类风湿关节炎滑膜细胞凋亡及相关基因Fas表达的研究

目的:研究类风湿关节炎(RheumatoidArthritis,RA)患者滑膜组织中细胞凋亡及相关基因蛋白Fas的表达和意义。方法:采用免疫组织化学方法,对9例患者及8例正常对照滑膜组织中凋亡细胞及Fas的表达进行检测。结果:RA患者滑膜组织中细胞凋亡率明显低于对照组,而Fas阳性的细胞百分比却明显高于对照组。结论:RA患者滑膜组织中细胞凋亡的减少可能是导致滑膜过度增生进而关节功能丧失的原因之一,Fas表达虽增多但不能直接诱导细胞凋亡。     

细胞内Fas相关死亡域样白介素1-β转换酶抑制蛋白在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞内Fas相关死亡域样白介素1-β转换酶抑制蛋白(FLIP)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞凋亡的影响。方法:荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测胃癌组织及其癌旁正常组织FLIP(S)mRNA表达水平。结果:FLIP(S)mRNA在胃癌组织和癌旁正常组织都有表达,在胃癌组织表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。FLIP(S)mRNA在低分化癌组织中表达较中高分化表达高,有淋巴结转移表达高于无淋巴结转移,随着浸润深度的增加,FLIP(S)mRNA表达也增加,差异有统计学意义(P<0.05)。cFLIP的蛋白表达与胃癌细胞凋亡指数呈负相关(P<0.05)。结论:FLIP(S)在胃癌组织中表达升高,在分化越低组织中其表达水平越高,抑制胃癌癌细胞的凋亡,促进胃癌的发生,为临床治疗胃癌提供了新思路。     

丹参诱导类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞中Fas/FasL的表达

目的 观察丹参对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞中Fas/FasL mRNA表达的影响.方法 RA患者关节滑液经原代培养,获取成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs),分别用终浓度为0、0.2 mg/ml和0.4 mg/ml的丹参作用24 h后,提取总RNA并逆转录成cDNA保存.随机选取正常人外周血,通过分离单个核细胞提取总RNA并逆转录成cDNA保存作为阳性对照.分别采用RT-PCR和SYBR Green适时荧光定量PCR方法检测Fas/FasL mRNA的表达.结果 RT-PCR结果显示,FasL只在外周血标本上有表达,而在各浓度处理的RA FLSs没有检测到;Fas无论在外周血还是不同浓度处理的RA FLSs上均有表达.定量PCR结果显示,Fas的表达量随丹参浓度增加而增加,并且在丹参浓度为0.4 mg/ml时具有统计学差异(P<0.05).Fas mRNA的表达与相应浓度下RA FLSs的凋亡率存在相关性(r=0.998,P<0.05).结论 丹参可体外诱导RA患者成纤维样滑膜细胞Fas mRNA表达上调;未检测到FasL mRNA在RA患者FLSs中的表达.Fas mRNA的上调可能与丹参诱导RA FLSs凋亡有关.     

B7-H1在类风湿关节炎滑膜组织中的表达及意义

目的 研究分析类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜组织中B7-H1蛋白的表达,旨在探讨其在RA发病中的意义.方法 采用免疫组织化学SABC法检测24例RA患者膝关节滑膜组织中B7-H1蛋白的表达,并以骨关节炎患者(OA)和健康人膝关节滑膜组织做对照研究.结果 24例RA患者膝关节滑膜组织中21例(87.5%)B7-H1蛋白表达阳性,10例OA患者中3例(30.0%)B7-H1蛋白表达阳性,而6例正常对照组中有1例(16.7%)表达阳性,三者比较差异有显著性(P＜0.05).且B7-H1蛋白在滑膜增生严重的RA患者中表达更高.结论 B7-H1在RA患者的膝关节滑膜组织中高表达,可能直接参与了RA的发病过程.     

HSP70s CD_（68）在类风湿关节炎滑膜组织中的表达研究

目的了解HSP70s、CD68在滑膜组织中的表达分布情况。方法采用免疫组化SP法对39例类风湿关节炎滑膜病理活检组织进行HSP70s和CD68染色。结果HSP70s、CD68在类风湿关节炎滑膜组织中均高度表达,滑膜组织增生明显则表达愈明显。结论HSP70s、CD68与类风湿关节炎的发病有关。     

类风湿关节炎患者血清同型半胱氨酸水平相关分析

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者与对照组血清同型半胱氨酸水平(Hcy)的差异,并分析RA患者早期动脉硬化与Hcy的关系。方法:分别测量RA患者组与对照组的血清Hcy,比较两组值有无差异;测量RA患者组的颈动脉内中膜厚度(IMT),根据IMT升高与否分为两组,比较两组间的Hcy水平有无差异。结果:RA患者组的血清Hcy水平明显高于正常对照组(13.19±3.08vs 6.38±2.37),统计学分析有显著差异。IMT升高的RA患者组的血清Hcy水平高于IMT正常的RA患者组(13.08±2.73vs 10.07±1.52),统计学分析有显著差异。结论:RA患者血清Hcy水平较正常升高,提示RA患者可能存在较高罹患动脉硬化(AS)的风险;IMT升高的RA患者较RA正常的患者的Hcy水平身高,提示Hcy与RA患者的早期动脉硬化发生相关。     

高迁移率族蛋白B1 在类风湿关节炎中的 表达水平研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在类风湿关节炎中的表达。方法 选取2017 年5 月- 2018 年5 月在吉林大学第一医院行关节置换术或滑膜清理术的类风湿关节炎患者49 例作为研究组;另选取 该院同期行手术治疗的骨关节炎患者30 例作为对照组。所有研究对象入院后第3 天清晨空腹采集外周静脉 血,分离血清,采用酶联免疫吸附法测定HMGB1 含量;取保存的所有研究对象的病损关节滑膜组织石蜡病 理切片标本,采用链霉菌抗生物素蛋白- 过氧化物酶连结（SP）法检测HMGB1 的表达。结果 研究组血清 HMGB1 水平高于对照组（P <0.05）。研究组HMGB1 阳性表达率高于对照组（P <0.05）。研究组SP 法染色 评分高于对照组（P <0.05）。结论 HMGB1 在类风湿关节炎中高表达,其可能在类风湿关节炎组织损伤发生、 发展中发挥重要作用,可作为类风湿关节炎辅助诊断指标之一。     

增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的作用

目的研究增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA FLS)增殖的影响。方法慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN转染RA FLS并表达PTEN蛋白,应用RT-PCR、Western blot检测PTEN表达,MTT法检测RA FLS增殖能力的变化。结果转染pLenti6/V5-PTEN后,RA FLS中PTEN mRNA表达提高60%以上,PTEN蛋白表达在48 h后提高了107.85%(P<0.05),RA FLS增殖在487、29、6 h分别下降了25.14%、41.84%和52.46%(P<0.05)。结论慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN能够提高PTEN蛋白表达水平,并显著抑制RA FLS增殖。     

类风湿关节炎滑膜组织线粒体功能相关差异表达基因的分析

目的探讨线粒体功能相关基因在类风湿关节炎(RA)滑膜组织中的表达变化及其与滑膜组织病理变化的关联。方法利用来自GEO数据库的基因表达芯片数据,通过生物信息学方法分析关节滑膜组织中线粒体功能相关基因的表达情况,并对这些基因进行功能、通路注释与相互作用网络分析。结果与正常对照相比,RA患者存在1 986个显著差异表达的基因,其中169个基因的编码蛋白定位于线粒体并与线粒体结构、功能相关。功能注释分析结果显示:异常表达的线粒体功能相关基因的功能富集通路主要集中于线粒体的核苷酸代谢(GO:0009117)、线粒体结构(GO:0007005)等功能通路,并激活了部分炎症反应通路(GO:2001233、GO:0034976、GO:0006979和GO:0072593等)。而其蛋白-蛋白相互作用网络中的基因则富集了线粒体相关蛋白的加工(HSA04141)、核苷酸代谢(GO:0009117、GO:0006753)、翻译(R-HSA-1799339、R-HSA-72766)、修饰(R-HSA-446203、HSA00510)、小分子转运(R-HSA-382551)和体液水平的调控(GO:0050878)功能通路。结论差异表达的线粒体功能相关基因与关节滑膜组织的线粒体功能异常及RA的病理变化密切相关。     

自噬相关基因在类风湿关节炎滑膜组织的表达及调控机制

目的 研究自噬相关基因(ATG)在类风湿关节炎(RA)中的表达调控和自噬机制。方法 从GSE55235和GSE55457中鉴定出RA的差异表达基因(DEG),结合人类自噬数据库,筛选出差异表达自噬相关基因(DE-ATG)。利用STRING 11.0和GeneMANIA数据库建立蛋白互作网络。此外,NetworkAnalyst和Cytoscape建立转录因子-基因-miRNA共表达网络。最后,受试者工作特征曲线分析和DrugBank鉴定预测生物标志物的效能和靶向药物的性能。GraphPad prism 8.2.1和R 4.0.3用于统计分析和图形制作。结果 485个DEG在T细胞激活、激素调节、破骨细胞分化、RA和趋化因子等信号通路富集。11个DE-ATG通过hsa-mir-155-5p、RUNX1、TP53和SOX2等调控RA滑膜组织的表达,与四氯二苯二氧芑、二氧化硅有较强的环境因子调控关系。受试者工作特征曲线分析确定了具有良好敏感性和特异性的基因,如MYC、MAPK8、CDKN1A和TNFSF10,可用于区分某些表型,这可能是RA的新型生物标志物。结论 DE-ATG在RA中表达下调可能会促进软骨细胞凋亡和分解,新型生物标志物的确立为诊断和治疗RA提供了新思路和方法,转录因子-基因-miRNA网络的建立为解析滑膜炎症和关节软骨破坏提供直接证据。     

Rho激酶抑制剂对类风湿关节炎患者滑膜单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜单核巨噬细胞Rho激酶(ROK)活化情况,并探讨该激酶抑制剂对滑膜单核巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 单核巨噬细胞分离采用Ficoll密度梯度离心法和黏附法;ROK活性用磷酸化MYPTl蛋白表达来表示,磷酸化MYPTl蛋白检测采用免疫印迹法,单核巨噬细胞活性检测采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的RA患者关节滑液单核巨噬细胞ROK活性显著高于自身配对的和正常对照组外周血单核细胞;新鲜分离的RA患者滑液单核巨噬细胞磷酸化MYPTl表达量与RA患者DAS28评分呈正相关关系(r=0.69,P<0.05),ROK抑制剂Y27632在抑制RA滑膜单核巨噬细胞ROK活性的同时,对肿瘤坏死因子(TNr)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6等炎症细胞因子分泌也有显著抑制作用,但对抗炎细胞因子IL-10分泌没有影响.结论 RA滑液巨噬细胞中ROK处于异常活化状态,并与RA疾病活动有关.ROK特异性抑制剂对RA滑液巨噬细胞分泌多种炎症细胞因子均有抑制作用,提示ROK可能是治疗RA滑膜炎症的潜在靶点.     

类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的差异蛋白质谱分析

目的 应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用.方法 采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest软件分析图像,比较两种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定,并用Western blot验证部分表达差异蛋白质.结果 ①采用窄范围的pH 4～7 IPG胶条进行2-DE分析,正常人及RA患者滑膜细胞蛋白胶图上分别平均显示852、837个点.有49个蛋白点在正常、RA滑膜细胞间有2倍以上的显著性量变.②分别在胶图上共选取40个表达水平存在明显差异的蛋白质点进行质谱鉴定,鉴定出23个在RA患者滑膜细胞中表达上调蛋白质.Western blot验证Enolaseα、Annexin Ⅰ、Cathepsin D、SOD2、Peroxiredoxin 2在RA滑膜细胞中表达显著升高.结论 正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异.这些差异蛋白可能参与类风湿关节炎的发病.     

类风湿性关节炎滑膜中VEGF、bFGF、PEDF的表达分析

目的 检测类风湿性关节炎（RA）患者髋或膝部滑膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）的表达,以研究VEGF、bFGF、PEDF在RA发展中的作用.方法 采用免疫组织化学法对20例RA患者滑膜组织中PEDF、VEGF及bFGF的表达水平进行了检测,并与10例骨关节炎和6例正常滑膜组织进行对照研究.结果 VEGF和bFGF在RA患者的滑膜组织中呈高表达,而在正常人滑膜组织中表达水平则较弱;PEDF在正常人和RA患者的滑膜组织中表达水平均较弱或不表达.结论 RA患者滑膜组织VEGF、bFGF呈过度表达,而PEDF则呈弱表达或不表达.     

Immunohistochemical study of Fas antigen expression in synovial tissues from patients with rheumatoid arthritis

ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｆＦａｓａｎｔｉｇｅｎｅｘｐｒｅｓｉｏｎｉｎｓｙｎｏｖｉａｌｔｉｓｕｅｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓＹｕＱｉｎｇｈｏｎｇ于清宏,ＬｉｕＸｉａｎｇｙｕａｎ刘湘源...     

类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖特性的体外研究

探讨类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）滑膜成纤维样细胞（fibroblast like synovial cells,FLS）体外培养时的增生特点,观察沙利度胺（thalidomide）、白芍总苷（total glucosides of peony,TGP）、艾拉莫德（iuratimod, T 614）在体外实验中对RA FLS细胞增殖分化特性的影响。方法:关节镜、关节活检针取RA患者滑膜组织或抽取膝关节积液分离滑膜细胞并培养和鉴定,MTT法和反转录 聚合酶链反应(RT PCR)法分别观察沙利度胺、TGP、T 614对FLS细胞存活分数（SF）的影响和RA FLS的c fos mRNA表达。结果: 体外培养传代的RA FLS为非恶性无限制增生。沙利度胺、TGP和T 614对RA FLS的细胞染色和表面标记等特征无明显影响,但对RA FLS的SF值均有不同程度的抑制（P<0.05）;3种制剂中沙利度胺对FLS的SF抑制率最强,T 614对FLS的作用最小（P<0.05）。生理剂量的沙利度胺和高剂量TGP干预时RA组药物浓度与FLS的SF值呈负相关（P<0.05）。RA FLS的c fos mRNA表达率高,加入沙利度胺、TGP和T 614共孵育3?d后c fos的表达率下降, 以沙利度胺作用最明显（P<0.05）。结论:在无炎症因子刺激时,体外培养的RA FLS呈良性增生方式。在实验剂量下沙利度胺、TGP和T 614均通过抑制c fos的表达、降低FLS增殖能力等不同途径发挥对RA滑膜细胞的免疫调节作用。     

抗体芯片在类风湿关节炎患者滑液与血浆蛋白检测中的应用

目的应用抗体芯片研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑液与血浆蛋白表达谱的差异。方法选取3例RA患者的血浆和滑液标本,用抗体芯片试剂盒同时检测507种蛋白质的表达,筛选配对滑液与血浆差异表达的蛋白(差异>2.0倍)。结果筛选出67种在RA滑液中明显高表达的蛋白质,其中10种为新发现的滑液蛋白,包括IL-28A、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)-6、FGF-结合蛋白(FGF-binding protein,FGF-BP)、血管生成素(angiopoietin)4、刺鼠相关蛋白(agouti-related protein,AgRP)、食欲素(orexin)A、抵抗素样分子(resistin-like molecule,RELM)-β、肾母细胞瘤过度表达基因(nephroblastoma overexpressed,NOV)/CCN3、生长分化因子相关血清蛋白(growth and differentiation factor-associated serum protein,GASP)-2/WFIKKN、膜卷曲相关蛋白(membrane frizzled-related protein,MFRP)。芯片分析未显示滑液中低表达的蛋白质。结论揭示RA患者滑液蛋白质表达谱的特点可以为研究RA滑膜炎和(或)骨破坏的发生机制提供新的线索。     

类风湿关节炎患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达及意义

目的研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,探讨其在RA致病中的作用.方法采用流式细胞仪检测RA患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,并设立正常对照组.结果RA患者外周血表达CD25的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比明显增多(P<0.01);关节滑膜液表达CD25的B淋巴细胞和表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比亦明显增多(P<0.01).结论外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HIA-DR的表达增高,在RA发病机制中起着重要的作用.     

类风湿关节炎患者外周血和关节液中T淋巴细胞亚型和T细胞共刺激分子CD28的表达和临床意义

目的:探讨T细胞共刺激分子CD28在类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节液中的表达和意义,同时比较T淋巴细胞亚群CD4、CD8在类风湿关节炎患者外周血和关节液中的表达和意义。方法:选取RA患者45例,平均年龄(47.57±16.43)岁,平均病程(5.84±7.19)年,男性9例,女性36例。取新鲜抗凝外周血细胞(PBMC)应用流式细胞仪进行检测。其中15例有膝关节液者同时抽取关节液单个核细胞(SFMC)行同样检测。与RA年龄和性别匹配的正常体检者54例作为对照。检测CD4、CD8、CD28、CD19(B淋巴细胞)的百分比以及CD4+和CD8+细胞分别表达CD28+的百分比。结果:类风湿关节炎外周血CD4+百分率较正常对照明显升高(P<0.01),但较关节液均明显降低(P<0.05);外周血CD8+百分率与正常对照无显著差别,而关节液细胞中CD8+百分率较外周血显著升高(P<0.01)。CD28+百分比在关节滑液细胞中较血细胞中有明显增高(P<0.01)。CD4+CD28+/CD4+百分比在类风湿关节炎患者血细胞、关节液细胞与正常对照组均无差别。CD8+CD28+/CD8+百分比在类风湿关节炎关节滑液中较血细胞中有明显增高,二者相差非常显著(P<0.01)。结论:类风湿关节炎患者外周血和关节液中T淋巴细胞亚型和T细胞共刺激分子CD28的表达异常,可能是参与RA发病和病情发展的重要机制之一。     

用差示PCR法筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中的高表达基因

目的 筛选类风湿性关节炎（RA）滑膜细胞中的高表达基因,以探讨RA滑膜细胞发生肿瘤样增殖和侵蚀软骨的分子机理。方法 以骨性关节炎（osteoarthritis,OA)滑膜细胞作对照,采用差示PCR（differentially display PCR)方法,克隆RA滑膜细胞中高表达的cDNAs片段,经反向点杂交排除假阳性克隆后,将阳性克隆进行基因序列分析,结果共回收76仆差异条带,得到42个有插段的克隆,经反向点杂交后得到22个阳性克隆,对其中19个克隆进行基因序列分析表明,最长片段为501bp长,最短片段为145bp长,大部分在300bp,有13个克隆为已知基因,其中包括组织蛋白酶,其它6个克隆为未知序列,这些未知序列中除一个序列外酶,其它6个克隆为未知序列,这些未知序列中除一个序列外都为基因的非编码区,结论 差示PCR方法在筛选差异表达基因方面存在着很大的局限性,组织蛋白酶B可能与RA滑膜细胞的软骨侵蚀性有关。