不同浓度青藤碱对大鼠滑膜细胞因子mRNA表达的影响

目的：观察不同浓度的青藤碱(SIN)体外作用对佐剂性关节炎(从)大鼠滑膜细胞TNF-αmRNA、IL-1 β mRNA、IL-10 mRNA表达的影响。方法：以佐剂性关节炎大鼠为模型，收集滑膜细胞培养，随机分为5组：正常对照组，从组，AA SIN 30μg／mL，AA SIN 60μg／mL，AA SIN 120μg／mL，反转录PCR检测TNF-α mRNA、IL-1b mRNA、IL-10 mRNA的表达。结果：佐剂性关节炎后滑膜细胞内TNF-α mRNA、IL-1 β mRNA、IL-10 mRNA的表达均显著升高，青藤碱在一定的浓度范围内呈浓度依赖性抑制TNF-α mRNA、IL-1b mRNA的表达，而对IL-10 mRNA的抑制效应与浓度无关。结论：青藤碱可能通过降低滑膜细胞内TNF-α mRNA及IL-1 β mRNA的表达而发挥治疗AA的效应。     

归脾安神颗粒对失眠模型大鼠PGD2表达的影响

目的运用中医辨证论治,对疾病进行整体分析并作理论指导,探讨归脾安神颗粒治疗失眠的临床疗效,更进一步的深入了解归脾安神颗粒发挥药效的具体作用机制。方法选用清洁的wistar大鼠,并经过处理后制成失眠大鼠模型,然后将失眠大鼠模型随机分成失眠模型组、归脾安神颗粒低、中、高3个剂量组、阳性对照(枣仁安神胶囊)组,并设置空白对照组,各18只。观察戊巴比妥钠翻正实验对大鼠睡眠潜伏期及睡眠总时间的影响。采用酶联免疫法观察激素PGD2的含量,采用荧光定量PCR检测PGD2 mRNA、L-PGDS mRNA、DPR mRNA的表达。结果归脾安神颗粒可增加失眠大鼠模型的总睡眠时间,并且可以提高失眠模型大鼠下丘脑PGD2含量及PGD2 mRNA、L-PGDS mRNA、DPR mRNA的表达的作用。结论归脾安神颗粒能够改善失眠模型大鼠的睡眠,延长总的睡眠时间。药效发挥机理基本确认为通过干预失眠模型大鼠下丘脑激素而发挥改善睡眠的作用。     

抵当汤对血脂异常大鼠ET—1mRNA、VCAM—1mRNA表达影响

目的：观察抵当汤不同荆量对血脂异常大鼠血脂、黏附因子及内皮功能影响。方法：采用经典喂养法复制大鼠血脂异常的模型，喂高脂饲料，同时每天灌胃抵当汤。连续喂养8周。实验结束断头取血，测定血清TC、TG、HDL-C、LDb-C。取主动脉采用RT-PCR方法测定组织中ET-1mRNA、VCAM-1mRNA表达。结果：血清TC、TG、LDL明显降低，HDL显著升高；主动脉组织ET-1mRNA、VCAM—1mRNA表达显著降低。结论：抵当汤具有调节血脂，保护内皮功能的作用，是防治血脂异常理想的药物。     

隐孔菌多糖对致敏小鼠肺组织趋化因子mRNA和-肿瘤坏死因子mRNA表达的影响

目的观察致敏小鼠抗原攻击后肺组织趋化因子（eotaxin）mRNA、α-肿瘤坏死因子（TNF-α）mRNA表达的时程关系以及隐孔菌多糖（Crptoporus Polysaccharide,CP）对表达的影响。方法采用半定量RT—PCR法测定肺组织eotaxin mRNA和TNF-α mRNA表达，并通过观察支气管肺灌洗液（BALF）中白细胞总数和嗜酸性粒细胞的数目验证eotaxin mRNA和TNF-α mRNA表达增多的功能。结果致敏小鼠抗原攻击8h后肺组织TNF-α mRNA表达和24h后eotaxin mRNA表达达到高峰，与对照小鼠比较明显增多，BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞数目相应增加。CP3、10、30mg／kg呈剂量依赖抑制TNF-α mRNA和eotaxin mRNA表达以及炎症细胞在气道的聚集。结论CP抑制肺组织TNF-α mRNA和eotaxin mRNA表达可能是其抗过敏性炎症的作用机制。     

消癖汤对肝郁型乳腺增生病大鼠乳腺组织PCNAmRNA、BcL-2mRNA、VEGFmRNA表达的影响

目的：建立病证结合大鼠乳腺增生模型,研究中药干预治疗作用。方法：采用病证结合造模方法,建立肝郁型乳腺增生病的大鼠模型,观察中药消癖汤对大鼠模型的影响,以逍遥散、三苯氧胺作为阳性对照药物,采用原位杂交法检测各组乳腺组织的增殖细胞核抗原信使核糖核酸（PCNAmRNA）、抑凋亡基因BcL-2信使核糖核酸（BcL-2mRNA）、血管内皮细胞生长因子信使核糖核酸（VEGFmRNA）的阳性表达水平。结果：中药消癖汤能够降低实验大鼠乳腺组织PCNAmRNA、BcL-2mRNA、VEGFmRNA的阳性表达水平,其作用与逍遥散、三苯氧胺相似。结论：消癖汤能够通过抑制大鼠乳腺组织细胞增殖,诱导凋亡和抑制腺体新生血管的形成来实现抑制大鼠乳腺增生的作用。     

清金得生片联合化疗对Lewis荷瘤小鼠Fas、FasL mRNA表达的影响

目的 观察清金得生片联合化疗对Lewis荷瘤小鼠Fas、FasL mRNA表达的影响。方法 Lewis肺癌荷瘤小鼠随机分为模型组、清金组、顺铂组、清金加顺铂组,给药10 d后,取肿瘤组织,采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠Fas、FasL mRNA的表达。结果 清金加顺铂组瘤体组织Fas mRNA的表达显著高于模型组(P ＜ 0.05),各给药组间差异无统计学意义;与模型组比较,清金组、顺铂组、清金加顺铂组瘤体组织FasL mRNA的表达差异均有统计学意义(P ＜ 0.05),各给药组间差异无统计学意义。结论 清金得生片联合化疗的抗肿瘤作用与调节Fas/FasL系统,从而逆转肿瘤的免疫逃逸有关。     

平调饮对原发性肝癌AFP mRNA、GPC-3 mRNA影响的研究

目的探讨平调饮对原发性肝癌患者AFP mRNA、GPC-3 mRNA表达的影响。方法抽取60例肝癌患者的抗凝血液,配对法随机分为试验组和对照组各30例。采用Tr-Izol一步法提取总RNA,用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术检测治疗前后试验组及对照组患者AFP mRNA、GPC-3 mRNA的表达情况。结果治疗后试验组及对照组AFP mRNA、GPC-3 mRNA表达均显著下降,在降低AFP mRNA表达方面试验组与对照组无显著性差异,降低GPC-3 mRNA表达方面试验组明显优于对照组(P0.05)。结论平调饮能有效抑制人血液中AFP mRNA、GPC-3 mRNA的高表达,在降低GPC-3 mRNA表达方面效果优于华蟾素。其治疗原发性肝癌机制与临床应用价值值得进一步研究。     

补阳还五汤对 AD大鼠海马区 NF-κBp65 mRNA基因表达的影响

目的：本课题紧紧围绕着NF-κB/IκB-α通路观察补阳还五汤对AD模型大鼠神经细胞的保护作用,从分子水平探讨补阳还五汤对AD的神经细胞作用机制。方法：将70只Wistar雄性大鼠分为7组：补阳还五汤高、中、低剂量组、阳性对照组、空白组、假手术组以及模型组,每组10只。采用大鼠单侧海马区定向注射Aβ1-40复制AD动物模型,通过实时荧光定量PCR技术观察NF -κBp65mRNA、IκB-αmRNA和 BACE1 mRNA 基因表达的影响。结果：补阳还五汤能升高 AD 大鼠海马区 IκB -αmRNA基因的表达,减少NF-κBp65 mRNA及BACE1 mRNA基因的表达。结论：补阳还五汤对AD大鼠的神经元具有保护作用,其机理可能是通过减少AD大鼠的核转录因子NF-κBp65的表达,同时抑制BACE1的转录和翻译而实现的。     

复方青秦液对尿酸性肾病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ及环氧化酶－2影响的研究

目的探讨复方青秦液对尿酸性肾病大鼠肾组织中血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）、环氧化酶－2 （cyclooxygenase-2,COX-2） mRNA转录及蛋白表达水平的影响。方法将SD大鼠按照编号随机取码原则随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、中药大、中、小剂量组,用腺嘌呤灌胃伴饲酵母造模。空白对照组及模型组每日灌胃蒸馏水;阳性对照组每日灌胃别嘌醇9.33 mg/kg;中药大、中、小剂量组每日给予复方青秦液3.77、1.89、0.09 g/kg灌胃,连续6周。在4周时每组随机部分大鼠（空白组3只,其余每组6只）,6周时处死剩余大鼠,取肾组织采用RT-PCR扩容AngⅡ 和COX-2 mRNA转录水平,采用ELISA测定AngⅡ蛋白表达水平,采用Western blot电泳技术及免疫组化测定COX-2蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,模型组除4周AngⅡ mRNA表达,4、6周时 AngⅡ、COX-2 mRNA及蛋白表达均明显升高（P〈0.01,P〈0.05）。4周时,中药大、中剂量组COX-2蛋白表达明显低于模型组及中药小剂量组（P〈0.05）,阳性对照组COX-2蛋白平均积分光密度值也明显低于模型组（P〈0.01）。6周时,与模型组比较,除中药大剂量组AngⅡ mRNA表达外,阳性对照组及中药各剂量组AngⅡ mRNA及蛋白表达均降低（P〈0.05, P〈0.01）,其中中药大、中剂量组效果优于阳性对照组及中药小剂量组（P〈0.05, P〈0.01）;另外,阳性对照组及中药各剂量组COX-2 mRNA表达、平均积分光密度值以及阳性对照组、中药大、中剂量组COX-2蛋白表达均明显低于模型组（P〈0.05）,其中中药中剂量组COX-2 mRNA表达优于阳性对照组（P〈0.05）,中药大剂量组COX-2蛋白表达优于中药小剂量组（P〈0.05）。结论复方青秦液可以下调尿酸性肾病大鼠肾脏AngⅡ、COX-2 mRNA 转录及蛋白表达水平,从而抑制肾组织炎性病理损伤。     

益精方对不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法Wistar大鼠75只随机分为空白组,模型组,益精方高、中、低剂量组,每组15只。除空白组外,其余各组均以腺嘌呤连续灌胃10天;从第11天开始,空白组及模型组用等量生理盐水灌胃,益精方高（3.38 g/100 g）、中（1.69 g/100 g）、低剂量（0.85 g/100 g）组分别以益精方各剂量灌胃,每天1次,连续20天。实验结束后将大鼠全部处死,摘取睾丸,采用原位缺口末端标记法（TUNEL）和免疫组化SABC法分别检测各组动物生精细胞的凋亡情况及Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,细胞凋亡数升高,差异均有统计学意义（P〈0.01）。与模型组比较,三个剂量组Bcl-2蛋白表达均升高（P〈0.01,P〈0.05）,高、中剂量组Bax蛋白表达均降低（P〈0.01,P〈0.05）,中剂量组细胞凋亡数降低（P〈0.01）。结论益精方能够通过调控睾丸组织Bcl-2及Bax蛋白的表达,抑制生精细胞的凋亡。     

阳和化岩汤对大鼠乳腺癌癌前病变的抑制及ki67表达的影响

目的探讨阳和化岩汤对大鼠乳腺癌癌前病变的抑制作用以及对ki67蛋白及mRNA表达的影响。方法采用二甲基苯并蒽（DMBA）诱导建立大鼠乳腺癌癌前病变模型,9周后随机分为空白对照组、模型组、阳和化岩汤组、散结化痰汤组、平消片组及三苯氧胺组,每天分别采用饮用水、阳和化岩汤（组成：鹿角霜1 2 g熟地9 g肉桂6 g白芥子3 g莪术12 g山慈菇1 5 g浙贝母9 g甘草6 g）7.2 g/kg、散结化痰汤（组成：白花蛇舌草15 g半枝莲15 g栝蒌15 g半夏9 g）5.4 g/kg、平消片144 mg/kg及三苯氧胺4 mg/kg灌胃治疗4周。取大鼠乳腺组织,HE染色观察病理形态学变化,免疫组化法检测ki67蛋白表达的阳性率和灰度值,q-PCR检测ki67 mRNA表达。结果与模型组比较,其他各治疗组一般增生与癌前病变发生率高,浸润性癌发生率低,差异有统计学意义（P〈0.05）;除散结化痰汤组外,其他治疗组ki67蛋白表达灰度值升高,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）;ki67阳性率及ki67 mRNA表达除平消片组外均下降,差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。与阳和化岩汤组比较,各治疗组癌前病变与浸润性癌发生率差异无统计学意义（P〉0.05）;平消片组ki67表达阳性率及ki67 mRNA表达均升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论阳和化岩汤能够部分阻断逆转乳腺癌癌变,并具有抑制ki67蛋白及mRNA表达的作用,其作用优于平消片,与三苯氧胺接近,适用于乳腺癌癌前病变的预防治疗。     

姜黄素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化及TGF-β/Smads信号转导途径的影响

目的 观察姜黄素对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾小管上皮细胞转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及TGF-β/Smads信号转导途径的影响。     

补肾健脾方对AD大鼠AchE、ChAT及海马神经元凋亡的影响

目的研究中药补肾健脾方对阿尔茨海默（AD）大鼠血清及海马组织中乙酰胆碱酯酶（AchE）、胆碱转移酶（ChAT）及神经细胞凋亡的影响。方法雄性SD大鼠随机分为5组：正常组、模型组、假手术组及补肾健脾复方制剂小剂量、大剂量干预组。采用鹅膏蕈氨酸毁损大鼠脑Meynert基底核制备AD动物模型,中药补肾健脾方分别以3.6g/（kg.d）、7.2g/（kg.d）灌胃。30d后以水迷宫测试大鼠学习及记忆能力,对各组大鼠血清及脑海马匀浆中AchE、ChAT的活性进行测定,运用电镜技术及免疫组化检测海马中神经细胞的凋亡及Bax、Bcl-2的表达。结果与模型组比较,补肾健脾复方制剂大、小剂量干预组大鼠的平均逃避潜伏期明显缩短（P〈0.05）,血清及匀浆中AchE的活性下降（P〈0.05）,ChAT活性增高（P〈0.05）,脑皮质的细胞凋亡显著减少（P〈0.05）,脑皮质中Bax阳性神经元数量明显降低（P〈0.05）,Bcl-2阳性神经元的数量显著增加（P〈0.05）。结论补肾健脾方可在抑制AchE活性的同时增加ChAT的活性,并可通过调节Bax/Bcl-2的表达减少海马组织中神经细胞的凋亡。     

芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax的影响

目的 探讨芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达的影响.方法 心肌缺血45 min,再灌注2 h制备缺血再灌注模型.随机分为正常组、假手术组、生理盐水缺血再灌注组、溶剂对照组、美托洛尔阳性对照组及芹菜素低、中、高剂量组,每组8只.除假手术组外,余各组在缺血前10 min分别股静脉给药.再灌注2 h后迅速取出心脏,用RT-PCR测Bcl-2及Bax基因的mRNA表达;实验时记录心率（HR）、平均动脉压（MAP）、心电图S-T段并计算心律失常Lambeth评分.结果 芹菜素组与生理盐水缺血再灌注组比较,Bcl-2 mRNA表达量增加,Bax mRNA表达量减少,均呈剂量依赖性（P＜0.05）;心律失常Lambeth评分芹菜素组低于假手术组 （P〈0.05）;芹菜素能缩短再灌注心律失常持续时间（P〈0.05）.结论 芹菜素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有良好的保护作用;芹菜素抗心肌凋亡作用的机制可能与其上调Bcl-2基因表达和下调Bax基因表达有关.     

钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡/增殖及FN、LN的影响

目的 研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts, VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin, LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin, FN)的影响。方法 选择8周龄雄性SHR 40只,随机分为模型组、卡托普利组(17.5 mg/kg)、异钩藤碱组(5.0 mg/kg)、钩藤碱组(5.0 mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0 mg/kg),每组8只。另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组。模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水。各组给药容积为每次10 mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量。采用Annexin V-FITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率;免疫组化法检测胸主动脉VAF Bcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达;原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor, TGF-β1) mRNA表达。结果 与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高, Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1 mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1 mRNA差异无统计学意义(P>0.05);胸主动脉VAF凋亡率升高, Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01);钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01);异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR 胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1 mRNA表达途径抑制SHR 胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压。     

参麦注射液对加入IL-1β诱导下软骨细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的:观察参麦注射液(SMI)对加入IL-1β诱导下软骨细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的影响,探讨其防治软骨退变的作用机制。方法:分离培养体外软骨细胞,随机分成3组:空白组、IL-1β诱导组和参麦组,空白组采用含10%胎牛血清的培养基培养,IL-1β诱导组采用含浓度为10ng/mL IL-1β的培养基培养,参麦组采用含浓度为10ng/mL IL-1β和10%参麦注射液的培养基培养,采用反转录/聚合酶链反应(RT-PCR)法检测参麦注射液对软骨细胞Bax和Bcl-2 mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,IL-1β诱导组Bcl-2 mRNA表达明显减少(P0.01),Bax mRNA表达增多(P0.01),均有统计学意义;与IL-1β诱导组比较,参麦组Bcl-2 mR-NA表达明显增多(P0.01),Bax mRNA表达减少(P0.01)。结论:参麦注射液可能通过降低促凋亡基因BaxmRNA表达,增加凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的表达,从而调节Bcl-2/Bax mRNA的比例,抑制软骨细胞凋亡。     

大承气颗粒对多器官功能障碍综合征大鼠小肠平滑肌细胞凋亡的干预作用

目的探讨大承气颗粒对多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）大鼠小肠平滑肌细胞（smooth muscle cell, SMC）凋亡的干预作用及其机制。方法健康成年Wistar大鼠100只,随机分为对照组（20只）、模型组（40只）和大承气颗粒组（中药组,40只）。模型组和中药组大鼠予腹腔注射大肠希氏菌（E. coli）混悬液,建立细菌性腹膜炎致MODS模型,中药组造模前2天给予大承气颗粒（1 mL/100 g）灌胃,2次/天,连续3天。造模24 h后取存活大鼠的上段小肠组织,分别进行末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）和免疫组织化学染色,观察大承气颗粒干预前后MODS大鼠小肠SMC的凋亡数量及线粒体凋亡信号途径B细胞淋巴瘤/白血病－2（B cell lymphoma/lewkmia-2, Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein, Bax）、细胞色素C（cytochrome c, Cyt c）蛋白表达的变化。结果与对照组比较,模型组小肠SMC凋亡数量、Bax、Cyt c蛋白表达明显升高（P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达明显减少（P〈0.01）。与模型组比较,中药组小肠SMC凋亡数量、Bax、Cyt c蛋白表达明显降低（P〈0.01）,Bcl-2蛋白表达明显升高（P〈0.01）。结论大承气颗粒可以通过抑制小肠SMC线粒体凋亡途径的激活,抑制SMC的凋亡,从而促进MODS大鼠胃肠运动功能的恢复。     

制大黄-川芎“药对”抑制造影剂肾病大鼠肾小管上皮细胞凋亡信号通路的机制研究

目的研究制大黄-川芎“药对”抑制造影剂。肾病（CIN）大鼠。肾小管上皮细胞凋亡信号通路的机制。方法将32只雄性sD大鼠分为正常组（A组）、模型组（B组）、药对组（C组）、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组（D组）。C组于造模前7天每日灌胃“药对”水煎液,D组造模前3天每日腹腔注射NAC（150μg／g）。B、C、D3组按照文献方法制备CIN模型。造模后24h处死大鼠,测定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;HE染色观察肾脏病理改变,Western印迹检测肾组织p-p38MAPK、Bcl-2及Bax表达。结果与A组比较,B、C、D组大鼠血清肌酐、尿素氮均明显升高（P〈0．05,P〈0．01）,出现肾间质水肿、肾小管上皮细胞胞浆空泡样变,p-p38MAPK、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下降。与B组比较,C、D组血清肌酐、尿素氮明显降低（P〈0．05）,肾脏病理改变显著减轻,p-p38MAPK、Bax蛋白表达下降,而Bcl-2表达增加（P〈0．01）。结论p38MAPK通路活化参与了CIN大鼠急性。肾损伤过程,且制大黄-川芎“药对”能通过抑制该通路活化保护CIN大鼠肾功能。