蛇毒降纤酶的主要药理作用

蛇毒中 “凝血酶样酶”（ Ｔｈｒｏｍ ｂｉｎｌｉｋｅ Ｅｎｚｙｍ ｅ, Ｔ Ｌ Ｅ） 由中国卫生部定名为降纤酶 （ Ｄｅｆｉｂｒａｓｅ, Ｄｆ）。类同生理凝血酶 （ Ｔｈｒｏｍ ｂｉｎ, Ｔｂ） 能降解血浆纤维蛋白原 （ Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ, Ｆｇ）, 但只解离 Ｆｇ 结构的肽链 Ａ, 而不象生理凝血酶能同时解离肽链 Ａ 和肽链 Ｂ; 经 Ｄｆ降解的 “脱肽链 Ａ 纤维蛋白”是可溶性单体, 不接受血中稳定因子 （第十三因子, ⅩⅢ Ｆ） 的催化交联, 易被血中溶纤酶 （ Ｐｌａｓｍ ｉｎ, Ｐ１） 迅速消溶并被吞噬细胞所消除, 不产生 Ｄ Ｉ Ｃ现象; 蛇毒 Ｄｆ的直接效果是降低血浆纤维蛋白原在血中的含量, 从而降低血液粘度, 得以疏畅血流, 用于防治血液高粘滞伴发的血管闭塞性疾病; 蛇毒 Ｄｆ能激发组织溶纤酶原激活物 （ｔ Ｐ Ａ） 的释放, 促使溶纤酶原转变为有活性的溶纤酶, 能使纤维蛋白降解产物 （ Ｆ Ｄ Ｐ） 得以消除, 使血栓崩解。蛇毒 Ｄｆ能阻抑血小板的聚集从而延缓血栓的形成。     

蛇毒纤维蛋白原水解酶

蛇毒纤维蛋白原水解酶毛建平孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０）关键词蛇毒纤维蛋白质凝血酶样酶纤溶酶许多蛇毒中含有降解纤维蛋白原或纤维蛋白的酶类,它们作用于高等动物血液循环系统,防止中毒动物血液凝固以利于其它毒素迅速扩散和生效。人类于...     

人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶凝聚纤维蛋白原及释放血纤肽的不同机制

人纤维蛋白原经人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶作用后,释放出血纤纤肽A和血纤肽B,二者可用高效液相色谱法分离鉴定。人凝血酶首先释放出血纤肽A,浙江蝮蛇毒类凝血酶则先释放出血纤肽B,甚至在纤维蛋白凝聚之前,血纤肽B的释放量早已达到极值,即使凝块形成后,血纤肽A与血纤肽B之比仍为1:3。人凝血酶在钙离子存在下,作用于纤维蛋白原时,其凝聚时间缩短,血纤肽A释放量不变,血纤肽B释放量则增高。在同样条件下,浙江蝮蛇毒类凝血酶作用时,血纤肽A释放量无明显变化,血纤肽B释放量却降低近1/3。无论是人凝血酶还是浙江蝮蛇毒类凝血酶,当与纤维蛋白原在2M尿素存在下反应时,均无可见凝块形成,但在37℃下用350nm光吸收监测其聚合过程仍可见光吸收上升,溶液呈乳白色。本文首次报道用电子显微镜观察比较了人凝血酶和浙江蝮蛇毒类凝血酶作用人纤维蛋白原后所形成的凝块结构。前者形成的结构致密,纤维长而细;后者形成的结构松散,较透明,纤维短而粗,这种结构更易为体内纤溶系统所降解。     

竹叶青Trimeresurus stejeegeri蛇毒凝血酶样酶的酶学性质研究

本文报道从竹叶青蛇毒中纯化的两个凝血酶样酶（组分Ⅰ和组分Ⅱ）的酶学性质研究。结果表明二者在体外都能使人纤维蛋白原转变为纤维蛋白,具有精氨酸酯酶活性,都能水解凝血酶专一性底物。纤维蛋白平板法证明组分Ⅰ具有激法纤溶作用;组分Ⅱ同时具有激活纤溶和直接纤溶作用;组分Ⅰ和组分Ⅱ能缓慢降解纤维蛋白原的α链,随着作用时间延长,组分Ⅰ还能进一步部分降解纤维蛋白原的β链,活性中心探讨表明,组分Ⅰ的活性中心由丝氨酸蛋白酶部位和糖基部位组成。组分Ⅰ水解BAEE的最适温度为50 ℃,最适pH为8.6。     

烙铁头蛇毒素纤维蛋白原溶酶研究:Ⅱ.对纤维蛋白原及凝血酶的作用

烙铁头（T.mucrosquamatus）蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg能水解三肽底物Bz-Phe-Val-Arg-PNA，但对凝血酶的良好底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA却活性甚低。TMVFg显著延长血浆凝血酶时间、血浆复钙时间及纤维蛋白原溶液凝血酶时间。同时，TMVFg体外也能延长全血凝固时间，表明具有抗凝作用。纤维蛋白原-纤维蛋白转换实验表明：TMVFg水解纤维蛋白原产生的纤维蛋白原断片（FDP）除具有抗凝血酶，抑制纤维蛋白聚合活性外，还能促进纤维蛋白的聚合。进一步用FPLC分离TMVFg水解人纤维蛋白原混合液，得两个FDP断片功能峰，FDP组分Ⅰ和FDP组分Ⅱ。其中FDP组分Ⅰ能抑制纤维蛋白凝块形成；FDP组分Ⅱ能促进纤维蛋白凝块形成，抑制TMVA（烙铁头蛇毒血小板活化素，它可不通过ADP、花生四烯酸途径而诱导血小板聚集），但对ADP诱导的家兔血小板聚集无影响。TMVFg对凝血酶水解三肽底物Cbz-Gly-Pro-Arg-PNA及凝固纤维蛋白原的活性也有一定抑制作用。实验证明，TMVFg抗凝的主要作用机理是其水解纤维蛋白原产生的断片对纤维蛋白原凝固的抑制作用、FDP断片抗凝血酶作用及TMVFg本身对凝血酶活性的抑制所引起的，但在二者之间，前者是主要的。从研究结果发现：TMVFg水解纤维蛋白原所产生的断片有一类能加速凝血酶凝固纤维蛋白原的过程，这就发现了FDP断片的新功能。它证明了FDP断片作为血液凝固、纤溶正反馈调节因子的功能。这一类FDP断片还能抑制TMVA诱导的血小板聚集，因此，烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg将成为研究血液凝固调节系统及血小板聚集第三条途径的强有力试剂。     

烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶研究 Ⅰ分离纯化及理化性质(英文)

通过DEAE-SephadexA-50,DEAE-SepharoseCL-6B,MonoQ （FPLC）三步离子交换柱层析,纯化得到一新的纤维蛋白原溶酶,在碱性聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上均呈单一的蛋白带。分子量为2600,等电点pl4.7;它是一个糖蛋白,含糖量6.4%,其中中性糖0.3%,已糖胺4.9%,唾液酸1.2%。烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶TMVFg由187个氨基酸组成,含有较高的酸性氨基酸,此外甘氨酸含量也较高。TMVFg热稳定性强,而酸不稳定,在280 nm处具有典型的蛋白吸收峰,在无离子水中紫外消光系数E0.1%/280 nm=1.558。纯化的TMVFg具有较强的精氨酸酯酶活力,对苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）的Km值为1.4×10[-3]M。TMVFg的活性受苯甲基丹磺酰氟（PMSF）抑制;乙二胺四乙酸（EDTA）对活性无影响。TMVFg不能使纤维蛋白原凝固,但能水解纤维蛋白原α、β链。纤溶实验表明TMVFg具有激活纤溶作用。纯化的烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶对酪蛋白无作用,无出血活性,因而与凝血酶样酶、出血毒素及β-纤维蛋白原溶酶（OUYANG et al.,1977）明显不同。     

浙江蝮蛇蛇毒凝血酶在家兔体内的抗凝作用的研究

浙江产蝮蛇（Agkistrodon halys Pallas）毒类凝血酶经静脉注射家兔（0.25毫克/公斤）可使血浆凝血酶时间显著延长,这是由于血浆纤维蛋白原的水平下降及其性质上的变化引起的。表现在对Ristocetin的亲合力显著降低。此凝血酶时间之延长可被甲苯胺兰部分纠正。葡萄球菌猬集试验表明体内有大量纤维蛋白降解产物（FDP）产生。体外实验表明该酶不激活FXⅢ。 上述结果说明,类凝血酶的体内抗凝作用除由于纤维蛋白原含量降低及性质上有变化外,还与给药后体内大量纤维蛋白降解产物的形成有关。     

竹叶青Trimeresurus stejnegeri蛇毒凝血酶样酶的酶学性质研究

本文报道从竹叶青蛇毒中纯化的两个凝血酶样酶(组分Ⅰ和组分Ⅱ)的酶学性质研究。结果表明二者在体外都能使人纤维蛋白原转变为纤维蛋白,具有精氨酸酯酶活性,都能水解凝血酶专一性底物。纤维蛋白平板法证明组分Ⅰ具有激活纤溶作用;组分Ⅱ同时具有激活纤溶和直接纤溶作用;组分Ⅰ和组分Ⅱ能缓慢降解纤维蛋白原的α链,随着作用时间延长,组分Ⅰ还能进一步部分降解纤维蛋白原的β链,活性中心探讨表明,组分Ⅰ的活性中心由丝氨酸蛋白酶部位和糖基部位组成。组分Ⅰ水解BAEE的最适温度为50℃,最适pH为8.6。     

蛇毒纤溶酶的性质及应用研究

蛇毒中含有许多不同生物活性的酶类,包括金属蛋白酶、凝血酶、丝氨酸蛋白酶、磷脂酶、磷酸二酯酶、透明质酸酶、精氨酸酯酶等。其中,在蝰亚科、蝮亚科和眼镜蛇科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白（原）的酶,称为纤维蛋白（原）溶酶（简称纤溶酶,Fibrinolytic enzyme,FLE）。纤维蛋白原是由Aα、Bβ、γ三对肽链组成。纤维蛋白则是A、B两对肽链从Aα、Bβ两对肽链上水解下来后,剩下的（αβγ）2通过氢键聚合形成的不溶性纤维蛋白多聚体。纤溶酶对两者都有水解作用。自1976年Ouyang和Huang首次从尖吻蝮蛇毒中获得纯化的纤溶酶以来,迄今已从不同科属的至少15种蛇毒中获得了25种以上的纯化纤溶酶,并对其分子结构、酶学特性及出血活性的关系进行了深入的研究。纤溶酶是一种具有溶栓、抗栓等作用的药物,已成为蛇毒蛋白领域的一个研究热点。     

华广虻(Tabanusamaenus Walker)溶纤活性蛋白的纯化及生物活性分析

经过 ７５％ 饱和度硫酸铵沉淀、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ７５ 凝胶过滤层析、 Ｌｙｓ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ 亲和层析和电泳制备洗脱,从华广虻（ Ｔａｂａｎｕｓ ａｍ ａｅｎｕｓ Ｗ ａｌｋｅｒ）腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 ６７ｋ Ｄ 的溶纤活性蛋白 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ经纤维蛋白平板测定表明, Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 只具有纤溶酶作用,不具有激活纤溶酶原的作用;但 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—— Ｃｈｒｏｍ ｏｚｙｍ Ｕ Ｋ 及 Ｓ ２２８８还能水解胰蛋白酶专一底物 Ｂｚ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｎ Ａ 及 Ｃ Ｂ Ｚ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｎ Ａ,表明 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ具有类胰蛋白酶活性,专一水解精氨酸形成的酰胺键（或肽键） Ｔ Ａ Ｆ Ｐ无胰凝乳蛋白酶活性      

蛇毒类凝血酶的分子生物学研究进展及其应用

蛇毒类凝血酶在体外可以作用于纤维蛋白原使其凝固,具有类似凝血酶的功能。但在体内却表现出抗凝、降纤的功能。本概述了蛇毒类凝血酶对纤维蛋白原的识别和作用、序列同源性特点、cDNA克隆的表达以及在临床中的应用。     

尖吻蝮蛇毒去纤酶制剂对家兔体内外凝血作用的影响

本文报导了尖吻蝮蛇毒去纤酶(defibrase)对家兔体内外凝血作用的影响。 体外实验表明,去纤酶和凝血酶具有相同的作用,它能将血浆纤维蛋白原变成纤维蛋白,后者是非交联性的,去纤酶能降解纤维蛋白原的α—链从而使血块进一步溶解,不致产生血管内凝血。 体内实验表明,去纤酶显著延长全血凝血时间,凝血酶时间和凝血酶原时间,注射去纤酶后,家兔血液中的血浆纤维蛋白原降低,优球蛋白溶解时间显著缩短,对因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、ⅩⅢ和血小板因子却无明显影响。 体内外实验表明,尖吻蝮蛇毒去纤酶制剂似乎具有纤溶和去纤两种性质。     

蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒类凝血酶的研究——Ⅰ.分离提纯及理化、酶学性质的鉴定

(1) 浙江产蝮蛇蛇毒中含有三种具有精氨酸酯酶活力的组分。它们分别是激肽释放酶、类凝血酶及类溶血纤维酶。其中类凝血酶的精氨酸酯酶活力最高,约占总酯酶活力的60%。(2) 提纯后的类凝血酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条区带。经凝胶过滤及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,其分子量约43,000。氨基酸组成分析表明含有较多的酸性氨基酸及脯氨酸,此外还含有约6%的中性糖,9%的己糖胺及3.3%的唾液酸。(3) 类凝血酶能直接使血纤维蛋白原凝聚,水解BAEE的活力约是胰蛋白酶的2.7倍,K_m为3.4×10~(-4)M,高于其它已知的蝮亚科蛇毒类凝血酶活力。它不作用于BANA、BAPA及其它蛋白底物。蛇毒类凝血酶与人凝血酶一样,对专一萤光底物Boc-Val-Pro-Arg-MCA都有明显活力,但其凝结血纤维蛋白原的活力却远低于人凝血酶。(4) 类凝血酶能被DFP及PMSF所抑制,但抑制速度缓慢,不能被胰蛋白酶的专一抑制剂TLCK所抑制,因而是专一性很强的丝氨酸蛋白酶。     

蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒类凝血酶的研究——Ⅰ.分离提纯及理化、酶学性质的鉴定

(1)浙江产蝮蛇蛇毒中含有三种具有精氨酸酯酶活力的组分。它们分别是激肽释放酶、类凝血酶及类溶血纤维酶。其中类凝血酶的精氨酸酯酶活力最高,约占总酯酶活力的60%。(2)提纯后的类凝血酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈一条区带。经凝胶过滤及SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,其分子量约43,000。氨基酸组成分析表明含有较多的酸性氨基酸及脯氨酸,此外还含有约6%的中性糖,9%的己糖胺及3.3%的唾液酸。(3)类凝血酶能直接使血纤维蛋白原凝聚,水解BAEE 的活力约是胰蛋白酶的2.7倍,K_(?)为3.4×10~(-4)M,高于其它已知的蝮亚科蛇毒类凝血酶活力。它不作用于BANA、BAPA 及其它蛋白底物。蛇毒类凝血酶与人凝血酶一样,对专一萤光底物Boc-Val-Pro-Arg-MCA 都有明显活力,但其凝结血纤维蛋白原的活力却远低于人凝血酶。(4)类凝血酶能被DFP 及PMSF 所抑制,但抑制速度缓慢,不能被胰蛋白酶的专一抑制剂TLCK 所抑制,因而是专一性很强的丝氨酸蛋白酶。     

蛇毒丝氨蛋白酶多样性：底物专一性免疫化学及序列比较研究

本文报道烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶,眼镜王蛇蛇毒纤维蛋白原溶酶,竹叶青蛇毒专一纤溶酶原激活剂对５种小分子多肽底物的底物专一性,及这些蛇毒丝氨酸蛋白酶对各种凝血因子（第Ｘ因子、凝血酶原、纤溶酶原、蛋白Ｃ）的作用,并和其它蛇毒丝氨酸蛋白酶如矛头蝮蛇毒凝血酶样酶、铜头蝮蛇毒蛋白Ｃ激活剂ＡＣＣ－Ｃ、蝰蛇毒第Ｖ因子激活剂ＲＶＶ－Ｖ进行比较研究。通过酶标偶联免疫反应研究了抗ｓｖ－ＰＡ抗体与各种丝氨酸蛋白酶的免疫     

蛇毒中凝血酶样酶的研究

蛇毒中凝血酶样酶的研究韦世秀广西医科大学蛇毒研究所南宁５３００２１许多蝮亚科蛇毒中都含有一种氨基酸酯酶［１］,它催化纤维蛋白原分子特定部位Ａｒｇ－Ｇｌｙ肽键的裂解,释出血纤肽而转换为纤维蛋白。其作用与血浆凝血酶十分相似,因而称之为凝血酶样酶（Ｔｈｒｏ...     

眼镜蛇毒纤维蛋白原溶解因子的纯化及理化性质的研究

经Heparin-SepharoseCL-6B亲和层析和SephadexG-150分子筛层析,从中国眼镜蛇毒(Najanajaatra)中纯化出一种可水解纤维蛋白原Aα链的蛋白酶——组分F.SDS-PAGE测得分子量为47100,为一含2%中性己糖的单肽链糖蛋白;它对纤维蛋白、酪蛋白和苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)均无水解作用,也无激活纤溶酶原的作用;100μg皮下或皮内注射,未见出血反应。组分F对酸和热均不稳定。EDTA,EGTA,PMSF和肝素等可抑制其纤维蛋白原溶解活性,benzami-dine,aprotinin和大豆胰蛋白酶抑制因子(SBTI)则无抑制作用。     

华广虻肠道溶纤活性蛋白的纯化和性质(英文)

经过 75 %饱和度硫酸铵沉淀、SephadexG 75凝胶过滤层析、Lys Sepharose 4B亲和层析和电泳制备洗脱 ,从华广虻 (TabanusamaenusWalker)腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 6 7KD的溶纤活性蛋白TAFP。经纤维蛋白平板测定表明 ,TAFP不仅具有纤溶酶作用 ,还具有激活纤溶酶原的作用 ;通过三肽生色底物测定发现 ,TAFP能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—ChromozymUK及S 2 2 88。还能水解胰蛋白酶专一底物Bz Phe Val Arg NA及CBZ Gly Pro Arg NA ,表明TAFP具有类胰蛋白酶活性 ,专一水解精氨酸形成的酰胺键 (或肽键 )。TAFP无胰凝乳蛋白酶活性     

蝮蛇(Agkistrodon halys Palls)蛇毒类凝血酶的研究——Ⅱ.类凝血酶对纤维蛋白原的作用方式

许多蝮亚科蛇毒中含有类凝血酶。它们和蛇伤引起的毒理作用有密切关系。由于它对纤维蛋白原的作用特点,在临床上已被用作抗凝剂治疗血管阻塞性疾病。此外,它也被用来研究纤维蛋白的聚合机制。     

蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒类凝血酶的研究——Ⅱ.类凝血酶对纤维蛋白原的作用方式

许多蝮亚科蛇毒中含有类凝血酶。它们和蛇伤引起的毒理作用有密切关系。由于它对纤维蛋白原的作用特点,在临床上已被用作抗凝剂治疗血管阻塞性疾病。此外,它也被用来研究纤维蛋白的聚合机制。