稳心颗粒对心肌梗死大鼠缝隙连接蛋白43和内质网应激通路基因表达的影响

目的 探讨稳心颗粒调节缝隙连接蛋白43（CX43）和内质网应激通路基因表达的心脏保护机制。方法 建立心肌梗死大鼠模型,术后第2天根据心电图筛选入组,随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组,另设平行操作不结扎的假手术组,药物治疗2周。腹腔注射异丙肾上腺素记录心律失常发生率;心脏血流动力学检测各组大鼠左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室内压最大上升速率（+dp/dt_max）、左心室内压最大下降速率（–dp/dt_max）;苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠心脏病理改变;Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原容积分数;实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测各组大鼠CX43、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、肌醇需求激酶1（IRE1）、活化转录因子6（ATF6）、X盒结合蛋白1（XBP1）mRNA的相对表达量;蛋白免疫印迹法检测CX43的表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠心律失常发生率明显上升（P<0.01）,LVSP、+dp/dt_max、–dp/dt_max均显著降低（P<0.01）,LVEDP显著增高（P<0.01）,心肌组织病理性改变明显,心肌胶原容积分数明显增加（P<0.01）,CX43 mRNA相对表达量明显下调（P<0.01）,IRE1 mRNA相对表达量增高（P<0.05）,GRP78、ATF6、XBP1 mRNA相对表达量明显增高（P<0.01）,CX43蛋白表达明显降低（P<0.01）;稳心颗粒及美托洛尔治疗2周后,给药组大鼠心律失常发生率下降（P<0.05）,LVSP增加（P<0.05）,+dp/dt_max、–dp/dt_max显著增加（P<0.01）,心肌组织病理性变化显著改善,心肌胶原容积分数明显降低（P<0.01）,CX43 mRNA表达量上调（P<0.05）,GRP78、IRE1、ATF6、XBP1 mRNA表达量下调（P<0.05）,CX43蛋白表达升高（P<0.05）。结论 稳心颗粒可调节心肌梗死大鼠CX43和内质网应激通路基因表达,进而发挥心脏保护作用。     

内质网应激凋亡途径对H9C2细胞缝隙连接蛋白43表达的影响及稳心颗粒的干预研究

目的：研究内质网应激凋亡途径对大鼠心肌H9C2细胞缝隙连接蛋白43（Cx43）表达的影响及稳心颗粒的干预作用。方法：体外培养H9C2细胞,分为对照组、模型组、salubrinal（Sal）组、稳心颗粒组;采用毒胡萝卜素（TG）诱导内质网应激凋亡模型,以经典凋亡抑制剂Sal抑制凋亡,采用CCK-8比色分析法筛选药物浓度及时间,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP-同源蛋白（CHOP）、天冬氨酸胱氨酸特异性蛋白酶-12（Caspase-12）、Cx43的表达。结果：CCK-8结果提示,TG、Sal和稳心颗粒的最佳浓度分别为0.1、20 μmol·L-1和10 g·L-1,作用时间均为24 h。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,其余3组的细胞凋亡率显著增加;与模型组比较,Sal组及稳心颗粒组的细胞凋亡率都明显下降。Western blotting结果中,与对照组比较,模型组细胞GRP78、CHOP及Caspase-12蛋白表达水平显著增高,而Cx43蛋白表达水平显著降低;与模型组比较,Sal组和稳心颗粒组细胞CHOP、Caspase-12蛋白表达水平显著降低,Cx43蛋白表达水平显著升高,Sal组细胞GRP78蛋白表达差异无统计学意义,稳心颗粒组GRP78蛋白表达水平显著升高。结论：TG诱导的内质网应激凋亡途径会影响Cx43的表达,稳心颗粒可以通过抑制内质网应激凋亡途径调节H9C2细胞Cx43的表达水平。     

凉血化瘀方对急性肝损伤大鼠线粒体和内质网应激凋亡途径的影响

目的观察凉血化瘀方对大鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其机制。方法SD健康雄性大鼠50只,随机分为正常对照组,D一氨基半乳糖（GalN）＋脂多糖（LPS）模型组,凉血化瘀方高、中、低剂量治疗组。末次给药后1h除正常组外其余4组按0．1midl0g腹腔注射D—GalN（50mg／mL）加LPS（0．48~tg／mL）,造成大鼠急性肝损伤模型。用HE染色,观察肝组织病理变化;电镜观察肝细胞形态及结构;TUNEL法检测肝细胞凋亡;Westernblot检测细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Bcl-2、Chop的表达情况。结果各剂量凉血化瘀方均改善肝组织病理损伤;凉血化瘀方各剂量组细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Chop的表达下调（P均〈0．05或0．01）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,肝细胞形态改善明显。结论凉血化瘀方能抑制肝细胞凋亡。机制主要与调控线粒体和内质网应激途径诱导的细胞凋亡相关。     

栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤模型大鼠缺血区脑组织内质网应激及细胞凋亡的影响

目的 探讨栝楼桂枝颗粒治疗脑缺血再灌注损伤的可能作用机制.方法 54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、栝楼桂枝颗粒组,每组18只.模型组、栝楼桂枝颗粒组大鼠采用线栓法致大脑中动脉栓塞建立脑缺血再灌注损伤模型,假手术组除不插入线栓外其余操作同模型组.各组于造模后2h开始干预,假手术组和模型组给予生理盐水10 ml/kg...     

瓜蒌薤白半夏汤对缺血性心肌损伤大鼠的心肌内质网应激和细胞凋亡的影响

目的 观察瓜蒌薤白半夏汤对缺血性心肌损伤大鼠的心肌内质网应激和细胞凋亡的影响。方法 建立高脂血症为基础的缺血性心脏病大鼠模型,给予瓜蒌薤白半夏汤水煎液28d,检测血流动力学、肾交感神经活动、心肌酶、氧化应激、心肌组织凋亡和内质网应激变化。结果 瓜蒌薤白半夏汤治疗组的左心室血流动力学水平、血清心肌酶、交感神经活性、心肌氧化应激、心肌凋亡蛋白和内质网应激蛋白水平显著改善。结论 瓜蒌薤白半夏汤可通过改善内质网应激介导的心肌细胞凋亡治疗缺血性心肌损伤。     

内质网应激介导的细胞凋亡途径及新靶点药物

 目的综述内质网应激介导的细胞凋亡信号转导途径,以及以各条途径中所涉及的关键酶为新靶点开发研制药物的进展情况。方法着重以近几年国外该领域有代表性的文献为依据,进行分析、归纳、总结。结果与结论Caspase,C/EBP homologous prote in(CHOP),Bc l-2,凋亡信号调节激酶(ASK1)等酶在内质网应激介导的细胞凋亡的信号转导途径中发挥着非常重要的作用,针对这些酶所设计的抑制剂或激活剂,可以抑制或促进细胞的凋亡,从而达到治疗相关疾病的目的。     

黄芪甲苷通过抑制内质网应激减轻老年大鼠急性心肌梗死后非梗死区心肌细胞凋亡

目的:探讨黄芪甲苷减少老年大鼠急性心肌梗死后非梗死区细胞凋亡与内质网应激反应的关系。方法:建立大鼠心肌梗死模型,将24h内存活大鼠随机分为急性心肌梗死组、黄芪甲苷2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg组及阳性对照牛磺酸300mg/kg组,另设假手术组作为阴性空白对照。采用TUNEL法和透射电镜观察法检测心肌细胞凋亡;激光扫描共聚焦显微镜测定心肌细胞内钙离子浓度;蛋白免疫印迹法检测内质网应激相关蛋白糖调节蛋白78和Caspase-12的表达水平。结果:与假手术组相比,急性心肌梗死组细胞凋亡率由0.9±0.04%明显升高至23.8±1.19%、胞浆内钙离子浓度由102.37±8.91μmol/L明显升高至467.15±17.43μmol/L,细胞超微结构明显改变、内质网应激相关蛋白糖调节蛋白78和Caspase-12表达由0.11±0.02和0.013±0.009明显增加至0.89±0.13和0.106±0.011;而5mg/kg黄芪甲苷明显缓解了上述指标的变化(凋亡率降为11.0±0.53%、胞浆内钙离子浓度平均值为降为364.92±9.39μmol/L,细胞超微结构改善,GRP-78、Caspase-12蛋白表达量降为0.34±0.17和0.047±0.018);且与阳性对照牛磺酸组相比差别无统计学差异。结论:黄芪甲苷可减少老年大鼠急性心肌梗死后非梗死区心肌细胞凋亡率而保护心肌,其机制可能与抑制内质网应激相关凋亡途径有关。     

稳心颗粒对心律失常大鼠凋亡、炎症及氧化应激的影响

目的 探讨稳心颗粒对心律失常大鼠凋亡、炎症及氧化应激的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组及稳心颗粒低、中、高剂量（1.34、2.68、5.36 g/kg）组和胺碘酮（35.7 mg/kg）组。各组大鼠连续预防性给药21 d,对照组和模型组ig纯水。末次给药后1 h将大鼠麻醉,尾iv乌头碱以诱导心律失常。采用多道生理信号采集处理系统记录大鼠注射乌头碱前后的心电图变化;采用苏木素-伊红（HE）、Masson染色观察心肌组织病理损伤情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;采用试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malonaldehyde,MDA）、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用Western blotting检测心肌组织兰尼碱受体2(ryanodine receptor 2,RYR2)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-li...     

凉血化瘀方拮抗内质网应激引起的L02肝细胞凋亡作用及机制研究

内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS) 启动的细胞凋亡是近年才发现的一种新的凋亡途径,本研究从ERS途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖 (D-GalN)所致肝细胞凋亡的保护作用。研究发现,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞质内游离钙离子含量明显上升,并使ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达显著增加。不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞的凋亡,抑制细胞质内游离钙离子含量的增高,并使磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达量呈逐渐下降的趋势。这些发现说明:凉血化瘀方对TNF-α和D-GalN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与维持内质网腔钙稳态平衡和下调ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的表达有关。     

中医中药干预内质网应激及其诱导细胞凋亡研究进展

在内质网应激及其诱导的细胞凋亡中,中医中药已经作为新的研究热点进入人们的视野。目前的研究也表明在细胞和动物模型中,无论是中药单体、中成药、复方或中医针灸,都能有效影响相关信号因子的表达。该文主要介绍当前基于内质网应激(ERS)的中医中药研究。     

芪泽汤对慢性肾功能衰竭大鼠 内质网应激相关凋亡分子表达的影响

目的:探讨芪泽汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠内质网应激(ERS)相关凋亡分子表达的影响.方法:2.5％腺嘌呤ig24 d建立SD大鼠肾衰模型.分为5组:正常组、模型组、尿毒清组(2.5 g·kg-1·d-1)、芪泽汤高、低剂量组(50.4,12.6g·kg-1·d-1),每组10只.造模同时各治疗组ig给药,干预24 d后,观察体重变化,全自动生化分析仪检测大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr),应用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,Western blot检测CHOP( C/EBP-homologous protein)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12( Caspase-12)肾内表达水平.结果:模型组BUN(17.21±4.63) mmol·L-1,SCr( 67.00±25.62) μmol·L-1较对照组BUN(4.19±0.77) mmol· L-1,SCr( 15.89±2.62)μmol·L-1明显升高(P ＜0.01);TUNEL结果显示空白组肾小管上皮细胞有少量凋亡,而模型组细胞凋亡数明显增多(P＜0.01);模型组CHOP,Caspase-12表达显著增强(P＜0.01).芪泽汤低剂量和尿毒清能抑制慢性肾功能衰竭大鼠肾小管上皮细胞凋亡和CHOP,Caspase-12表达(与模型组相比较P＜0.05).结论:芪泽汤低剂量能保护腺嘌呤导致的大鼠肾损害,可能与其抑制ERS相关凋亡分子CHOP,Caspase-12高表达有关.     

内质网应激对缺血性脑卒中神经元凋亡与自噬的调控及中医药的干预

内质网作为细胞内的一种膜质细胞器,通过参与分泌蛋白和跨膜蛋白的合成、折叠、成熟和翻译后修饰以维持细胞内稳态,与疾病的发生发展密切相关。当内质网环境受到干扰后蛋白质将发生折叠或错误折叠,此时内质网应激被激活,可对神经元的凋亡与自噬进行调控,在缺血性脑卒中中扮演着重要角色。本文从内质网应激的信号通路入手,探讨内质网应激与神经元凋亡和自噬的关系,介绍中医药通过内质网应激途径调控缺血性脑卒中神经元凋亡与自噬的研究概况,为研究中医药在缺血性脑卒中的作用机制提供新的现代医学的理论支持和作用靶点。     

清肝活血方及其拆方抗酒精性肝损伤大鼠肝细胞内质网应激性凋亡的作用及机制

目的 研究中药复方清肝活血方及其拆方抗酒精性肝损伤大鼠肝细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)性凋亡的作用及机制。     

基于内质网应激探讨淫羊藿苷对受损神经元的影响

目的:从内质网应激的角度观察淫羊藿苷对受损神经元的影响,并探究其修复受损神经元的部分机制。方法:采用神经生长因子(NGF)将PC12细胞诱导分化为神经元,并使用流式细胞术测定微管相关蛋白2(MAP2)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳性率进行鉴定。实验分为4组,空白组为PC12诱导分化的神经元细胞;溶剂组为PC12诱导分化的神经元+0.1%二甲基亚砜(DMSO);毒胡萝卜素组为PC12诱导分化的神经元+2μmol·L^-1毒胡萝卜素;淫羊藿苷组为PC12诱导分化的神经元+2μmol·L^-1毒胡萝卜素+0.1μmol·L^-1淫羊藿苷,使用细胞增殖活性检测试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),葡萄糖调节蛋白78(Grp78)的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CHOP,Grp78 mRNA表达。结果:与溶剂组比较,毒胡萝卜素组可抑制经NGF诱导的神经元样PC12细胞的增殖活性,可促使细胞凋亡,并能够上调CHOP,Grp78的表达(P<0.05,P<0.01);与毒胡萝卜素组比较,淫羊藿苷组可缓解毒胡萝卜素对神经元增殖活性的抑制,减少神经元凋亡,并能够下调CHOP,Grp78的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:淫羊藿苷可通过下调CHOP和Grp78的表达抑制内质网应激,促进受损神经元的修复。     

黄芪散对高脂饮食诱导肥胖大鼠肝脏内质网应激信号通路的影响

目的:观察黄芪散对高脂饮食诱导的肥胖大鼠肝脏内质网应激信号通路的影响,并探讨其机制。方法:选择雄性SD大鼠,通过高脂饲料连续喂养7周建立肥胖大鼠模型后,将其随机分为模型组,黄芪散低、高剂量组(1. 2,2. 4 g·kg-1),立普妥组(2 mg·kg-1),模型组和正常组给予等量生理盐水,灌胃给药,连续15周。分别测定各组大鼠的体质量、附睾脂肪系数、肝脏系数;采用生化试剂测定血浆空腹血糖(FPG),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠附睾脂肪及肝脏病理变化;同时采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c),蛋白激酶R样内质网激酶(PERK),肌醇依赖酶1α(IRE1α),磷酸化IRE1α(p-IRE1α)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠的体质量和肝脏系数显著升高(P 0. 01); FPG,TC,TG,LDL-C水平均明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。模型组大鼠的脂肪细胞和肝细胞体积明显增大,细胞中可见大量脂肪小泡。同时肝组织中内质网应激相关因子SREBP-1c,PERK,IRE1α,p-IRE1α的蛋白表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,黄芪散高、低剂量组均能明显降低肥胖大鼠的体质量、附睾脂肪系数、肝脏系数和糖脂水平(P 0. 05,P 0. 01),且能明显改善附睾脂肪和肝脏的病变程度。黄芪散高、低剂量组及立普妥组大部分可不同程度地降低肝组织中SREBP-1c,PERK,IRE1α/p-IRE1α的蛋白表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:黄芪散具有调节糖脂代谢、保护肝脏和减轻体质量的作用,其机制可能与调控肝脏内质网应激相关因子SREBP-1c,PERK,IRE1α/p-IRE1α的蛋白表达有关。     

中介素通过抑制内质网应激保护缺氧复氧损伤的大鼠肾小管上皮细胞

目的探讨中介素(intermedin,IMD)通过抑制内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)途径的细胞凋亡,发挥对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护机制。方法 NRK-52E细胞随机分为对照组;H/R组;空质粒(H/R+p IRES2)组;IMD(H/R+IMD)组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡;Realtime PCR法和Western-blot法分别检测ERS相关经典分子GRP78、CHOP、Caspase 12在mRNA及蛋白水平的表达;ER特异性荧光染料Dapoxyl用于观察ER形态变化。结果 MTT结果显示,H/R组NRK-52E细胞存活率较对照组明显下降,而IMD转染后细胞存活率提高;肾小管上皮细胞NRK-52E经H/R处理后出现凋亡,细胞凋亡率显著增加,同时H/R可导致ERS途径经典分子GRP78、CHOP、Caspase 12的mRNA和蛋白表达均显著上调;IMD转染后可显著降低NRK-52E细胞凋亡,细胞凋亡率降低,ERS途径经典分子GRP78、CHOP、Caspase 12的mRNA和蛋白表达均明显下降。内质网染色结果显示,H/R可以导致内质网结构受损,Dapoxyl染料聚集,荧光强度加强,内质网颗粒感增强,荧光颗粒分布不均、浓集,并有空泡;IMD转染后内质网结构受损减轻。结论大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E H/R损伤过程中可能存在ERS凋亡途径的活化,IMD可以通过抑制ERS相关的凋亡信号通路,从而减少肾小管上皮细胞凋亡,减轻肾脏IRI。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激影响的研究

目的:探讨滋补脾阴方药(ZiBu PiYin Recipe,ZBPYR)对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激相关分子表达的影响。方法:高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)注射建立2型糖尿病模型,在此基础上,通过复合因素造模的方法建立脾阴虚糖尿病模型,以水迷宫实验评价模型大鼠是否出现学习记忆障碍,之后观察各组大鼠海马内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和真核转录因子2的α亚单位(eukaryotic translation initiation factor 2 subunitα,eIF2α)表达的变化。结果:ZBPYR治疗后GRP78 mRNA水平降低(P0.05),GRP78、磷酸化PERK、磷酸化eif2α蛋白水平明显降低(P0.05),与脾阴虚糖尿病组相比,差异有统计学意义。结论:滋补脾阴方药可能是通过影响内质网应激PERK信号传导改善脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆障碍。     

淫羊霍苷对HCY诱导的血管内皮细胞内质网应激的影响

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导的血管内皮细胞内质网应激的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制。方法:建立HCY诱导的兔血管内皮细胞损伤模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)基因表达;目的基因克隆、鉴定并测序。结果:荧光显微镜观察显示HCY模型组可见多数凋亡细胞,ICA组细胞未见明显凋亡形态学改变;ICA处理组细胞GRP78mRNA表达明显减少,与HCY组比较差异显著(P0.01);测序结果表明,来源于血管内皮细胞的全长648bp的基因片断与兔GRP78基因高度同源。结论:ICA拮抗HCY诱导的血管内皮细胞凋亡,减缓血管内皮细胞内质网应激可能是其作用机制之一。