妥泰对宫内缺血Wistar大鼠学习记忆能力的影响

目的观察妥泰对宫内急性脑缺血损伤的Wistar大鼠学习记忆能力的影响。方法夹闭妊娠大鼠子宫血管,制成急性脑缺血损伤的新生鼠模型,治疗组于生后30 min内通过胃管给予妥泰,分为1次给药组及5次给药组,生后28天通过Morris全自动水迷宫实验,比较各组新生鼠学习记忆能力的差别。结果妥泰1次组逃避潜伏期及逃避路径长度明显大于正常对照组而小于缺血组(P<0．05);妥泰5次组逃避潜伏期及逃避路径长度明显大于正常对照组而小于缺血组及妥泰1次组(P<0．05)。结论妥泰可以改善宫内急性脑缺血Wistar大鼠生后的学习记忆能力, 且多次给药组学习记忆能力好于单次给药组。     

妥泰对宫内缺血Wistar大鼠学习记忆能力的影响

目的观察妥泰对宫内急性脑缺血损伤的Wistar大鼠学习记忆能力的影响。方法夹闭妊娠大鼠子宫血管，制成急性脑缺血损伤的新生鼠模型，治疗组于生后30min内通过胃管给予妥泰，分为1次给药组及5次给药组，生后28天通过Morris全自动水迷宫实验，比较各组新生鼠学习记忆能力的差别。结果妥泰1次组逃避潜伏期及逃避路径长度明显大于正常对照组而小于缺血组（P〈0．05）；妥泰5次组逃避潜伏期及逃避路径长度明显大于正常对照组而小于缺血组及妥泰1次组（P〈0．05）。结论妥泰可以改善宫内急性脑缺血Wistar大鼠生后的学习记忆能力，且多次给药组学习记忆能力好于单次给药组。     

亚低温对缺氧缺血新生大鼠海马星形胶质细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察亚低温对新生大鼠海马星形胶质细胞增殖和凋亡的影响,以探讨亚低温对缺氧缺血脑损伤保护作用的机制.方法 ①体外实验:取3日龄大鼠海马脑片,培养至第4天用氧糖剥夺法制备标本,于33℃(亚低温组)和37℃培养48 h(常温组);对照组脑片不进行氧糖剥夺处理,37℃培养7 d.采用免疫荧光染色方法观察培养脑片星形胶质细...     

地塞米松对小鼠星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察内毒素导对体外培养的大鼠星形胶质细胞一氧化氮（ＮＯ）及其诱导一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的变化,以及地塞米松（ＤＥＸ）对其的影响。方法 采用Ｒｒｉｅｓｓ法和半定量反录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法,对正常、内毒素诱导后及加入ＤＥＸ的内毒素诱导后大鼠星形交质细胞ＮＯ及其ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达进行检测。结果（１）内毒素诱生形胶质细胞ＮＯ产生增另,且呈内毒素剂量和时间依赖性;（２）ＤＥ     

大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养改良方法的研究

目的 改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞(astrocyte, AS)的体外培养方法,为进一步研究奠定基础.方法 选取生后3 d的Sprague-Dawley大鼠的大脑皮层,常规分离纯化AS,低密度种植,培养箱中孵育1 h后换瓶,24 h后换液,细胞融合成单层后传代,传代后维持在含10%胎牛血清DMEM培养基中培养,并在长时期内不给予更换或补加培养液.采用 GFAP/DAPI免疫荧光法鉴定AS细胞.结果 体外培养的纯化大鼠大脑皮层AS,表现为细胞突起细长、胞体明显缩小、形态多样的纤维型AS,最后细胞突起之间相互连接形成AS网络.GFAP/DAPI免疫荧光染色结果示GFAP阳性细胞达98%以上.结论 大鼠大脑皮质AS的体外培养改良方法培养的AS体外形态、发育特点均与在体内AS基本一致,且纯度较高,为进一步进行AS的研究创造了条件.     

星形胶质细胞外泌体对缺氧缺血神经元的保护作用

目的 探索星形胶质细胞外泌体对缺氧缺血神经元的影响。方法 体外培养大鼠星形胶质细胞,通过差速离心法获取细胞上清液中的外泌体。采用透射电镜、Nanosight和Western blot鉴定外泌体;采用BCA法检测外泌体蛋白浓度。体外培养大鼠神经元,分为对照组、外泌体组、氧糖剥夺（OGD）组和OGD+外泌体组（n=3）。OGD组和OGD+外泌体组给予无糖培养基和缺氧处理;外泌体组和OGD+外泌体组分别给予终浓度为22 μg/mL的外泌体处理,对照组和OGD组给予等体积PBS处理。采用ELISA法检测神经元乳酸脱氢酶（LDH）水平;TUNEL法检测神经元凋亡指数。结果 外泌体鉴定结果显示差速离心法提取的外泌体符合外泌体特点;与对照组和外泌体组相比,OGD组LDH值和凋亡指数显著增加（P < 0.05）;与OGD组相比,OGD+外泌体组LDH值和凋亡指数均显著降低（P < 0.05）。结论 星形胶质细胞来源的外泌体对神经元缺氧缺血损伤有保护作用。     

RNA干扰介导新生大鼠星形胶质细胞水通道蛋白-4基因沉默

目的 研究RNA干扰（RNA interference，RNAi)表达载体对原代培养星形胶质细胞水通道蛋白4（aquaporin-4，AQP4)基因的抑制作用。方法 构建AQP4 RNA干扰的表达载体和无意对照载体。采用实时荧光定量PCR和Western blot分别测定AQP4 mRNA和蛋白表达，用[3H]标记的葡萄糖测定细胞体积。结果 AQP4 RNAi 表达载体抑制了星形胶质细胞AQP4 mRNA和蛋白表达,在该载体转染后48 h，AQP4 mRNA和蛋白表达的抑制率分别大约为77% and 85%，而且AQP4基因沉默星形胶质细胞在低渗液中水渗透性明显减轻。结论 RNAi 表达载体能有效抑制星形胶质细胞AQP4基因的表达，而且AQP4可能是星形胶质细胞水转运的主要调控因素。     

不同增生程度星形胶质细胞对癫癎大鼠多药耐药基因MDR表达的影响

目的：探讨星形胶质细胞增生与癫癎大鼠多药耐药基因（MDR）表达的关系。方法：将新生Sprague-Dawley大鼠大脑皮层星形胶质细胞分离、纯化并培养至第3代后,采用肿瘤坏死因子（TNF-α）分别作用2 h、24 h 及48 h以刺激星形胶质细胞增生。将不同增生程度的星形胶质细胞培养液分别注入到癫癎大鼠侧脑室,用PCR法、免疫组化法和免疫印记法测定脑组织MDR产物P-糖蛋白（P-gp）表达。结果：TNF-α刺激后2 h胶质细胞开始增生,24 h达高峰;增生的胶质细胞培养液可使癫癎大鼠MDR表达上调,表达量与增生程度一致。结论：星形胶质细胞增生可使癫癎大鼠MDR基因表达上调,可能参与了难治性癫癎的形成。［中国当代儿科杂志,2010,12(11)：908-911］     

炎症因子诱导星形胶质细胞凋亡及机制探讨

目的：探讨LPS,IL-1β,TNF-α所致星形胶质细胞(AC)凋 亡的机制及途径。方法：原代培养的新生SD大鼠前脑AC分为正常对照组、 炎症组(LPS+IL 1β+TNF α)与预处理组(L-NMMA预处理30 min后加入LPS+TNF-α+IL-1 β)。培养72h后,MTT测定AC活力;分光光度仪测定细胞培养上清中NO2-/NO3-含量;电镜、流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测胞浆内细胞色素C的表达;原位杂 交检测AC Caspase-3 mRNA表达。结果：预处理组细胞活力明显高于炎症 组(0.81±0.29 vs 0.46±0.15),差异有显著性(P<0.01)。炎症 组AC活力与其分泌的一氧化氮(NO)呈负相关(r=-0.604,P<0.05)。预处理 组凋亡率［(15.2±7.9)%］低于炎症组［(29.7±10.4)%］,P<0.0 5。预处理组胞浆内细胞色素C的含量较炎症组明显减少(14 784±2 096 vs 31 049± 3 784),P<0.01。炎症组的Caspase 3 mRNA表达强于预处理组。结论：①LPS,IL-1β,TNF-α可导致细胞活力下降。其细胞活力的下降与其分泌的NO增多有关。②增多的NO可导致AC凋亡;NO导致的AC凋亡可能与细胞色素C凋亡途径有关。     

原代大鼠星形胶质细胞对氧糖剥夺的增殖性应答反应

目的 建立良好的模拟缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞增殖的体外模型的方法.方法 采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法测定星形胶质细胞活力,5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成,免疫组织化学染色法检测星形胶质细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达.比较原代大鼠星形胶质细胞在氧糖剥夺(OGD),10 mL·L-1氧气、无糖含血清培养基)培养不同时间(0h、3h、6h、9h)的增殖情况.结果 CCK-8检测结果显示随OGD培养时间延长,原代大鼠星形胶质细胞活力逐渐增强,6h达高峰,与相应时间点正常培养组比较差异有统计学意义;随后减弱,9h已接近正常培养组水平.OGD培养后,原代大鼠星形胶质细胞EdU和PCNA阳性细胞率逐渐增加,6h达最高水平,与相应时间点的正常培养组比较差异有统计学意义;而后下降,至9h与正常培养组比较差异无统计学意义.结论 OGD培养6h可成功模拟体内缺氧缺血后星形胶质细胞增殖改变,为进行缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞过度增殖的相关研究提供了稳定可靠的体外实验模型和理论依据.     

新生大鼠缺氧缺血损伤后行为变化和海马结构突触素的表达

目的 探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后学习记忆行为功能与突触可塑性之间的关系。方法 7日龄Wistar大鼠36只随机分为缺氧缺血(HI)组21只和正常对照组15只。HI组大鼠通过结扎左侧颈总动脉后吸入8％的氮氧混合气体2h,制成缺氧缺血性脑病(HIE)模型。饲养至80d左右时,采用Y-迷宫实验检测分辨学习和记忆能力,免疫组织化学方法对海马结构突触素的表达进行分析。结果 HI组大鼠分辨学习能力和记忆保持百分数分别为33±8和(59±21)％,显著低于正常对照组27±7和(80±19)％(P<0.01,P<0.05);海马、齿状回突触素免疫染色出现明显的免疫板层分布,HIE组海马CAI区始层、辐射层、腔隙分子层及齿状回分子层突触素免疫产物校正光密度(COD)值均较对照组明显降低(P<0.01),分别降至41.2％,27.2％,10.5％和38.9％。结论 HIBD后大鼠学习和记忆能力明显下降,可能与海马结构突触素减少有密切关系。     

槲皮素对缺氧缺血性脑白质损伤新生大鼠学习记忆能力的影响

目的：研究槲皮素(QUE,黄酮类化合物) 对缺氧缺血性脑白质损伤新生大鼠学习记忆能力的影响。方法：生后3 d Sprague-Dawley（SD）大鼠60只,随机分成对照组、模型组和QUE处理组（20 mg/kg 和40 mg/kg）,每组15只。模型组和QUE处理组行右侧颈总动脉结扎及缺氧处理以建立缺血缺氧性脑白质损伤模型。QUE处理组每日给药一次,连续6 周。第6周时分别用Morris水迷宫及开场试验评价其学习记忆能力和行为情感。结果：从训练的第2天开始,模型组逃避潜伏时间（EL）明显长于对照组（P<0.01）, 20和40 mg/kg QUE处理组EL明显短于模型组（P<0.05）。模型组大鼠穿越原平台次数明显低于对照组（P<0.01）及两个QUE组（P<0.05）。开场试验显示,模型组大鼠后肢站立次数较对照组增加,中央区域驻留时间较对照组延长,QUE处理后大鼠后肢站立次数较模型组明显减少（P<0.05）,中央区域驻留时间明显缩短（P<0.05）。结论：QUE可以明显改善缺血缺氧性脑白质损伤新生大鼠的学习记忆及行为情感障碍,对中枢神经系统脑白质损伤具有保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对新生大鼠脑缺氧缺血后学习记忆能力的改善作用

目的评估碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic!ischemicbraindamage,HIBD)后学习记忆能力的改善作用。方法建立HIBD新生大鼠模型16只,随机分成治疗组、对照组,另取8只新生大鼠作假手术组。各组于生后30d开始进行Morris水迷宫测试,动态观察其学习记忆功能。结果对照组逃避潜伏期[(51.75±11.27)s]较治疗组[(40.32±11.48)s)]和假手术组[(36.58±10.83)s]明显延长(P<0.05);对照组拆除平台后跨越平台的次数[(2.34±2.42)次]较治疗组[(5.08±3.86)次]和假手术组[(7.03±3.62)次]明显减少(P<0.05)。结论bFGF可明显改善大鼠HIBD后的学习记忆能力。     

缺氧缺血性脑损伤新生猪海马皮层细胞色素C氧化酶活性变化

目的　研究缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)新生猪海马皮层细胞色素C氧化酶 (COX)活性变化。方法　50只 3d新生猪随机分为实验组和对照组 (假手术组 )。实验组制成HIBD模型后置空气中 ,根据在空气中放置时间分 4组 (0h组 ,2 4h组 ,48h组 ,72h组 ) ,每组 10只。每只新生猪分离左侧海马皮层线粒体 ,用分光光度计测定其COX活性 ;采用SDS -PAGE分析线粒体蛋白改变。结果　 1.0h组COX活性与对照组无显著性差异(P >0 .0 5) ,再灌注时开始下降 ,2 4h组活性最低 (P <0 .0 5) ,然后逐渐回升 ,但 72h组仍未恢复至对照水平(P <0 .0 5)。 2 .SDS -PAGE示 2 4h组、48h组和 72h组线粒体蛋白成分和结构与对照组比较有明显差异。结论　HIBD后再灌注线粒体COX活性下降 ,线粒体蛋白成分和结构发生明显变化 ,此为线粒体能量代谢障碍的直接原因 ,也是HIBD中线粒体对神经元凋亡起关键作用的理论基础。     

早期环境刺激对缺氧缺血性脑损伤大鼠学习记忆的影响

目的探讨生命早期丰富环境和触摸干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠空间参考学习记忆能力及海马CA1区神经元数量的影响。方法生后7 d大鼠,建立HIBD动物模型,随机分为未干预组、丰富环境组、早期触摸组、联合干预组;另设假手术组,每组各14只大鼠。HIBD后7 d开始给予大鼠不同干预,于生后35 d行Morris水迷宫测试;同时,采用尼氏染色法观察各组大鼠海马CA1区神经元数量的变化。结果在Morris水迷宫隐蔽平台测试中,丰富环境组和联合干预组大鼠到达平台的平均潜伏期时间明显短于未干预组和早期触摸组,差异有统计学意义(P均<0.05);而早期触摸组与未干预组的差异无统计学意义。在Morris水迷宫探索测试中,丰富环境组和联合干预组大鼠在目标象限停留的百分比较未干预组显著增高,差异有统计学意义(P均<0.01),而早期触摸组和未干预组的差异无统计学意义。HIBD大鼠损伤侧海马CA1区神经元较假手术组明显减少,差异有统计学意义(P<0.001);其中联合干预组和丰富环境组大鼠损伤侧海马CA1区神经元的数目较未干预组和早期触摸组增加,差异有统计学意义(P<0.05);丰富环境组大鼠非损伤侧神经元数目增加,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生仔鼠HIBD后1周开始的丰富环境仍可促进仔鼠脑功能恢复;新生仔鼠HIBD后早期短暂的触摸并不能增加丰富环境干预的疗效。     

细菌内毒素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期智能的影响

目的：探讨细菌内毒素脂多糖（LPS）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠远期智能的影响，方法，建立新生大鼠LPS＋HIBD模型，于新生大鼠缺氧前4h给予腹腔注射LPS0．3mg/kg,HIBD组和对照组仅给予腹腔注射生理盐水，采用迷宫实验观察远期学习记忆能力的改变。结果：LPS＋HIBD组学习记忆能力明显低于HIBD组，表现在达标所需反映次数明显高于HIBD组（P＜0．05），而正确率支明显低于HIBD组（P＜0．05），结论：LPS对缺氧缺血引起的脑损伤有增敏作用，可进一步降低HIBD后的学习和记忆能力。     

电刺激小脑顶核对缺氧缺血新生大鼠学习记忆能力的影响

目的探讨电刺激小脑顶核对缺氧缺血新生大鼠学习记忆功能的影响。方法 7日龄Wist-ar大鼠(36只)随机分为缺氧缺血性脑损伤组和假手术组,缺氧缺血性脑损伤组又分为模型组和电刺激组,采用结扎左侧颈总动脉并吸入氮氧混合气体2h制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型,分别于手术第2天相同时间点给予无电刺激装置(假手术组),连接装置但不接通(模型组),连接装置并且接通(电刺激组)。各组12只动物,随机分为7d干预组(6只)和14d干预组(6只),两组分别于7、14d干预后,(1)用Y-型迷宫检测脑损伤鼠的学习记忆功能;(2)苏木精-伊红染色法光镜下观察脑神经细胞和神经纤维的病理变化;(3)免疫组织化学检测脑皮质和海马区STAT3蛋白水平的表达。结果 (1)Y-型迷宫测试结果模型组总时间较电刺激组增多,模型组主动回避反应率和正确反应率低于电刺激组(P<0.05);模型组总时间与假手术组相比,显著增加;模型组主动回避反应率和正确反应率也明显低于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)假手术组脑组织各部位的结构及细胞层次清楚、形态正常,未见明显损伤性改变。模型组脑组织可见明显的毛细血管出血,细胞核固缩、核碎裂明显...