检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型荧光定量PCR方法的建立

目的 建立一种高敏感度的检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)DNA的实时荧光定量PCR方法,为针对HSV-2潜伏感染的治疗性疫苗和抗病毒药物疗效提供一个评价方法。方法 依据HSV-2糖蛋白D(gD)基因序列,使用序列比对软件,选取其保守区序列设计引物及TaqMan探针并进行筛选;以gD基因重组质粒pcDNA3-HSV-2 gD作为标准模板,对该检测方法的反应条件进行优化,提高其检测特异性、敏感度和重现性。结果 该检测方法特异性好,检测的最低拷贝数可达到2个拷贝,线性范围为2×10⁰~2×10⁸拷贝/反应,是普通PCR敏感度的10³倍。该检测方法组间和组内变异系数均低于5%,说明该检测方法具有良好稳定性。结论 本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法用于检测痕量HSV-2 DNA具有特异、敏感、定量和重现性好的优点。     

单纯疱疹病毒2型ICP4基因荧光实时定量PCR检测方法的建立

目的 建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法.方法 依据HSV2 ICP4基因序列设计引物.PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序,抽提重组质粒作为标准品.根据测序结果设计荧光定最PCR的引物和探针,质粒标准品10倍稀释后进行扩增,建立标准曲线,并进行灵敏度和可靠性分析.结果 测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A-G无和T-C的无义突变.标准品101以下没有检测信号,101具有明确的检测信号,因而检测的灵敏度为10.可靠性测定结果:107-101进行10次重复Ct值的平均值分别为14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,变异系数分别为0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%.Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.回归系数为0.998.结论 成功建立了HSV2 ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法,灵敏度高,重复性好,可用于HSV2 ICP4基因的定量分析.     

猫疱疹病毒Ⅰ型实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用

目的建立猫疱疹病毒I型(FHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和Taq Man探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立FHV-1实时荧光定量PCR方法,并对方法的线性、特异性、敏感性、及稳定性等进行测定。用建立的方法对48份猫临床样品进行检测。结果成功建立FHV-1实时荧光定量PCR方法;该方法的线性范围为(1×102~1×109)copies/μL,与单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、犬疱疹病毒(CHV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猫细小病毒(FPV)均无交叉反应,检测灵敏度可达到10 copies/μL。批内变异系数均小于5%。应用该方法从48份猫临床样本中检测出33份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点,适合于临床FHV-1的快速定量检测。     

小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏感染模型的建立

目的建立简便易行的单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV—1)潜伏感染动物模型。方法BALB／c小鼠60只随机分为3组，分别为鼻黏膜病毒滴入组、尾静脉接种组和角膜划痕接种组，进行单纯疱疹病毒Ⅰ型接种。6周后行小鼠三叉神经节病毒抗原检测和病毒DNA片段检测，以确认潜伏感染的存在。结果尾静脉接种组小鼠三叉神经节病毒DNA片段的检出率为9／12，角膜划痕组小鼠三叉神经节病毒DNA片段的检出率为13／16，均高于鼻黏膜接种12／20；小鼠三叉神经节病毒抗原表达均为阴性；尾静脉接种组死亡率4／15，高于其他两组。结论鼻黏膜病毒滴入、尾静脉注射和角膜划痕接种均可建立小鼠HSV—1潜伏感染模型，以角膜划痕法引起疱疹病毒急性感染症状轻恢复快，潜伏感染发生率高，为最理想的建立HSV—1潜伏感染的方法。     

微滴式数字PCR与荧光定量PCR对真皮间充质干细胞增殖及凋亡相关基因检测的比较研究

目的 比较微滴式数字PCR(droplet digital PCR, dd-PCR)和实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)对真皮间充质干细胞(dermal mesenchymal stem cell, DMSC)增殖及凋亡相关指标检测的敏感度。方法利用dd-PCR和RT-qPCR分别对寻常型银屑病患者和健康对照者真皮间充质干细胞(dermal mesenchymal stem cell, DMSC)的增殖及凋亡活性相关指标进行检测。结果 dd-PCR和RT-qPCR检测结果显示,银屑病DMSC的增殖(PCNA及CDK4)和凋亡活性相关指标(caspase-3)表达水平均较对照组降低,两种方法结果具有高度一致性;但dd-PCR使用的cDNA模板浓度为RT-qPCR的0.01倍。结论 对于DMSC分子活性检测而言,dd-PCR和RT-qPCR具有相似的准确性,但dd-PCR敏感度较高,故在模板量受限的情况下,可以优先选择dd-PCR。     

荧光定量PCR检测孕妇单纯疱疹病毒的感染

目的探讨荧光定量PCR技术(Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction, FQ-PCR)检测孕妇单纯疱疹病毒(HSV)感染的临床诊断价值.方法45例怀疑HSV-Ⅱ感染的孕妇用ELISA法检测血清HSV-ⅡIgM,同时用FQ-PCR检测血清及宫颈分泌物HSV DNA.结果该组孕妇血清HSV-ⅡIgM阳性率为20.0%,血清HSV DNA阳性率为33.3%,后者检出阳性率明显高于前者(P＜0.05).宫颈分泌物标本HSV DNA阳性率为40.0%,明显高于血清ELISA检测阳性率(P＜0.05),但与血清FQ-PCR检出阳性率无显著性差异(P＞0.05).结论荧光定量PCR检测孕妇HSV DNA感染可以提高诊断率及准确率.     

环介导等温扩增法检测孕妇血清中单纯疱疹病毒Ⅰ型方法的建立

目的建立稳定、可靠的环介导等温扩增法（LAMP）快速检测孕妇血清中单纯疱疹病毒Ⅰ（HSV-Ⅰ）DNA的方法。方法通过对影响LAMP反应体系的几个主要因素进行优化,确定最佳反应条件,并对其特异性、灵敏度及可靠性进行评判。结果 LAMP检测HSV-Ⅰ DNA的最佳反应条件：甜菜碱和Mg2＋的终浓度分别为1.0mol/L和10mmol/L,于62℃恒温反应1h。扩增产物可被Hinf Ⅰ消化,理论上检测下限可达10个拷贝,与定量PCR相比符合率达94.5%。结论本实验建立的LAMP检测HSV-I的方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,适合基层用于HSV-Ⅰ筛查。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型——慢性痛基因治疗的载体

慢性顽固性疼痛严重危害人类健康,传统的药物治疗效果不佳。单纯疱疹病毒I型(herpes simplex virus type I,HSV-I)载体具有天然嗜神经性,适合神经系统转基因治疗。皮下接种HSV-I载体,能有效传递疼痛调节基因至背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的感觉神经元,编码抑制性神经递质或抗炎递质,减轻了炎性和神经病理性疼痛。这种全新的止痛方法,没有全身用药的不良反应,能与标准的止痛治疗措施联合应用,显示了巨大的潜力。现就HSV-I在慢性疼痛治疗中的应用作一综述。     

猫疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立猫疱疹病毒Ⅰ型（FHV-1）PCR检测方法,应用于临床样品中FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1TK基因序列设计合成引物,并以此建立FHV-1的PCR检测方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证。用建立的方法对15份猫临床样品进行检测。结果建立的FHV-1PCR检测方法与单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）、犬疱疹病毒（CHV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猫细小病毒（FPV）均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为7lg TCID50/ml,相应的DNA模板浓度为1.46×102拷贝/ml;FHV-1DNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用该方法从15份猫临床样本中检测出10份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点,适合于临床FHV-1的感染检测。     

水痘-带状疱疹病毒的致病机制与防治

水痘-带状疱疹病毒(VZV)属人类疱疹病毒α亚科,具有嗜神经性,人类是该病毒的唯一自然宿主.初次感染可引起水痘,日后宿主免疫力低下时,病毒可再次激活引起带状疱疹.VZV感染易引起诸多并发症,对临床的诊治造成一定干扰.本文就VZV的分子结构、感染机制及途径、流行病学、临床特点和防治原则等方面进行综述,为疾病预防、诊断及合...     

与水痘病毒相关的带状疱疹

<正>带状疱疹是由水痘-带状疱疹病毒引起的急性炎症性皮肤病。水痘病毒与带状疱疹病毒属于同一类病毒,是同一类病毒感染后引起的两种不同表现的疾病。凡是对该病毒没有免疫力的儿童,感染该病毒后发生水痘,曾经出过水痘或接触过水痘患者的成年人,感染病毒后易于患带状疱疹;还有隐性感染者,感染病毒后当时不发病,病毒潜伏在神经根,在肌体抵抗力下降、劳累或感冒等诱因的影响下则可发生带状疱疹。人体是水痘-带状疱疹病毒唯一寄宿的地方,病毒经呼吸道黏膜进入血液后     

消化性溃疡患者血清单纯疱疹病毒Ⅰ型IgG抗体和胃十二指肠粘膜内单纯疱疹病毒Ⅰ型抗原

应用酶联免疫学方法(ELISA)测定62例十二指肠溃疡患者(DU),23例胃溃疡患者(GU)及28例对照组的血清单纯疱疹毒毒Ⅰ型IgG(HSV-ⅠIgG)水平。结果表表明,DU组(0.83±0.29U)明显高于对照组(0.55±0.36U,P<0.01)。GU组(0.71±0.30 U)也显著高于对照组(P<0.025)。用抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物技术(ABC)测定20例DU、8例GU及20例正常人的胃十二指肠粘膜HSV-Ⅰ抗原。结果显示,DU组的胃粘膜内HSV-I抗原阳性率(40％)明显高于对照组(10％,P<0.o1)和GU组(为0,P<0.01)。DU组十二指肠粘膜内HSV-Ⅰ抗原阳性率(20％)也明显高于对照组(为0,0.025相似文献   

改良的qPCR检测水痘-带状疱疹病毒的临床应用*

目的?分析改良的qPCR与水痘-带状疱疹病毒（VZV）DNA试剂盒检测VZV DNA的检出率,并进一步探讨其临床应用。方法?选取2017年5月—2017年7月在西南医科大学附属医院就诊的带状疱疹患者31例。利用患者疱液提取标准品,并根据VZV DNA保守序列ORF59制备引物以设计一种改良的qPCR。对比该方法与试剂盒检测VZV DNA的效果后,用该方法测定伐昔洛韦抗病毒治疗前后外周血单个核细胞（PBMC）和血浆VZV DNA的阳性率。结果?患者疱液提取的标准品大小为395?bp。经测序并与VZV DNA进行比对,标准品被匹配上的碱基数占比99%。该qPCR的标准曲线决定系数R2=0.9999,回归方程Y=-3.9367X+45.07,其中X为Log值,Y为Ct值。改良的qPCR与VZV DNA试剂盒检测PBMC中VZV DNA阳性率均为73.3%。治疗前后PBMC与血浆的VZV DNA阳性率比较,差异均无统计学意义（P?>0.05）。PBMC和血浆在治疗前与治疗后的VZV DNA阳性率比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。 结论?改良的qPCR与VZV DNA试剂盒的检测效果相近,且血浆可替代PBMC作为检测标本。该方法具有经济、快捷的优势,值得临床推广应用。     

突发性耳聋患者血清中人类巨细胞病毒和单纯疱疹病毒的检测

采用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对３０例突发性耳聋（突聋）患者血清中人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）进行了检测，结果显示：７例（２３％）ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，４例ＨＣＭＶ抗体（ＩｇＡ或ＩｇＭ）升高或ＩｇＭ升高，２例ＨＣＭＶ和ＨＳＶＤＮＡ均阳性，相应抗体水平高于正常，治疗后１月复查部分病例转阴，提示：用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对突聋患者病毒感染情况的检测，对于探讨突聋的发病机制和治疗有重要意     

小鼠脑无症状性单纯疱疹病毒Ⅰ型感染的实验研究

【目的】观察单纯疱疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus—type one,HSV-1）是否可以引起脑组织的无症状性感染,探讨多发性硬化的发病机制。【方法】将Balb／c小鼠分为实验组、对照组和脑炎组,在不同时间点观察小鼠神经病学体征、行为学以及体重变化;用聚合酶链反应法检测三叉神经节病毒DNA片段;免疫荧光法检测脑组织疱疹病毒抗原表达,以判定脑组织病毒增殖性感染的存在。【结果】实验组小鼠各时相点神经病学体征、神经行为学和体重变化与对照组小鼠相比较差异无统计学意义。在病毒接种的各时相点,大部分小鼠三叉神经节检测到了疱疹病毒DNA片段,同时脑的颞叶、顶叶和额叶皮层均发现片状HSV抗原阳性表达神经元,以7d组阳性细胞最多,荧光亮度最强,15d组阳性细胞减少,荧光亮度减弱。【结论】单纯疱疹病毒Ⅰ型能够引发小鼠脑组织的急性、短暂性、无症状性非坏死性感染。     

应用荧光探针定量PCR检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型的临床应用

目的:探讨荧光探针定量PCR检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)在临床上的应用。方法:采用荧光探针定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对93例临床诊断为生殖器单纯疱疹病毒感染者检测。结果:检出56例HSVⅡ阳性,阳性率60.22%。结论:FQ-PCR在检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型的临床应用中具有快捷、特异性强的优点。     

中草药抗Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）的实验研究Ⅱ

中草药抗Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）的实验研究Ⅱ傅强，郑民实（微生物学教研究，江西医学院微生物学教研室）关键词单纯疱疹病毒Ⅰ型；中草药；动物试验中国号Ｒ９６５．１单纯疮疹病毒性角膜炎（ＨＳＫ）是眼科常见的病毒性传染病，临床上使用的化学合成药每因毒、...     

单纯疱疹病毒Ⅰ型感染培养细胞CV-1后微丝形态变化的观察

应用光镜和电镜技术,对疱疹病毒Ⅰ型感染后的培养细胞CV-1中微丝结构与功能的变化进行动态观察,探讨病毒感染造成的微丝形态及分布变化。观察结果,或染细胞微丝分布不均、结构不清。