抗胃癌细胞系GC 79-11单克隆抗体的研制及鉴定

近十年来,已相继研制成功多株胃癌单克隆抗体,但有关胃癌单克隆抗体在临床上的应用价值仍在探索中。因此,选择不同类型的胃癌细胞作为免疫原,制备针对不同的胃癌相关抗原的单克隆抗体,对于胃癌的诊断和治疗具有重要的意义。     

用单克抗隆体检测肝癌的肿瘤相关抗原

目前用细胞融合技术已经制备出抗各种癌细胞的,肿瘤相关抗原的单克隆抗体。这些抗体主要用于:①血清免疫学诊断。②免疫组织学的细胞鉴定。③活体内的肿瘤影象显示。④癌症的免疫治疗等。本文介绍用单克隆抗体检测肝癌的肿瘤相关抗原的最新进展。 Carlson等(1985)用产生HBsAg的人类肝细胞癌株PLC/PRF/5作免疫原,制备了对人和鼠肝癌细胞株有反应的三种鼠型单克隆抗体。这些抗体与结肠癌细胞株有交叉反应,对人正常肝、胰、心、肾、骨骼肌、消化管,肺、脑、白细胞、红细胞和血小板无反应。其中,P215457与PM4E9917的对应抗原是人肝癌细胞株PLC/PRF/5和Mahlavu细胞膜并     

抗人Toll样受体4单克隆抗体的制备及其生物活性研究

目的运用单克隆抗体技术制备抗人Toll样受体4(TLR4)单克隆抗体(mhTLR4抗体),并鉴定其生物学活性。方法以重组人TLR4(rhTLR4)作为抗原,腹腔注射免疫Balb/c小鼠。分离小鼠脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合并培养,挑选阳性杂交瘤细胞,扩大培养,制备和鉴定mhTLR4其生物学效应。结果经3次免疫后的小鼠血清中抗rhTLR4抗体的效价具有较高水平的表达。1∶500的小鼠免疫血清可明显抑制人PBMC的TNF-α表达。分离小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,获得3株阳性单克隆杂交瘤细胞。其中2株经过增殖培养、纯化浓缩制备出较高产量的鼠抗人TLR4单克隆抗体。生物学活性测定表明,产生的抗rhTLR4单克隆抗体,能够明显地阻断脂多糖(LPS)诱导的人PBMC细胞对TNF-α的表达。结论本文制备的鼠抗人TLR4单克隆抗体,经鉴定具有较高的阻断内毒素信号传导的效应。为进一步研制人源化抗TLR4抗体、研制新一代抗内毒素靶向药物奠定了基础。     

抗入巨细胞病毒极早期抗原单克隆抗体的制备(文摘)

作者用杂交瘤技术制备出抗人巨细胞病毒(HCMV)极早期抗原的单克隆抗体(McAb),探讨HCMV感染的早期临床诊断。 作者将HCMV用moiI法感染人胚肺纤维母细胞(HEL)后分离细胞核,与Freund氏佐剂一起免疫BALB/c小鼠,每隔2周追加免疫一次,共4个月。腹腔内追加注入后,将脾细胞和鼠骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附法筛选,经过克隆化获得杂交瘤细胞纯株后,     

THBS2 特异性单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备THBS2特异性单克隆抗体并鉴定其特性,为临床应用奠定基础。方法:表达并纯化THBS2不同截断体片段的GST融合蛋白,经小鼠免疫、细胞融合及筛选,制备THBS2特异性单克隆抗体,然后对获得的单抗亲和力和特异性及在不同免疫学实验中的应用进行鉴定,最后采用免疫沉淀法对36例胰腺癌患者及20例正常人血清THBS2进行检测。结果:获得了10株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌抗体;10株单抗经ELISA、Western blot和免疫沉淀证实均能特异性识别人THBS2,且发现THBS2在胰腺癌患者血清中的表达水平显著高于正常人(P0.000 1)。结论:成功制备获得了亲和力高、特异性好的抗人THBS2单克隆抗体,为血清THBS2的检测奠定了基础。     

一种新的胃癌中性糖脂抗原MG_7-Ag的纯化及分析

本文应用本室制备的一株经免疫病理、细胞学诊断、动物及人体内放射免疫显象均已证实,对胃癌有较好反应性的鼠抗人胃癌单抗MG_3。用电泳纯化单抗MG_735.6mg,制备免疫亲和层析柱,从胃癌组织及胃癌转移性腹水癌细胞中获得一种胃癌相关抗原命名为MG_7-Ag。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核衣壳蛋白(NP)的单克隆抗体,并探讨其在该病诊断中的作用。方法克隆NP基因,构建原核表达载体pComb3XSS-NP,并转化大肠杆菌Top10F′,经诱导表达,纯化获得6HIS-NP融合蛋白。以该融合蛋白免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备NP的鼠源单克隆抗体。经鉴定后,选择1株1C8-C6进行大量制备、纯化,并偶联辣根过氧化物酶(HRP),用该酶标抗体对SFTSV感染人的急性期血清进行Western blot检测。结果成功表达、纯化SFTSV重组的NP。经小鼠免疫、细胞融合和ELISA筛选后,共获得4株鼠源单克隆抗体。具较高滴度的1C8-C6酶标抗体能与SFTSV感染人的急性期血清中的NP在Western blot水平上结合,而与汉坦病毒、登革热病毒感染人急性期血清及正常人血清不反应。结论 SFTSV NP的表达及其单抗的制备为该病的实验室诊断奠定了基础。     

胃癌单克隆抗体1D1-2在荷瘤裸鼠体内的放射免疫显像

本文应用胃癌组织和胃癌细胞株接种Rowett裸大鼠及BALB/c裸小鼠,成功的建立了两种荷瘤裸鼠模型。采用氯铵T碘化法将~(125)I、~(131)I标记于抗人胃癌单克隆抗体GMG_1:1D1-2,标记率为68％,IF和RIA     

抗痢疾志贺氏2型菌单克隆抗体的制备和鉴定

志贺氏菌(Shigella)是细菌性痢疾的病原菌。抗志贺氏菌单克隆抗体(McAb)的制备,对菌痢的临床诊断、流行病学调查和基因工程疫苗的研究有一定意义。 试验所用材料 细菌株和BALB/c小鼠来自流研所;Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞来自病毒所。 免疫和细胞融合 免疫程序参见文献。按常规方法进行细胞融合,融合后细胞接种在3块96孔板中,置二氧化碳孵箱内培养。     

抗人卵巢上皮癌单克隆抗体OC_(859)的产生和鉴定

应用细胞融合技术,以人浆液性卵巢上皮癌细胞株CAOV。为抗原,成功地制备了一株能产生抗卵巢上皮癌单克隆抗体OG_(859)的杂交瘤。 经免疫萤光酶标等方法鉴定,证实OC_(859)与卵巢癌上皮细胞株CAOV_3呈强阳性反应,在其他肿瘤细胞株中仅与肝癌及Rajj细胞有极弱的反应。对其它8种肿瘤细胞株均无反应。     

抗人大肠癌单克隆抗体的制备及应用

目的制备和纯化抗人大肠癌单克隆抗体(ND-1),分析其在大肠癌诊断中的应用价值。方法常规免疫小鼠制备腹水,腹水经离心和过滤后,应用G蛋白亲和层析法进行纯化。采用SDS-PAGE、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA检测纯化后抗体的纯度、活性、效价和特异性。并用免疫组织化学SP法检测在大肠癌组织中的表达。结果经SDS-PAGE分离可见两条相对分子质量(Mr)分别为55 000和25 000明显的两条蛋白条带。间接ELISA检测抗体效价为1∶1 000 000,ND-1抗体对表达相应抗原的大肠癌细胞株具有特异结合活性。人大肠癌组织切片经ND-1抗体免疫组织化学染色阳性率为82.9%,其中高分化腺癌阳性率为100%。结论应用G蛋白亲和层析法可以很好分离纯化鼠腹水中的IgG1亚型的单克隆抗体,抗体的纯度高,特异性强,生物学活性好,可望成为有效的肿瘤诊断和治疗的手段。     

体外免疫的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合条件的初步观察

单克隆抗体不仅对疾病的诊断,今后对疾病的治疗亦将起到重要作用。但鼠单克隆抗体用于人类疾病治疗会引起过敏反应等问题,因而近年对分泌人类单克隆抗体的杂交瘤或淋巴细胞株的研究越来越多。制备人单克隆抗体过程中的一个重要关键是免疫手段,有许多抗原是不能或不宜给人进行免疫注射的,因此需要建立在体外对正常淋巴细胞进行特异性免疫的方法,并探索利用体外免疫的淋巴细胞进行细胞融合的实验条件。本文对体外免疫的淋巴     

一组新的胃癌相关抗原MG-Ag在消化道肿瘤血清诊断中的应用及意义

近年来随着单克隆抗体技术的发展，发现了一些消化道肿瘤相关抗原，有些对消化道肿瘤的诊断具有一定价值，但在特异性及敏感性上仍存在一些不足。本文用一组鼠抗人胃癌单克隆抗体(MG系列)对胃癌相关抗原MG-Ag进行血清检测。     

抑制和激活蛋白1(Rap1)单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备并鉴定人端粒相关蛋白抑制和激活蛋白1(Rap1)的单克隆抗体。方法用重组原核人Rap1蛋白免疫BALB/c小鼠;细胞融合后,间接ELISA筛选阳性杂交瘤,建立分泌抗人Rap1蛋白单克隆抗体(m Ab)的杂交瘤细胞株,并进行效价测定和特异性鉴定。结果制备并获得1株稳定分泌抗人Rap1蛋白m Ab的杂交瘤细胞株。ELISA测定腹水效价高达1∶10 000以上。Western blot法、免疫沉淀和免疫荧光染色证实该m Ab能特异性识别人Rap1蛋白并可用于上述不同检测。结论成功制备获得了亲和力高、特异性好的抗人端粒相关蛋白Rap1的m Ab。     

人TEM7膜外段单克隆抗体的制备及其在不同来源肿瘤组织中的定位研究

目的　利用制备的抗人肿瘤血管内皮标志物 7(TEM7)单克隆抗体通过免疫组织化学的方法 ,检测TEM7蛋白在不同来源的肿瘤组织中的定位 ,为以TEM7为靶标的肿瘤血管导向治疗提供必要的理论基础。方法　利用PCR的方法 ,将TEM7膜外段重组到原核表达载体pET 32b中 ,在大肠杆菌中表达 ,蛋白经离子吸附层析纯化后免疫雌性BALB/c小鼠 ,传统的杂交瘤融合技术制备鼠抗人TEM7膜外段单克隆抗体。以酶联免疫吸附实验 (ELISA)、Westernblot筛选及鉴定分泌特异性抗人TEM7膜外段单克隆抗体的杂交瘤细胞株。最后采用免疫组织化学ABC的方法 ,分别对不同来源的70例肿瘤组织及癌旁正常组织进行了TEM7蛋白定位的研究。结果　制备了抗人TEM7单克隆抗体 ,经过Westernblot鉴定具有高度的特异性。对肿瘤及癌旁正常组织免疫组织化学ABC染色的结果可见TEM7蛋白定位于 :大肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、肝细胞癌、肾细胞癌和前列腺癌的血管内皮细胞 ;大肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌和肝细胞癌的肿瘤细胞 ;大肠癌、胃癌和乳腺癌的血管平滑肌细胞 ;胃癌的胃壁平滑肌细胞 ;肝细胞癌的胆管上皮细胞。结论　成功制备了特异性抗人TEM7膜外段的单克隆抗体 ;TEM7在肿瘤组织中并非特异性地表达于肿瘤血管内皮细胞 ,还可见于肿瘤组织的癌细胞、血管平滑     

人类各种肿瘤的单克隆抗体

作者建立了与人胃癌细胞反应的10株单克隆抗体,它们可识别各种人癌肿。用一种缺乏鉴别的腺癌胃细胞系TMK-1供制备杂交瘤。用石蜡包埋制片进行免疫组化染色研究表明,其中9A3.20D11和21A4与肺、乳腺、舌、食道、十二指肠、大肠和胃癌细胞发生阳性反应。这     

单克隆抗体与肿瘤转移

近年来,应用单克隆抗体技术对癌细胞转移机理进行了分子水平的大量研究,取得了很大进展。本文就单克隆抗体在癌细胞转移过程中的免疫学作用和在转移肿瘤诊治中的应用。作一概述。 一、单克隆抗体参与免疫应答 恶性肿瘤淋巴结转移时,及瘤体分离的癌细胞发生细胞膜的抗原性变化,淋巴结内出现防御反应的免疫应答。现已明确,激活的巨噬细胞能有效地控制肿瘤转移。Fidler(1974)注射激活的巨噬细胞,发现肿瘤的肺转移得以控制。Koga等(1985)报告细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和NK细胞能特异地抑制肺和淋巴结转移。近年发现,巨噬细胞按其表面标志可分为许     

依赖于环腺苷酸蛋白激酶的单克隆抗体制备及其在正常和恶性细胞内的免疫细胞化学定位观察

用依赖于环腺苷酸(cAMP)的蛋白激酶(蛋白激酶A,PKA)免疫LOU/C大鼠,分离出脾细胞与大鼠骨髓瘤细胞系IR 983 F融合,经HAT培养液筛选和ELISA检测,获得1株分泌抗PKA单克隆抗体的大鼠杂交瘤细胞系B5 A8。免疫扩散实验表明,该单克隆抗体亚类为IgG_1。免疫印迹实验显示,此单克隆抗体可识别蛋白激酶A的52～56 kd多肽。利用经亲和层析法纯化的单克隆抗体,采用免疫荧光细胞化学方法检测人正常成纤维细胞、人胃癌细胞系和小鼠艾氏腹水癌细胞内的蛋白激酶A定位,结果显示蛋白激酶A主要定位于细胞质,与细胞骨架的分布一致。同步化的胃癌细胞系蟹白激酶A在G_2期进入胞核,经外源性cAMP处理后的胃癌细胞蛋白激酶A向核周围积聚。本文对蛋白激酶A在细胞内分布的变化进行了讨论。     

肿瘤相关糖抗原sTn的提纯及其单克隆抗体的制备

提纯肿瘤相关糖抗原sTn并研制针对它的单克隆抗体(mAb).取羊颌下腺经溴棕三甲铵沉淀,经Sepharose CL-4B等获取羊颌下腺粘蛋白(OSM),将OSM采用脾内注射、完全佐剂2种方法免疫Balb/C小鼠.常规方法细胞融合,用ELISA间接法筛选阳性细胞并测定效价,双抗体竞争抑制试验识别sTn表位,采用免疫组化检测sTn在胃癌组织中的表达.最终获得2株可分泌sTn mAb细胞株(2F6,7E4),均为小鼠IgG1亚类,2株mAb抗相同抗原表位.免疫组化染色显示胃癌组织中sTn表达阳性率较高,可达71.4%,且与胃癌进程相关.本文成功提纯了sTn抗原并制备了2株杂交瘤细胞株,在胃癌的诊断和治疗中有潜在的应用价值.     

抗人IL-11单克隆抗体的研制及生物学特性研究

以rhIL 11作为免疫原常规免疫BALB/c小鼠 ,采用细胞融合、ELISA检测和杂交瘤细胞克隆筛选等方法获得了 2株鼠抗人IL 11的单克隆抗体 (5A4、 1G12 ) ,分别属于IgG1亚类和IgG2a亚类。MTT法和细胞增殖试验分析表明 ,5A4、 1G12均不同程度地抑制IL 11对其依赖株细胞B9 11的增殖效应。表明成功地研制成了 2株鼠抗人IL 11的中和功能性单克隆抗体