结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2004c的抗原表位预测

本文应用生物信息学技术预测结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2004c的抗原表位,为结核病的诊断和疫苗研发筛选合适的抗原靶位。通过Blast分析发现Rv2004c蛋白与人类蛋白的同源性较低;采用DNAStar软件包中的Protean软件分析其二级结构、亲水性、抗原性、柔韧性及表面可能性,预测该蛋白有10个候选B细胞抗原表位;应用RANKPEP及SYFPEITHI法预测该蛋白有37个候选Th细胞抗原表位,主要位于第200位氨基酸之后,其中HLA-DRB1*0401及HLA-DRB1*0701表型相对的表位数目较多且某些候选表位的主要组织相容性复合体(MHC)限制类型存在交叉重叠;应用SYFPEITHI法、BIMAS法及NetCTL法预测该蛋白有10个候选细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,其中以HLA-A2限制性表位数目较多、分值较高。由此得出结论:Rv2004c蛋白含有较多潜在的T细胞和B细胞抗原表位,可作为新的结核病诊断试剂和疫苗研发的候选靶蛋白。     

microRNA调控结核分枝杆菌感染巨噬细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡对于机体抑制或清除胞内结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis, Mtb)尤为重要, Mtb感染巨噬细胞后,往往会诱导机体启动一系列机制调控巨噬细胞凋亡。在 Mtb感染的巨噬细胞内存在差异表达的microRNAs (miRNAs),miRNA可直接结合凋...     

巨噬细胞在结核分枝杆菌感染中作用的研究进展

作为当今世界最重大的传染病之一,结核病对于全人类是一个巨大威胁.据统计,全球约1/3的人感染过结核分枝杆菌,每年新发感染人数约800万,每年因结核病而死亡的人数更是高达200万[1-2].     

Toll样受体2(TLR2)与结核分枝杆菌感染的相关研究进展

Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的TLR2都可与其相互作用,释放细胞因子,影响MTB在体内的状态和增殖。在分子层面,TLR2的多态性有待更多探索,目前研究的大部分TLR2的多态性被认为与MTB的易感性无关。文中总结了TLR2与配体、感染后免疫调节活动、多态性与MTB易感性等方面的研究进展。     

结核分枝杆菌检测技术的研究进展

结核杆菌的检测方法主要有细菌学、免疫学和分子生物学,病理工作者需了解这些技术的基本原理、检测过程和优缺点,再根据各医院具体情况选择合适的MTB检测方案,以提高不同层次检测的准确性。现将近年来结核杆菌的检测技术概况和研究进展作一综述。     

结核分枝杆菌抗原模拟肽的筛选和鉴定

目的 应用噬菌体随机12肽库免疫淘筛结核分枝杆菌抗原模拟肽.方法 以结核患者血清IgG为靶分子,3轮淘筛噬菌体随机12肽库,ELISA鉴定阳性噬菌体克隆,并进行测序分析.选择高频出现的阳性克隆用ELISA法初步分析其诊断能力.结果 经3轮免疫筛选,噬菌体得到有效富集,12个阳性噬菌体克隆经测序分析获得6种短肽序列.高频出现的两个阳性克隆诊断结核病的敏感性分别为71.4％ (A2)和55.4％ (A7).结论 结核患者血清IgG筛选噬菌体随机12肽库获得了能结合抗结核抗体的噬菌体展示短肽.     

结核分枝杆菌免疫逃逸机制的研究进展

结核分枝杆菌是一种烈性、强毒、传染性病原菌。由其引发的结核病极难治愈,普通的抗生素药物对其根本不起作用。究其原因是该菌通过一系列目前仍尚未阐明的逃逸机制逃脱了巨噬细胞溶酶体对其的融合杀伤作用,因而得以存活并寄生在巨噬细胞内的吞噬体中。对此,近年来发表了一系列极有价值的研究成果,主要集中在可溶性N-乙基顺丁希二酰亚胺敏感因子连接蛋白受体（SNARE）融合核心复合体的形成,Rab7、Rab5及其效应蛋白EEA-1在晚内体成熟中的作用以及自噬在免疫逃逸机制中的作用等几个方面,这对于进一步丰富和阐明结核分枝杆菌的免疫逃逸机制理论具有重要意义。     

结核分枝杆菌抗原分析及免疫交叉反应研究

目的：筛选和鉴定结核分枝杆菌特异性和保护性抗原，研究结核杆菌的免疫反应特点，以探索结核病诊断和治疗的新途径。方法：采用超声破碎和滤膜抽滤的方法分别得到菌体蛋白和滤液蛋白，通过Western blot试验用结核杆菌的单克隆抗体及结核病人血清来检测蛋白样品，把发生阳性反应的蛋白在BECKMAN LF3200／多肽氨基酸序列测定仪上进行N末端序列分析，并用结核杆菌的单抗对自身抗原组蛋白进行了检测。结果：结核杆菌的31kD和30kD蛋白与结核杆菌的单抗及病人血清反应均呈阳性，但与正常小鼠血清和健康人血清反应呈阴性。31kD和30kD蛋白的N末端序列分别为：Ala Glu Val Asp Trp Leu Val Phe Ala Val和Phe Ser Arg Pro Gly Leu Pro Val Glu Tyr。结核分枝杆菌的单抗与自身抗原组蛋白能发生免疫交叉反应。结论：结核杆菌的31kD和30kD蛋白是免疫保护性抗原，对免疫交叉反应分子基础的进一步研究必将增加对结核免疫机理的了解。     

结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)对γδ T细胞影响的研究进展

结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)是从结核分枝杆菌(MTB)减毒菌株H37Ra经121℃,20 min,高温高压处理后从菌体释放到上清液中一种多肽类抗原。γδ T细胞是一类广泛分布于非淋巴组织的非常规T细胞,可分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)等细胞因子,在抗MTB感染的免疫应答中发挥重要作用。MTB-HAg可在体外有效刺激γδ T细胞增殖活化,使其更加高效地参与抗结核感染的过程,故MTB-HAg可作为设计新型结核疫苗或药物的潜在靶点。但由于MTB-HAg组成复杂,具体是何种成分刺激γδ T细胞发挥抗MTB感染功能还不清楚。     

结核分枝杆菌感染人群的免疫干预进展

<正>自结核病的病原体——结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)被Robert Koch发现以来,结核病患者的免疫治疗研究就此拉开了帷幕[1]。Koch当仁不让地成为开展结核病免疫治疗的第一人。他发现,豚鼠初次皮内攻击Mtb4～6周后,再次皮内注射Mtb活菌或结核菌素(旧结核菌素,OT),会使豚鼠的病理性反应有所减轻,表现为注射部位的病灶很快坏死并脱落,而留下的溃疡通常较易愈合[2]。动物实验上的这种好转迹象给了Koch启发。然而,当他用结核菌素对结核患者进行免疫治疗时,却产生了意想不到的后果,部分结核病患者的病变加重,出现发烧和休克等症状,甚至注射后几小时内死亡[3]。这种现象(即Koch现     

自噬在结核分枝杆菌感染中的作用及相关基因的表达

目的:探讨自噬在结核分枝杆菌(MTB)感染中的作用及相关基因的表达.方法:透射电镜观察在雷帕霉素诱导下自噬体的形成,通过克隆形成单位(CFU)检测自噬形成后对胞内感染的MTB H37Rv菌株的清除作用,以实时定量PCR方法检测自噬相关基因atg5、atS7、atg8、atg12 mRNA表达水平.结果:在宙帕霉素诱导下,RAW264.7细胞可形成自噬体,自噬体产牛后对胞内感染的H37Rv菌株具有一定的清除作用.在MTB感染过程中参与自噬形成的atg5、atg8、atg12 mRNA表达量上调,而atg7表达量无变化.结论:自噬参与抗MTB免疫应答过程,而ats5、atg8、atg12是MTB感染形成自噬体的重要调控分子.     

结核分枝杆菌Rv3245 蛋白抗原免疫学特性的研究

目的:研究结核分枝杆菌Rv3425 蛋白免疫学特性,评估其诊断应用价值及在结核致病性中的作用。方法:将Rv3425 基因克隆至pET28a 载体中,诱导表达Rv3425 融合蛋白并进行纯化;利用ELISA、Western blot 分析其抗原性与特异性;流式检测该抗原对巨噬细胞凋亡的影响。结果:获得了可溶性原核表达融合蛋白Rv3425,Rv3425 蛋白能刺激灭活结核分枝杆菌免疫小鼠脾细胞产生高水平的特异性IFN鄄酌、纯化的Rv3425 蛋白能与结核感染小鼠血清特异性结合,其特异性血清抗体IgG 及IgM 在结核病人中的水平明显高于健康人,发现该蛋白能诱导巨噬细胞的凋亡。结论:本研究发现结核分枝杆菌Rv3425 蛋白具有较强的抗原性且能促进巨噬细胞的凋亡,这些发现对于结核病的诊断及致病机制的研究具有重要价值。     

结核分枝杆菌Hsp60 影响小鼠巨噬细胞抗原提呈相关分子表达的研究

目的:探讨结核分枝杆菌热休克蛋白60(MTB Hsp60)对小鼠骨髓巨噬细胞MHCⅡ类分子表达的影响。方法:采用50 ng/ml、100 ng/ml的MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞,分别在24 h、48 h、72 h收集细胞提取mRNA,采用实时荧光定量PCR检测PⅣ、PⅢ、PⅠ、IL-27、CⅡTA的mRNA表达水平;分别用50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml的MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ/F4/80、CD86/F4/80的百分比。结果:50 ng/ml MTB Hsp60刺激后CⅡTA、PⅣ、IL-27、PⅠ在3个时间点的总体比较差异有统计学意义(P0.05),3个时间点两两比较,CⅡTA在72 h的表达与24 h的表达相比明显降低(0.543±0.034 vs 1.859±0.689,P0.017),PⅣ在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(0.442±0.061 vs 0.834±0.030,P0.017),IL-27在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(1.519±0.041 vs 1.711±0.016,P0.017),72 h的表达与24 h的表达相比明显增高(2.606±0.193 vs 1.711±0.016,P0.017),PⅠ在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(1.221±0.019 vs 1.567±0.037,P0.017);100 ng/ml MTB Hsp60刺激后CⅡTA、IL-27、PⅠ在3个时间点的总体比较差异有统计学意义(P0.05),3个时间点两两比较,IL-27在48 h、72 h的表达与24 h的表达相比明显增高(2.609±0.246/0.867±0.049 vs 0.602±0.096,P0.017),PⅠ在72 h、48 h的表达与24 h的表达相比明显增高(0.811±0.085/1.361±0.199 vs 0.526±0.140,P0.017)。100 ng/ml MTB Hsp60刺激后的PⅢ、PⅠ、CⅡTA的mRNA表达水平相较于50 ng/ml MTB Hsp60刺激后有所下调(P0.05),而PⅣ的mRNA表达水平增高(P0.05)。MHCⅡ/F4/80的表达百分比在3个不同浓度刺激后比较差异具有统计学意义(P0.05):MHCⅡ/F4/80的表达在200 ng/ml MTB Hsp60刺激后相较于50 ng/ml MTB Hsp60的刺激有所下调,而CD86/F4/80的mRNA表达水平增高。结论:MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞后CⅡTA、PⅣ、IL-27、PⅠ、PⅢ的mRNA表达有显著变化且受到MTB Hsp60浓度和时间的影响,MHCⅡ类分子随MTB Hsp60刺激浓度的增加而减少,CD86随MTB Hsp60刺激浓度的增加而增加,提示MTB Hsp60抑制小鼠骨髓巨噬细胞MHCⅡ类分子的表达,促进黏附分子的表达,即Hsp60可能抑制巨噬细胞抗原提呈功能从而影响其抗原提呈相关分子的表达,使MTB逃避巨噬细胞的免疫杀伤,进一步导致MTB慢性感染和潜伏感染。     

用PFGE鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌

快速、准确地鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌（MOTF）对结核病与非结核分枝杆菌病的诊断与治疗具有重要的指导意义。本研究以传统鉴定法为“金标准”，对94株分枝杆菌进行了分析，基于脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis．PFGE）及聚类分析的原理，建立了鉴定结核分枝杆菌与MOTF的新方法，并对其进行了方法学评价。     

结核分枝杆菌免疫逃逸分子机制的研究进展

结核分枝杆菌是一种胞内感染菌,感染后主要寄居在巨噬细胞内,可通过抑制吞噬溶酶体的形成,避免反应氧和反应氮产物的毒性效应以及干扰巨噬细胞抗原递呈等多种途径逃逸巨噬细胞的免疫杀伤,进而在细胞内存活、增殖,在条件适合时可引起结核病,并对人体健康和公共安全产生严重危害。深入探讨结核分枝杆菌免疫逃逸的分子机制,有助于进一步了解结核分枝杆菌与巨噬细胞的相互作用模式,并为结核病诊断、预防、治疗及相关产品开发提供一定的理论依据。     

结核分枝杆菌多抗原蛋白芯片对儿童结核病的诊断价值

目的探讨结核分枝杆菌（MTB）多抗原蛋白芯片对儿童结核病的诊断价值。方法选取2005年4月至2006年4月在首都医科大学附属北京儿童医院诊断为结核病的住院患儿作为结核病组。选取同期住院，患感染性疾病，同时除外结核病的患儿作为非结核病组；选取体检纯化蛋白衍生物（PPD）试验阳性，既往无结核病史，无明显结核中毒症状，胸部影像学及腹部B超检查未见结核病灶的儿童作为结核感染组；选取同期行健康体检，卡疤试验阳性，无基础疾病，无结核接触史的儿童为健康对照组。各组留取血清标本。计算结核病组PPD试验阳性率及细菌学检查阳性率。应用MTB多抗原蛋白芯片同时检测标本中脂阿拉伯甘露糖（LAM）、相对分子质量16000和38000蛋白IgG抗体，通过蛋白芯片阅读仪判断结果，其中任意1种或1种以上抗体检测阳性，即判为蛋白芯片检测阳性。分别计算各组抗体检测阳性率，并计算该方法检测儿童结核病的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等指标。应用Logistic回归及，检验分析蛋白芯片检测阳性率与患儿年龄、病程、抗结核治疗时间、激素使用以及结核病类型的关系。结果研究期间共纳入结核病组79例，非结核病组33例，结核感染组15例，健康对照组30例。蛋白芯片检测结核病组的阳性率为34．2％（27／79），低于PPD试验阳性率（84．8％，67／79），高于细菌学检查阳性率（12．7％，10／79）。在非结核病组阳性率为6．1％（2／33），结核感染组和健康对照组阳性率为0。蛋白芯片检测结核病组的灵敏度为34．2％，特异度为97．4％。阳性预测值93．1％，阴性预测值58．5％。Logistic回归发现蛋白芯片检测阳性率仅与病程相关，且随病程延长而阳性率升高。病程〈1个月，蛋白芯片检测阳性率为18．8％（6／32），病程在～3个月，蛋?     

结核分枝杆菌感染的巨噬细胞的死亡和自噬

结核分枝杆菌(MTB)是一种兼性细胞内寄生菌,能将单核/巨噬细胞内物质转化为对其自身生存有利的成分。在结核病中细胞凋亡有助于机体保护作用,包括消除病原菌的复制环境、促使体液免疫对游离病原菌产生免疫应答以及增强抗原提呈作用。细胞坏死未显示抗MTB免疫保护作用。巨噬细胞的自噬诱导能有效杀伤MTB,巨噬细胞与MTB通过自噬产生复杂的对话机制。因此,开展MTB诱导的宿主细胞应答机制研究有可能被用于结核病的防治。本文主要总结了MTB感染巨噬细胞死亡和自噬的研究现状。     

髋关节广泛耐药性结核分枝杆菌感染诊治1例

髋关节广泛耐药性结核菌感染临床少见,其确诊所需时间较长,往往确诊时已为晚期,对髋关节的结构和功能已造成巨大破坏,治疗复杂,给患者造成了沉重的负担.中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院收治的1例以左髋关节疼痛为首发症状的年轻患者,初步考虑为左髋关节结核,经一期骨水泥旷置术及规律抗结核治疗5个月后感染复发,二次旷置并行基...     

外泌体与结核分枝杆菌相互作用的研究进展

结核病是目前世界各国重点防控传染性疾病之一。外泌体(exosomes)是多种细胞分泌的一种含有特异性与非特异性蛋白成分的囊泡结构,是机体免疫细胞之间重要的信息传递介质,其在机体免疫反应中发挥着重要作用。外泌体能呈递表面抗原,激活多种细胞免疫因子,介导巨噬细胞杀伤结核杆菌的细胞免疫反应。外泌体与结核分枝杆菌相互作用研究已经成为当前重大研究热点,有望开发成预防结核病的新型疫苗。