全球O型口蹄疫病毒流行逐年递减

<正>口蹄疫病毒有七个没有交叉保护的血清型,并且病毒容易变异,因此该病的防疫一直是养殖企业的难题。近两年的国际OIE数据显示,A型血清型感染率呈迅速上升趋势,2011年全球A型感染率是2010年的3倍,而O型则趋缓。中国兽医药品监察所口蹄疫病毒研究专家赵启祖认为,上述情况与O型口蹄疫疫苗的免疫有一定关系。研究发现,口蹄疫病毒的流行毒株有明显区域性。根据国际OIE的最新数据,这两年流行的血清型有所变化:A型流行渐广,从2010年仅8.3%     

猪O型口蹄疫病毒强弱毒株VP_1基因的克隆与序列分析

本研究根据口蹄疫病毒 (FMDV)VP1基因的序列 ,设计并合成了 1对用于扩增整个VP1基因的引物 (5P、P6 )。从细胞培养液或组织中提取总RNA ,通过PT_PCR扩增 ,从F2 9株、O3I3株和T5 0 9株中均获得了 1条约 740bp的DNA电泳带。将PCR产物双酶切后电泳回收 ,插入到相应双酶切的pUC18质粒中 ,获得了重组质粒。通过PCR鉴定 ,证明重组质粒pUCVP1/F2 9、pUCVP1/O313、pUCVP1/T5 0 9均插入了VP1基因。对上述 3个重组质粒进行测序后分析 ,F2 9强毒株与O3I3、T5 0 9弱毒株相比 ,其核苷酸序列同源性分别为 98.75 %和 99.0 6 % ;因F2 9株核苷酸发生 3个碱基缺失与 1个碱基替换 ,故推导的氨基酸序列同源性分别仅为 44 .13%和 41.32 % ;而T5 0 9株与O3I3株相比 ,其核苷酸、氨基酸序列同源性分别为 99.37%和 95 .31%。通过序列分析发现 ,本研究的 3个毒株与国内大多数毒株 (包括 1997年台湾暴发FMDV所分离的毒株 ,除O/A/ 5 8株外 )均属于同一基因型 ,核苷酸序列同源性为 85 %～ 94% ;而与国外毒株相比 ,属不同的基因型 ,核苷酸序列同源性仅为 81%～ 82 %。其推导的氨基酸序列 ,除F2 9株与O/HK/ 93株及 1997年台湾暴发FMDV分离的少数毒株的氨基酸序列同源性仅为 45 %～ 6 3%外 ,本研究的 3个毒株与国内分离的大多数毒株的VP1     

不同厂家的猪O型口蹄疫疫苗对口蹄疫流行毒株保护性的研究

为了探索不同厂家疫苗对猪O型口蹄疫流行毒株的保护情况,选用当前政府采购的A、B灭活疫苗厂家和C合成肽疫苗厂家生产的猪O型口蹄疫疫苗,按照农业部推荐免疫程序对试验猪分别进行二次免疫后90天,用OZK/93和O/(XJ/10-11/MYA/98)进行攻毒,观察其各自保护率。结果显示,A、B两个厂家的灭活疫苗对OZK/93株的攻毒保护率分别为60%、80%,对O/(XJ/10-11/MYA/98)株的攻毒保护率分别为100%、100%;合成肽疫苗对OZK/93株的保护率为100%,对O/(XJ/10-11/MYA/98)株保护率为60%。说明试验用的3个厂家的猪O型口蹄疫疫苗对毒株的保护有差异。     

猪O型口蹄疫病毒强弱毒株VP1基因的克隆与序列分析

本研究根据口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因的序列，设计并合成了1对用于扩增整个VP1基因的引物（5P、P6）。从细胞培养液或组织中提取总RNA，通过PT－PCR扩增，从F29株O3I3株和T509株中均获得了1条约740bp的DNA电泳带。将PCR产物双酶切后电泳回收，插入到相应双酶切的pUC18质粒中，获得了重质粒。通过PCR鉴定，证明重组质粒pUCVP1/F29,pUCVP1/0313,pUCVP1/T509均插入了VP1基因。对上述3个重线质粒进行测序后分析，F29强毒株与O313、T509弱毒株相比，其核苷酸序列同源性分别为98．75％和99．06％；因F29株核苷酸发生3个碱基缺失与1个碱基替换，故推导的氨基酸序列同源性分别仅为44．13％和41．32％，而T509和O3I3株相比，其核苷酸、氨基酸序列同源性分别为99．37％和95．31％。通过序列分析发现，本研究的3个毒株与国内大多数毒株（包括1997年台湾暴发FMDV所分离的毒株，除O／A／58株外）均属同一基因型，核苷酸序列同源性为85％－94％；而与国外毒株相比，属不同的基因型，核苷酸序列同源性仅为81％－82％，其推本研究的3个毒株与国内分离的大多数毒株的VP1基因的氨基酸序列同源性高达87％－95％，本项研究对猪O型FMDV的强弱毒株VP基历进行克隆与序列分析，将进一步丰富我国FMDV毒株VP1基因资料库，为更加科学地防制FMD提供分子水平依据。     

外来口蹄疫流行毒株跟踪分析与防控

2008年以来,外来口蹄疫流行毒株不断侵入,给我国造成巨大危害。分子流行病学研究表明,我国现有的主要流行毒株,如A/Sea-97、O/Mya-98、O/PanAsia和O/Ind-2001等,均系外来毒株。结合全球口蹄疫流行形势和毒株遗传衍化关系推测,这些毒株由东南亚地区传入我国的可能性最大。此外,常年流行于中亚、西亚等国家的O/PanAsia-2、A/Iran-05和Asia1/Sindh-08等毒株,以及在印度等南亚地区流行的A/G VII和Asia1/G VIII等毒株传入我国的风险依旧存在。为及时判定外来口蹄疫威胁,做好诊断、免疫等阻断技术储备,本文就外来口蹄疫毒株流行情况和国家口蹄疫参考实验室有关技术储备工作进行总结,以期为我国外来口蹄疫防控提供参考。     

口蹄疫A型病毒不同毒株抗原反应性

旨在对口蹄疫A型病毒(FMDV)3种毒株制备的不同抗原进行反应性比较分析,筛选最合适的免疫学诊断抗原,为进一步研究利用该抗原进行血清学诊断奠定基础.分别选择AF/72毒株、Re-A/WH/09毒株制备纯化146S抗原和VP1表达蛋白以及A/GD/MM/13毒株VP1表达蛋白作为备选抗原,利用间接ELISA检测方法与胶体...     

O型口蹄疫病毒缅甸98株衣壳蛋白的表达及抗原性分析

口蹄疫病毒空衣壳是由口蹄疫病毒衣壳蛋白构成的不含核酸成分的衣壳结构,具有与完整病毒相似的构象和免疫原性。本研究以O型口蹄疫缅甸98株(O/MYA98/BY/2010株)为研究对象,利用其P12A-3C基因构建重组杆状病毒,间接免疫荧光试验检测到Sf9昆虫细胞成功表达重组衣壳蛋白。对收集的蛋白分析发现,重组衣壳存在于未被裂解的前体蛋白和中间体蛋白中。双抗夹心ELISA检测到重组衣壳蛋白相比灭活病毒有较高的抗原结合效价。蔗糖密度梯度离心纯化空衣壳,空衣壳所在梯度表现出最强抗原性。研究结果证实了重组衣壳蛋白具有良好的抗原性,可为口蹄疫病毒空衣壳疫苗的深入研究提供参考。     

国内现有猪口蹄疫O型灭活疫苗对2010年流行毒株的抵抗力

在2010年上半年,猪O型口蹄疫不断发生,作为国内几个生产厂家的猪口蹄疫现用疫苗种毒的提供者,我组进行了猪源流行毒对该种毒灭活疫苗免疫猪的攻毒保护试验及观察。结果如下:1)、猪源流行毒致猪发病速度慢。猪源流行毒接种猪后,致猪发病的时间在3～5天,而疫苗株致猪发病时间是接种后2～3天;2)、该疫苗毒株能有效抵抗猪源流行毒的攻击,PD50大于6;3)、免疫保护和ELISA抗体水平没有线性相关性;4)、免疫保护与140S抗原量有相关性。     

口蹄疫病毒的基因分型

口蹄疫病毒的分型对口蹄疫防治和病毒的研究具有极其重要的意义,笔者对口蹄疫病毒基因分型的理论基础、基因分型及其意义方面进行了综述.     

全球口蹄疫流行和防控状况

近几十年来,全球口蹄疫（FMD）的防控取得巨大成效,截至2015年5月已有49%的OIE成员被认可为无FMD国家/地区;但是口蹄疫仍在亚洲、非洲部分国家呈地方性流行。2012年,FAO/OIE正式发布“全球FMD控制策略”,提出了15年内FMD的控制目标,即FMD在大多数国家得到控制、在某些国家甚至被消灭,无FMD国家继续保持无疫。本文介绍了全球FMD流行状况、区域防控经验及其成效,简述了“全球FMD控制策略”的目标、组成部分和主要活动,并提出了相关建议,以期对我国FMD防控提供借鉴。     

Development and Application of Two-temperature RT-PCR for Detectionof Type O Foot and Mouth Disease Virus

According to the gene sequences analysis of foot and mouth disease virus (FMDV) in GenBank,a pair of specific primers was designed in the conserved sequence of type O FMDV P1 gene. The reaction parameters were optimized using the uniform design method to develop a two-temperature RT-PCR method for detection of type O FMDV.The results of sensitivity and specificity showed that the two-temperature RT-PCR method was only specific for type O FMDV without amplification of the other viruses. The amplified fragment was same with the expected length.The cloning and sequencing results revealed that the sequence of amplified fragment had 100% simililarity to the target sequence,and the minimum detection quantity was 1.665 pg/μL,the effective detection rate was consistent with the three step RT-PCR sensitivity test results. 54 taper toxicity test pigs were detected,and positive identification results and three-step PCR results was consistent.Compared with the three-step PCR,it could save 20 min.These results indicated that the developed two-temperature RT-PCR for detection of type O FMDV was a kind of accurate,rapid,specific and sensitive detection method.     

口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

试验通过对口蹄疫病毒核苷酸序列的比对分析,在O型口蹄疫病毒的P1基因保守区,设计1对特异性引物,应用均匀设计法优化反应参数,建立口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法。对该法进行特异性试验、敏感性试验检测。结果表明,该二温式RT-PCR方法只对口蹄疫O型病毒敏感,对其他血清型的口蹄疫病毒及常见的猪病病毒均不敏感;扩增条带与预期目的片段大小相符,扩增片段经克隆、测序发现与引物所在基因序列的同源性为100%;检测病毒RNA的敏感性为1.665 pg/μL,其敏感性与三步法PCR敏感性检测结果没有差异。运用该法对54头攻毒试验的动物进行检测,阳性鉴定结果与三步法PCR鉴定结果一致,与三步法PCR相比该法节省了20 min,表明所建立的口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR方法是一种准确、快速、特异、敏感的检测方法。     

口蹄疫病毒完整病毒粒子定量方法的研究进展

口蹄疫疫苗的有效抗原成分为完整的口蹄疫病毒粒子(146S),疫苗的效力与疫苗中含有的146S具有极大的相关性。因此对疫苗的生产过程及产品进行146S的定量检测是非常重要的环节。目前对146S定量的方法主要是超速离心的方法,除此之外,ELISA检测也越来越受到关注,同时很多研究人员也在积极探索其他更为简便快捷的检测方法。作者主要对各种146S的定量方法作一综述。     

O型口蹄疫病毒VP1基因在2种原核表达载体上的表达

设计1对引物将口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)VP1基因克隆到T载体上,通过NdeⅠ和Xho Ⅰ双酶切VP1基因和pET-28(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-28a-VP1;然后用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切VP1基因与pET-41(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-41a-VP1;然后将这2个新构建的载体分别通过热冲击法转化BL21(DE3),37℃不同IPTG浓度和32℃、0.01 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示pET-28a-VP1的表达量高于pET-41a-VP1,在DTT和乙醇的作用下,二者均没有可溶性蛋白出现.     

口蹄疫病毒O型OXH0312株灭活疫苗的制备及其检验

对口蹄疫O型OXH0312病毒株进行了牛体感染、乳鼠适应传代和细胞适应传代等生物学特性的研究,并对制备的细胞毒配制的疫苗进行了免疫原性测定。结果显示,该毒株从细胞毒13代(BF13)起,病变时间趋于稳定,14代至17代是一个相对平台期,病变时间稳定在11 h之内;用乳鼠测定病毒毒价稳定在107.68/0.2 mL左右,传到21代时,效价开始下降。用15代、16代和17代病毒液制备3批疫苗进行PD50的测定,3批成品苗的PD50分别为3.80、4.20、3.00。说明该毒株具有比较稳定的生物学特性和良好的免疫原性,可以做为生产用后备种毒。