模拟土壤环境中炭疽杆菌生态学的实验研究

本实验以模拟的方法，采集不同地区、不同类型的土壤，人为用炭疽杆菌污染，在不同条件下观察该菌形成芽孢数量的变化。结果证实土壤的类型与芽孢的形成数量无明显关系，炭疽杆菌在土壤中保存时，随着时间延长，形成芽孢的比率并无明显增加，但数量有所增长，说明土壤环境在一定程度上支持炭疽杆菌繁殖。特别是在土壤中加入新鲜动物血液时，芽孢数量明显增多，土壤的温度和湿度平衡对芽孢形成影响最大，符合炭疽的流行病学规律，提示     

甘肃省甘南州两起炭疽疫情调查

目的 分析2019年廿肃省甘南藏族自治州(简称甘南州)两起炭疽疫情的流行特征及处置措施,为该地区炭疽预防和控制提供参考.方法 参照《炭疽诊断标准》WS 283-2008和《全国炭疽监测方案》开展流行病学调查,查阅病例临床资料并描述分析.结果 两起疫情共发病4例,涉及2个县3个自然村,一起发生于夏河县牧区(1例),医院报告为疑似肺炭疽,PCR检测痰标本,确诊为皮肤炭疽并发甲型流感导致的肺部感染,排除肺炭疽病例;另一起发生在临潭县(3例),通过购买卓尼县病牛输入,为家庭聚集性皮肤炭疽疫情,3人参与病牛剥皮,全部发病,5人食用病牛肉,发病3人.两起疫情均通过剥皮食用病死牛所致,二者间未呈现明显的流行病学联系.一年后回顾性调查两起疫情,并随访病例、现场采样评价消毒效果,未分离到炭疽杆菌.结论 疫区处理措施有效,但仍存在隐患,需加强监测;应加强当地群众的炭疽宣传教育和群众防病意识;同时,提高医务人员、实验室专业技术人员的业务能力,防止漏诊和误诊.     

炭疽芽孢杆菌的分离鉴定及其与疫苗株的鉴别诊断

目的建立炭疽芽孢杆菌临床分离株和疫苗株的鉴别诊断方法,为炭疽疫情判断和疾病控制提供依据。方法以炭疽芽孢外壁胶原样蛋白的编码基因bclA和pXO1质粒上的aat序列为靶点,设计引物,通过PCR扩增片段多态性和测序结果分析可变串联重复序列(VNTR)。在生物安全3级实验室分离炭疽菌体蛋白,使用MALDL-TOF/TOF质谱仪进行检测,BioTyper软件分析图谱。结果炭疽分离株与Ⅱ号、无荚膜疫苗株,VNTR分析结果均有不同。2个分离株测定bclA基因序列全长均为1 113 bp,编码的蛋白包含66个GXX重复和5个BclA重复。质谱分析发现,2个分离株菌体蛋白表达峰图基本一致,而2个疫苗株与之相比有很大的差异,许多蛋白的表达明显下调。结论两种方法都能够有效鉴别炭疽临床分离株和疫苗株。     

炭疽芽胞杆菌中插入序列研究进展

炭疽芽孢杆菌是1877年由著名的微生物学家柯赫(Rob-ertKoch)发现经人类证实的第一个细菌病原菌;它属于B.cereus菌属,此菌属主要包括炭疽芽孢杆菌(B.anthracis),腊样芽孢杆菌(B.cereus),蕈状芽孢杆菌(B.mycoides),假真菌样芽孢杆菌(B.pseudomycoides),苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)和B.weihenstephanensis6个对人类活动有影响的菌种[1]。我们所关注的炭疽芽孢杆菌革兰氏染色阳性,两端平切,无鞭毛,需氧或兼性厌氧;在有氧条件下可形成位于菌体中心的椭圆形芽孢;该菌营养要求不高,易于大量培养.炭疽芽孢杆菌是引起人畜共患急性传染病的病…     

正常兔补体对炭疽芽孢的杀灭与裂解作用

经Sterne株炭疽芽孢吸附的正常兔血清与一定量Sterne株炭疽芽孢37℃孵育,血清补体溶血活性被消耗,大量芽饱被杀灭,扫描电镜下可见芽孢被裂解破坏,而与56℃灭活血清作用的芽孢形态完整。通过选择性阻断补体两条激活途径,发现这种芽孢杀灭依赖补体系统,补体经典和旁路途径均参与作用,但经典途径起主要作用。实验结果表明:补体系统在机体产生特异性免疫之前,对机体防御炭疽菌的侵袭起着重要作用。     

应用荧光PCR检测土壤、脏器中的炭疽芽孢杆菌

目的用荧光定量PCR方法检测土壤、动物脏器和血液中炭疽芽孢杆菌,评价并优选目标核酸纯化方法。方法采用TaqMan荧光定量PCR技术,以炭疽芽孢杆菌pagA、rpoB2引物探针和相应外标、内标为手段,比较4种从土壤中检测炭疽菌及3种从感染脏器及血液中检测炭疽菌的方法,探讨环境和组织样品中抑制因素对荧光定量PCR检测的影响,优选并确定纯化检验手段。结果应用NaI裂解glassmilk纯化炭疽菌核酸并用荧光定量PCR检验,检出底限为2·5万拷贝/g土壤(pagA),从血液样本的检出限为1000拷贝/ml。结论荧光定量PCR技术和NaI裂解glassmilk纯化制备模板的联合应用可灵敏、特异地从土壤、血液中检测炭疽芽孢杆菌。     

应用Taq Man荧光PCR定性定量检测炭疽芽孢杆菌

目的　发展一种快速、敏感、特异的检测炭疽芽孢杆菌的方法。方法　应用基于TaqMan荧光探针的实时(real time)PCR技术,针对致病炭疽毒株的两个质粒pXO1、pXO2上的pagA ,cap基因和染色体上的ropB基因设计引物和探针定性、定量检测炭疽芽孢杆菌。构造并应用上述探针的外标对照及pagA的内标对照,采用多重荧光定量PCR技术建立荧光定量方法并发现假阴性;采用UDG抗污染和ROX矫正背景噪音,提高检验能力;用该方法检测炭疽芽孢杆菌疫苗株感染的动物脾脏标本,盲法评价该方法在实际工作的应用。结论　该方法能特异、灵敏、高效地检测炭疽芽孢杆菌,该方法的推广和应用对有效防范炭疽生物恐怖袭击、提高突发事件应对能力、快速诊断具有重要意义。     

炭疽杆菌细菌学研究

本文研究了炭疽细菌学的下列问题:(1)准确求出该菌增代时间,有利于研究其早期生长规律;(2)发现炭疽芽胞出芽时先有一个生理学出芽阶段,要比形态学出芽早得多;(3)炭疽荚膜抗原性特异,以此建立试验常有较好结果;(4)炭疽菌体抗原非特异性问题较大,判断由它建立的试验结果要慎重;(5)炭疽杆菌受β-内酰胺类抗生素作用形成的串珠,经改进为平板纸片法和肉汤法后,扩大了它的应用范围;(6)炭疽噬菌体及其快速裂解法已成为鉴定该菌不可缺少的武器;(7)卵黄液腹腔注射确能增强炭疽芽胞的毒力;(8)炭疽杆菌和蜡样杆菌仍然是二个独立的种。应用这些基础研究原理于实际工作,大多取得了较好的结果。随着炭疽杆菌质粒的发现,将进一步推动炭疽理论和应用课题的研究和发展。     

荧光定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

目的利用LightCycler建立一种简便、特异的实时荧光定量PCR检测方法,用于炭疽芽孢杆菌的快速检测。方法采用SYBR GreenⅠ随机掺入法,利用本实验室建立的实时荧光定量PCR反应体系,根据炭疽芽孢杆菌荚膜和水肿因子设计引物,同时检测两个毒力相关质粒的存在,检测其灵敏度和特异性,并以盲测试验进行验证;在此基础上鉴定14株炭疽芽孢杆菌,并测试该法检测土壤模拟污染标本的灵敏度,实验中设置内对照以排除假阴性结果的存在。结果炭疽杆菌基因组DNA的检测灵敏度可达每反应体系0.53pg,两个克隆株提取质粒的检测限分别为每反应体系12拷贝、140拷贝;检测14株炭疽芽孢杆菌及29株非炭疽芽孢杆菌的PCR扩增结果表明,炭疽芽孢菌DNA均出现特异的扩增结果,29株对照菌的DNA均为阴性;土壤模拟污染标本检测灵敏度可达每反应体系36个芽孢;20次重复实验结果表明其平均值与标准差为14.602±0.640。结论该方法检测炭疽芽孢杆菌具有简便、快捷、灵敏度高和特异性好的特点,为临床诊断、环境监测、卫生防疫等方面,快速检出炭疽芽孢杆菌提供了有利的手段。     

新分离枯草芽孢杆菌蛋白酶基因的克隆和鉴定

目的 从新分离的枯草芽孢杆菌中克隆和鉴定蛋白酶基因.方法 用PCR方法从新分离的枯草芽孢杆菌DNA扩增出蛋白酶基因,PCR产物克隆入pMD-18T载体,DNA序列分析鉴定重组的插入片段;DNA序列分析结果与GenBank上的序列进行比较确定新克隆蛋白酶基因的种类.结果 从枯草芽孢杆菌DNA中扩增出大约1 200 bp的PCR产物,重组入pMD-18T载体,DNA序列分析结果显示插入的DNA片段全长1 146个核苷酸,在Genbank搜索显示为枯草芽孢杆菌蛋白酶基因全序列,与GenBank报道的所有序列均有差别.结论 从新分离的枯草芽孢杆菌DNA中克隆出新的蛋白酶基因.     

贵州省2006-2011年炭疽芽胞杆菌检出情况与致病性研究

目的了解贵州省2006—2011年炭疽芽胞杆菌感染和分布情况,为贵州省炭疽疫情的预防控制和炭疽病09分子流行病学研究提供科学依据。方法对来自贵州省2006—2011年不同地区09830份疑似炭疽标本（外环境标本667份、患者标本151份和牲畜标本12份）,采用传统的革兰染色镜检、普通营养琼脂平板和血琼脂平板培养基分离培养炭疽芽胞杆菌,运用青霉素抑制试验和噬菌体裂解试验对可疑炭疽芽胞杆菌菌落进行鉴定。采用Real—time PCR技术检测88株经传统细菌学方法鉴定为炭疽芽胞杆菌菌株pX01质粒上的PA基因和pX02质粒上的CAP基因。结果从830份标本中分离出88株炭疽芽胞杆菌,总检出率为10．60％。2007年分离出炭疽杆菌的阳性标本最多,占36．36％;其次为2009年,占29．55％。阳性标本主要分布在黔西南州,其次为毕节地区和黔南州;册亨县、织金县和望谟县为炭疽杆菌检出数较多的监测县。88株炭疽芽胞杆菌CAP基因均为阳性。除2007年2株炭疽菌株PA基因为阴性外,其余86株PA基因均为阳性。结论贵州省炭疽疫源地面积广大,污染严重;检出的88株炭疽芽胞杆菌中97．73％的菌株同时具有两种毒力质粒,具有强致病性;该研究结果对贵州省炭疽疫情的预防控制及分子流行病学研究具有重要意义。     

一株炭疽杆菌无毒株的建立

目的 建立无毒炭疽菌株，为炭疽疫苗研究和免疫检测打基础。方法 用传统的高温减毒法，将当前用于生产炭疽疫苗的减毒菌株进一步减毒。结果 对筛选的一株炭疽杆菌AAT121株进行全面检定，证实它已失去其亲代株A16R所具有的pXO1质粒，并因此失去了产生毒素的能力，成为炭疽杆菌“无毒株”；同时也几乎完全失去了生成芽胞的能力；其它的生物和生化学性质未发现变化。结论 炭疽减毒株也可用高温减毒法进一步减毒为无毒株，以便有关研究中应用。     

2019-2020年宁夏炭疽芽胞杆菌毒力鉴定及基因分型研究

目的 了解宁夏2019-2020年分离的炭疽芽胞杆菌菌株致病力及基因分型特征,为宁夏皮肤炭疽疫情判定与分子溯源提供实验室依据。方法 收集2019-2020年宁夏各地区分离的炭疽芽胞杆菌,对其进行毒力鉴定,并运用MLVA-15和canSNP分型技术进行基因分型研究。结果 2019-2020年宁夏分离到的炭疽芽胞杆菌均为强毒株,MLVA-15分型为同一种群,canSNP分型为A.Br.001/002组。结论 2019-2020年宁夏分离到的炭疽芽胞杆菌致病力较强,且菌株呈现相同的基因分型特征,提示菌株间存在流行病学关联。此研究结果填补了宁夏炭疽芽胞杆菌实验室检测中菌株致病力及基因分型的空白。     

中国炭疽芽胞杆菌中11个串联重复序列位点的特征和分布

目的检测炭疽芽胞杆菌中可变数量串联重复序列(VNTR)的变化,分析我国菌株中VNTR的特征和分布规律。方法 PCR扩增,琼脂糖电泳和毛细管电泳,测序验证,BLAST比对等。结果 11个VNTR位点中有4个在所有菌株中没有差别,另外7个位点只在个别菌株中检测到差别,有差别的菌株多分布在新疆;11个VNTR位点均位于基因编码区内,编码对细菌生存重要的蛋白和一些功能不明蛋白。结论结果提示新疆的菌株类型较复杂;本研究中的VNTR位点比较保守,可能不能用于区别不同的炭疽芽胞杆菌,但对于了解炭疽芽胞杆菌的基因组特征以及鉴定炭疽芽胞杆菌具有一定的作用。     

2012-2015年贵州省炭疽芽胞杆菌分离鉴定及MLVA分型分析

目的 了解菌株的分子流行病学特征,为贵州省炭疽疫情的预防控制提供科学依据。方法 对2012-2015年贵州省间不同地区的409份标本(外环境388份、患者19份和牲畜2份)进行炭疽芽胞杆菌分离培养,采用革兰染色镜检、青霉素抑制试验和噬菌体裂解试验对可疑炭疽菌落进行鉴定,分析菌株检出情况。运用MLVA-15技术对炭疽芽胞杆菌分离株进行基因分型获得各VNTR位点的扩增长度并计算重复单元的重复数目。结合各VNTR位点重复数目,利用NTsys 2.10e软件对不同地区菌株进行聚类分析。结果 从409份标本中分离出34株炭疽芽胞杆菌,检出率为8.31%。其中341份土壤检出33株,检出率为9.68%;17份患者皮肤病灶渗出液检出1株,检出率为5.88%。2015年分离出炭疽杆菌的阳性率最高,占48.72% (19/39)。MLVA-15分析显示,34株菌株被分为3个MLVA型;聚类分析显示,34株菌株被分为A和B两簇,其中A簇又被进一步分为A1和A2分支。来自相同地区或年份的多数菌株聚类关系相对较近。结论 2012-2015年贵州省间各种疑似炭疽送检标本中,土壤的检出阳性率最高,贵州省炭疽芽胞杆菌菌株具有MLVA型别多样性,型别分布和聚类关系具有明显的地域性。     

手部皮肤炭疽的特征分析

目的　对云南省发生的一起以手部皮肤感染为主要表现的炭疽疫情进行分析总结,为进一步防治炭疽提供经验。方法　收集并分析昆明市第三人民医院收治的因屠宰牛引发皮肤炭疽的4例患者的临床资料。结果　4例患者有明确的流行病学史,2例为炭疽确诊病例,2例为临床诊断病例。4例患者均以手或手臂出现水泡为首发症状,周围皮肤红肿,伴局部疼痛明显,水泡大小不等,中央呈黄色脓疱状,局部焦痂形成;4例患者WBC、CRP明显升高;4例患者ALT、AST、CK及LDH也出现不同程度升高;4例患者均使用标准化抗菌治疗方案,结合局部创面处理、消肿及支持等对症治疗约3周,均痊愈出院。讨论　皮肤炭疽患者的皮肤表现多样,早期易误诊、误治,及时诊断和治疗是关健。皮肤炭疽局部挤压和有基础性疾病者易重症化。