miR-150-5p抑制肝癌细胞的迁移和侵袭及其机制

目的:探讨mi R-150-5p在肝细胞癌(HCC)细胞迁移与侵袭中的作用及其调控机制。方法:用荧光定量PCR测定mi R-150-5p在正常肝细胞系L02及HCC细胞系Hep G2中的表达;将Hep G2细胞分成两组,分别转染mi R-150-5p(mi R-150-5p组)与随机序列(对照组),转染后,分别用细胞划痕实验、Transwell小室基质渗透实验检测细胞的迁移和侵袭能力,用Western blot检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果:mi R-150-5p的表达量在Hep G2细胞系中明显降低,为L02细胞系的0.26倍(P0.01)。转染后,mi R-150-5p组的mi R-150-5p水平明显升高,为对照组的9.53倍(P0.001);mi R-150-5p组的细胞划痕愈合率明显低于对照组(54.63%vs.87.51%,P0.01),细胞侵袭数明显少于对照组(138个vs.452个,P0.01);MMP2与MMP9蛋白表达量均明显低于对照组(0.78 vs.1.75;0.82 vs.1.85,均P0.05)。结论:mi R-150-5p在HCC细胞中表达降低,升高mi R-150-5p的表达可抑制HCC细胞的迁移和侵袭,机制可能与其下调MMP2和MMP9表达有关。     

miR-96的表达对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-96在肝细胞癌(HCC)细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR测定miR-96在不同HCC细胞系(HepG2、7721、huh7)及正常肝细胞系L02中的表达;将HepG2细胞分别转染miRNA随机序列(阴性对照组)、miR-96模拟物(miR-96模拟物组)和miR-96抑制物(miR-96抑制物组)后,用细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测细胞迁移及侵袭能力,qRT-PCR及Western blot分别测定PTPN9 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-96在各肝癌细胞系中的相对表达量均明显高于其在正常肝细胞系L02的相对表达量(均P0.01)。与阴性对照组比较,细胞划痕愈合率在miR-96模拟物组明显升高,而在miR-96抑制物组明显降低(均P0.05);侵袭细胞数在miR-96模拟物组明显增多,而在miR-96抑制物组明显减少(均P0.05);PTPN9 mRNA与蛋白相对表达量在miR-96模拟物组均明显下调,而在miR-96抑制物组均明显上调(均P0.05)。结论:miR-96在HCC细胞中表达升高,并可能通过下调PTPN9表达促进HCC细胞的迁移与侵袭。     

miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其作用与机制

背景与目的:miR-200a-3p参与了多种肿瘤的生物学过程的调控,但在不同肿瘤中起着不同的作用(促癌基因或抑癌基因).目前,其在胆囊癌中的作用尚不清楚.因此,本研究探讨miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生物学功能的影响与机制.方法:采用qRT-PCR法测定32例胆囊癌及癌旁组织、胆囊癌细胞系(GB...     

上调miR-449a表达对肝癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的:探讨miR-449a在肝癌(HCC)细胞中的表达及其对HCC细胞生物学行为的影响。方法:用qRT-PCR检测miR-449a在正常肝细胞L02和4种HCC细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721和Bel-7402)的表达。用脂质体法将miR-449a模拟物或阴性对照序列转染HCC细胞后,分别用CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室实验检测细胞增殖、细胞周期、侵袭能力的变化,并观察以上两种不同转染的HCC细胞在裸鼠体内的成瘤情况。结果:miR-449a在4种HCC细胞株的表达水平均明显低于L02细胞(均P0.05),其中在Bel-7402细胞表达的水平最低。与转染阴性对照序列的Bel-7402细胞比较,转染miR-449a模拟物的Bel-7402细胞增殖活性明显降低、G_1/S期阻滞明显增加、穿室细胞数明显减少(均P0.05);与转染阴性对照序列的Bel-7402细胞比较,转染miR-449a模拟物的Bel-7402细胞在裸鼠体内成瘤后的移植瘤质量与体积均明显减小(0.748 g vs.1.234 g;33.667 mm~3 vs.1 400.500 mm~3,均P0.05)。结论:HCC细胞中miR-449a表达降低,上调miR-449a表达可以抑制HCC细胞在体内外的生长。     

上调miR-101对肝细胞癌生物学行为的影响

目的：探讨miR-101在肝细胞癌（HCC）细胞生物学行为的影响。 方法：分别将miR-101模拟物或miRNA阴性对照序列转染HepG2和SMMC-7721两种HCC细胞,以无处理自然生长的两种细胞为各自空白对照,观察miR-101对两种细胞增殖、集落形成能力、凋亡及周期的影响,以及对侵袭和迁移能力的影响。 结果：与各自的空白对照细胞比较,转染miR-101模拟物后的HepG2和SMMC-7721细胞的增值能力明显降低、细胞集落的形成明显减少、G0/G1期的细胞比例升高、细胞凋亡率明显增加、迁移与侵袭细胞数明显减少（均P<0.05）;转染miRNA阴性对照序列对两种细胞的以上指标无明显影响（均P>0.05）。 结论：miR-101可能在HCC细胞中起到了抑癌基因的作用,上调其表达能抑制HCC的恶性生物学行为。     

miR-21在肝癌中的表达及其与PTEN的关系

目的:探讨miR-21在肝癌中的表达及其与PTEN的关系。方法:用RT-PCR检测119例肝癌组织与癌旁组织中miR-21与PTEN的表达情况;双报告基因实验检测肝癌细胞中miR-21对PTEN转录水平的影响;分析miR-21表达与肝癌患者临床病理因素的关系;在肝癌细胞中分别过表达及抑制miR-21的表达之后,检测细胞增殖与PTEN及其下游通路蛋白的表达。结果:肝癌组织中miR-21表达明显高于癌旁组织,而PTEN则相反(均P0.05);miR-21与PTEN的表达具有一定相关性(r2=0.6767,P0.05);miR-21可并抑制PTEN转录活性;miR-21的表达与肝癌患者AFP水平及TNM分期有关(均P0.05);肝癌细胞过表达miR-21后,肝癌细胞增殖明显增强,PTEN表达明显调,并影响其下游蛋白的表达,而抑制miR-21则相反(均P0.05)。结论:miR-21在肝癌中表达升高,且miR-21可以通过下调PTEN表达进一步促进肝癌细胞的增殖。     

长链非编码RNA MALAT1在肝癌组织中的表达及其在肝癌细胞增殖与侵袭转移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA MALAT1在肝癌组织中的表达及意义。方法:用qRT-PCR检测85例肝癌组织及其配对癌旁组织中MALAT1的表达,分析MALAT1的表达与肝癌患者临床病理因素的关系;在肝癌SMMC-7721细胞中分别过表达与敲除基因MALAT1后,通过CCK-8与Transwell实验检测肝癌细胞增殖与侵袭转移能力的改变。结果:MALAT1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.01);MALAT1在肝癌组织中的表达与肿瘤大小、肝癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显有关(均P0.05)。肝癌SMMC-7721细胞过表达MALAT1后增殖、侵袭与转移能力明显增强,而敲低MALAT1后增殖、侵袭与转移能力明显减弱(均P0.05)。结论:MALAT1在肝癌组织中表达上调,MALAT1可促进肝癌细胞增殖、侵袭与转移,故可能与肝癌的发生发展密切相关。     

上调lncRNA SNHG12与miR-199a-5p/FZD6轴对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化的影响

背景与目的:肝细胞癌(HCC)是临床上常见的恶性肿瘤之一,侵袭、转移和术后复发是导致HCC患者死亡的主要原因.目前认为长链非编码RNA (lncRNA)的失调可能与各类癌症的发生和转移有关.有研究显示lncRNA SNHG12在HCC组织表达明显上调,但其具体功能尚不清楚.故本研究探讨lncRNA SNHG12在HCC...     

miR-342-5p 调控靶基因Merlin 表达促进肝细胞癌侵袭转移的实验研究

目的：探讨miR-342-5p及其可疑靶基因Merlin在肝细胞癌（HCC）中表达及意义。 方法：用qRT-PCR检测miR-342-5p和Merlin mRNA在HCC组织与癌旁组织，以及正常肝细胞系与各种不同HCC细胞系中的表达；用重组慢病毒包装质粒pGCSIL-GFP-miR-342-5p或空载体（阴性对照）转染HCCLM3细胞，以无处理的HCCLM3细胞作为空白对照，划痕愈合及Transwell实验观察细胞侵袭运动能力；Western blot法检测细胞中Merlin蛋白的表达。采用双荧光素酶基因报告系统，将含野生型或突变型Merlin基因3''UTR质粒（psiCHECK-Merlin）分别与pGCSIL-GFP-miR-342-5p、空载体（阴性对照）共转染或单独转染（空白对照）HCCLM3细胞后，检测各组细胞荧光素酶活性。 结果：与癌旁组织比较，HCC组织中miR-342-5p表达明显上调，Merlin mRNA表达明显下调（均P<0.05）；HCC组织中，血管侵犯组较无血管侵犯组miR-342-5p表达明显上调，Merlin mRNA表达明显下调（均P<0.05），且miR-342-5p与Merlin mRNA表达呈负相关（r2=5.364，P<0.05）。各HCC细胞系中miR-342-5p表达均明显高于正常肝细胞系，且miR-342-5p的表达随HCC细胞系的侵袭性增高而上调，而Merlin mRNA表达则呈相反趋势（均P<0.05）。与空白对照组及阴性对照组比较，HCCLM3细胞转染pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒后，细胞侵袭运动能力明显下降（均P<0.05），而Merlin蛋白表达明显上调。psiCHECK-Merlin野生型与pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒共转染HCCLM3细胞后，细胞的荧光素酶活性较其阴性对照组或空白对照组明显降低（P<0.05），而psiCHECK-Merlin突变型与pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒共转染HCCLM3细胞后，细胞的荧光素酶活性与其空白对照组或阴性对照组无统计学差异（P>0.05）。 结论：Merlin是miR-342-5p的靶基因，miR-342-5p可能通过调控MerlinmRNA的表达促进肝细胞癌侵袭转移。     

miRNA-186-5p的表达与结肠癌细胞恶性表型的关系

目的:探究miRNA-186-5p在结肠癌中的表达与功能。方法:用q PCR检测20例配对的结肠癌与其癌旁组织标本,以及正常肠上皮NCM460细胞与不同结肠癌细胞系(HCT-116、HRT-18、HT-29)中miRNA-186-5p的表达;分别用miRNA-186-5p模拟物或阴性对照组序列转染HCT-116细胞后,用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。结果:miRNA-186-5p在结肠癌组织中的表达明显低于相应癌旁组织中的表达,在各结肠癌细胞系中均明显低于正常肠上皮NCM460细胞(均P0.05);与转染阴性对照序列的HCT-116细胞比较,转染miRNA-186-5p模拟物的HCT-116细胞,细胞增殖能力明显降低、克隆形成数明显减少(114.0个vs.311.7个)、划痕愈合率明显降低(28.7%vs.77.0%)、侵袭细胞数明显减少(119.3个vs.259.7个),差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:miRNA-186-5p在结肠癌组织中低表达或缺失,恢复miRNA-186-5p的表达水平能抑制结肠癌细胞的恶性表型,提示miRNA-186-5p在结肠癌中发挥抑瘤作用。     

长链非编码RNA 909靶向调控miR-194-5p/DACH1轴对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景与目的:长链非编码RNA 909(LINC00909)是一个新发现的长度约为2 kb的长链非编码RNA(lncRNA),在胶质瘤和白血病中被报道发挥癌基因的作用.然而LINC00909在胰腺癌中的作用鲜有报道.本研究旨探讨LINC00909在胰腺癌中的表达及其对患者预后的影响,以及LINC00909与其调控网络对胰...     

miR-124抑制结肠癌细胞增殖和侵袭与TET蛋白家族的关系

目的:探讨miR-124是否通过靶向调节TET蛋白家族的表达而抑制结肠癌细胞增殖与侵袭。方法:用双荧光素酶报告基因检测系统分别检测miR-124对TET家族(TET1、TET2、TET3)的3'UTR-荧光素酶活性的影响;用q RT-PCR与Western blot检测miR-124模拟物转染结肠癌HT29细胞后TET家族的m RNA与蛋白表达水平的变化;用MTS和Transwell实验观察HT29细胞转染miR-124模拟物及TET si RNA后增殖和侵袭能力的变化。结果:双荧光素酶报告基因检测结果显示,各TET m RNA的3'UTR均被miR-124特异性结合,其荧光素酶活性被明显抑制(均P0.05);转染miR-124模拟物后的HT29细胞TET的m RNA与蛋白表达水平明显减低(均P0.05);HT29细胞转染miR-124模拟物或TET si RNA后,增殖和侵袭能力均明显降低(均P0.05)。结论:miR-124可能通过直接靶向调控TET基因的表达,而抑制结肠癌细胞增殖和侵袭。     

miR-362-3p的表达及其靶基因与胆囊癌恶性特征的关系

目的:探讨miR-362-3p在胆囊癌中的表达及功能。方法:用qRT-PCR检测手术切除的44例胆囊癌患者手术标本中miR-362-3p的表达,并分析其表达与胆囊癌临床病理特征及预后的关系。miR-362-3p模拟物转染胆囊癌细胞后,分别用MTT法、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验观察细胞增殖、迁移及侵袭的改变。通过生物信息学方法及双荧光素酶报告基因试验分析miR-362-3p的靶基因,并采用补救试验验证。结果:miR-362-3p在胆囊癌组织的表达明显低于相应癌旁组织(P0.05)。miR-362-3p的低表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及远处转移明显有关(均P0.05)。低表达miR-362-3p患者总体生存率较高表达miR-362-3p患者明显降低(P0.05)。转染miR-362-3p模拟物后,胆囊癌细胞的增殖,迁移及侵袭能力明显减弱(均P0.05)。Nemo样激酶(NLK)被确定为miR-362-3p的潜在靶基因,转染NLK过表达载体后,miR-362-3p模拟物对胆囊癌细胞的上述作用被明显逆转(均P0.05)。结论:miR-362-3p在胆囊癌中表达下调,下调的miR-362-3p减少了对靶基因NLK的抑制,从而促进了胆囊癌细胞的增殖、迁移和侵袭。