石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒活性抑制作用的初步研究

【目的】寻找用于治疗尖吻蝮(Agkistrodon acutus)咬伤的中草药石柑子(Pothos chinensis)的药效实验证据。【方法】将制备所得石柑子水提物与尖吻蝮蛇毒混合孵育40min,检测混合液中蛇毒的磷脂酶 A2 活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性。【结果】石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒的磷脂酶 A2 活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性都有明显抑制作用。【结论】研究结果初步证实了石柑子对尖吻蝮咬伤具有治疗效果。
     

尖吻蝮蛇蛇毒酸性磷脂酶A2三维结构的计算机模拟研究

利用同源模建方法,借助于分子力学优化和分子动力学模拟,构建了尖吻蝮蛇蛇毒酸性磷脂酶Ａ２Ｉ和Ａ２Ⅱ的三维结构,用Ｐｒｏｆｉｌｅ－３Ｄ和Ｐｒｏｓｔａｔ检测模建蛋白的结构以确证其合理性,并把模建蛋白与知同源蛋白的空间结构进行了比较,对模建蛋白的结构与的关系进行了讨论,认为在钙离子 度相同的情况下,钙离子的结合可能使酸性磷脂酶Ａ．ａＡＰＬＡ２Ⅱ中ＴｒＰ的荧光强度比Ａ．ａＰＬＡ２Ⅰ中Ｔｒｐ的荧光强度变化大。     

尖吻蝮蛇毒对人卵巢癌A278O细胞的抑制作用研究

【目的】研究尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒对人卵巢癌A2780细胞(后简称A2780细胞)形态学特征、细胞增殖活力及粘附能力的影响。【方法】采用倒置荧光显微镜观察在不同质量浓度和时间条件下,尖吻蝮蛇毒对A2780细胞形态学特征的影响;采用CCK-8法检测细胞增殖率的变化,使用细胞计数法检测尖吻蝮蛇毒对细胞粘附能力的影响。【结果】当尖吻蝮蛇毒质量浓度为3.125μg·mL-1时,A2780细胞出现少量皱缩、变圆、凋亡的现象;随着尖吻蝮蛇毒质量浓度增加,细胞凋亡的现象愈加明显。当用50μg·mL-1的尖吻蝮蛇毒处理A2780细胞1h后,被处理细胞出现少量皱缩、变圆现象;12h后,被处理细胞粘连成团,出现大量凋亡现象。在3.125～200μg·mL-1范围内,随着尖吻蝮蛇毒质量浓度的增加,A2780细胞增殖活力逐渐减弱,且呈明显剂量依赖关系。当用3.125μg·mL-1的尖吻蝮蛇毒处理A2780细胞时,细胞粘附率降为78.26%;当蛇毒质量浓度为25μg·mL-1时,细胞粘附率降为不足10%。【结论】尖吻蝮蛇毒可明显影响A2780细胞的形态学特征,抑制该细胞的增殖活力以及粘附能力。     

蛇莓乙醇提取物抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶活性初探

【目的】初步探究蛇莓(Duchesnea indica)对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒蛋白水解酶的抑制作用。【方法】采用不同极性有机溶剂对蛇莓乙醇提取物进行分级萃取,结合硅胶薄层层析(TLC)进行分离,再利用气相色谱-质谱法(GCMS)对抑制蛋白水解酶作用最强的活性部位进行组分分析。【结果】乙酸乙酯萃取相具有较强的抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶活性;经硅胶TLC分离从中获得条带1、条带2、条带3和条带4共4个条带,且条带4的尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶抑制活性最强。通过GC-MS分析检测出条带4中存在15种成分,其中2,4-二叔丁基苯酚、正十六烷酸、十八烷酸、十六烷酸,2-羟基-1-(羟甲基)乙酯、硬脂酸-2-羟基-1-(羟甲基)乙酯和10,13-十八碳二炔酸甲酯可能与抑制蛇毒活性相关。【结论】蛇莓中存在抑制尖吻蝮蛇毒蛋白水解酶的功效组分,可以作为蛇伤药物开发的资源。     

小叶三点金不同萃取相对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

【目的】考察小叶三点金(Desmodium microphyllum)乙醇提取物不同萃取相对尖吻蝮蛇(Deinagkistrodon acutus)毒主要酶类的抑制作用。【方法】采用不同极性溶剂对小叶三点金乙醇提取物进行萃取,检测各萃取相对尖吻蝮蛇毒中蛋白水解酶、磷脂酶A2、透明质酸酶和类凝血酶的抑制作用,再结合气相色谱-质谱法(GC-MS)对抑制作用最强的萃取相进行组分分析。【结果】乙酸乙酯萃取相能够明显抑制尖吻蝮蛇毒中的蛋白水解酶、磷脂酶A2和透明质酸酶和类凝血酶的活性,经GC-MS分析检测出26种成分,其中正十六烷酸、十八碳烯酸、豆甾醇和谷甾醇具有抑制蛇毒活性的作用。【结论】小叶三点金醇提物乙酸乙酯萃取相对尖吻蝮蛇毒中主要酶类具有明显抑制作用,能够作为有效部位用于抗蛇毒功效组分的筛选研究。
     

小叶三点金醇提物对尖吻蝮蛇毒的抑制作用

研究小叶三点金Desmodium microphyllum醇提物对尖吻蝮蛇Deinagkistrodon acutus蛇毒的抑制作用。将尖吻蝮蛇毒与不同比例小叶三点金醇提物在37℃下孵育30 min,检测对蛇毒中主要酶活力以及体内毒性的抑制作用。小叶三点金醇提物对尖吻蝮蛇毒中蛋白水解酶、磷脂酶A2、透明质酸酶以及纤维蛋白原水解酶均具有明显的抑制作用,对尖吻蝮蛇毒引起的小鼠出血、水肿、组织坏死以及致死毒性具有显著的中和作用,且呈剂量效应关系。首次证实了小叶三点金具有抑制尖吻蝮蛇毒的功效,为小叶三点金在蛇伤治疗中的应用提供了理论依据。     

3种固定化尖吻蝮蛇毒金属蛋白酶的比较

[目的]筛选出一种最优的固定化尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒金属蛋白酶(Snake venom metalloproteinase,SVMP)的方法.[方法]采用D380大孔树脂、海藻酸钠-壳聚糖、溶胶-凝胶等3种载体固定化SVMP,用分光光度法检测固定化金属蛋白酶和游离金属蛋白酶的酶活性,...     

石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒活性抑制作用的初步研究

【目的】寻找用于治疗尖吻蝮(Agkistrodon acutus)咬伤的中草药石柑子(Pothos chinensis)的药效实验证据。【方法】将制备所得石柑子水提物与尖吻蝮蛇毒混合孵育40min,检测混合液中蛇毒的磷脂酶A2活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性。【结果】石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒的磷脂酶A2活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性都有明显抑制作用。【结论】研究结果初步证实了石柑子对尖吻蝮咬伤具有治疗效果。     

Sr^2＋诱导尖吻蝮蛇毒中抗凝血因子I的结构稳定性及重新折叠

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子I（ACFI）是活化凝血因子X（FXa）结合蛋白，具有显著的抗凝血活性．用荧光光谱研究了Sr^＋诱导ACF I的结构稳定性及重新折叠．结果表明，脱钙ACF I（apo-ACFI）可结合两个Sr^＋．ACF I与FXa的结合反应不是绝对依赖于Ca^2＋，Sr^2＋也可以诱导ACF I与FXa的结合反应．盐酸胍诱导的Sr^2＋重组ACFI（Sr^2＋-ACF I）去折叠过程是一个三态过程，有一个稳定的中间态．像Ca^2＋一样，Sr^2＋不仅能显著增加ACF I的结构稳定性，而且在不改变变性剂浓度条件下，能诱导去折叠的脱钙ACF I重新折叠成Sr^2＋-ACF I的中间态．Sr^2＋诱导apo-ACF I重新折叠过程包含快慢两步反应，Sr^2＋取代Ca^2＋只降低快折叠反应速度，而不影响慢折叠反应速度．这说明，金属离子影响快折叠过程，而慢折叠过程只决定于蛋白质本身性质．     

尖吻蝮蛇毒不同蛋白酶水解物的制备及抗氧化活性研究

【目的】研究尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒的不同蛋白酶水解产物的制备及抗氧化活性。【方法】分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解尖吻蝮蛇毒,以水解物的水解度、清除自由基活性、金属离子螯合能力和总还原力作为抗氧化活性比较指标来选出最佳水解蛋白酶,并比较该蛋白酶水解物在超滤后得到的不同分子量组分的抗氧化活性大小。【结果】碱性蛋白酶水解物的清除DPPH自由基活性、亚铁离子螯合能力和总还原力均为最佳;该酶解物经超滤得到的3个组分中,分子量为3～10kDa的组分对DPPH自由基和羟基自由基清除能力最强,分子量大于10kDa的组分的亚铁离子螯合能力和总还原力最强。【结论】尖吻蝮蛇毒的不同蛋白酶水解物均具有抗氧化活性,其中用碱性蛋白酶水解物抗氧化活性较强。     

抗尖吻蝮蛇毒卵黄抗体口服给药保护剂的研究

【目的】比较硫糖铝和5种糖类对抗尖吻蝮蛇(Deinagkistrodon acutus)毒卵黄抗体(IgY)的保护作用,为开发抗尖吻蝮蛇毒IgY口服制剂提供依据。【方法】通过免疫白来航鸡(Gallus domesticus),从所产鸡蛋中制备抗尖吻蝮蛇毒IgY。在不同pH 值(2.0,3.0)条件下,于IgY中加入相同剂量的保护剂,用ELISA 法测定IgY 活性;在pH 值为2.0且加入条件下,加入等于或高于胃内正常质量浓度的胃蛋白酶,后加入不同剂量的硫糖铝,再用ELISA法测定IgY 抗体活性;用不同剂量的保护剂与IgY混合后灌胃小鼠(Mus musculus),在不同时间点(1.5,2.5,3.5h)取血,采用ELISA和Western法测定血清中的IgY活性。【结果】在pH 值为2.0和3.0条件下,硫糖铝对IgY抗体活性的保护效果均为最佳;在pH 值为2.0且加入不小于胃内正常的胃蛋白酶质量浓度的条件下,体积分数在30%以上的硫糖铝均可提高IgY 活性;IgY 灌胃后的小鼠血清中,体积分数为50%的硫糖铝可有效保护IgY 活性。【结论】加入硫糖铝作保护剂后能有效提高IgY 对胃酸和胃蛋白酶的抵御作用。
     

牛奶菜水提物对中华眼镜蛇毒神经毒性的抑制作用

【目的】考察牛奶菜(Marsdenia sinensis)水提物对中华眼镜蛇(Naja atra)毒神经毒性的抑制作用。【方法】利用四通道离体组织灌流系统和昆明小鼠(Mus musculus)离体回肠标本检测牛奶菜水提物对中华眼镜蛇毒神经毒性的抑制、即时中和与恢复作用。【结果】牛奶菜水提物对中华眼镜蛇毒神经毒性有一定抑制作用。【结论】研究结果揭示了牛奶菜用于治疗中华眼镜蛇咬伤的有效性,为后续开发抗蛇毒药物奠定了基础。     

植物乙醇提取物对香蕉炭疽病菌的抑制活性

采用菌丝生长速率法测量、比较和分析了17种植物乙醇提物2 mg/ml对香蕉炭疽病菌抑制活性,结果显示:毛轴蕨和山苍子对香蕉炭疽病菌抑制活性明显高于其他15种供试植物,抑制率均达到100%;与此同时,加拿大一枝黄对香蕉炭疽病也表现出较好的抑制率活性达到72.58%。毛轴蕨乙醇提取物对香蕉炭疽病菌孢子萌发有很强的抑制作用,抑制中浓度IC50为0.34 mg/ml。毛轴蕨乙醇提取物对香蕉炭疽病菌较强的抑制活性,具有开发植物源杀菌剂的潜力。     

蛇毒类凝血酶研究进展

对有关蛇毒类凝血酶(SVTLEs)的分布分类、理化性质、酶学性质、结构特征、基因克隆表达、临床应用等方面的研究资料进行了概括和综述.结果发现:SVTLEs主要分布在蝮亚科和蝰科毒蛇的毒液中;根据SVTLEs水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度不同,可将其分为SVTLE-AB、SVTLE-A和SVTLE-B等3类;多数SVTLEs的分子量在30~50 kD,含6个二硫键,pI较低,部分SVTLEs的pI较高;SVTLEs可水解TAME和BAEE,其活性可被DFP和PMSF所抑制,但不被胰蛋白酶trypsin及凝血活性中心His的专一抑制剂TLCK和EDTA抑制;对SVTLEs的一级结构和二级结构研究较多,对高级结构研究有待深入;很多SVTLEs基因在大肠杆菌中成功获得了表达,但表达物不能被糖基化和正确折叠,故没有活性或活性不高,而其在真核表达系统中表达活性较高;部分碳水化合物具有稳定SVTLEs结构及提高SVTLEs的酶活力的作用;SVTLEs的临床应用涉及心肌梗塞、缺血性中风、血栓性疾病等疾病的治疗.SVTLEs未来的研究重点将集中于其在真核表达系统的表达和对其高级结构的解析.     

中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中主要酶类活性的抑制作用

【目的】探究中华眼镜蛇(Naja atra)血清对自身蛇毒中主要酶类活性的抑制作用。【方法】不同稀释倍数的中华眼镜蛇血清与蛇毒于37℃孵育30min后,检测蛇毒中磷脂酶A2、透明质酸酶、乙酰胆碱酯酶、L-氨基酸氧化酶和5′-核苷酸酶活性的变化情况。【结果】中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中磷脂酶A2和5′-核苷酸酶具有明显的抑制作用:当血清稀释2倍时,可以使蛇毒磷脂酶A2活性降低28.44%(p<0.001);当血清稀释8倍时,可以使蛇毒中5′-核苷酸酶活性活性降低23.44%(p<0.001)。中华眼镜蛇血清对自身蛇毒中的透明质酸酶、乙酰胆碱酯酶和L-氨基酸氧化酶均无抑制作用。【结论】中华眼镜蛇血清中存在蛇毒磷脂酶A2和5′-核苷酸酶的抑制剂,该结果为后期蛇毒抑制剂的筛选提供了理论依据。     

红花羊蹄甲抑菌活性的研究

红花羊蹄甲花提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和土壤中的一些细菌均有抑菌效果,随着羊蹄甲花提取物浓度的增加,其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑茵作用增强,呈一定的剂量依赖性.在同等浓度下羊蹄甲花提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好,抑菌圈可达13.0mm,其次是枯草芽孢杆菌,抑茵圈可达到9.0mm,然后是大肠杆菌,抑茵圈为7.4mm.最后找出羊蹄甲花对这些细菌的最低抑茵浓度.红花羊蹄甲花提取物对米曲霉、黑曲霉无抑菌效果.     

中药复方宫炎净的乙醇提取物抗炎作用研究

为探讨中药复方宫炎净乙醇提取物的抗炎作用,并筛选抗炎作用最好的乙醇提取物剂量。将实验小鼠分为生理盐水组、地塞米松组以及高、中、低剂量中药复方宫炎净乙醇提取物组,同时建立二甲苯所致耳廓肿胀、蛋清所致足趾肿胀、棉球所致肉芽肿小鼠炎症模型,通过测定小鼠耳廓肿胀率、足趾肿胀率以及棉球所致肉芽组织重来判定乙醇提取物的抗炎效果。结果表明：中剂量乙醇提取物能够显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀率,并显著低于高、低剂量乙醇提取物组（P〈0．05）,与地塞米松组差异不显著（P〉0．05）;各组均能明显降低蛋清所致小鼠足趾肿胀率,其中中剂量乙醇提取物组显著低于高、低剂量乙醇提取物组（P〈0．05）,极显著低于生理盐水组（P〈0．01）,与地塞米松组差异不显著（P〉0．05）;中剂量乙醇提取物能明显抑制棉球所致小鼠肉芽组织增生,并显著低于高、低剂量乙醇提取物组（P％0．05）,极显著低于生理盐水组（P〈0．01）,与地塞米松组差异不显著（P〉0．05）。结果显示,中药复方宫炎净的中剂量乙醇提取物抗炎效果最好。