精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸肽类似物的固相合成

[目的]含有Arg-Gly-Asp(精氨酰甘氨酰天冬氨酸,RGD)片段的多肽可以识别整合素受体家族,但是这些含RGD小肽在体内很容易被蛋白酶降解.本研究设计并合成RGD肽类似物,通过结构改造克服这一缺点,以期开发新的高效的抗肿瘤药物.[方法]分子设计采用N取代甘氨酸(NSG)残基替代法,即用NSG残基Ida代替Asp、用酰甲胺或酰乙胺代替C末端的羧基,生成N取代类肽型的产物;化学合成采用Boc保护策略,在Merrifield树脂上逐步固相合成N取代类肽型的产物.[结果]全部RGD肽类似物结构均经LC-MS分析证明,总收率在85％以上,纯度＞95.1％.[结论]通过本合成工作,为建立经济、可行的类肽合成提供了一种有效途径.     

Fmoc固相合成生长激素释放肽-2

生长激素释放肽(GHRP)于20世纪70年代末、80年代初依据蛋氨酸-亮氨酸脑啡肽的结构首次合成[1],之后又合成了数种类型的GHRP[2]。研究发现,结构改造后的GHRP-2(又名KP-102,药品名为Pralmorelin,氨基酸序列为D-Ala-(D-β-naphthyl)-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2)具有更强的刺激生长激素释放和改善儿童生长激素缺乏症的作用[3-4]。2004年,Pralmorelin用于治疗身材矮小症的Ⅱ期临床试验已在日本开始进行[5]。GHRP造价低廉,给药简便,在下丘脑生长激素释放激素无效时仍可产生作用,不影响或少影响生长素的内源节律性释放,具有明显的药物发展前景[2,5]。     

阿基瑞林的固相合成

Argireline（阿基瑞林）,又名乙酰六胜肽-3,经现代生化机制科学合理设计,是模仿SNAP-25蛋白N端合成的由6个氨基酸组成的寡肽[1-2]。阿基瑞林具有抗皱活性,且经过临床试验,安全性可以保证,功效可与A型肉毒毒素媲美,但避免了肉毒毒素必须采用注射应用方式和使用成本高昂的缺点。阿基瑞林现已成为风靡世界的抗皱化妆品原料,许多高端化妆品均应用了阿基瑞林成分用于抗皱[3-4]。     

人心房肽Ⅲ的固相合成及生物活性测定

本文报告以氯甲基聚苯乙烯树脂作为固相载体、按顺序用逐步合成法固相合成了人心房肽Ⅲ。产物经高压纸电泳、分子量测定和酸水解后氨基酸组成分析,证明为化学均一的单体分子。成品经生物活性测定,显示有很强的利钠、利尿以及降低动脉压的作用。     

花椒属环八肽Zanriorb A1的固相合成

目的 合成能够诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的花椒属环八肽Zanriorb A1.方法 通过9-芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法,以2-氯三苯基氯树脂(CTC)为载体,Fmoc-Gly-OH为起始原料,N,N-二异丙基乙胺(DIEA)/6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)为缩合体系,在液相经1-羟基苯并三氮唑(HOBt)/苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸(PyBOP)/DIEA实现环合,所得化合物通过RP-HPLC、MS等光谱表征.结果 通过本法顺利得到纯度>98%的花椒属环八肽Zanriorb A1,总收率为48%.结论 该合成方法具有可行性,操作简单,总收率高,目标化合物可用于抗Jurkat细胞的药物研究.     

Fmoc固相合成神经降压素

神经降压素是由13个氨基酸残基组成的生物活性多肽。实验以Fmoc氨基酸原料，采用固相合成方法，经N，N＇-二环己基碳二亚胺／1-羟基苯并三唑缩合，三氟乙酸／二氯甲烷脱保护，并从Wang树脂上切割下来，粗肽得率为61．8％，经RP-HPLC纯化，获得纯度在98％以上的目标肽，其ESI—MS和氨基酸组分分析结果与理论值相符。     

2套多肽固相合成装置的设计与应用

根据多肽固相合成的基本原理,设计了２套手工合成装置,介绍了每套装置的操作方法,并阐明了各种装置的优缺点和应用范围。     

叔丁氧羰基保护的环状氨基酸的合成及其在多肽固相合成中的应用

目的 合成叔丁氧羰基（Boc）保护的环状氨基酸Acc5、Acc6,并将这类构型限制型氨基酸用于多肽的固相合成,考察环状氨基酸在多肽固相合成中的应用以及在强酸条件下的稳定性.方法 环状氨基酸通过相应的环酮与KCN和铵盐反应得到含有氰基的环状化合物,再通过氰基的酸性水解而得到,最后在弱碱性条件下与二碳酸二叔丁酯（Boc2 O）反应,得到Boc保护的环状氨基酸;通过1 H NMR和ESI-MS表征其结构;采用对甲基二苯甲基氨基树脂,通过Boc、芴甲氧羰基（Fmoc）的氨基保护策略,对肽序列进行固相合成,最后在强酸HF条件下裂解,通过HPLC对粗肽进行纯度分析,ESI-MS表征其结构.结果 1 H NMR和ESI-MS图谱显示环状氨基酸Acc5和Acc6均为目标化合物.HPLC结果显示,得到的2个促性腺激素释放激素类似物（GnRH）,粗肽纯度良好,且易于纯化;ESI-MS图谱确证肽序列结构正确.结论 环状氨基酸在固相合成工艺中有很好的缩合效率,并且能够在强酸裂解条件下保持稳定.     

棕榈酰五肽-3的固相合成

皮肤真皮中胶原蛋白减少被认为是人体衰老形成皱纹的主要原因,因此,如果能够促进皮肤合成更多的胶原蛋白,那么将会有效逆转衰老从而减少皱纹。小分子多肽类用于抗皱产品已经有很多年[1-2]。每年都有大量多肽类抗皱的产品上市,从早期的乙酰基五胜肽到棕榈酰寡肽。棕榈酰五肽-3(Matrixyl)是棕榈酰寡肽系列抗皱多肽小分子的一种。     

固相合成肺表面活性物质蛋白质B的活性作用

为今后制备人工ＰＳ打下基础，用固相合成成熟段ＳＰ－Ｂ，用膜天平测定法和大鼠肺出血模型，观察它在体内、外的活性作用。结果：人工合成的磷脂加入合成的ＳＰ－Ｂ在体外能降低表面张力至１０ｍＮ／ｍ以下，并增加滞后环面积；在体内能预防大鼠肺出血，使肺指数从０．７３降至０．５８，血清脂质过氧化物从４．８３降至２．７４，肺泡血浆蛋白质渗出从７０．５８降至２１．９８。合用人工合成的ＳＰ－Ｂ优于单纯应用人工合成磷脂组     

固相合成肺表面活性物质蛋白质B的活性作用

为今后制备人工ＰＳ打下基础，用固相合成成熟段ＳＰ－Ｂ，用膜天平测定法和大鼠肺出血模型，观察它在体内、外的活性作用。结果：人工合成的磷脂加入合成ＳＰ－Ｂ在体外能降低表面张力至１０ｍＮ／ｍ以下，并增加滞后环面积；在体内能预防大鼠肺出血，使肺指数从０．７３降至０．５８（Ｐ＜０．０５），血清脂质过氧化物（ｎｍｏｌ／Ｌ）从４．８３降至２．７４（Ｐ＜０．０１），肺泡血浆蛋白质（ｇ／ｋｇ干肺）渗出从７０．５８降至２１．９８（Ｐ＜０．０１）。合用人工合成的ＳＰ－Ｂ优于单纯应用人工合成磷脂组，并与应用天然ＰＳ组相仿。     

用Wang树脂固相法合成RGD

1984年,Pierschbacher和Ruolstahti首次确定了RGD序列为人纤维连接蛋白(fibronectin,FN)与其受体的结合位点.Hayman等[1]将含RGD序列的4个寡肽与无RGD序列的5个寡肽进行细胞粘附活性研究,发现含RGD序列的肽有抑制正常大鼠肾、变异的鼠肾、鼠BALB/C373、人骨肉瘤(MG-63)和人纤维素瘤(HT1080)细胞的粘附作用,而无RGD序列的后5个肽则没有抗粘附活性.1987年,Hynes[2]报道,细胞表面存在与细胞粘附有关的ECM糖蛋白受体,并将它们命名为整合蛋白(integrin).整合蛋白介导着许多种类的细胞与细胞及细胞与底物之间的相互作用,参与许多生物学过程,如体内平衡调节、吞噬作用、细胞迁移、细胞信号传递、淋巴细胞的识别、血小板的聚集等.由于许多病理学过程与正常的ECM作用相关,因此,含RGD多肽或化合物有望治疗一些疾病,因而该类肽的类似物成为药物设计的一个新靶点[3].本文以Fmoc保护氨基酸为原料,用Wang树脂固相法合成了RGD.     

基于光敏感保护策略的Phakellistatin 13固相合成

目的：使用光敏感保护基和固相合成法制备Phakellistatin 13。方法使用二氢吡喃树脂作为固相载体,利用自行制备的光敏感保护基对苏氨酸进行保护并将其固定于树脂上。以该苏氨酸作为起始氨基酸,进行常规肽链组装,肽链组装完毕后通过光照脱去光敏感保护基,在固相上完成环合,切除后得到游离环肽。结果使用邻硝基乙苯一步制得了具有光敏感作用的2-（2-硝基苯基）-丙醇（Npp-OH）,利用该保护基保护了苏氨酸羧基并借此完成了Phakellistatin 13的合成。终产物结构经高分辨质谱确证,表明该策略切实可行,为环肽的合成提供了有效的工具。结论 Npp保护基易于制备,保护和去保护收率高,对酸碱稳定,因此是一种优良的第三维保护基。利用该保护基,有效的完成了环肽的合成。     

穿膜肽TAT的固相合成及体外活性研究

目的 以固相合成法合成穿膜肽TAT,并对合成产物进行活性评价.方法 采用Na-芴甲氧羰基(fluorenyl-methyloxyloxycarbonyl,FMOC)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成穿膜肽TAT.应用高效液相色谱和质谱仪测定其纯度及相对分子质量;荧光显微镜观察穿膜肽TAT介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green flutescent pro-tein,pEGFP)质粒在体外培养人脐静脉内皮细胞中的转染效果以评价穿膜肽TAT的生物活性;MTT法检测穿膜肽TAT与质粒DNA复合物对人脐静脉内皮细胞生长活性的影响.结果 高效液相色谱和质谱鉴定所制备穿膜肽TAT的纯度为96.6%,相对分子质量1 880.它能够携带质粒DNA穿过细胞膜进行基因转染,并对细胞活性无明显影响.结论 采用Fmoc固相肽合成法可以成功地合成有生物活性的穿膜肽TAT.     

正交设计法优化胸腺五肽固相合成工艺

【目的】寻找固相合成胸腺五肽的较优工艺条件。【方法】采用Fmoc保护策略固相合成胸腺五肽,应用正交设计试验法,选取7种因素,每个因素选取2个水平,用高效液相色谱法确定生成物中胸腺五肽的产率,考察产率这一指标。【结果】胸腺五肽较优的合成条件为:氨基酸的用量比为1:3、哌啶的浓度为20%、脱保护基时间为30 min、缩合剂DCC与HOBt的用量比为2:1、缩合时间为6 h、裂解剂TFA的浓度为95%、裂解时间为30 min。哌啶的浓度、缩合剂DCC与HOBt的用量比、氨基酸的用量比为影响反应的主要因素。合成产率可达到38.4%。【结论】该合成工艺操作简便、周期短、产率较高、经济可行。     

微波促进固相合成胰高血糖素样肽-1类似物及其降血糖活性

目的:提高胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对二肽激肽酶(DPPⅣ)的稳定性。方法:以Rink Amide-MBHA树脂为载体,采用Fmoc/t-Bu正交保护固相合成策略,运用微波照射促进合成GLP-1类似物,最后经过反相制备高效液相色谱纯化得到目标多肽纯品。结果:所合成的GLP-1及其类似物的相对分子质量和纯度均经过电喷雾质谱和高效液相色谱确证。降血糖活性研究结果显示,改造后的GLP-1类似物有很好的降血糖活性且作用时间较长。结论:修饰后的GLP-1类似物在保留降糖活性的同时延长了作用时间,这为开发新型抗糖尿病药物提供了基础。     

微波辐射条件下IIA,IIB族金属脂肪酸盐的固相合成

应用微波化学这一新兴交叉学科学方法固成了一系列金属脂肪酸盐。该方法具有反应速度快、转化率高、产品易纯化以及实验操作简单等优点，显示出微波化学极大的发展和应用前景。     

固相合成疏水肽纯度的HPSEC评价

快速评价固相合成疏水肽Ｐ４４的纯度。方法本文为避开反相梯度色谱可能潜在的影响因素,运用高效体积排阻色谱（ＨＰＳＥＣ）的原理,选用耐一定浓度有机相的Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ２５０高效凝胶分析柱对固相合成疏水肽Ｐ４４进行分析,并通过９９６ＦＧＸＥ ＴＰ ＢＬ ＧＱ ＳＷＩＭＫＫＤ ＡＤ     

LC/MS鉴定固相合成多肽P14分子异构体存在的方法

目的 确认固相合成多肽Ｐ１４分子是否存在异构体。方法 通过ＨＰ１１００与ＥＳＩ离子源ＰＥＡＰ２０００液质联用（ＬＣ／ＭＳ）分离Ｐ１４肽,在质谱鉴定合成肽主峰为理论设计量前提下,应用ＰＥ ＳＣＩＥＸ Ａｎ－ａｌｙｓｔ １．０ｂ３质谱分析软件分析子离子流色谱图。结果 从总离子流色谱图中精确提取Ｐ１４肽Ｑ１正离子双电荷质量数,形成Ｐ１４肽质量数子离子流色谱图,其中有散在不同保留时间的质量数存在。结论 Ｐ１