应用蛋白芯片技术检测分析鼠疫血清抗体谱的研究进展

鼠疫是鼠疫杆菌借鼠蚤传播为主的烈性传染性疾病,广泛流行于啮齿动物中.从6世纪初到19世纪末就有3次世界范围内的大流行.鼠疫按临床症状分为腺鼠疫、肺鼠疫和败血症型鼠疫.腺鼠疫临床表现典型,而肺鼠疫和败血症型鼠疫则发病更为迅速,致死率也更高.     

鼠疫菌感染兔血清抗体谱分析

目的分析鼠疫耶尔森菌感染的兔血清(鼠疫菌感染兔血清)中抗体产生的种类与规律,为了解鼠疫菌的致病机制及筛选新的疫苗亚单位提供实验依据。方法利用含有145个鼠疫菌毒力相关蛋白的蛋白质芯片检测鼠疫菌感染兔血清抗体谱,并与鼠疫菌活疫苗EV76株免疫兔血清(免疫兔血清)抗体谱比较。结果在鼠疫菌感染兔血清中共检测到41个蛋白相应的抗体,其中28个抗体在免疫兔血清中也检测到,有6个蛋白抗体只在鼠疫菌感染兔血清中检测到。结论鼠疫菌感染兔血清的抗体谱与免疫兔血清的抗体谱不完全一致,通过对鼠疫菌感染兔血清抗体谱的研究,可为深入了解细菌的致病机制及筛选新的疫苗亚单位奠定基础。     

腺鼠疫患者血清抗体谱的研究

目的检测腺鼠疫患者血清抗体谱及抗体随时间变化趋势。方法利用一包含145个鼠疫耶尔森氏菌毒力相关蛋白质的蛋白芯片检测云南腺鼠疫患者血清抗体谱及抗体随时间变化趋势。结果在腺鼠疫患者体内检测到32种蛋白相应的抗体。结论FI抗体产生的速度最快、幅度最高、持续的时间最长;YopM、YopH、YopE抗体升高不明显;V抗体在患者体内未检测到;在发病后14 d才检测到pH6抗原的抗体,3个月时抗体荧光值没有下降,可持续半年。YopD的抗体在部分患者体内明显升高,但在半年后下降到正常水平。     

青海省鼠疫患者血清抗体谱研究

目的研究在鼠疫感染过程中,患者对鼠疫耶尔森菌产生体液免疫反应的规律.寻找鼠疫菌新的具有免疫原性的蛋白。方法利用鼠疫耶尔森菌重要毒力相关蛋白芯片对鼠疫患者的血清抗体谱进行检测。结果利用含145个鼠疫耶尔森菌蛋白质的蛋白芯片。共检测到鼠疫患者血清中29个蛋白的抗体。其中13种蛋白的抗体在患者体内明显上升,除已知的8个具有免疫原性的蛋白外,发现了鼠疫菌5个新的具有免疫原性的蛋白(SycE、SycH、OmpA、pH6与YPO2098)。结论这5个新的具有免疫原性的蛋白将是下一步鼠疫疫苗研究的靶点。     

鼠疫诊断芯片的探针制备

目的 探索制备鼠疫诊断芯片特异性探针的新方法。方法 直接采用限制性核酸内切酶Sau3A Ⅰ消化鼠疫耶尔森菌3个致病性质粒，克隆在T载体上，再经巢式PCR扩增制备成打印芯片的探针。结果 该法收集到250条探针用于打印芯片。分别与鼠疫耶尔森菌，同属的假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌杂交，可筛选出杂交信号强阳性的特异点阵。结论 该法简便可行，适于制备鼠疫诊断芯片的探针。     

多重PCR检测方法在鼠疫监测中的应用

目的验证在鼠疫疫源地调查中应用多重PCR方法快速检测鼠疫菌的实用性。方法在14个省的17个鼠疫监测点采集标本2524份。选用针对鼠疫菌特异序列的引物,并加入内部对照模板,直接从鼠肝、脾等脏器标本中进行鼠疫核酸检测,与细菌分离培养结果相比较并进行统计学分析。结果两种检测方法的符合率为92.67%。PCR方法阳性检出率为10.38%,较细菌培养阳性检出率(4.48%)高(x~2=682.25,P<0.01)。结论多重PCR方法可应用于鼠疫监测中,比传统方法迅速、灵敏,但还有待于优化。     

肺鼠疫患者血清蛋白抗体的测定

目的 分析肺鼠疫患者血清中蛋白抗体产生的种类和机体免疫应答能力,为筛选新的疫苗亚单位提供试验依据.方法 利用蛋白微阵列技术构建蛋白芯片.对2例肺鼠疫患者发病后6个月的血清,采用蛋白质芯片(含有149个鼠疫菌毒力相关基因蛋白)技术检测血清中鼠疫蛋白抗体的种类和机体的免疫应答能力.结果 患者1血清中除了YPMT1.23c、YPMT1.86、YP00406、YP01071基因编码的蛋白没检测出相应的蛋白抗体外,其他88种蛋白均检测出相应的蛋白抗体;患者2血清中检测出43种基因编码的蛋白抗体,其他49种没有检查到.有39种基因蛋白抗体在患者1、2血清中都存在,其中有YPMT1.81c、YPMT1.84、rv10、YPCD1.31c、YPCD1.28、YPCD1.58、YPMT1.62c、YP03247共8种蛋白抗体明显升高.与正常值比较,患者1、2血清中8种蛋白抗体升高的阳性倍数分别为:109.96、176.4,20.64、17.73,16.50、7.16,23.51、7.65,46.00、25.61,4.50、8.24,5.98、5.08,23.98、4.76.结论 通过对肺鼠疫患者血清抗体测定,8种蛋白抗体不仅可作为免疫诊断的靶标,同时也是今后亚单位疫苗的研究重点.     

大黄抑制鼠疫耶尔森菌的基因芯片检测

目的 研究基因组芯片检测大黄抑制鼠疫耶尔森菌分子机制的方法 .方法 使用的鼠疫耶尔森菌全基因组芯片包含4005条鼠疫耶尔森菌基囚.应用液体稀释法测定大黄对鼠疫耶尔森菌的最小抑菌浓度(MIC),基因芯片表达谱实验中,大黄作用鼠疫耶尔森菌的浓度为10×MIC,作用时间为30 min,提取并纯化鼠疫耶尔森菌总RNA,反转录合成cDNA,用Cy3,Cy5染料标记后,与鼠疫耶尔森菌全基因组芯片杂交,通过芯片扫描仪获得表达谱分析结果 .应用实时定量PCR技术对芯片结果 进行验证.结果 大黄对鼠疫耶尔森菌的MIC为0.02500 kg/L.获得了大黄作用鼠疫耶尔森菌的基因芯片表达谱.大黄作用鼠疫菌的明显差异表达基凶共有498个,上渊基闪358个,下凋基因140个.结论 应用鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片可以进行大黄抑制鼠疫耶尔森菌的分子作用机制研究.     

鼠疫耶尔森氏菌快速检测研究进展

目的论述一套对鼠疫耶尔森氏菌特异性强、快速、灵敏度高的快速检测方法,对鼠疫做到早发现、早预防、早诊断、早治疗,预防和控制鼠疫的发生和流行。方法查阅和收集国内外相关鼠疫耶尔森氏菌快速检测的文献和资料。结果鼠疫耶尔森氏菌检测技术向着快速、敏感、特异的标准化和国际化方向发展,其检测技术更加先进、齐全、完备。结论鼠疫耶尔森氏菌的检测技术从细菌学、血清学及分子生物学等正向更快速、更先进的方向发展,这对鼠疫防治将发挥重要作用。     

鼠疫F1抗原胶体金检测试剂的应用评价

目的 探讨鼠疫F1抗原胶体金检测试剂(简称金标试剂)的应用价值.方法 制备金标试剂,实验室检测其灵敏度、特异性和稳定性.并在全国17个鼠疫监测点检测动物脏器标本1798份,以细菌培养和反向血凝法作为平行对照,比较金标试剂的符合率和阳性率.结果 金标试剂灵敏度为0.0010g/L F1抗原,室温和4℃放置12个月检测效果稳定,检测假结核和小肠结肠炎菌悬液均呈阴性反应.现场检测标本,金标试剂与反向血凝法比较,符合率为97.11%(1746/1798),与细菌培养法比较,符合率为96.83%(1741/1798);而金标试剂阳性率为9.23%(166/1798),高于反向血凝法[6.79%(122/1798)]和细菌培养法[6.28%(113/1798)].结论 金标试剂灵敏度高、特异性强,是可以用于鼠疫现场监测和病例判定的快速诊断方法.     

ELISA双抗原夹心法检测鼠疫FI抗体的效果评价

目的比较ELISA双抗原夹心法与IHA法检测人血清中鼠疫FI抗体的最低检出限,符合率以及检测ELISA的特异性,以确定ELISA检测技术能否在鼠疫监测、诊断和流行病学调查中得到应用。方法分别用ELISA双抗原夹心法和IHA（间接血凝法）检测血清298份和鼠疫阳性诊断血清1份。结果ELISA双抗原夹心法检出4份阳性血清,IHA也检出4份阳性血清,2种方法阳性检出率无差别,符合率为75％,最低检出限均为1：160。结论ELISA特异性强,阳性检出率与IHA相当,结果容易判定,可以在鼠疫病例诊断及鼠疫监测中作为常规方法推广使用。     

河北省鼠疫耶尔森菌毒力测定

目的研究河北省鼠疫自然疫源地分离的鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)对小鼠和豚鼠的毒力。方法选取2005年分离的鼠疫菌株(200501、200502、200507、200511、200512)、1972年分离的鼠疫菌株(7220)、1994年分离的鼠疫菌株(9401).腹股沟皮下注射法接种小鼠和豚鼠,动物死亡后常规解剖取肝、脾等脏器做细菌培养,计算每株鼠疫菌对小鼠和豚鼠的半数致死量(LD_(50))及LD_(50)的95%可信区间,比较各菌毒力的强弱。结果7220株和2005年分离的5株鼠疫菌毒力强,小鼠LD_(50)介于21.72～113.59个菌;9401株毒力相对较弱,LD_(50)为1809.88个菌。7株菌对豚鼠均有较强的毒力,LD_(50)介于3.35×10~2～6.64×10~4个菌。结论7株鼠疫菌属于鄂尔多斯高原型强毒鼠疫菌,对小鼠和豚鼠均有较强的毒力。     

蛋白芯片在寄生虫病免疫学诊断中的应用前景

蛋白芯片技术是近年来兴起的一种高度集成化的分析和研究手段,该技术具有高通量、快速、高效、操作简单、结果准确、灵敏度高等特点,在生命科学、临床医学、司法鉴定、卫生检验领域有很好的应用前景.该文阐述了蛋白芯片技术的基本原理、分类、制备,结合寄生虫病诊断的内容和特点,就蛋白芯片技术在寄生虫病免疫学检测领域的应用作一简要综述和展望.     

鼠疫治疗策略进展

鼠疫是自然疫源性疾病,起病急、病程短、传染性强、病死率高,给人民生命安全和社会稳定带来严重威胁。鼠疫疫源地分布于世界各地,至今,部分地区疫情流行仍很活跃,导致鼠疫这种人兽共患病的防控形势十分严峻。以链霉素为首选的抗生素疗法是传统的方案,在各型鼠疫的治疗中发挥关键作用,但随之而来的耐药性报道,促使了新策略的研发和实践。文章就不同种类抗生素的治疗效应、鼠疫疫苗的研究进展、噬菌体疗法的研究进展作一综述,以期为今后鼠疫治疗提供参考。