     

骨髓间充质细胞构建组织工程神经修复坐骨神经缺损

背景:许旺细胞是周围神经组织工程的种子细胞,但体外分离、培养、纯化许旺细胞较困难.脱细胞同种异体神经移植物具有较强的修复外周神经缺损的能力,且可诱导骨髓间充质细胞分化为类许旺细胞,理论上骨髓间充质细胞可替代许旺细胞作为种子细胞应用于周围神经组织工程.目的:观察骨髓间充质细胞构建组织工程神经修复坐骨神经缺损的效果,评估骨髓间充质细胞作为种子细胞修复周围神经缺损的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-07/12在大理学院基础医学院实验室完成.材料:将30只SD大鼠按随机数字表法分为3组,每组10只.骨髓间充质细胞+异体移植组将骨髓间充质细胞复合脱细胞同种异体神经移植物培养的组织工程神经与两断端用10/0无创线端端吻合;异体移植组将脱细胞同种异体神经移植物桥接;自体移植组将切断的坐骨神经旋转180°端端吻合.方法:运用骨髓间充质细胞构建的组织工程神经修复大鼠10 mm坐骨神经缺损,移植后12周通过坐骨神经功能指数、腓肠肌湿质量恢复率、S-100免疫组织化学染色、电镜等方法观察移植物修复效果.主要观察指标:复合物培养时观察细胞形态的变化;移植后观察坐骨神经功能指数及腓肠肌湿质量恢复率;通过甲苯胺蓝染色观察新生髓鞘形成和轴突生长及神经纤维的分布情况,结合透射电镜及S-100蛋白免疫组织化学染色,观察许旺细胞生长和神经纤维再生情况.结果:坐骨神经功能指数及腓肠肌湿质量恢复率的检测结果显示骨髓间充质细胞+异体移植组优于异体移植组(P<0.05).骨髓间充质细胞+异体移植组复合物中S-100的表达明显高于异体移植组,有髓神经纤维数量、有髓纤维直径和髓鞘厚度均大于异体移植组(P< 0.05),修复效果接近自体移植组.结论:骨髓间充质细胞构建的组织工程神经修复周围神经缺损的效果优于单纯的脱细胞同种异体神经移植物,骨髓间充质细胞作为种子细胞在周围神经组织工程中具有较强的应用价值.     

许旺细胞与脱细胞神经移植物共培养在周围神经损伤修复中的作用

目的：观察体外分离、培养、纯化的许旺细胞对脱细胞神经移植物修复神经损伤舯促进作用，为临床应用组织工程化神经修复周围神经缺损提供实验依据。 方法：实验于2004-04／2005-04在中国医科大学组织工程实验室完成。纳入普通级雄性Wistar大鼠24只，体质量180-220g。随机分为实验组、空白对照组、自体移植对照组共3组，每组8只。分笼饲养。另纳入5-8d龄spmgue-Dawley乳鼠40只，取其双侧坐骨神经与臂丛神经。实验组大鼠右后腿用种植许旺细胞的ARSN桥接人为造成的神经缺损。空白对照组大鼠右后腿用单纯ARSN桥接人为造成的神经缺损。酶反复消化法与差速贴壁法分离和培养许旺细胞；许旺细胞与10mm长的脱细胞神经移植物共培养后，应用外科手术移植到大鼠坐骨神经缺损处，自体移植对照组大鼠右后腿用单纯切断的神经上下颠倒原位桥接人为造成的神经缺损。13周取材通过透射电镜和扫描电镜观察神经纤维的再生情况。 结果：Wistar大鼠24只全部进入结果分析，没有脱失。①实验组较空白对照组的再生有髓神经纤维均匀，轴索略粗，髓鞘厚度有差别，部分神经纤维髓鞘还未形成板层结构，许旺细胞包绕神经纤维，轴索内微丝微管结构较清晰，无髓神经纤维直径较小，不均匀分布在有髓神经纤维之间，由一层纤维结缔包裹形成纤维束，实验组较自体移植对照组的髓鞘略薄，自体移植组再生神经纤维均较粗，许旺细胞包裹轴突形成排列规则、电子密度较高的髓鞘，髓鞘厚薄基本相同。②实验组可见大量许旺细胞呈双极梭形，并且首尾相连排列成链状或网状特征性分布。许旺细胞还可在神经纤维上的胶原丝上附着。③实验组有髓神经纤维数、髓鞘厚度、G率（有髓纤维总面积／神经干总面积）接近自体移植对照组，差异无显著性意义[（5344&;#177;592），（5514&;#177;373）；（3．13&;#177;0．16），（3．19&;#177;0．25）μm；（48．43&;#177;3．62）％，（57．11&;#177;2．28）％；P〉0．05]；与空白对照组比较差异有显著性意义[（5344&;#177;592），（3191&;#177;236）；（3．13&;#177;0．16），（1．28&;#177;0．33）μm；（48．43&;#177;3．62）％，（31．05&;#177;4．19）％；P〈0.05]。 结论：与许旺细胞共培养的脱细胞神经移植物可加快宿主轴索再生，促进神经损伤修复，是临床修复神经缺损的可行办法。     

同种异体移植近期神经再生的实验研究

目的：观察犬去细胞异体神经移植的近期神经再生。方法：15犬分成去细胞神经移植组6犬、自体神经移植组6犬、新鲜异体神经移植组3犬。坐骨神经5．0cm长缺损，以3种神经移植物桥接修复。术后6个月行神经再生的组织学观察。结果：移植段内大量新生神经纤维，新生血管及许旺细胞；远端胫神经内大量的有髓神经纤维；靶肌肉运动终板的数量、形态及分布良好。去细胞神经移植组和自体神经移植组非常相似。结论：化学去细胞神经作为同种异体神经移植物，在修复犬的粗大和长段神经缺损时不会被宿主排斥和吸收，其神经再生与自体神经移植无明显差别。     

许旺细胞及小肠黏膜下层复合生长因子缓释微球修复周围神经缺损

背景：前期实验已初步证实许旺细胞复合小肠黏膜下层及碱性成纤维细胞生长因子构建的人工神经具有体外神经活性、趋化性。目的：观察许旺细胞及小肠黏膜下层复合碱性成纤维细胞生长因子缓释微球修复周围神经缺损后神经传导的再通情况。方法：制作SD大鼠坐骨神经缺损模型,随机分组：实验组以许旺细胞及小肠黏膜下层复合碱性成纤维细胞生长因子缓释微球修复,阳性对照组以许旺细胞及小肠黏膜下层复合游离碱性成纤维细胞生长因子修复,阴性对照组以许旺细胞及小肠黏膜下层修复,空白对照组以自体神经修复。结果与结论：术后16周实验组再生神经纤维数目,DiI示踪标记的阳性神经元数量、S-100及神经细丝蛋白的阳性表达率、髓鞘及再生轴突的超微结构恢复、神经传导速度及复合动作电位的改善均优于阳性对照组与阴性对照组（P〈0.05）。表明许旺细胞复合小肠黏膜下层及碱性成纤维细胞生长因子缓释微球构建的人工神经可重建坐骨神经缺损后的神经传导通路。     

脱细胞枪乌贼神经的制备及其生物相容性

背景:脱细胞哺乳动物神经有有髓纤维直径小、细胞成分不易彻底清除、复合细胞不均匀的缺点。目的:制备脱细胞枪乌贼神经,并探讨其生物相容性。方法:用Hasse化学萃取法制备脱细胞枪乌贼神经,观察其脱细胞的效果、管道及基底膜的完整性,用MTT法检测脱细胞枪乌贼神经与细胞相容性,用皮下植入实验检测其组织相容性。结果与结论:制备的脱细胞枪乌贼神经细胞及髓鞘清除彻底、神经纤维膜管及基底膜保留完整,且膜管粗大。脱细胞枪乌贼神经皮下植入植入后1和2周材料周围有炎症细胞浸润。植入后4周材料周围有薄层纤维结缔组织囊,材料内部及周围只有少量炎症细胞。结果证实,采用Hasse化学萃取法制备的脱细胞枪乌贼神经,细胞清除彻底,神经纤维膜管及基底膜保留完整,与异种细胞及组织相容性良好。     

去细胞坐骨神经天然支架的成分分析

背景：目前周围神经去细胞的方法较多,应用较多的是化学萃取法和液氮冻融法,但是化学萃取法耗时较长,而液氮冻融法则去除细胞不彻底。作者在查阅大量文献和多次实践的基础上,最终确定了冻融＋化学萃取＋机械振荡的优化法对坐骨神经进行脱细胞处理。目的：对优化法制备的去细胞坐骨神经天然支架进行形态学分析,并对其成分进行鉴定。方法：取Wistar大鼠双侧坐骨神经,随机分为2组,对照组不做特殊处理,实验组用冻融＋化学萃取＋机械振荡的优化法进行脱细胞处理。结果与结论：用优化法制备的去细胞坐骨神经天然支架呈三维管状立体结构,许旺细胞、髓鞘及轴突去除完全。经免疫组化鉴定,Ⅰ型、Ⅲ型胶原和层粘连蛋白等细胞外基质主要成分得到保留。     

富血小板血浆诱导骨髓间充质干细胞结合化学萃取去细胞神经修复坐骨神经缺损

背景:周围神经损伤早期许旺细胞尚未大量分裂增殖,此时由于解剖连续性的中断,通过轴浆逆向运输提供的营养因子骤减,缺乏神经营养因子支持的神经元有可能死亡,从而使周围神经不能再生或再生乏力.目的:观察植入经富血小板血浆诱导的骨髓间充质干细胞结合去细胞神经修复坐骨神经缺损的效果.方法:取新西兰大耳白兔制备坐骨神经缺损模型,随机抽签法分成4组:去细胞神经组,移植同种异体去细胞神经;骨髓间充质干细胞组,移植同种异体骨髓间充质干细胞结合化学萃取的同种异体去细胞神经:经诱导骨髓闯充质干细胞组,移植经富血小板血浆诱导的同种异体骨髓间充质干细胞结合化学萃取的同种异体去细胞神经;自体神经组,移植自体神经.术后进行形态学观察与靶肌肉肌湿质量恢复率、运动神经传导速度、轴突直径和髓鞘厚度的检测.结果与结论:经富血小板血浆诱导的骨髓间充质干细胞结合化学萃取的去细胞神经移植修复神经的靶肌肉肌湿质量恢复率、运动神经传导速度、轴突直径和髓鞘厚度及形态学观察明显优于移植单纯化学萃取的去细胞神经与骨髓间充质干细胞结合化学萃取的去细胞神经的效果,而与移植自体神经修复结果相似.说明经诱导后的骨髓间充质干细胞在体内具有许旺细胞的部分功能,可作为组织工程化外周神经的种子细胞,用于周围神经缺损的修复.     

周围神经损伤后溃变再生与许旺细胞膜离子通道的关系

目的：收集资料探寻许旺细胞离子通道和周围神经溃变再生的相关性。资料来源：应用计算机检索Highwire，Proquest数据库1980-01／2004-06期间的相关章，检索词为Schwanncell，ionchannel，pmliferate，并限定章语言种类为英语。资料选择：对资料初审，纳入标准：选择许旺细胞离子通道在周围神经溃变再生过程中变化的相关章，包括动物实验和临床基础研究。排除标准：重复研究，综述和Meta分析类章。资料提炼：共收集到28篇相关献，含追溯法3篇，18篇列入纳入标准，其中7篇与K^ 通道有关，5篇与Na^ 通道有关，6篇与其他离子通道有关的。排除的10篇章中，3篇系重复研究，7篇系侧重研究许旺细胞离子通道蛋白亚单位方面的章。资料综合：几乎所有在神经元上发现的电压门控通道都在许旺细胞上存在，在许旺细胞膜表达的离子通道主要有：K^ 通道，Na^ 通道，Ca^ 通道，Cl^-通道等，每一种又存在有不同的亚型，在许旺细胞周膜表达的阳离子通道的分子及生物物理学特性和在外周神经轴突上表达的同一通道基本相同，人工培养的许旺细胞表达的离子通道在促使和控制细胞增生方面发挥特殊作用。结论：许旺细胞周膜离子通道和其本身增殖，神经轴突髓鞘形成密切相关，并参与实现许旺细胞与轴突的相互作用。因此，在神经受到各种损伤而发生溃变及随后的再生过程中，许旺细胞周膜离子通道必然产生相应的变化，研究这些变化并给与一定的干预，活化或阻止某些离子通道的表达，以加快受损神经的修复，是一种可行的途径。     

许旺细胞及小肠黏膜下层复合生长因子缓释微球修复周围神经缺损

背景:前期实验已初步证实许旺细胞复合小肠黏膜下层及碱性成纤维细胞生长因子构建的人工神经具有体外神经活性、趋化性。目的:观察许旺细胞及小肠黏膜下层复合碱性成纤维细胞生长因子缓释微球修复周围神经缺损后神经传导的再通情况。方法:制作SD大鼠坐骨神经缺损模型,随机分组:实验组以许旺细胞及小肠黏膜下层复合碱性成纤维细胞生长因子缓释微球修复,阳性对照组以许旺细胞及小肠黏膜下层复合游离碱性成纤维细胞生长因子修复,阴性对照组以许旺细胞及小肠黏膜下层修复,空白对照组以自体神经修复。结果与结论:术后16周实验组再生神经纤维数目,DiI示踪标记的阳性神经元数量、S-100及神经细丝蛋白的阳性表达率、髓鞘及再生轴突的超微结构恢复、神经传导速度及复合动作电位的改善均优于阳性对照组与阴性对照组(P<0.05)。表明许旺细胞复合小肠黏膜下层及碱性成纤维细胞生长因子缓释微球构建的人工神经可重建坐骨神经缺损后的神经传导通路。     

许旺细胞与脱细胞神经移植物共培养在周围神经损伤修复中的作用

目的:观察体外分离、培养、纯化的许旺细胞对脱细胞神经移植物修复神经损伤的促进作用,为临床应用组织工程化神经修复周围神经缺损提供实验依据。方法:实验于2004-04/2005-04在中国医科大学组织工程实验室完成。纳入普通级雄性Wistar大鼠24只,体质量180～220g。随机分为实验组、空白对照组、自体移植对照组共3组,每组8只。分笼饲养。另纳入5～8d龄Sprague-Dawley乳鼠40只,取其双侧坐骨神经与臂丛神经。实验组大鼠右后腿用种植许旺细胞的ARSN桥接人为造成的神经缺损。空白对照组大鼠右后腿用单纯ARSN桥接人为造成的神经缺损。酶反复消化法与差速贴壁法分离和培养许旺细胞;许旺细胞与10mm长的脱细胞神经移植物共培养后,应用外科手术移植到大鼠坐骨神经缺损处,自体移植对照组大鼠右后腿用单纯切断的神经上下颠倒原位桥接人为造成的神经缺损。13周取材通过透射电镜和扫描电镜观察神经纤维的再生情况。结果:Wistar大鼠24只全部进入结果分析,没有脱失。①实验组较空白对照组的再生有髓神经纤维均匀,轴索略粗,髓鞘厚度有差别,部分神经纤维髓鞘还未形成板层结构,许旺细胞包绕神经纤维,轴索内微丝微管结构较清晰,无髓神经纤维直径较小,不均匀分布在有髓神经纤维之间,由一层纤维结缔包裹形成纤维束,实验组较自体移植对照组的髓鞘略薄,自体移植组再生神经纤维均较粗,许旺细胞包裹轴突形成排列规则、电子密度较高的髓鞘,髓鞘厚薄基本相同。②实验组可见大量许旺细胞呈双极梭形,并且首尾相连排列成链状或网状特征性分布。许旺细胞还可在神经纤维上的胶原丝上附着。③实验组有髓神经纤维数、髓鞘厚度、G率(有髓纤维总面积/神经干总面积)接近自体移植对照组,差异无显著性意义[(5344±592),(5514±373);(3.13±0.16),(3.19±0.25)μm;(48.43±3.62)%,(57.11±2.28)%;P>0.05];与空白对照组比较差异有显著性意义[(5344±592),(3191±236);(3.13±0.16),(1.28±0.33)μm;(48.43±3.62)%,(31.05±4.19)%;P<0.05]。结论:与许旺细胞共培养的脱细胞神经移植物可加快宿主轴索再生,促进神经损伤修复,是临床修复神经缺损的可行办法。