戊二醛脱毒前后的百日咳杆菌外膜蛋白及其组分的毒性与免疫原性

应用TritonX-100抽提和Sephadex G-100层析获得百日咳杆菌外膜蛋白(OMP)及其5个组分(OMP_1～OMP_5).OMP_1～OMP_4均具有促白细胞增多、组胺敏感和胰岛活化蛋白的活性.OMP及其各组分对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)具有毒性作用,可使该细胞聚集生长、~3H-TdR掺入量下降,及核糖体大量脱落和膜旁颗粒减少等现象.OMP组分OMP_1～OMP_4经0.3%戊二醛处理后,上述生物学活性均明显下降,CHO细胞不出现聚集生长,~3H-TdR掺入量明显高于未脱毒的组分,与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).脱毒前后的OMP各组分对小鼠的主动保护作用未见明显变化(P>0.05).实验结果表明,戊二醛能有效地降低OMP_1～OMP_4的毒性,但脱毒后的OMP_1～OMP_4仍具备较强的免疫原性和保护力.因此,OMP及其组分经戊二醛处理后,有希望成为百日咳杆茵的无细胞疫苗.     

百日咳杆菌外膜蛋白及其组分的制备和特性分析

经反复冻融和超声波击碎的百日咳杆菌,用Triton X-100抽提后获得外膜蛋白(OMP),再经Sephadex G-100层析后分成5个组分(OMP1～OMP5),其分子量分别为89000、38000、36000、34000和30000.SDS-PAGE图谱显示,OMP含有百日咳I相菌株所特有的分子量为30000和28000的两条蛋白带.OMP及其各组分的内毒素活性仅为大肠杆菌脂多糖的1/500-1/5000,对小鼠的主动保护作用与全细胞死菌苗相似,其抗血清对小鼠也有较强的被动保护作用.实验结果表明,OMP及其组分制备较为简便,且具有较强的保护力.因此,OMP及其组分可作为百日咳杆菌的高效低毒的无细胞疫苗.     

百日咳杆菌外膜蛋白免疫保护作用及其机理的研究

经戊二醛脱毒前或后的百日咳杆菌外膜蛋白免疫的ＮＩＨ小鼠，其ＰＤ５０分别为９８．１０～１０９．００和６９．３５～７７．０６μｇ／ｋｇ，但其ＬＤ５０分别为３７．９０～４２．１１和１０７．２０～１１９．１１ｍｇ／ｋｇ。脱毒后的百日咳杆菌外膜蛋白１次免疫小鼠的保护率　为７５．０％，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和Ｔ淋巴细胞转化率明显上升，免疫后第６０ｄ　血清抗体效价达到高峰，以后逐渐下降，抗体类型以ＩｇＭ为主。经脱毒外膜蛋白２次免疫的小鼠保护率高达９５．８％．小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、Ｔ和Ｂ淋巴细胞转化能力均显著增强，免疫后第１８０ｄ仍能测出较高效价的血清抗体，抗体类型转为以ＩｇＧ为主。实验结果证实，脱毒后的百日咳杆菌外膜蛋白能安全有效地刺激机体产生特异性免疫力，且２次免疫的效果优于１次免疫。     

5株类杆菌外膜蛋白的研究

本文用实验方法１（用ＥＤＴＡ处理等过程）和方法２（用Ｔｒｉｔｏｎ处理等过程）制备脆弱类杆菌处膜蛋白，结果表明方法２优于方法１。多形类杆菌是脆弱类杆菌的亚种，其外膜蛋白的ＳＤＳ－ＰＡ－ＧＥ图型极为相似，而与不同的菌种产黑色素类杆菌，不同的菌属具核梭杆菌的外膜蛋白电泳图型不同，但牙龈类杆菌与脆弱类杆菌属于不同的菌种，其外膜蛋白电泳图型却极为相似，原因尚不能解释。     

无细胞百日咳疫苗时代百日咳杆菌黏附素蛋白缺失株的研究进展

无细胞百日咳疫苗接种后的免疫持久性下降和百日咳杆菌变异是导致"百日咳再现"的两个重要原因。百日咳杆菌变异株不表达无细胞百日咳疫苗中所包含的抗原成分,其中以黏附素蛋白的缺失最为常见。大量研究表明黏附素蛋白的缺失对百日咳杆菌的侵袭力和致病性并无明显影响,被认为可以由其他毒力因子代偿。黏附素蛋白缺失株产生的原因,包括IS481序列插入等菌株自身变异相关的分子机制,以及无细胞百日咳疫苗接种后的免疫环境造成的选择性压力。我国目前处在无细胞百日咳疫苗接种初期,尚未报道发现黏附素蛋白缺失株。     

用融合蛋白在大肠杆菌中高表达百日咳杆菌毒素蛋白S3亚基…

用多聚酶链反应和基因重组技术通过百日咳毒素Ｓ３亚基因和高表达质粒ＰＭＡＬ－Ｃ构建了麦芽糖结合蛋白和亚基蛋白的融合基因，并在大肠杆菌中高效表达了融合蛋白。     

嗜肺巴氏杆菌外膜蛋白和脂多糖提取及其活性的初步研究

目的　提取嗜肺巴氏杆菌外膜蛋白 (OMP)和脂多糖 (LPS) ,测定其稳定性和抗原性 ,探讨其作为诊断抗原的可能性。方法　选取具有代表性的嗜肺巴氏杆菌 15株及参考株共 16株 ,提取OMP、LPS ,通过SDS -PAGE、Westernblot、ELISA等方法在稳定性、抗原性等方面与全菌抗原 (WC)进行比较。结果　 16株嗜肺巴氏杆菌OMP的SDS-PAGE图谱基本一致 ,不同培养基成分、培养时间和不同体外传代次数的提取物均显示 5条带 ,相对分子质量大约是 (17、2 6、31、37、4 1)× 10 3。其中 5株嗜肺巴氏杆菌的LPS为光滑型和粗糙型LPS的混合物 ,主带相对分子质量在 14 .4× 10 3左右。外膜蛋白和脂寡糖提取物保持了其抗原反应性和免疫原性。OMP和LPS具有种和型的特异性。OMP的 5条条带抗原性存在差异 ,相对分子质量 (2 6、37)× 10 3的蛋白不具有抗原性 ,相对分子质量 17× 10 3的蛋白抗原为受试菌株的共同抗原 ,(31、4 1)× 10 3抗原具有大鼠株和小鼠株的特异性。LPS表现出较强的型的特异性。结论　本研究提取的OMP和LPS活性稳定 ,并保持了抗原性和免疫原性。     

鼠伤寒杆菌外膜蛋白免疫原性初步研究

研究目的寻找鼠伤寒杆菌与免疫相关组分,探讨鼠伤寒杆菌外膜蛋白作为亚单位疫苗预防鼠伤寒杆菌感染的可能性。研究背景鼠伤寒沙门氏菌感染甚为普遍,而目前尚缺乏有效的防疫方法,制备有效疫苗是控制鼠伤寒杆菌感染和流行的重要措施。研究方法采用Schnaitman所描述的方法提取鼠伤寒杆菌OMP分别免疫小鼠和家兔后分离血清,用ELISA方法测定免疫血清抗体滴度。用小鼠作足垫肿胀试验作为测定细胞免疫指标。用免疫印迹试验分析免疫血清和鼠伤寒感染患者恢复期血清。研究结果鼠伤寒杆菌外膜蛋白能诱发小鼠和家兔产生高效价抗体,并能诱发小鼠产生明显的DTH反应,所有免疫血清均识别36KD蛋白带。结论鼠伤寒杆菌外膜蛋白具有较强的免疫原性,能诱发动物产生体液免疫和细胞免疫。36KD蛋白带可能是鼠伤寒杆菌主要免疫原。     

用融合蛋白在大肠杆菌中高表达百日咳杆菌毒素蛋白S＿3亚基基因

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）和基因重组技术通过百日咳毒素Ｓ＿３亚基基因和高表达质粒ｐＭＡＬ－Ｃ构建了麦芽糖结合蛋白（ＭＢＰ）和（Ｓ＿３）亚基蛋白的融合基因，并在大肠杆菌中高效表达了（ＭＢＰ－Ｓ＿３）融合蛋白。该融合蛋白产率占细胞总蛋白含量的２５％，并且能用蛋白酶因子Ｘａ将融会蛋白切开，得到ＭＢＰ（４２ＫＤ）和Ｓ＿３亚基蛋白（２１．８７ＫＤ）．该方法表达式效率高。纯化过程简单，为基因工程技术生产该毒素提供了新的途径。     

SDS化学法提取不动杆菌外膜蛋白在临床流行病学调查的应用

SDS化学法提取细菌外膜蛋白(OMP)用于医院内新生儿不动杆菌感染调查,189株中其流行株有10条主要OMP,非流行株多一条25KD带;4种生物型OMP不同;比较SDS化学法与超声物理法提取OMP效果,前者更好,因其操作简便、节省设备,适用于基层医院。     

百日咳杆菌与成年人慢性咳嗽

目的：评价百日咳杆菌引起成年人慢性咳嗽的几率。方法：用细菌培养，PCR和ELISA方法对201名患者急性期和恢复期标本进行检测。结果：我们发现，4名患者百日咳杆菌培养阳性；11名患者(包括培养阳性的患者)百日咳杆菌PCR阳性；33人，包括11名PCR阳性患者中的10名，有最近感染的血清学证据。咳嗽与否不能鉴别百日咳杆菌阳性还是阴性。结论：百日咳杆菌感染是引起成年人慢性咳嗽的非常普遍的原因。这些患者是百日咳传染源，会将百日咳传染给婴儿。对于婴儿这将是灾难性的。     

梅毒螺旋体外膜蛋白功能的研究进展

梅毒是一种严重影响人类健康的慢性传播性疾病,是由梅毒螺旋体感染所引起。梅毒螺旋体外膜蛋白(Omp)是一类具有关键性功能的蛋白。Omp在梅毒螺旋体的免疫原性、黏附宿主细胞以及转运营养物质等方面具有非常重要的作用。本文就梅毒螺旋体主要外膜蛋白的结构、功能等特性做一综述。     

潍坊市首次分离出七株副百日咳杆菌

1989年4月至6月,潍坊市某小学爆发一起以急性呼吸道感染为主要症状的疾病,我们用咳碟法采集患儿标本31份进行细菌分离,共分离出7株副百日咳杆菌。现报告如下: 1 材料与方法 1.1 标本来源及采集用咳碟法采集患儿标本,将包一金二氏培养基置于病人口前10cm处,待病人咳嗽时,速将平皿盖打开,使本板培养基正对口部,病人咳出的飞沫喷到本板培养基上,盖好平皿     

赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白LipL32基因重组质粒的构建及其细胞毒性的研究

目的构建赖型钩端螺旋体(钩体)017株外膜蛋白LipL32基因的重组质粒,并研究其细胞毒性。方法从钩体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化大肠杆菌,诱导表达LipL32蛋白,将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western Blotting鉴定其免疫原性。将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测细胞的乳酸脱氢酶(LDH)、NO释放量研究其细胞毒性。结果扩增出816bp的LipL32基因,重组质粒经双酶切、PCR鉴定、测序均表明重组载体构建成功。经IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约52×103,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物制备得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:32000,Western Blotting显示在目的蛋白位置处有特异性阳性条带。经过LipL32蛋白作用的ECV304细胞LDH、NO释放量和对照组比较有明显升高。结论成功构建LipL32基因重组质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达,表达的目的蛋白对细胞有一定的毒性效应。     

百日咳杆菌诱导大鼠急性感染性脑水肿模型

向左颈内动脉注百日咳杆菌，造成大鼠急性感染性脑水肿模型，生理盐水和正常手术为对照组。结果示注菌１ｈ，４ｈ组左脑含水量分别较正常组和盐水组显著增高；ＥＢ含量注菌组均较对照组显著增高；且注菌侧脑明显蓝染，提示本模型主要系血管源性脑水肿。