重组人内皮抑素的纯化及抗肿瘤活性研究

[目的]从高效表达的基因工程菌中纯化重组人内皮抑素,对其抗肿瘤活性进行研究.[方法]经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,重组人内皮抑素在大肠杆菌基因工程菌中以包涵体形式高效表达.通过凝胶层析纯化重组内皮抑素蛋白.应用鸡胚绒毛尿囊膜实验(CAM),肺癌细胞MTT试验及细胞迁移抑制实验,裸鼠皮下移植喉癌抑瘤实验、病理组织切片、免疫组化指标的测定等检测研究重组人内皮抑素的抗肿瘤活性.[结果]重组内皮抑素的复性率可达40%.重组内皮抑素在体外直接抑制肺癌细胞的增殖及迁移.用药21天,对裸鼠皮下移植喉癌的抑瘤率达到40.66%,HE染色、免疫组化及CAM实验表明其对肿瘤组织新生血管的生成有较强的抑制作用.[结论]重组人内皮抑素具有抑制肿瘤组织新生血管生成和直接抑制肿瘤细胞生长和迁移的双重抗肿瘤活性.     

重组腺病毒人内皮抑素的质量标准研究

目的: 建立重组腺病毒人内皮抑素的质量标准和检测方法. 方法: PCR法鉴定腺病毒载体的E2B区和插入基因,琼脂糖凝胶电泳检查重组病毒DNA酶切图谱.分光光度法测定病毒颗粒数,TCID50法测定病毒感染滴度.感染人肝癌细胞HepG2测定插入基因的表达量,感染人血管内皮细胞HM2测定表达产物的生物学活性.病毒的纯度分析采用A260/A280比值和HPLC法进行.采用A549细胞进行复制型腺病毒的检测.结果: 腺病毒载体E2B区和插入基因PCR扩增结果与理论相符,重组病毒DNA的酶切图谱与标准品一致.原液病毒颗粒数为2.4×1012 VP/ml,滴度为1.53×1011 IU/ml,比滴度为6.4% IU/VP;成品病毒颗粒数为1.0×1012 VP/ml,滴度为3.75×1010 IU/ml,比滴度为病3.8% IU/VP.以50 MOI重组腺病毒感染HepG2细胞48 h后培养上清人内皮抑素表达量为332 ng/ml.50 MOI重组腺病毒对血管内皮细胞生长的抑制率为55%.A260/A280为1.29,HPLC纯度为99.7%.复制型腺病毒为≤1RCA/3×1010 VP.其他各项检测指标均符合规定.结论: 建立了重组腺病毒人内皮抑素的质量标准及其检测方法,并用于该产品的质量控制.     

重组人血管内皮抑素临床应用和研究的新进展

目前,重组人血管内皮抑素（恩度）一线联合方案治疗非小细胞肺癌已获批准,并已连续３年列入中国版ＮＣ ＣＮ指南。本文回顾分析了近期发表的有关恩度的临床应用及研究的重要文献,深入了解其作用机制,以期指导进一步的临床推广应用。     

重组人内皮抑素30肽的抗肿瘤作用研究

目的：探讨重组人内皮抑素30肽对肝癌细胞的生物活性及其可能的作用途径。方法：建立HepG2肝癌细胞的单层细胞和多细胞球模型,采用MTT方法和流式细胞技术检测重组人内皮抑素30肽对单层细胞和多细胞球的生长抑制率和细胞调亡率;采用免疫组化和图像分析技术了解重组人内皮抑素30肽与肝癌细胞表面整合素结合的情况。结果：MTT实验表明,在二维细胞中,重组人内皮抑素30肽对HepG-2肝癌细胞表现出明显的抑制作用。在单层细胞和多细胞球中,重组人内皮抑素30肽均可导致细胞凋亡。免疫组化结果显示,无论在单层细胞还是多细胞球中,使用重组人内皮抑素30肽组HepG-2肝癌细胞表面的αtβ1整合素和αvβ3整合素的表达均比对照组明显降低（P〈0．05）。结论：重组人内皮抑素30肽对HepG2肝癌细胞具有直接的杀伤作用。重组人内皮抑素30肽可与HepG-2肝癌细胞表面的αtβ1整合素和αvβ3整合素结合发挥其抗肿瘤作用。     

重组人内皮抑素30肽的抗肿瘤作用研究

目的:探讨重组人内皮抑素30肽对肝癌细胞的生物活性及其可能的作用途径.方法:建立HepG2肝癌细胞的单层细胞和多细胞球模型,采用MTT方法和流式细胞技术检测重组人内皮抑素30肽对单层细胞和多细胞球的生长抑制率和细胞调亡率;采用免疫组化和图像分析技术了解重组人内皮抑素30肽与肝癌细胞表面整合素结合的情况.结果:MTT实验表明,在二维细胞中,重组人内皮抑素30肽对HepG-2肝癌细胞表现出明显的抑制作用.在单层细胞和多细胞球中,重组人内皮抑素30肽均可导致细胞凋亡.免疫组化结果显示,无论在单层细胞还是多细胞球中,使用重组人内皮抑素30肽组HepG-2肝癌细胞表面的α5β1整合素和αVβ3整合素的表达均比对照组明显降低(P<0.05).结论:重组人内皮抑素30肽对HepG2肝癌细胞具有直接的杀伤作用.重组人内皮抑素30肽可与HepG-2肝癌细胞表面的α5β1整合素和αVβ3整合素结合发挥其抗肿瘤作用.     

重组人血管内皮抑素联合重组人p53腺病毒治疗乳腺癌的实验性研究

背景与目的目前多基因、多靶点联合治疗已成为肿瘤研究的方向之一,本文探讨重组人血管内皮抑素(endostatin,ES)联合重组人p53腺病毒(rAd/p53)对乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用.方法建立人乳腺癌裸鼠模型,成瘤后随机分为对照组、ES组、rAd/p53组和联合组,分别给予处理;观察裸鼠的一般情况、体重和肿瘤的体积,并检测肿瘤组织微血管密度(MVD,microvessel density)和血管内皮生长因子(VEGF,vascular endothelial growth factor)的表达.结果成瘤后ES组,rAd/p53组和联合组抑瘤率分别为1.75%、43.36%和58.68%,rAd/p53组和联合组可明显抑制肿瘤生长(P＜0.05),联合组抑瘤作用更为显著;对照组、ES组、rAd/p53组与联合组肿瘤组织的MVD及VEGF表达H-评分分别为(30±5、24±4、24±4、18±4)和(46±8、39±8、40±5、29±5),联合组均低于其余各组,差异有显著性(P＜0.05);各组均未见不良反应,体重变化无显著性(P＞0.05).结论重组人血管内皮抑素联合rAd/p53可显著抑制裸鼠乳腺癌的生长及微血管生成.     

血管抑素、内皮抑素与肺癌关系的研究进展

为了解癌症发生和转移的机理 ,近一个世纪以来 ,人们进行了多方面的研究。早在 1945年 ,Ａｌｇｉｒｅ就提出了肿瘤血管形成的概念 ,实体肿瘤形成后即进入无血管的浸润前期 ,此时肿瘤结节很少能长到 2～ 3ｍｍ3 ,细胞数亦在 10 7以内。但一旦肿瘤出现血管形成 ,即迅速生长[1] 。在 70年代早期 ,Ｆｏｌｋｍａｎ又提出一种假说 ,即肿瘤生长和转移依赖于肿瘤血管形成 ,抑制其血管形成能够控制其生长和转移。但这一假说直到 90年代才由许多实验研究所证实[2 ] 。长时间以来 ,晚期恶性肿瘤患者的治疗主要依靠传统的化学药物治疗方法 ,并主要针对的…     

重组人血管内皮抑素联合化疗临床应用进展

重组人血管内皮抑素（恩度）自2006年SFDA批准上市以来,联合NP（长春瑞滨＋顺铂）化疗方案用于治疗非小细胞肺癌患者,取得了较好的疗效,并写入NCCN指南（中国版）。随着其在其它恶性肿瘤方面的应用,其适应范围逐渐扩大,本文回顾了近年恩度与化疗方案联合应用的文献,就其最新进展进行综述。     

重组人血管内皮抑素联合化疗临床应用进展

重组人血管内皮抑素(恩度)自2006年SFDA批准上市以来,联合NP(长春瑞滨+顺铂)化疗方案用于治疗非小细胞肺癌患者,取得了较好的疗效,并写入NCCN指南(中国版)。随着其在其它恶性肿瘤方面的应用,其适应范围逐渐扩大,本文回顾了近年恩度与化疗方案联合应用的文献,就其最新进展进行综述。     

重组人血管内皮抑素治疗恶性腹腔积液的研究进展

恶性腹腔积液是晚期或复发恶性肿瘤的常见并发症,严重影响患者生活质量,传统治疗方法效果欠佳。重组人血管内皮抑素（恩度）作为广谱抗血管生成药物,在联合化疗治疗非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤方面疗效显著,安全性好。多名学者从基础和临床方面创造性地将恩度用于治疗恶性腹腔积液,均表现出确切的疗效,积液控制良好,副反应少,耐受性好,是一种安全有效的治疗手段。     

重组人内皮细胞生成抑制因子-Endostation的表达和纯化

目的:利用Pichia pastoris菌株高效表达重组人内皮细胞生长抑制因子(rh-Endostatin),并将其纯化至均质。方法:将构建的菌种Pichia pastoris X33/pLW202扩增后接种至发酵培养基中,诱导表达后收获上清,将上清浓缩后经亲合层析、凝胶层析后得到高纯度rh-Endostatin。结果:从发酵上清中可得到60mg/L高纯度的rh-Endostatin,经HPLC检测纯度达98％以上。结论:在Pichia pastoris表达系统中,实现了rh-Endostatin的高效分泌性表达。     

基因工程人β干扰素的原核表达及纯化研究

目的摸索一种适合于中试生产的点突变重组人β干扰素(17Ser-IFN-β)发酵与纯化工艺。方法研究不同培养基和热诱导时间对17Ser-IFN-β表达的影响;观察pH、蛋白浓度和层析条件对17Ser-IFN-β纯化的影响。结果17Ser-IFN-β工程菌在含甘油、酪蛋白水解物及微量元素的M9培养基中,17Ser-IFN-β表达量明显增加。灰度扫描显示热诱导4h后的表达量最高,目的蛋白可达菌体总蛋白的20%以上。17Ser-IFN-β可以相对特异性地被仲丁醇抽提至有机相中,纯度达80%,经S200凝胶过滤柱层析后纯度达90%,用G25柱转换缓冲液,使缓冲液pH值＞8,同时去除缓冲液中的还原剂DTT,将复性后的样品用C4反相柱层析进行精制,最终获得纯度＞98%和比活性>3×107U/mg的17Ser-IFN-β制品。结论成功地建立了注射用新型重组人β-干扰素的中试生产工艺,为随后进行的临床前研究及临床试验打下基础。     

内皮抑素在宫颈癌组织中表达的研究

目的探讨内皮抑素在宫颈癌组织中的表达及与病理分化、临床分期和盆腔淋巴结转移的关系。方法用免疫组化S-P法检测52例宫颈癌和14例正常宫颈组织内皮抑素的表达。结果内皮抑素在宫颈癌组织阳性表达率为(70.0±21.23)%,在正常宫颈组织为(21.43±3.18)%,两者差异有统计学意义(P<0.05);内皮抑素阳性表达率与宫颈癌细胞病理分化、临床分期和盆腔淋巴结转移有密切关系。结论内皮抑素在宫颈癌生长、侵袭和转移过程中起重要作用。     

基因工程人干细胞因子原核表达、纯化及生物学活性研究

目的摸索一种适合于中试生产的重组人干细胞因子(recombinant human stem cellfactor,rhSCF)的发酵表达与纯化工艺.方法研究不同培养基和热诱导时间对rhSCF表达量影响;探索最佳纯化工艺和各因素对rhSCF得率和生物学活性的影响.结果rhSCF工程菌在含甘油、酪蛋白水解物、酵母浸出粉、胰蛋白胨及微量元素的培养基中表达量最高.灰度扫描显示热诱导后2 h开始表达,6 h表达量最高,目的蛋白约可达菌体总蛋白30%.高表达蛋白经复性后,可用酸沉淀作粗分离纯化,随后用阳离子交换层析分离,纯度达80%,经反相层析去除二聚体后,最后用DEAE柱浓缩后并经S200转换缓冲液,最终获得纯度＞95%和比活性＞6×105 U/mg的rhSCF制品.结论成功地建立了注射用rhSCF的中试生产工艺,为随后进行的临床前研究及临床试验奠定基础.     

重组人血管内皮抑素联合化疗心脏毒性的分析

目的: 评价重组人血管内皮抑素联合化疗的心脏不良反应。 方法: 收集12例应用重组人血管内皮抑素联合化疗恶性肿瘤患者的临床资料,观察治疗过程中患者有无心慌、胸闷、呼吸困难等临床症状,心电图,心肌酶谱及左心室射血分数(LVEF)的改变,筛选心脏毒性的早期诊断的指标。 结果: 治疗1周和治疗结束时与治疗前相比CK-MB升高具有显著性意义(P<0.05),治疗结束时与治疗前相比心电图改变有显著性意义(P<0.05)。治疗后与治疗前LVEF值的改变无显著性意义。 结论: 初步认为重组人血管内皮抑素联合化疗存在轻度的心脏不良反应,对心肌有一定的损伤,但是心功能未受到明显改变。CK-MB和心电图可作为早期监测心脏毒性的检查指标。在重组人血管内皮抑素联合化疗的过程中应该警惕心脏不良反应的发生。     

重组人白细胞介素17的原核表达、纯化及鉴定

目的:优化重组人白细胞介素17的原核表达条件,选择不同的路线进行分离纯化.方法:利用SDS-PAGE方法分析比较重组人白细胞介素17在不同培养基、不同诱导时间的表达量,选择最适条件,大量扩增后,分离出包涵体,分别采用盐酸胍溶解法和SDS溶解法两条纯化路线进行进一步的分离和纯化,并对所纯化产物进行常规分析鉴定.结果:采用上述两种不同的溶解包涵体方法,通过后续复性及纯化,均可得到高纯度具有生物学活性的重组IL-17.采用SDS溶解法具有较高的得率,采用盐酸胍溶解法纯化得率较低,得产物的生物学活性较高.结论:通过表达及纯化,得到了大量高纯度具有活性的rhIL-17,为进一步研究IL-17的体内外生物学效应打下了基础.     

Lack of Antitumor Activity of Recombinant Endostatin in a Human Neuroblastoma Xenograft Model

Patients with metastatic neuroblastoma are rarely curable with currently available therapy, and the search for new treatment options, which include the use of inhibitors of tumor angiogenesis, is warranted. Here, we have evaluated the efficacy of one of the most promising natural inhibitors of angiogenesis described to date, endostatin, in a human neuroblastoma xenograft model in nude mice. Murine endostatin cDNA was cloned in a bacterial expression vector, expressed as a polyHis-Endostatin fusion protein and purified on Ni²⁺-NTA beads. The in vitro activity of soluble endostatin was confirmed on bovine capillary endothelial cells and human umbilical vein endothelial cells. The human neuroblastoma cell line SKNAS was injected subcutaneously in the flank of nude mice and administration of the recombinant angiogenesis inhibitor started when tumors reached the size of 100m³. Twenty mg/kg of recombinant precipitated endostatin or PBS was subcutaneously injected daily for 12 days. Serum endostatin levels were measured using a competitive enzyme immunoassay. Tumor growth was only slowed down in endostatin-treated mice when compared to control mice, and no statistically significant difference in serum levels of endostatin was observed between endostatin-treated and control groups. The lack of correlation between serum concentration and tumor response raises concern regarding the mechanism of action of endostatin.     

重组人血管内皮抑制素联合化疗治疗晚期恶性肿瘤

目的 观察重组人血管内皮抑制素（恩度）联合化疗治疗晚期恶性肿瘤的疗效和毒副反应.方法 25例经病理组织学或细胞学检查确诊的晚期恶性肿瘤患者,均采用恩度联合化疗方案,恩度15 mg静脉滴注3～4h,d1-14连续给药,同时给予以往未使用过的或既往治疗无交叉耐药的化疗药物,每3周重复.2个周期后评价疗效和毒副反应.结果 2...