Effect of human cytomegalovirus on invasive capability of early pregnant extravillous cytotrophoblasts

The effect of human cytomegalovirus (HCMV) on invasive capability of early pregnant extravillous cytotrophoblasts (EVTs) was investigated in vitro.Primary EVTs were obtained by complex phosphoesterasum...     

人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立

目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为。方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transwell的上下小室,观察该模型下细胞形态变化及侵袭特性,免疫组化、免疫荧光染色检测细胞的纯度。结果免疫组化显示EVCT的细胞角蛋白7阳性表达的细胞数占95%以上,阳性表达转化生长因子β2的细胞数占95%以上,DSC泌乳素阳性表达的细胞数也超过95%,证实共培养系统中EVCT和DSC纯度均在95%以上,且生物学特性得以维持。上室中的EVCT保持了其侵袭能力,在Matrigel包被的滤膜上EVCT的侵袭指数为3.22±0.04。结论适当的培养方法可获得高纯度的EVCT和DSC,并使其维持特有的生物学活性,成功地建立了共培养系统模型,便于研究滋养细胞侵袭和胚胎着床的机制。     

体外人巨细胞病毒感染对人涎腺导管上皮细胞角蛋白表达的影响

目的探讨体外人巨细胞病毒（HCMV）感染对人涎腺导管上皮细胞（HSG）角蛋白表达的影响。方法应用免疫细胞化学法检测体外培养的HSG中角蛋白8和18（K8和K18）的表达;蛋白印迹法检测HCMV感染对体外培养的HSG中K8和K18表达的影响;半定量逆转录聚合酶链式反应法检测HCMV对体外培养的HSG中K8和K18转录水平的影响。结果体外培养的HSG中K8和K18呈阳性表达;HCMV感染体外培养的HSG0-96h,K8的表达呈逐渐下降趋势,K18的表达在感染后24h内表达升高,此后下降;K8和K18的mRNA水平和蛋白水平均呈反向平行关系。结论HCMV感染体外培养的HSG可引起角蛋白表型发生改变,K8和K18表达水平改变的调节发生在转录后水平。     

大蒜新素对人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fas mRNA表达的影响。方法 用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2．5、0．25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96h凋亡细胞比率；大、中、小剂量大蒜新素(9、6和3μg／mL)处理正常的和感染的HELF细胞(MOI为2．5)后上述各时间点凋亡细胞比率。用原位杂交法检测大剂量大蒜新素处理感染细胞(MIO为0．25)72h后bcl-2和fas mRNA表达强度变化，并与正常细胞和感染细胞对比分析。结果 正常细胞凋亡比率保持恒定低水平(凋亡率平均2．68％)；低、高感染复数感染细胞随时间延长凋亡细胞逐渐增多，凋亡率峰值分别达8．85％(96h)和25．63％(72h)；各剂量大蒜新素处理的正常细胞凋亡率增加，呈剂量依赖性，峰值分别为4．88％、6．47％和8．35％；但各剂量药物处理感染细胞后却使细胞凋亡比率下降，大剂量药物处理72h时效应最为明显，凋亡细胞比率由25．63％降至16．24％。正常细胞高表达bcl-2，低表达fas基因；感染HCMV后，bcl-2表达显著下调，fas表达明显增强；大蒜新素处理感染细胞后使bcl-2表达强度明显高于感染细胞，fas表达水平明显低于感染细胞，但仍未恢复到正常细胞水平。结论HCMV是HELF凋亡的强诱导剂；病毒可通过下调凋亡抑制基因bcl-2和上调凋亡促进基因fas而发挥致凋亡作用。大蒜新素本身可诱导HELF凋亡，但却能明显抑制HCMV诱导的细胞凋亡，其抑制作用可能与药物干扰HCMV影响凋亡调控基因bcl-2和fas表达有关。     

人滋养层细胞内丙型肝炎病毒样颗粒的免疫电镜形态学研究

目的：应用免疫电镜技术观察体外培养的人胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒（HCV）情况。方法：采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞，以HCV RNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染实验，胶体金免疫电镜检测滋养层细胞内的HCV病毒颗粒，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）定性检测滋养层细胞内HCV RNA。结果：体外培养的人胎盘滋养层细胞内可观察到胶体金颗粒吸附的病毒样颗粒，形态及直径符合HCV特点。RT—PCR定性检测结果阳性，进一步证文所观察到的病毒样颗粒为HCV。结论：HCV可感染体外培养的人胎盘滋养层细胞。     

Study on the Expression of Fas Ligand on the Surfaces of Human Cytotrophoblasts in Normal Pregnancy

The fetus represents a foreign entity to the maternal immune system, yet this nature allograft is notnormally rejected. This unique situation is alwaysconcerned closely by immunologists and organ transplantation workers. Following the deepgoing of thestudy on the mechanisms of immune tolerance, it wasfound that specific activated T cell apoptosis inducedby Fas/Fas ligand (FasL) played an important role inperipheral immune tolerance. The major reason whysome immune--privileged organs such as …     

早孕绒毛细胞滋养层细胞分离培养的实验研究

目的改善体外分离和培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞(cytotrophoblast,CTB)的方法,探讨CTB的一些生物学特性.方法取人工流产6～8周妊娠绒毛,机械法分离,酶消化,经Ficoll分离介质离心得到单个核细胞进行培养并鉴定,测定其生长曲线并观察其体外转化、细胞周期和激素合成.结果分离培养的CTB经免疫细胞化学染色鉴定,接种后2 h开始贴壁,第5天融合90%以上,细胞周期显示约有79%细胞处于G0/G1期,激素分泌表现出随CTB的转化而变化.结论成功分离培养了人早孕绒毛CTB,方法简便易行,获得的细胞形态单一、生长稳定、定向转化,为进一步研究CTB在生殖生理中的作用提供了实验基础.     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的 :探讨人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)感染昆明小鼠的敏感性 ,建立HCMV致畸的动物模型。方法 :昆明系小鼠 4 0只 ,随机分为两组 :对照组 (8只 )和接种病毒组 (32只 ) ,病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒 7,1 5 ,30 ,6 0d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点 ,以免疫组织化学方法检查病毒抗原 ,PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果 :接种HCMVAD1 69株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形 ,用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论 :HCMVAD1 69株可引起小鼠脑部发育畸形 ,这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据     

更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究

目的:探讨更昔洛韦体外抑制人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的作用方式.方法:根据病毒复制周期设计3种作用模式来观察更昔洛韦对HCMV的抑制作用:模式Ⅰ将病毒与细胞混合后,再加入药物;模式Ⅱ将药物与细胞混合后,再加入病毒;模式Ⅲ将药物与病毒混合后再加入细胞.通过观察细胞病变效应,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,以确定该药物治疗指数.结果:更昔洛韦对人胚成纤维细胞半数中毒浓度(TC50)为1 685.23 mg/L.在模式Ⅰ中,更昔洛韦对HCMV半数抑制浓度(IC50)为35.255 mg/L,治疗指数为47.8;在模式Ⅱ和Ⅲ中,更昔洛韦对HCMV无明显抑制作用.结论:更昔洛韦对HCMV感染细胞后显示出显著的抑制作用,且随药物浓度的增加其作用逐渐增强,存在明显的量效关系.同时,体外实验显示,更昔洛韦对人胚成纤维细胞感染HCMV无预防作用.     

婴幼儿人巨细胞病毒感染不同病毒载量与脑干听觉诱发电位异常关系的探讨

目的：探讨婴幼儿人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, CMV）感染后体内病毒载量不同与脑干听觉诱发电位（brainstem auditory evoked potential , BAEP）异常之间的关系。方法经病原学诊断为CMV感染的住院患儿160例,年龄10天～3个月,尿CMV-DNA拷贝数为1．797×10^4/ml ～5．62×10^7/ml ,按照尿病毒拷贝数的幂指数分为104（n＝72）、105（n＝40）、106（n＝28）和107（n＝20）4组,分别对其进行BAEP检测。结果尿CMV-DNA拷贝数的不同与BAEP的异常改变之间存在关联。①客观听阈值随CMV-DNA拷贝数的增加而增高（ P＜0．01）。②Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波的潜伏期随CMV-DNA拷贝数的增加而延长（P＜0．01）,Ⅰ～Ⅲ、Ⅲ～Ⅴ、Ⅰ～Ⅴ波间期随CMV-DNA拷贝数的增加而延长（P＜0．01）。结论婴幼儿CMV感染后尿液中病毒载量增高与进行性感音神经性听力丧失发生风险增高有关。     

人巨细胞病毒对脐血多向祖细胞体外生长的影响及干预研究

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对脐血多向造血祖细胞(CFU-Mix)体外增殖的影响及黄芪对此的保护作用.方法采用甲基纤维素半固体培养技术,培养、观察、计数HCMV-AD169感染的CFU-Mix集落数、抑制率、集落峰值及集落维持时间;用聚合酶链反应(PCR)和荧光定量PCR技术检测集落细胞内HCMV-AD169DNA.在110感染组中加入黄芪,观察黄芪对HCMV-AD169感染的CFU-Mix集落增殖抑制的干预作用.结果 HCMV-AD169感染的CFU-Mix集落数较对照组明显减少(P＜0.05),集落数随病毒感染滴度的增高而减少,抑制率随病毒感染滴度的增高而逐渐增加;感染组集落维持时间较对照组明显缩短(P＜0.01),但各组集落峰值出现时间无明显差异(P＞0.05);用PCR技术在感染组集落细胞内检测到HCMV-AD169DNA;在110感染组中加入黄芪后,CFU-Mix集落数明显提高,集落增殖提高率为38.9%,集落维持时间较110感染组明显延长(P＜0.01),荧光定量PCR技术检测集落细胞内HCMV-DNA copies较110感染组明显减少.结论在体外HCMV-AD169对CFU-Mix生长和集落形成有明显的抑制作用,HCMV能直接感染多向造血祖细胞,此可能与临床HCMV感染引起贫血、血小板减少和粒细胞减少有关;黄芪在体外有明显的抗HCMV作用.     

中药金叶败毒制剂体外抗人巨细胞病毒作用观察

目的：研究中药金叶败霉制剂(JYBD)抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的可能机制。方法：采用体外细胞培养技术建立HCMV感染细胞模型，应用更昔洛韦(GCV)和JYBD进行干预，采用定量RT-PCR法检测干预后不同时间感染细胞HCMV即刻早期基因IE86 mRNA的表达水平，观察感染细胞的病变进展情况，同时采用放射免疫法测定受染细胞细胞因子TNF-α和IL-6的分泌水平。结果：JYBD与GCV对HCMV IE86 mRNA的表达以及HCMV所致细胞病变有明显的抑制作用，降低受染细胞TNF-α、IL-6的分泌水平，JYBD作用弱于GCV。结论：JYBD可通过抑制HCMV IE基因的转录。促进细胞因子的分泌而发挥体外抗HCMV作用。     

更昔洛韦联合中药金叶败毒制剂体外抗人巨细胞病毒作用观察

目的：研究更昔洛节(GCV)联合中药金叶败毒制剂(JYBD)抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的可能机制。方法：采用体外细胞培养技术建立HCMV感染细胞模型．应用GCV、JYBD及两药联用进行干预,采用定量RT-PCR法检测干预后不同时间感染细胞HCMV即刻早期基因IE72 mRNA的表达水平,观察感染细胞的病变情况,同时采用放射免疫法测定受染细胞TNF-α和IL-6的分泌水平。结果：JYBD与GCV对HCMV IE72 mRNA的表达以及HC-MV所致细胞病变有明显的抑制作用,降低受染细胞的TNF-α、IL-6的分泌水平,JYBD作用弱于GCV,2药联合作用最强。结论：GCV联合JYBD可通过促进细胞因子的分泌,调节免疫功能,具有良好的体外抗HCMV作用。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的：探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染昆明小鼠的敏感性，建立HCMV致畸的动物模型。方法：昆明系小鼠40只，随机分为两组：对照组(8只)和接种病毒组(32只)，病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒7，15，30，60d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点，以免疫组织化学方法检查病毒抗原，PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果：接种HCMV AD169株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形，用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论：HCMV ADl69株可引起小鼠脑部发育畸形，这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据。     

巨细胞病毒对人群发生高血压的影响

目的：探讨巨细胞病毒对人群发生高血压的影响。方法收集2011年2月至2013年6月来我院接受治疗的168例高血压患者的血液标本作为观察组,同时收集160例体检正常者的血液标本作为对照组。检测并比较两组患者血浆标本中的巨细胞病毒特异性中和抗体、巨细胞病毒特异性IgG和IgM及巨细胞病毒UL93 DNA。结果观察组患者巨细胞病毒UL93DNA、巨细胞病毒特异性IgG和IgM的阳性率分别为73.21%、70.83%和4.20%,对照组患者分别为57.50%、49.38%和2.50%,观察组患者巨细胞病毒UL93DNA和IgG的阳性率高于对照组(P<0.05),而两组间巨细胞病毒特异性IgM阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者血浆巨细胞病毒特异性中和抗体的几何滴度平均为(40.12±19.89),对照组为(59.96±24.85),两组患者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论高血压患者的巨细胞病毒感染率高于健康人群,高血压患者巨细胞病毒特异性中和抗体水平降低明显,这均表明巨细胞病毒感染与人群发生高血压存在相关性。     

Leflunomide inhibits the apoptosis of human embryonic lung fibroblasts infected by human cytomegalovirus

Background

The immunomodulatory drug leflunomide (LEF) is frequently used for treating human cytomegalovirus (HCMV), but its antiviral mechanism is still unclear. In this study,we therefore investigated the effects of the active LEF metabolite A771726 on the HCMV lifecycle in human embryonic lung fibroblasts. We clarified the mechanism of LEF antiviral infection, and provide a new way to treat immune dysfunction patients with HCMV infection.

Methods

The experiment was divided into four groups: the control group, the HCMV group, the ganciclovir + HCMV group as well as the LEF + HCMV group. MTT was usedfor assessment of the cell inhibitory rate. Apoptosis was measured by staining with fluorescein isothiocyanate Annexin V and propidium iodide. Statistical significance was determined by paired t-test using SPSS software.

Results

The results of the study showed that cell proliferation was significantly inhibited by HCMV at 24 hours and 48 hours. With increasing HCMV concentration, the value-added inhibition of the cells was significantly decreased compared with the control group, and was statistically significant (P <0.01). Ganciclovir can increase proliferation of cellsinfected with HCMV; compared with the control group it was statistically significant (P <0.05). Meanwhile, with LEF treatment cell proliferation was significantly improved at 24 hours and 48 hours, with statistical significance (P <0.05). The apoptosis rate of human embryonic lung fibroblasts infected with HCMV increased significantly at 24 hours, 48 hours and 72 hours, and as time goes on the apoptosis rate increases statistically significantly (P <0.01) compared with the control group The apoptosis rate of theHCMV infection group decreased by adding LEF,and was statistically significant (P <0.05).

Conclusions

In this studywe show that LEF is an exciting new drug for cytomegalovirus infection. LEF significantly inhibited HCMV infection-induced apoptosis and proliferation, playing an important role in the treatment of patients infected by HCMV. In this study we explored the potential usefulness of LEF for cytomegalovirus infection and found it to be a cost-effective new treatment for cytomegalovirus infection that deserves further study.     

不同喂养方式对先天性巨细胞病毒感染新生儿病毒载量的影响

目的探讨母乳喂养与人工喂养对先天性巨细胞病毒(CMV)感染新生儿病毒载量的影响。方法选择2016年7月至2019年6月空军军医大学第二附属医院儿科诊治的82例CMV感染无症状新生儿为研究对象,根据喂养方式的不同将其分为两组,其中31例采用母乳喂养者为观察组,51例采用人工喂养者对照组。比较两组新生儿唾液/尿液CMV DNA载量的差异,并随访至出生后6个月,观察两组新生儿的肝功能异常和脑发育异常情况。结果观察组和对照组新生儿的CMV DNA病毒载量出生3 d内[(2.62±0.51) vs (2.51±0.62)]、1个月[(1.85±0.95) vs (1.92±0.73)]、3个月[(1.82±0.92) vs (1.71±0.75)]、6个月[(1.69±0.62) vs (1.62±0.53)]比较差异均无统计学意义(P>0.05);所有新生儿均获得随访,观察组与对照组新生儿的肝功能异常(3.23%vs 0)、脑发育异常(0 vs0)、中性细胞减少(3.23%vs 0)、贫血(3.23%vs 0)、听力异常(6.45%vs 1.96%)检出率比较差异均无统计学意义(P>...     

二甲亚砜对人巨细胞病毒初次分离促进作用的实验观察

目的观察二甲亚砜(DMSO)对人巨细胞病毒(HCMV)初次分离的影响.方法将临床收集的11例患者尿标本接种至两组人胚成纤维细胞(HF)细胞中进行HCMV分离.1组为DMSO细胞组,即在培养液中添加了终浓度为1%的DMSO;另1组为常规细胞组接种组,设为对照,不作任何处理.待细胞出现HCMV特征性细胞病变(CPE)时,通过PCR法测定HCMV DNA加以确证.结果 11例标本中,两组均有5例标本出现HCMV CPE,且标本号一致.但DMSO细胞组CPE出现时间比对照组提前约9 ～12 d.结论 DMSO对HCMV初次分离的阳性结果没影响,但可使HCMV特征性CPE的出现得以提前,加快了临床标本中HCMV的分离.     

二氧化硅对人肺泡巨噬细胞基质金属蛋白-9表达的影响

①目的　探讨二氧化矽 (SiO2 )对人肺泡巨噬细胞基质金属蛋白 (MMP - 9)表达的影响。②方法　收集矽肺患者肺泡巨噬细胞 (AM) ,在体外以 50 μg/mlSiO2 刺激、LPS或无血清培养基培养 2、6、1 2、1 8、2 4、36h ,用免疫细胞化学的方法检测AM中MMP - 9的表达。③结果　经SiO2 刺激的AM中MMP - 9表达明显上调 ,且随刺激时间不同表达量也不同 ,于 1 8h达高峰。不同时间的表达量与同期对照组AM相比差异显著 (P <0 .0 1 )。④结论　SiO2 可诱导AM高表达MMP - 9,提示AM在损伤早期通过产生MMP - 9而降解基底膜 ,可能与包括成纤维细胞在内的各种细胞的迁移有关。